心肌肽素对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的影响

目的研究心肌肽素对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的影响,探讨心肌肽素在离子通道水平的药理作用机制。方法用急性酶解分离法获得豚鼠心室肌细胞,标准的全细胞膜片钳技术记录L型钙电流(ICa-L)。结果心肌肽素1、5、10、50、100、500 mg.L-1使豚鼠心室肌细胞ICa-L分别增加(5±4)%、(21±5)%、(30±5)%、(55±8)%、(76±11)%、(80±9)%,半最大效应浓度(EC50)为(18±6)mg.L-1。心肌肽素50 mg.L-1使ICa-L激活时间(TTP)从(6.7±0.9)m s缩短为(5.9±0.7)m s(P<0.01);使ICa-L电流密度-电压曲线下移,但激活电压、峰电压和I-V曲线的形状不变;激活曲线向负电压方向变化,半数激活电压从(-4.3±0.4)mV减少至(-8.6±0.4)mV(P<0.05);不影响稳态失活曲线和稳态失活后恢复曲线。结论心肌肽素浓度依赖性增强豚鼠心室肌细胞ICa-L。     

昆明小鼠心室肌细胞分离方法及动作电位、L型钙通道电流记录

目的 探讨耐钙昆明小鼠心室肌细胞的急性分离方法及AP、L型钙通道电流的记录。方法 采用三步灌流法灌流,首先灌流无钙台氏液,再换成含Ⅱ型胶原酶0.1 mg.ml_-1、胰蛋白酶0.01 mg.ml_-1、牛血清白蛋白0.2mg.ml_-1的无钙台氏液灌流,消化液灌流期间,每隔5min加入20μl 的20mM CaCl₂,以观察流出液是否有单个心肌细胞来判断消化终点,最后灌流含1 mg.ml_-1牛血清白蛋白的KB液,采用全细胞膜片钳记录方式记录到动作电位及L型钙通道电流。结果 可获得80～90%杆状心肌细胞,复钙后,仍有60%细胞保持静止,细胞表面干净整洁,折光性强,边缘和横纹清晰,立体感强获得60%左右的耐钙心室肌细胞,并记录到典型的AP、L型钙通道电流。结论 该分离方法分离的细胞具有耐钙性和正常电生理特性。     

虎杖苷对缺血缺氧下心肌细胞蛋白激酶C的影响

目的探讨虎杖苷对缺血缺氧作用下心肌细胞蛋白激酶C(PKC)活性的影响及其抗休克的机制。方法取大鼠乳鼠心室肌培养心肌细胞,用Koyama方法复制心肌细胞缺血缺氧模型。用γ-闪烁计数仪测定PKC的活性。结果正常状态下心肌细胞胞质PKC经虎杖苷(PD)刺激后活性下降(vs正常组P<0.05),但胞膜的PKC活性上升(vs正常组P<0.05)。缺血缺氧后胞质和胞膜PKC的活性均下降(vs正常组P<0.05),再经PD处理后胞质胞膜的PKC活性均上升(vs缺血缺氧组P<0.05,vs正常组P>0.05)。结论PD对缺血缺氧作用下的心肌有保护作用,可能是通过调节PKC的活性来发挥作用的,这可能是PD抗休克的分子机制之一。     

花生四烯酸乙醇胺对大鼠心肌细胞L型钙电流的影响

目的研究anandamide(花生四烯酸乙醇胺)对单个大鼠心肌细胞L型钙电流(I Ca-L)的影响。方法应用全细胞膜片钳技术记录I Ca-L,并观察anandamide对该电流的作用。结果 (1)anandamide浓度依赖性地减小I Ca-L,其IC50值为(1.3±0.3)μmol·L-1。(2)1μmol·L-1anandamide可明显使稳态失活曲线左移,失活中点电压(V1/2)由(-34.4±0.2)mV变为(-42.2±0.6)mV,K值由(5.7±0.2)变为(6.4±0.4),表明anandamide改变了钙通道失活的电压依赖性。anandamide 1μmol·L-1对稳态激活曲线无明显影响。结论 anandamide可使稳态失活曲线左移而剂量依赖性地减小I Ca-L。     

