IGF-1对MC3T3-E1细胞凋亡及凋亡调控蛋白Bax、Bc1-2表达的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对小鼠前成骨样MC3T3*E1细胞凋亡基因相关蛋白Bax/BEl-2表达的影响.方法 MC3T3-E1细胞分组培养,应用4个浓度的IGF-1(1 ng/mL、10 ng/mL、30 ng/mL、50 ng/mL)干预24 h.观察MC3T3-E1细胞动态生长状况;流式细胞技术检测细胞凋亡率;免疫组织化学法检测凋亡蛋白Bax/Bc1-2的表达水平.结果 与正常血清对照组相比,无血清对照组MC3T3-E1细胞凋亡率增加(P<0.05);与无血清组相比,IGF-1组MC3T3一E1细胞凋亡率降低(P<0.05),Bax表达减弱(P<0.05),Bc1-2表达增强(P<0.05);各浓度组间比较,(1-50)ng/mL浓度范围内MC3T3-E1细胞凋亡率随IGF-1浓度加大而逐渐降低(P<0.05),Bax表达逐渐减弱(P<0.05),50ng/mL浓度组Bc1-2表达明显增强(P<0.01),Bc1-2/Bax灰度比与细胞凋亡率呈显著正相关(r=0.917,P<0.01).结论 一定浓度的IGF-1同时调节Bax和Bc1-2表达,抑制无血清培养诱导的细胞凋亡:并存在刺量依赖性效应.     

胰岛素样生长因子-1对MC3T3-E1细胞增殖及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响

目的观察胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对体外培养的小鼠前成骨样MC3T3-E1细胞增殖及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响,探讨IGF-1对骨代谢可能的影响机制。方法不同浓度rhIGF—1刺激体外培养的MC3T3-E1,用噻唑蓝（MTT）法测定细胞增殖能力。结果一定浓度IGF-1能明显增加戍骨细胞数量（P〈0．05）,在1ng／mL～100ng／ml。这种作用与IGF-1的浓度呈正相关;经rhIGF-1的刺激,成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达明显高于对照组（P〈0．05）;半定量RT—PCR显示在rhIGF-1干预48h后,Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达较对照组明显增加。结论IGF-1对MC3T3-E1细胞有明显的促增殖作用,在0．1ng／mL～100ng／mL之间呈浓度依赖性,IGF-1能促进成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的合成及其mRNA的表达。     

组织金属蛋白酶抑制因子3重组蛋白诱导小鼠成骨细胞MC3T3-E1凋亡

目的 研究组织金属蛋白酶抑制因子3（TIMP-3）重组蛋白对MC3T3-E1成骨细胞凋亡的影响。方法 细胞存活率和凋亡分别用MTT及ELISA检测。Fas，FasL，Bcl-2，Bax，caspase-3，caspase-8，细胞色素c的表达以及JNK，p38，细胞外信号调节激酶（ERK）1／2的磷酸化水平用Western印迹检测。结果 MTT及ELISA检测提示TIMP-3降低MC3T3-E1细胞存活率，诱导MC3T3-E1细胞凋亡。TIMP-1增加Fas、FasL蛋白表达，对Bax、Bcl-2蛋白表达无影响，但可诱导细胞色素c的释放及caspase-8、caspase-3的活化。TIMP-3促进p38和ERK磷酸化，而PD098059（ERK阻断剂）和SB203580（p38阻断剂）消除p38和ERK的促凋亡作用。结论 TIMP-3诱导MC3T3-E1细胞凋亡的信号途径为凋亡受体Fas介导，并有p38、ERK信号转导途径参与。     

