绒毛外滋养细胞侵袭异常与相关妊娠早期疾病的研究进展

在人类妊娠中,早期胎盘的形成和发育通过绒毛外滋养细胞(EVTs)对蜕膜和母体子宫肌层的侵袭实现。EVTs对母体子宫的侵袭是非特异性的,不仅可侵入母体子宫的结缔组织重塑子宫螺旋动脉,还可侵入母体子宫内的其他结构,包括子宫壁内的腺体、静脉和淋巴管等。EVTs对母体子宫侵袭不足与一系列妊娠早期并发症的发生均密切相关,但具体机制目前尚未明确。因此,充分了解EVTs的侵袭功能和途径可以为理解正常胎盘发育过程中EVTs的侵袭提供理论基础,也可为因EVTs侵袭异常导致的相关妊娠疾病(如复发性流产、先兆子痫和输卵管妊娠)研究提供新思路。     

TGF-β/Smads信号通路与滋养细胞的恶性侵袭

在人类胚胎植入过程中,滋养细胞对子宫内膜组织的有限侵袭是受严格精细调控的,其过度的侵入与绒癌的形成有关[1].研究表明,体内多种细胞因子对滋养细胞的侵入具有调节作用.如自分泌和旁分泌的TGF、TNF-α、IGF、EGF以及丝裂原等均能通过细胞内某些信号通路调控滋养细胞MMP、uPA等侵袭相关蛋白酶的表达,从而调节滋养细胞的侵袭作用[2-4].转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)是目前研究最多的参与滋养细胞侵入调节的细胞因子.研究发现,胎盘绒毛小叶的合体滋养细胞、细胞滋养细胞及绒毛的间质滋养细胞、蜕膜腺体细胞和间质细胞有TGF-β1表达,说明TGF-β1可能主要由以上几种细胞合成并分泌[5,6].     

正常人胚早期绒毛膜的组织学观察

目的研究正常人胚早期绒毛膜的发育过程,探讨绒毛的结构特点及其与功能的关系。方法用正方测试格半定量观察９２例正常人胚早期（６～１１周）绒毛膜的组织结构,测试绒毛上皮厚度及间质内间充质细胞、毛细血管的相对含量。结果绒毛膜滋养细胞包括三种：细胞滋养细胞、合体滋养细胞和中间型滋养细胞。滋养细胞具有正常的高度增殖及侵蚀能力。绒毛上皮厚度随胚胎周龄的增加而增加,于第１１周达峰值。绒毛间质内间充质细胞和毛细血管的相对含量随周龄的增加而增加,相邻两个周龄组之间的差异显著（Ｐ＜００５）。结论在胚胎早期,绒毛发育较快,间质生长活跃。滋养细胞高度增殖并侵蚀子宫蜕膜,但有一定限度。     

正常早期妊娠血浆和绒毛组织中肾上腺髓质素的测定

目的 :探讨肾上腺髓质素 (ADM)在正常早期妊娠中的作用。　方法 :应用放免法测定 30例正常早期妊娠和10例正常非妊娠者血浆ADM水平 ,用免疫组化和原位杂交方法检测ADM蛋白、ADM及其受体mRNA在绒毛组织中的表达。　结果 :正常早期妊娠者血浆ADM水平高于非妊娠者 (P <0 .0 5 )。正常早期妊娠绒毛组织中细胞滋养细胞和合体滋养细胞细胞质中均有ADM蛋白、ADM及其受体mRNA的表达。　结论 :血浆ADM可能参与调节人类早期妊娠母体内环境稳定 ,而绒毛组织中的ADM可能促进滋养细胞的侵袭和血管系统的建立。     

缺氧共培养血管内皮细胞对绒毛外滋养细胞侵袭力的影响

目的 探讨在缺氧共培养条件下血管内皮细胞对绒毛外滋养细胞侵袭力的影响.方法 绒毛外滋养细胞在缺氧下单独培养作为对照组,绒毛外滋养细胞与血管内皮细胞用Transwell小室建立缺氧共培养作为观察组.应用荧光定量PCR、Western blot方法分别检测绒毛外滋养细胞基质金属蛋白酶9(MMP9)/基质蛋白酶抑制剂1(TIMP1)mRNA及蛋白的表达;应用Transwell侵袭模型检测缺氧共培养下绒毛外滋养细胞侵袭力的变化.结果 与对照组比较,观察组的绒毛外滋养细胞MMP9 mRNA及蛋白的表达均明显降低(均P＜0.01),TIMP1 mRNA及蛋白的表达无明显变化(均P＞0.05);观察组的绒毛外滋养细胞侵袭力较对照组明显降低(P＜0.01).结论 缺氧共培养条件下,血管内皮细胞可下调绒毛外滋养细胞MMP9基因的表达并降低绒毛外滋养细胞侵袭力.     