阿霉素对豚鼠单一心肌细胞钙电流(I_(Ca-L))的影响

目的　探讨阿霉素 (adriamycin ,ADR)诱发心肌病的发病机制。方法　采用膜片钳全细胞记录方法 ,研究ADR对豚鼠单一心肌细胞L型钙通道电流 (ICa L)的影响。结果　用 0 1mmol·L-1ADR灌流前后豚鼠心肌细胞ICa L电流 电压 (I U)关系曲线近似倒钟形 ,其峰值电压在 + 10mV ;0 1mmol·L-1ADR可使ICa L明显增大 ,由灌流前的 ( -0 93± 0 0 5 )nA(n =8)增大到 ( - 1 3 1± 0 0 8) (n =8) (P <0 0 1) ,其增大百分率为灌流前的 ( 4 1 6± 12 3 ) % (n =8)。结论　ADR激活电压依赖性钙通道促进钙内流很可能是ADR造成心肌细胞内钙超载 ,从而诱发心肌病的机制之一。     

大黄素对豚鼠胆囊平滑肌L型钙电流的调节

目的研究大黄素对豚鼠胆囊肌条收缩及L型钙电流的调节。方法取成年豚鼠,分离胆囊肌条,使用张力传感器记录胆囊肌条的收缩活动。采用酶消化法急性分离豚鼠胆囊平滑肌细胞,使用全细胞膜片钳技术记录L型钙电流。结果预先加入硝苯地平,大黄素对胆囊肌条的收缩效应明显减弱。大黄素增加胆囊平滑肌细胞L型钙电流,呈浓度依赖性。与正常对照组相比,10μmol·L-1大黄素明显增强+10mV时L型钙电流幅度的(45.2±2.26)%(P<0.05)。预先加入PKC抑制剂十字孢碱,大黄素对钙电流的调节基本被抑制。结论大黄素可通过PKC途径增强胆囊平滑肌L型钙电流,从而促进胆囊平滑肌收缩。     

双苯氟嗪对豚鼠心室肌细胞L-钙电流的影响

目的:观察双苯氟嗪(Dip)对豚鼠心室肌细胞L-型钙电流(I_(Ca-L))的影响。方法:酶解法制备单个心室肌细胞。应用全细胞膜片箝技术记录豚鼠单个心室肌细胞钙电流。结果:在0.3-30μmol/L范围内,Dip可浓度依赖性地降低电压依赖性激活I_(Ca-L)峰值,被Dip 3μmol/L所抑制的I_(Ca-L)在冲洗5min后可得到部份恢复。但Dip对I_(Ca-L)的电压依赖特征,最大激活电压,以及I_(Ca-L)稳态激活无明显影响。在Dip3μmol/L存在下,半数激活电压(V_(0.5))和斜率参数(к)与对照组相比,差异均无显著性。V_(0.5)分别为(-12.8±1.7)mV和(-13.2±2.4)mV,к分别为(7.1±0.4)mV和(7.5±0.5)mV(P>0.05)。Dip3μmol/L可明显使钙电流稳态失活曲线左移,加速钙通道电压依赖性稳态失活。V_(0.5)分别为(-19.7±2.4)mV和(-31±6)mV,к分别为(3.6±0.3)mV和(1.8±0.2)mV(P<0.05).Dip 3μmol/L还使I_(Ca-L)从失活状态下的恢复明显减慢。结论:Dip主要作用于L-型钙通道的失活状态,加速钙通道失活,并使其从失活状态下恢复减慢,从而抑制I_(Ca-L)。     

胍丁胺对大鼠心室肌细胞L—钙通道电流的影响

目的:观察胍丁胺(Agm)对大鼠心室肌细胞L-型钙通道电流(I_(Ca-L))的影响.方法:以酶解法制备单个心室肌细胞.应用全细胞膜片箝技术记录大鼠单个心室肌细胞钙通道电流.结果:(1)Agm(0.5,1,2mmol/L)可浓度依赖性地降低电压依赖性激活I_(Ca-L)(pA)峰值,其值从1451±236 (对照组)到937±105(n=8,P<0.05),585±74(n=8,P<0.01),和301±156(n=8,P<0.01).(2)Agm 1 mmol/L使用依赖性地阻滞I_(Ca-L)·1 Hz时抑制率为53％±12％(P<0.05),3Hz时为69％±11％(P<0.01).(3)Agm使I-V曲线上移,但对I_(Ca-L)的电压依赖特征、最大激活电压以及I_(Ca-L)稳态激活无明显影响.在Agm 1 mmol/L作用下,半数激活电压(V_(0.5)和斜率参数(k)与对照组相比均无显著性差异.V_(0.5)分别为(-20.2±2.5)mV和(-20.5±2.7)mV,k分别为(3.2±0.4)mV和(3.0±0.5)mV.(4)Agm 1 mmol/L可明显使钙电流稳态失活曲线左移,加速钙通道电压依赖性稳态失活.V_(0.5)分别为(-32±6)mV和(-40±5)mV,k分别为(7.6±O.9)mV和(12.5±1.1)mV(P<0.05).(5)Agm 1mmol/L还使I_(Ca)从失活状态下恢复明显减慢.结论:Agm抑制I_(Ca-L),并主要作用于L-型钙通道的失活状态,表现为钙通道失活加速和从失活状态下恢复减慢.     