胰岛素样生长因子-1对MC3T3-E1细胞增殖及I型胶原蛋白合成的影响

目的 观察胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对体外培养的小鼠前成骨样MC3T3-E1细胞增殖及I型胶原蛋白合成的影响,探讨IGF-1对骨代谢可能的影响机制.方法 不同浓度rhIGF-1刺激体外培养的MC3T3-E1,用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力.结果 一定浓度IGF-1能明显增加成骨细胞数量(P<0.05),在1 ng/mL～100 ng/mL这种作用与IGF-1的浓度呈正相关;经rhIGF-1的刺激,成骨细胞I 型胶原蛋白的表达明显高于对照组(P<0.05);半定量RT-PCR显示在rhIGF-1干预48h后,I型胶原蛋白mRNA表达较对照组明显增加.结论 IGF-1 对MC3T3-E1细胞有明显的促增殖作用,在0.1 ng/mL～100 ng/mL之间呈浓度依赖性,IGF-1 能促进成骨细胞I 型胶原蛋白的合成及其mRNA的表达.     

VEGF通过MAPK途径上调MC3T3-E1及C2C12细胞中Cbfa1基因的表达

目的研究生长因子VEGF对Cbfa1的调节作用及其与MAPK信号传导通路的关系。方法采用瞬时转染技术和RT-PCR方法。结果在MC3T3．E1细胞中,VEGF（1×10^-8～1×10^-6g·L^-1）作用24小时能够增加Cbfa1基因启动子活性,相对荧光素酶活性分别为对照组的1．29（P〈0．05）,1．28（P〈0．01）和1．40（P〈0．05）。而加入PD98059（10μmol/L）后不但抑制了Cbfa1基因启动子活性的基础表达,而且完全阻断了VEGF所诱导的Cbfa1基因启动子活性的增加（P〈0．05）。C2C12细胞中不同浓度的VEGF处理组,其相对荧光素酶活性与对照组相比未见显著性差异。MC3T3-E1细胞中,VEGF处理前后,MC3T3-E1细胞中Cbfa1基因mRNA的表达水平未见显著变化。C2C12细胞中,VEGF处理后,第2天和第3天Cbfa1基因mRNA的表达由处理前的32．63±4．41,分别增加至46．56±2．70（P〈0．01）和50．35±5．62（P〈0．05）。PD98059阻断了C2C12细胞中VEGF对Cbfa1基因mRNA表达的上调作用。结论VEGF部分通过MAPK信号传导通路增加MC3T3-E1和C2C12细胞中小鼠Cbfa1基因启动子活性及mRNA的表达。     

高糖对成骨细胞MC3T3-E1活性影响的研究

目的探讨高糖对体外培养小鼠前体成骨细胞MC3T3-E1活性的影响。方法将培养的MC3T3-E1细胞分为5．5mmol／L正常糖对照组、12．5mmol／L高糖组和25mmol／L高糖组,观察不同浓度糖对MC3T3-E1细胞增殖、碱性磷酸酶（ALP）、矿化结节、骨钙素（OC）及Caspase-3的影响。结果与5．5mmol／L正常糖对照组相比,12．5mmol／L高糖组培养5d细胞增殖和ALP分泌不受影响,在培养7d和14d时明显促进矿化结节形成,在培养5d时促进细胞内0（2表达,在培养3d时促进Caspase-3的表达;而25mmol／L高糖组在培养5d则可明显抑制细胞增殖及ALP分泌,在培养14d减少矿化结节的形成,在培养第5d时减少0（2表达,在培养3d时促进Caspase-3的表达。结论高糖可影响MC3T3-E1细胞活性,12．5mmol／L糖在培养时间内不影响细胞增殖与分化,可促进矿化;25mmol／L糖则对细胞产生明显的抑制效应。     