自然流产患者绒毛EVTs的基因芯片初步分析

目的:探讨自然流产绒毛外滋养细胞(Extravillous trophoblast cells,EVTs)侵袭相关基因表达变化.方法:利用U133 plus2.0芯片对自然流产绒毛和正常绒毛组织中EVTs的基因表达谱进行检测,并用生物信息学方法对检测结果进行分析.结果:与正常EVTs相比,在自然流产EVTs中,发现显著上调基因219个,下调基因293个,其功能主要涉及细胞粘附、免疫应答、代谢等.结论:与滋养层细胞细胞粘附、免疫应答、水解酶及凋亡等相关基因的差异表达可能与滋养细胞侵袭行为变化及自然流产有关.     

长链非编码RNA母系印记基因3对人类绒毛发育的作用

目的 研究长链非编码RNA (lncRNA)母系印记基因3(MEG3)对人类流产绒毛发育的影响,并探讨其分子机制.方法 收集自然流产及人工流产各15例患者的绒毛组织,使用免疫组化方法检测其凋亡因子Bax及凋亡抑制因子Bcl-2的表达,使用qPCR法检测MEG3的表达.在人滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞中过表达MEG3后,利用qPCR法检测MEG3的表达,利用细胞侵袭实验比较过表达组与对照组细胞的侵袭能力.结果 人工流产绒毛组织中Bax的表达低于自然流产绒毛,而Bcl-2的表达高于自然流产绒毛(P＜0.01).人工流产绒毛组织中的MEG3的表达低于自然流产(P＜0.01).人滋养层细胞系HTR-8/SVneo细胞中过表达MEG3后,HTR-8/SVneo细胞侵袭能力降低(P＜0.01).结论 IncRNA MEG3可调控滋养层细胞的凋亡及侵袭能力,影响人类绒毛的发育.     

绒毛促性腺激素(HCG)血球凝集抑制试验的临床应用

绒毛促性腺激素是一种分子量约为3万左右的糖蛋白类激素。目前认为是绒毛郎罕氏细胞(细胞滋养叶细胞)合成,由合体滋养叶细胞所分泌,主要经肾脏排泄。在妊娠早期,可以维持月经黄体继续发育,转变成妊娠黄体并促进其内分泌功能,具有一定的     

中间型滋养叶细胞检查在子宫内妊娠诊断中的意义

[目的]探讨中间型滋养叶细胞检查在子宫内妊娠诊断中的意义.[方法]利用光学显微镜和免疫组织化学方法观察22例刮宫标本的中间型滋养叶细胞的形态及CK(AE1/AE3)的表达情况.[结果]12例见中间型滋养叶细胞,其中不全流产者为7例,不规则阴道出血者为3例,葡萄胎术后者为2例;见胎盘绒毛的9例及仅见蜕膜的3例均见中间型滋养叶细胞;2例异位妊娠及3例不明原因停经者均未见胎盘绒毛及中间型滋养叶细胞.[结论]中间型滋养叶细胞是子宫内妊娠的特异性细胞,对排除异位妊娠有临床意义.     

良性葡萄胎误诊为侵蚀性葡萄胎1例

葡萄胎是由于妊娠后胎盘绒毛滋养细胞增生,间质水肿,而形成的大小不一的水泡,水泡间结缔相连成串,而胚胎却早已死亡,自溶吸收.侵蚀性葡萄胎是指葡萄胎组织侵入子宫肌层或转移至子宫以外的妊娠滋养细胞疾病,理论上均应来自良性葡萄胎,具有恶性肿瘤的嫌疑,是危害妇女的常见病之一.     