Effect of resveratrol on L-type calcium current in rat ventricular myocytes

AIM: To study the effect of resveratrol on L-type calcium current (I(Ca-L)) in isolated rat ventricular myocytes and the mechanisms underlying these effects. METHODS: I(Ca-L) was examined in isolated single rat ventricular myocytes by using the whole cell patch-clamp recording technique. RESULTS: Resveratrol (10-40 micromol/L) reduced the peak amplitude of I(Ca-L) and shifted the current-voltage (I-V) curve upwards in a concentration-dependent manner. Resveratrol (10, 20, 40 micromol/L) decreased the peak amplitude of I(Ca-L) from -14.2+/-1.5 pA/pF to -10.5+/-1.5 pA/pF (P<0.05), -7.5+/-2.4 pA/pF (P<0.01), and -5.2+/-1.2 pA/pF (P<0.01), respectively. Resveratrol (40 micromol/L) shifted the steady-state activation curve of I(Ca-L) to the right and changed the half-activation potential (V0.5) from -19.4+/-0.4 mV to -15.4+/-1.9 mV (P<0.05). Resveratrol at a concentration of 40 micromol/L did not affect the steady-state inactivation curve of I(Ca-L), but did markedly shift the time-dependent recovery curve of I(Ca-L) to the right, and slow down the recovery of I(Ca-L) from inactivation. Sodium orthovanadate (Na(3)VO(4); 1 mmol/L), a potent inhibitor of tyrosine phosphatase, significantly inhibited the effects of resveratrol (P<0.01). CONCLUSION: Resveratrol inhibited I(Ca-L) mainly by inhibiting the activation of L-type calcium channels and slowing down the recovery of L-type calcium channels from inactivation. This inhibitory effect of resveratrol was mediated by the inhibition of protein tyrosine kinase in rat ventricular myocytes.     

银杏酮酯对缺血豚鼠心室肌细胞Ⅰ_(Ca-L)和游离钙的影响

目的观察银杏酮酯GBE50对模拟缺血游离豚鼠心室肌细胞L型钙电流和游离钙浓度的影响,探讨GBE50抗心肌缺血的作用机制。方法应用单酶酶解法分离游离单个豚鼠心室肌细胞,采用膜片钳全细胞记录心室肌细胞L型钙电流,通过激光共聚焦显微镜扫描测定细胞内游离钙浓度的动态变化。结果缺血抑制豚鼠心室肌细胞的ICa-L(n=9,P<0.01),使豚鼠心室肌细胞内游离钙增加(n=10,P<0.01),而50mg·mL-1GBE50减轻缺血对ICa-L的抑制效应(n=6,P>0.05),减少缺血后心室肌细胞内游离钙浓度的增加(n=10,P>0.05)。结论GBE50可减轻心肌缺血区域与非缺血区域电生理的异质性,维持缺血后豚鼠心肌细胞电生理的稳定性,并减轻缺血后心肌细胞内钙超载介导的心肌损伤。     

芍药苷对大鼠心肌细胞L钙通道的阻断作用

目的　在单个大鼠心肌细胞上 ,研究芍药苷对L型钙通道的阻断作用。方法　采用全细胞膜片钳技术。结果　芍药苷浓度依赖性阻断ICa ,L,其IC50 为 387μmol·L- 1 。应用 40 0 μmol·L- 1 芍药苷后 ,ICa,L最大电流幅度下降 51 % ,但I U曲线的形态和反转电位没有变化 ,激活曲线也没有明显的改变 ;失活曲线向较负电压的方向偏移约 8 3mV ,通道从失活中恢复的时间明显延长 ,由给药前的 (96± 1 7)ms增至 (1 85± 2 8)ms ;芍药苷的阻断作用没有显示出频率依赖性。结论　芍药苷对心肌细胞ICa ,L有阻断作用     