石斛合剂对衰老糖尿病大鼠胰腺组织凋亡相关基因Bax,Bcl-2mRNA及蛋白表达的调控

目的观察石斛合剂对衰老及衰老糖尿病（DM）大鼠胰腺组织凋亡相关基因Bax、Bcl-2mRNA及蛋白表达的影响。方法采用D-半乳糖致衰，继而加高脂高糖及注射低剂量链脲佐菌素（STZ）制备衰老DM模型，测定血清中SOD、MDA浓度，并利用RT-PCR法和Western-Blot法检测大鼠胰腺组织凋亡相关基凼Bax、Bcl-2mRNA及蛋白表达水平。结果与衰老及衰老DM组相比，石斛合剂各治疗组MDA浓度明显降低（P〈0．05），SOD浓度明显升高（P〈0．05～0．01），衰老DM石斛合剂治疗组胰腺组织BaxmRNA及蛋白水平明显降低（P〈0.05～0．01），Bcl-2mRNA及蛋白水平明显升高（P〈0．05）。结论①衰老大鼠呈现Bax／Bcl-2比值显著升高，衰老DM大鼠Bax／Bcl-2比值升高更为显著，即衰老大鼠Bax和Bcl-2mRNA及蛋白表达失衡，且这种失衡在衰老DM大鼠显得更为突出；②石斛合剂降低血糖，显著升高衰老及衰老DM大鼠SOD水平，降低MDA水平，其分子机制之一与其降低衰老DM大鼠胰腺组织Bax、增加Bcl-2 mRNA及蛋白水平，即调整Bax和Bcl-2mRNA及蛋白表达的失衡有关。     

缬沙坦对2型糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及调控基因Bcl-2、Bax的影响

目的：观察缬沙坦对2型糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及其调控基因Bcl-2、Bax的影响。方法：随机选择15只SD雄性大鼠,以高糖高脂饲料喂养6周后,腹腔注射STZ30mg／kg;2周后血糖升高≥16mmol／L者12只,随机又分为2型糖尿病组（n=6）和2型糖尿病缬沙坦治疗组（简称治疗组,n=6）,治疗8周,另选6只健康SD雄性大鼠为空白对照组,查内生肌酐清除率（Ccr）,24h尿白蛋白的排泄率（Uaer）。流式细胞术检测大鼠肾脏细胞凋亡率。免疫组化法检测Bcl-2、Bax的表达。结果：8周后,糖尿病组大鼠肾小球细胞外基质增生,部分肾小管轻度萎缩或管腔扩张,上皮细胞肿胀,胞浆内可见脂肪空泡变性,但治疗组较糖尿病组病变减轻。细胞凋亡率糖尿病组较治疗组高（26．54±2．67VS20．05±2．03,P〈0．05）;Ccr糖尿病组较治疗组低（O．021±0．001VS0．065±0．004ml／min,P〈0．05）,Uaer糖尿病组高于对照组和治疗组（O．150±0．004VS0．081±0．001,0．086±0．002mg,P〈0．05）。治疗组和糖尿病组肾小管均较对照组的Bcl-2和Bax阳性表达高（P-40．05）,治疗组肾小管Bcl-2较糖尿病组的阳性表达高,而Bax阳性表达低（P〈O．05）。结论：缬沙坦通过增加Bcl-2／Bax在肾小管的比例,使糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡率减低,保护肾功能。     

氟诱导成骨细胞MC3T3-E1自噬与凋亡及其相互作用分析

目的主要研究氟诱导成骨细胞MC3T3-E1发生自噬、凋亡及两者之间的关系。方法利用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法检测氟对成骨细胞MC3T3-E1的增殖活性影响,探寻氟引起凋亡的浓度;流式细胞术检测细胞凋亡;western blot免疫印记技术检测凋亡相蛋白;利用western blot免疫印记技术检测Beclin 1蛋白及LC3蛋白表达水平及变化。结果氟能明显抑制成骨细胞MC3T3-E1增殖,诱发细胞凋亡,其抑制作用呈时间、剂量依赖性;氟在促进细胞凋亡的同时也促进自噬产生;3-甲基腺素(3-MA)抑制自噬后,氟诱导的凋亡进一步增多。结论氟明显抑制MC3T3-E1细胞增殖,同时诱发细胞凋亡和自噬;氟诱导的自噬部分拮抗其诱导的凋亡。     