绒毛外细胞滋养层细胞体外侵袭模型的建立

目的 建立绒毛外细胞滋养层细胞(EVCT)体外侵袭模型,为探讨滋养层细胞侵袭调节机制提供实验平台.方法 取健康早孕妇女(孕7～9周)人工流产绒毛组织,利用Percoll梯度离心法及差速贴壁法,将纯化的绒毛外滋养层细胞,按所需浓度接种于涂有Matrigel培养板或24孔Transwell侵入系统中培养.用细胞免疫荧光法检测TGFβ2、cytokeration 7、integrin α1β1.用CCK-8评价细胞生长状况.用Transwell细胞侵入系统检测EVCT的体外侵袭作用.结果 EVCT在Matrigel包被的Petri皿培养4h,用细胞免疫荧光法显示有95%以上的细胞表达TGFβ2、cytokeration 7,integrin α1β1.EVCT在Matrigel培养不同时间后,其生长指数未有明显变化,提示Matrigel对EVCT的生长未见明显影响.EVCT在Transwell侵袭系统中培养不同时间后,根据侵袭细胞的OD值,提示48h细胞侵袭作用达到平台期.结论 本实验成功地建立了EVCT体外侵袭模型,可利用此模型研究滋养层细胞的侵袭机制.从而为研究妊娠生理、妊娠病理、妊娠免疫耐受及正常细胞到肿瘤细胞之间的转化提供了实验平台.     

蛋白聚糖在胎盘源性疾病中的生物标志物作用

胎盘功能障碍可导致早期流产或子痫前期和宫内生长受限等胎盘源性疾病，特殊的病原体（如感染恶性疟原虫）侵袭胎盘后也会导致胎儿和（或）母体健康受损。胎盘合体滋养细胞的细胞外基质（ECM）从胎盘绒毛膜绒毛向外延伸到母体血液中，在分子水平上调节和维持滋养细胞侵袭子宫内膜行为。蛋白聚糖（PG）是ECM的主要成分之一，PG多元化的功能主要归功于附着在其核心蛋白复杂的糖胺聚糖链序列和硫酸化模式，以及核心蛋白独特的性质和动态表达。PG定量和定性变化可反映系统紊乱的严重程度和宿主系统的参与程度。本综述总结了PG在胎盘源性疾病中的表达与功能。PG可能是胎盘源性疾病中可靠的生物标志物。     

绒毛滋养细胞染色体分析及临床应用

目的建立绒毛滋养细胞染色体核型分析方法,用于探讨早孕期自然流产的病因。方法通过体外细胞培养获取较多的绒毛滋养细胞中期分裂相,制备染色体片进行核型分析,观察早孕期流产绒毛滋养细胞染色体畸形的发生率。结果成功建立了滋养细胞染色体核型分析方法,58．3％（21／36）的早孕期自然流产患者滋养细胞染色体异常。结论开展流产绒毛滋养细胞染色体核型分析,对于明确早孕期自然流产病因具有重要的临床价值。     

人蜕膜基质细胞条件培养液对滋养细胞浸润功能的影响

胎盘滋养细胞的适度浸润是成功妊娠过程中胚胎植入与胎盘形成的必要条件。有研究表明母体的蜕膜微环境能影响滋养细胞的浸润能力。然而,目前滋养细胞有节制侵入子宫内膜的机制尚不明确。本研究通过体外培养人早孕正常蜕膜基质细胞,收集基质细胞条件培养液（DSCM）用以处理正常人早孕滋养细胞系（B6Tert）,     

滋养细胞的TGF-β/Smads信号转导通路

胎盘的植入过程需要滋养层细胞对子宫基质的侵入。源自胚胎原始滋养层细胞的绒毛外滋养细胞发挥类似肿瘤细胞浸润的特性，通过其侵入子宫基质将胎盘粘附于子宫壁组织，并伴随胎盘逐渐发育完善。滋养层细胞的侵入过程中，大量复杂的彼此联系事件是受严格的时空调控的。     