白藜芦醇对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的影响

目的研究白藜芦醇(resveratrol,RES)对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的影响。方法酶解法分离单个豚鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录白藜芦醇对豚鼠单个心室细胞L型钙通道电流(ICa-L)的影响。结果不同浓度的RES明显抑制ICa-L,1、10、100μmol.L-1L的RES使其峰电流密度从(12.96±1.48)pA/pF减少到(11.36±1.59)、(9.96±1.51)和(7.77±0.68)pA/pF(n=6,P<0.01),冲洗后可恢复至(11.85±0.83)pA/pF。RES可使ICa-L的I-U关系曲线上移,其形状和峰值电压保持不变;RES还可使通道的激活曲线右移,但失活曲线和失活恢复时间无改变。结论白藜芦醇通过延长L型钙通道激活过程而明显抑制ICa-L,减少细胞外的钙离子内流,延长有效不应期,从而发挥抗心律失常作用。     

尾加压素Ⅱ对大鼠心室肌细胞L-型钙电流的影响

目的 研究尾加压素Ⅱ(UⅡ)对大鼠心室肌细胞L-型钙电流(Ica-L)的影响。方法 利用全细胞膜片钳技术,观察给予不同浓度的UⅡ灌流后,大鼠心室肌细胞Ica-L的变化。结果 运用全细胞膜片钳技术,在单个心室肌细胞上给予不同浓度的UⅡ(10-9～10-5mol/L)灌流5min后,Ica-L峰值下降分别为(6.7±1.8)pA/pF,(5.9±2.0)pA/pF,(5.4±2.2)pA/pF,(4.5±2.0)pA/pF,(3.8±1.8)pA/pF,与对照组(8.0±1.2)pA/pF相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 UⅡ呈浓度依赖性地抑制大鼠心室肌细胞Ica-L强度;UⅡ可能通过抑制心室肌细胞Ica-L而发挥其心功能抑制作用。     

过氧化氢对大鼠心室肌细胞L-型钙通道电流的影响

目的:研究过氧化氢(H2O2)对单个大鼠心室肌细胞L-型钙通道电流(Ica,L)的影响。方法:用急性酶解法获得单个大鼠心室肌细胞;用标准的全细胞膜片钳技术记录钙通道电流,观察5mmol·L-1H2O2引起单个大鼠心室肌细胞Ica,L改变。结果:在5mmol·L-1H2O2作用下,大鼠心室肌细胞Ica,L峰值电流密度从4.89±0.52pA/pF增加至9.80±0.65pA/pF(P<0.05,n=10),电流-电压曲线下移,但激活电位、峰电位和翻转电位无明显改变;H2O2对Ica,L激活时间常数-电压曲线无明显影响,但可使其灭活时间常数-电压曲线明显向上移;H2O2对Ica,L稳态激活曲线无明显改变,但可使其稳态失活曲线明显左移,V0.5从(-26.85±5.3)mV左移至(-37.20±4.5)mV(P<0.05,n=5)。结论:H2O2可以增加大鼠心肌细胞Ica,L,且使其失活明显减慢。     

Blocking effects of phentolamine on L-type calcium current and ATP-sensitive potassium current in guinea pig ventricular myocytes

目的：研究酚妥拉明对豚鼠心室肌细胞Ｌ型钙电流及ＡＴＰ敏感钾电流的作用．方法：用膜片钳的全细胞记录方式观察钙电流和ＡＴＰ敏感钾电流．结果：酚妥拉明５，２５和１００μｍｏｌ·Ｌ－１对钙电流呈浓度依赖性和非电压依赖性的抑制作用，抑制率分别为１７％，２３％和３０％，而对电流电压关系没有影响．这一抑制作用与酚妥拉明对α１和α２受体的作用无关．酚妥拉明１００μｍｏｌ·Ｌ－１可显著抑制ＤＮＰ诱导产生的ＡＴＰ敏感钾电流，抑制率为７５％．结论：酚妥拉明显著抑制豚鼠心室肌细胞Ｌ型钙电流和ＡＴＰ敏感钾电流．