GLP-1对大鼠胰岛细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察胰升糖素样肽1（GLP-1）对大鼠胰岛细胞增殖及凋亡的影响，并探讨其作用机制。方法 （1）GLP-1与大鼠胰岛细胞瘤细胞株RINm5f共育，观察其增殖情况；（2）检测GLP-1对IL-1D诱导的RINm5f细胞凋亡的保护作用；（3）GLP-1与原代培养大鼠胰岛细胞共育1、3、5天后，检测BAX及Bcl-2基因的表达。结果（1）随着GLP-1浓度增高及刺激时间延长，RINm5f细胞A值呈剂量及时间依赖性增加；（2）GLP-1组与对照组相比RINm5f细胞凋亡率显著下降（P〈0．05）；（3）与GLP-1共育后，大鼠胰岛BAX基因的表达量无明显变化，对照组BAX基因的表达逐渐增加（P〈0．05）；而Bcl-2基因的表达量随着与GLP-1共育时间的延长呈时间依赖性增加。结论GLP-1对大鼠胰岛细胞增殖有明显促进作用；同时对胰岛细胞的凋亡有保护作用。     

吲哚美辛对前列腺癌DU145细胞增殖与凋亡的影响及机制探讨

目的观察吲哚美辛对人激素非依赖性前腺癌细胞系DU145增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法采用不同浓度的吲哚美辛处理DU145细胞。应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测并计算细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞周期分布,并计算细胞凋亡率;采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法测定细胞培养上清PGE2;应用RT-PCR法检测Bcl-2和Bax mRNA。结果吲哚美辛可明显抑制DU145细胞增殖（P〈0．05）,并具有时间一剂量依赖性;经吲哚美辛作用后,S期细胞明显增多,G2/M期细胞减少,细胞出现凋亡峰;细胞上清中PGB量明显减少（P〈0．001）;Bcl-2 mRNA表达降低,BaxmRNA表达下降,Bcl-2／Bax下降（P〈0．05）。结论吲哚美辛对前列腺癌细胞DU145生长具有抑制作用,阻滞细胞向c2／M期转化,并促进其凋亡。其作用可能与抑制细胞PGE2释放、下调Bel-2／Bax有关。     

缬沙坦对血管衰老中凋亡调控基因Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨缬沙坦对血管衰老中凋亡调控基因Bcl-2、Bax表达的影响。方法健康Wistar大鼠分为青年组、衰老组及缬沙坦组，测定血浆丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平，同时采用恒速注人流体方法测定各组大鼠颈动脉血管的顺应性，利用免疫组织化学染色法、RT—PCR法和Western印迹法分析各组大鼠凋亡调控基因Bcl-2、Bax的mRNA及蛋白表达水平。结果与衰老组相比，缬沙坦组MDA浓度显著降低（P〈0．05），SOD浓度显著升高（P〈0．05），颈动脉血管的顺应性增高，其中弹性面积有显著性差异（P〈0．05），Bcl-2的mRNA及蛋白表达水平明显增高（P〈0．05），Bax的mRNA及蛋白表达水平降低（P〈0．05）。结论血管衰老有其特征性生理改变，Bcl-2、Bax的mRNA及蛋白表达的失衡可能是血管衰老的重要分子机制之一，缬沙坦有一定的逆转血管衰老的作用。     