KLF8在人早孕绒毛组织中的表达及其意义

目的：通过检测正常孕妇早孕期绒毛组织中双向转录因子Krüppel-like factor 8（KLF8）的定位及表达,探讨其在早孕期滋养细胞侵袭中的作用。方法：选择2012年3月至2012年6月在重庆医科大学附属第一医院门诊孕6～11周进行选择性流产的22例正常孕妇为研究对象,取绒毛组织标本,采用免疫组化SP法检测各组孕妇绒毛组织中KLF8蛋白的定位,实时荧光定量PCR技术检测各组孕妇绒毛组织中KLF8 mRNA表达水平,采用蛋白印迹法检测各组孕妇绒毛组织中KLF8、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）蛋白的表达水平。结果：（1）正常孕6～11周绒毛组织中均有KLF8蛋白表达,主要定位于绒毛组织滋养层中的细胞滋养细胞和合体滋养细胞。（2）KLF8 mRNA 随妊娠周数增加而逐渐升高,并在孕8～10周达到高峰（孕8周最高）,而后急剧降低。（3）正常早孕绒毛组织中KLF8、MMP-9蛋白表达水平同样随妊娠周数增加而逐渐升高,并在孕8～10周达到最高峰（孕9周最高）,而后逐渐降低。（4）正常早孕绒毛组织中KLF8蛋白及MMP-9蛋白表达呈正相关关系,相关系数r为0.66（P<0.001）。结论：KLF8在正常早孕组织中定位于滋养层细胞尤其是与侵袭密切相关的细胞滋养细胞中,且表达变化与MMP-9蛋白水平以及滋养细胞浸润能力相吻合,提示KLF8可能参与胚胎植入及胎盘形成过程中滋养细胞浸润活性调控。     

Leptin mRNA在早孕绒毛滋养细胞中的表达

目的测定早孕绒毛滋养细胞中leptin mRNA表达,探讨leptin在胎盘形成过程中的可能作用.方法取妊娠6～8周绒毛80份,分离、培养细胞滋养细胞并经光电镜、免疫细胞化学鉴定;提取细胞总RNA,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定滋养细胞leptin mRNA表达.结果①经光电镜、免疫细胞化学染色鉴定,细胞角蛋白-7(CK-7)染色强阳性,β-hCG染色个别细胞弱阳性,vimentin染色阴性,表明分离培养的细胞为滋养细胞.②滋养细胞表达leptin mRNA在235 bp处有区带.结论培养的早孕绒毛滋养细胞表达leptin mRNA,leptin可能在胚胎着床、滋养细胞浸润过程中起调控作用.     

细胞滋养细胞中DPPⅣ的表达及其与侵袭能力的关系

目的 了解妊娠过程中细胞滋养细胞表面表达的二肽基肽酶(DPPⅣ)与细胞侵袭能力的关联.方法 采用流式细胞术检测培养的早孕绒毛细胞滋养细胞和绒癌细胞株JAR中DPPⅣ蛋白的表达;并利用Transwell侵袭分析系统观察两种细胞侵袭能力的差异.结果 原代培养细胞和JAR细胞上均表达DPPⅣ蛋白,但原代培养细胞上的表达量高于JAR细胞,相反,JAR细胞的侵袭能力高于原代培养细胞.结论 证明了DPPⅣ与滋养细胞的侵袭性特性有关,DPPⅣ的表达量与细胞的侵袭能力呈负相关,从而为子痫前期致病机理研究提供一定的理论依据.     

正常人胚早期绒毛期的组织学观察

目的 研究正常人胚早期绒毛膜的发育过程,探讨绒毛的结构特点及其与功能的关系。方法 用正方测试格半定量观察９２例正常人胚早期绒毛膜的组织结构,测试绒毛上皮厚度及间质充质细胞,毛细血管的相对含量。结果 绒毛膜滋养细胞包括三种;细胞滋养细胞,合体滋养细胞和中间型滋养细胞。     

良性葡萄胎误诊为侵蚀性葡萄胎1例

葡萄胎是由于妊娠后胎盘绒毛滋养细胞增生,间质水肿,而形成的大小不一的水泡,水泡间结缔相连成串,而胚胎却早已死亡,自溶吸收。侵蚀性葡萄胎是指葡萄胎组织侵入子宫肌层或转移至子宫以外的妊娠滋养细胞疾病,理论上均应来自良性葡萄胎,具有恶性肿瘤的嫌疑,是危害妇女的常见病之一。