依达拉奉对大鼠心肌再灌注抗凋亡作用的机制

目的：观察大鼠心肌缺血再灌注时依达拉奉抗凋亡作用的机制。方法：采用体外结扎大鼠左前降支制备大鼠心肌缺血再灌注模型。将Wistar大鼠随机分为对照组、缺血再灌注组、依达拉奉组（再灌注即刻经尾静脉注射依达拉奉3mg／kg）。分别用TUNEL染色法及免疫组化法检测心肌细胞凋亡、心肌凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果：（1）凋亡检测结果示,对照组无细胞凋亡,依达拉奉组较缺血再灌注组凋亡细胞数明品减少[（13．11±1．58）比（24．33±1．38）,P〈0．01];（2）免疫组化结果示,依达拉奉组与缺血再灌注组Bcl-2、Bax蛋白表达均明显高于对照组（P〈0．01）;依达拉奉组较缺血再灌注组Bcl-2蛋白表达明显升高[（0．2300±0．0218）比（0．0924±0．0152）],而Bax蛋白表达明显降低[（0．0249±0．0042）比（O．1312±0．0173）],P均〈0．01;缺血再灌注组Bcl-2／Bax比值较对照组明显降低[（0．6906±0．0035）比（1．1632±0．0212）],依达拉奉组Bcl-2／Bax比值（7．4752±0．5573）较缺血再灌注组和对照组明显升高（P〈0．01）。结论：依达拉奉能够减少心肌细胞凋亡,心肌细胞凋亡的减轻与下调Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达以及Bcl-2／Bax比值有关。     

IL-1β、IFN-γ对胰岛β细胞凋亡及胰岛素释放的影响

体外分离培养SD大鼠胰岛细胞，分别或共同加入IL-1β（终浓度20u／mL）和IFN-γ（终浓度150u／mL）处理。加入11．1mM的葡萄糖刺激胰岛素释放。应用放射免疫分析法测定培养液上清中胰岛紊浓度，流式细胞术检测胰岛细胞凋亡。结果：IL-1β单独作用于胰岛细胞，能抑制高糖刺激下胰岛素分泌及促进胰岛细胞凋亡。但与对照组比较差异无显著性（P〉0．05）；IFN-γ单独或联合IL-1β能显著抑制胰岛紊分泌（P〈0．05），促进胰岛细胞凋亡（P〈0．05）。结论：IFN-γ和IL-β能诱导胰岛β细胞凋亡，并且有协同作用。与自身免疫性糖尿病的发生、发展有一定关系。     

活化蛋白1在高糖诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡中的作用

目的观察活化蛋白1(AP-1)在高糖诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡中的作用。方法将体外培养的MC3T3-E1细胞分为正常对照组和实验组,实验组包括22.0 mmol/L D-葡萄糖组(高糖组)、P38MAPK-shRNA慢病毒转染组、P38MAPK信号转导阻断剂组、无关shRNA转染组、AP-1抑制剂SP600125组。采用TUNEL和流式细胞术检测细胞凋亡,用EMSA检测MC3T3-E1细胞AP-1的活性。结果与正常对照组相比,高糖组MC3T3-E1成骨细胞P38MAPK表达、AP-1活性、细胞凋亡显著增加。P38MAPK-shRNA慢病毒转染组和P38MAPK信号转导阻断剂组MC3T3-E1细胞AP-1活性较高糖组分别下降57.9%(P0.01)和45.6%(P0.05)。AP-1抑制剂组MC3T3-E1细胞凋亡率较高糖组下降39.7%(P0.01)。结论高糖通过激活P38MAPK增加AP-1活性,诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡,抑制AP-1活性后高糖诱导的MC3T3-E1细胞凋亡显著下降。     

吡格列酮对成骨细胞增殖及凋亡的影响

目的研究吡格列酮对成骨细胞增殖及凋亡的影响。方法以MC3T3-E1成骨细胞株为实验对象，分别用0μM、5μM、10μM、20μM、30μM、40μM吡格列酮干预，观察细胞活性、细胞周期及凋亡率的变化。结果随着浓度增加，成骨细胞的活性逐渐降低；与对照组相比，G0／G1，G2／M期细胞增多，S期细胞明显减少；凋亡率在5μM、10μM时低于对照组，20μM略低于对照组但无统计学意义（P〉0．05），30μL、40μM较对照组显著增高（P〈0．01）。结论吡格列酮在低浓度抑制成骨细胞凋亡，对细胞起保护作用，较高浓度则促进细胞凋亡。整体上可抑制成骨细胞DNA合成，抑制细胞增殖，导致细胞活性下降。     

虫草菌丝对非酒精性脂肪肝病大鼠肝细胞凋亡的作用及其相关机制

目的（1）证实肝细胞凋亡的异常增多存在于非酒精性脂肪性肝病中。（2）观察虫草菌丝对肝细胞凋亡异常增多的影响，并探讨可能的分子机制。方法通过高脂饮食建立大鼠非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的模型，同时设立正常饮食对照组，病理对照组（NASH组），虫草菌丝干预组（CS组）。肝组织切片HE染色观察肝脏病理改变；检测肝组织超氧化物歧化酶（SOD）活性；TUNEL检测肝组织肝细胞凋亡情况；免疫组织化学染色观察肝组织Bax、Bcl-2、Caspase-3、NF-κB P65蛋白表达情况。结果（1）与正常对照组相比，病理对照组大鼠肝组织广泛弥漫肝细胞脂肪变性，炎性细胞浸润、坏死、局部有纤维组织增生；肝脏SOD活性显著降低（P〈0．01）；TUNEL法检测肝细胞凋亡显著增多（P〈0．01）；免疫组化染色显示Bax、Caspase-3蛋白表达增加（P〈0．01），而Bcl-2无显著变化（P〉0．05）；（2）与病理对照组相比，虫草菌丝组大鼠肝组织有广泛肝细胞脂肪变性，炎性细胞浸润，可见灶性及点状坏死，未见纤维组织增生；肝组织SOD活性高于病理对照组（P〈0．05）；TUNEL法检测凋亡的肝细胞显著减少（P〈0．01）；免疫组化染色显示Bax、Caspase-3蛋白表达也明显降低（分别为P〈0．05、P〈0．01），而Bcl-2、NF-κB P65蛋白表达增加（P〈0．01）。结论（1）NASH时肝细胞凋亡异常增多。（2）虫草菌丝可以通过增加超氧化物歧化酶（SOD）活性来减少活性氧含量，降低Bax表达，增加Bcl-2表达和活化NF-κB P65减轻NAFLD中肝细胞凋亡从而在一定程度上具有保护肝脏功能的作用，对延缓或阻止脂肪肝病变的进展起到一定的作用。     

缺氧诱导因子1α在非离子造影剂诱导的肾小管上皮细胞凋亡中的作用及其机制

目的：应用缺氧诱导因子1α（hypoxia—induciblefactor-1α，HIF-1d）诱导剂氯化钴上调HIF-1α水平，观察其对非离子造影剂碘必乐诱导的HK-2细胞凋亡的作用和机制。方法：体外培养的HK-2细胞，分为阴性对照组、碘必乐阳性对照组（296mgl／ml，12h）、不同剂量及作用时间的氯化钴预处理与碘必乐共同作用组（氯化钻浓度为5、25、50、100μmol／L，分别预处理0h、1h、2h、4h、6h、12h）。通过流式细胞仪测定细胞凋亡率，Hoechst33258染色观察细胞捌1’：的形态学变化，WesternBlot方法榆测HIF-1α、Caspase-3和凋亡相关蛋白Bcl-2的表达水平。结果：（1）流式细胞仪检测结果表明，50μmol／L氯化钴预处理4h、6h和12h点与阳性对照组相比细胞凋亡率明显降低（10．95％，8．65％，8．61％vs22．06％，P〈0．05），其中6h、12h点较4h点对细胞凋亡的抑制作用更强（P〈0．05），而6h和12h点之间差异无统计学意义（P〉0．05）。100μmol／L与50μmol／L氯化钴预处理相同时间（6h、12h）细胞凋亡率差异无统计学意义（P〉0．05）；（2）Hoechst33258染色结果发现，与阳性对照组相比，50μmol／L氯化钴预处理6h和12h凋亡细胞明显减少，其它时间点与阳性对照组差异无统计学意义。（3）WesternBlot检测方法表明，50μmol／L氯化钻预处理1h以上即可引起HIF-1α表达增高，6h点表达最高（0．373&#177;0．032），12h点较前下降（0．285&#177;0．048）。与阳性对照组相比，50μmol／L氯化钴预处理4h、6h、12h，细胞内Caspase-3水平明显降低（P〈0．05，0．346&#177;0．037，0．294&#177;0．062，0．179&#177;0．051vs0．501&#177;0．039）。Bel-2表达水平明显增加（P〈0．05，0．275&#177;0.052，0．324&#177;0．046，0．337&#177;0．039vs0．099&#177;0．025）。结论：HIF-1α对非离子造影剂碘必乐诱导的人近端肾小管卜皮细胞凋亡有明显的抑制作用，其作用机制可能与下调Caspase-3和上调抗凋亡蛋白Bcl-2有关。     

雷帕霉素对肺癌SPC-A-1细胞增殖和凋亡的影响

目的 分析不同浓度的雷帕霉素体外处理人肺癌SPC-A-1细胞后，对细胞的增殖及凋亡的影响，并探讨其可能的作用机制。方法 采用CCK-8法测定雷帕霉素(5 ng/mL,10 ng/mL,15 ng/mL)处理人肺癌SPC-A-1细胞48 h后对细胞增殖的影响。运用FITC-Annexin V/PI双染色法，测定雷帕霉素处理SPC-A-1细胞48 h后对细胞凋亡的影响。使用Western Blot技术测定雷帕霉素作用SPC-A-1细胞48h后的p53、Bcl-2和Bax等凋亡蛋白表达情况。结果 雷帕霉素可以抑制SPC-A-1细胞增殖并可诱导其发生凋亡，其增殖抑制率与凋亡率变化存在剂量依赖性关系(P<0.05)。与对照组(雷帕霉素，0 ng/mL)比较，各浓度(5 ng/mL,10ng/mL,15 ng/mL)雷帕霉素处理对SPC-A-1细胞的凋亡率上升(P<0.05),且p53与Bax蛋白水平增加(P<0.05),而Bcl-2蛋白水平下降(P<0.05)。15 ng/mL雷帕霉素处理组细胞p53、Bax蛋白表达水平均与细胞凋亡率呈正相关(r=0.906,P<0...     

血管紧张素(1～7)防止血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡

目的已有实验证实血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）可诱导心肌细胞凋亡，本研究用血管紧张素（1～7）FAng（1～7）]干预AngⅡ诱导培养的乳鼠心肌细胞，以观察Ang（1～7）对心肌细胞的保护机制。方法分离出新生1～3d内的SD乳鼠心肌细胞进行体外培养，4d后将细胞随机分为正常对照组、AngⅡ组和AngⅡ＋Ang（1～7）组行加药干预，加药2d后用免疫细胞化学方法检测心肌细胞Bcl-2、Bax基因蛋白含量，流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率。结果正常对照组细胞Bcl-2表达灰度值为（12．4&#177;1.5），Bax表达灰度值为（6．9&#177;1．9），细胞凋亡率为（3．1&#177;1．4）％；AngⅡ组细胞Bcl-2表达灰度值为（7．4&#177;1．2），Bax表达灰度值为（16．4&#177;1．6），细胞凋亡率为（16．1&#177;2．2）％；AngⅡ＋Ang（1～7）组细胞Bcl-2表达灰度值为（10．5&#177;1．3），Bax表达灰度值为（11．1&#177;2．2），细胞凋亡率为（8．6&#177;2．4）％；各组间相互比较差异均具有统计学意义（P〈0．05）。结论Ang（1～7）可部分拮抗AngⅡ的作用，使心肌细胞Bax的表达减少，Bcl-2的表达增加，减少细胞凋亡率，起到细胞保护作用。