健康直系亲体靶向DC-CIK细胞的制备及在恶性肿瘤免疫治疗中的应用

目的:探讨健康直系亲体负载肿瘤干细胞抗原的靶向DC-CIK细胞的制备方法及对恶性肿瘤患者的治疗价值。方法:43例恶性肿瘤患者,用智能单采机采集健康直系亲体的外周血单个核细胞,其中贴壁细胞经体外诱导产生树突状细胞(DC),悬浮细胞经体外诱导产生CIK,DC负载不同肿瘤干细胞抗原制备靶向DC细胞,将靶向DC与CIK细胞共培养制备靶向DC-CIK,检测靶向DC-CIK细胞表面分子的表达及细胞增殖情况,并将靶向DC-CIK分6次回输给43例患者,治疗3个疗程后,结合影像学等检查综合评价临床治疗的疗效,同时观察不良反应。结果:靶向DC细胞与CIK细胞共培养后,可明显刺激CIK细胞的增殖,同时CD3~+CD8~+细胞,CD56~+及CD3~+CD56~+细胞的含量明显增加,43例恶性肿瘤患者接受健康直系亲体靶向DC-CIK细胞输注,PR17例,SD 25例,PD 1例,临床疗效明显,无不良反应。结论:健康直系亲体靶向DC-CIK细胞应用于恶性肿瘤患者效果确切、无明显不良反应。     

LAK细胞的研究进展

LAK细胞是80年代发现的一种新的细胞毒性淋巴细胞。平时处于抑制状态,当被诱导因子激活增殖后,对人体内的肿瘤细胞具有很强的杀伤作用,而对人体内的正常组织细胞几乎不破坏。对中、晚期癌症有一定的疗效,尤其对肾癌、黑色素瘤及肝癌等疗效较好。本文就LAK细胞的特性、制备、测定方法、体内分布、杀伤机制及临     

LAK/γIL-2治疗恶性肿瘤的疗效观察

淋巴因子激活的杀伤细胞(ALK细胞)是近年来发现的又一类重要的免疫活性细胞,大量文献报道显示联合应用LAK细胞和重组人白细胞介素-2(γIL-2)治疗恶性肿瘤取得明显疗效。自1993年10月以来,我们采用体外液相两步高效活化扩增技术制备的LAK细胞联合γIL-2治疗20例恶性肿瘤患者,取得一定疗效,报告如下:     

人胎肝细胞悬液治疗慢性重症肝炎疗效观察——附3例报告

本文介绍了胎肝细胞悬液静脉输注治疗慢性重症肝炎,通过3例临床观察,病人腹胀、恶心呕吐,食欲不振等主观症状及肝功能、凝血功能均有不同程度的改善,显示了一定的疗效.同时简述了胎旰细胞悬液的制备方法,其疗效机理可能是为受体肝脏提供了暂时而有效的代偿支持作用,胎旰细胞的裂解产物刺激受体肝细胞再生,它所释放的免疫调控因子阻止受体肝细脏细胞进一步坏死.文中对治疗中可能出现的免疫排斥和ABO血型等问题进行了一般讨论.     

浅谈中药汤剂制备过程中应注意的几个环节

汤剂 ,古代称汤液 ,是中医临床常用的剂型之一。他以其组方灵活 ,制作过程快、见效迅速而在临床上被广泛应用。因此 ,饮片的质量和汤剂的制备方法正确与否对临床疗效有直接的影响 ,不正确的制备方法 ,甚至会产生毒副作用。现就中药汤剂的制备。应注意的几个环节作如下探讨。1　保证饮片质量在汤剂的制备过程中 ,首先要对饮片质量进行检查 ,要选择无糜烂 ,无柱虫侵袭过质量较好的饮片做制备材料 ,从而保证汤剂的质量和疗效。2　要对饮片进行浸泡由于常用的中药饮片多为干品 ,煎煮时需加水浸泡 ,使植物细胞重新膨胀 ,细胞中的可溶性物质重新溶…     

原代喉癌细胞药敏实验研究

目的：化疗前进行肿瘤细胞药敏试验，以提高疗效。方法：应用MTT比色法和流式细胞术对手术切除的喉癌组织制备单细胞悬液，体外培养，进行4种抗癌药物敏感性试验和细胞周期检测。结果：5－FU、MTX对喉癌细胞敏感性强，流式细胞仪检测，喉癌细胞G1期细胞增多，S期细胞 减少。结论：在化疗前进行肿瘤细胞药敏试验，选择高效药物用于同一患者，对于提高喉癌的疗效，减少毒副作用的产生具有重要意义和实际应用价值。     

流式细胞术检测结肠癌细胞表面sialyl-LewisA/X的样品制备方法探讨

目的 探讨不同样品制备方法 对结肠癌细胞表面sialyl LewisA/X抗原的影响.方法 应用EDTA、胰酶、细胞刮、胰酶-EDTA、胰酶联用细胞刮刀组制备培养入结肠癌细胞单细胞悬液.采用流式细胞仪检测入结肠癌细胞表面sialyl LewisA/X的嘉达和细胞数.结果 单用EDTA或细胞刮制备的细胞悬液中细胞产量低,胰酶或胰酶联用细胞刮刀组制备的细胞悬液中细胞产量高.胰酶组细胞表面sialyl LewisA/X的荧光强度明显降低.EDTA组、细胞刮组、胰酶联合细胞刮组间sialyl LewisA/X的荧光强度表达差异无统计学意义.结论 胰酶联用细胞刮法是贴壁培养细胞制备单细胞悬液的一种好方法.     

CAR⁃T细胞技术研究进展及发展趋势

由于存在肿瘤异质性和免疫抑制微环境等因素,CAR?T细胞治疗实体瘤还未显示出明显的临床疗效。针对实体瘤治疗,近年在CAR?T细胞制备方面已有较大进展。本文就近年来在实体瘤治疗方面CAR?T细胞技术的研究进展和未来发展趋势进行评述。     

脂质纳米粒-mRNA递送系统及其在嵌合抗原受体T细胞治疗中的应用

尽管嵌合抗原受体（CAR）T细胞治疗在血液系统恶性肿瘤患者中取得了显著的临床疗效，但需要进一步优化。脂质纳米粒（LNP）-信使核糖核酸（mRNA）递送系统作为一种非病毒性基因载体运用于CAR-T细胞治疗研究中，一方面通过LNP将密封蛋白-6 mRNA靶向递送至抗原提呈细胞，从而实现抗原提呈细胞辅助性增强密封蛋白-6靶向的CAR-T细胞的功能，以进一步诱导对实体瘤的清除；另一方面，通过LNP将成纤维细胞激活蛋白（FAP）CARmRNA靶向递送至T细胞，实现体内FAP靶向的CAR-T细胞的制备，以通过阻断心脏纤维化过程达到治疗急性心肌损伤的目的。在CAR-T细胞研究和治疗中，LNP-mRNA递送系统具有不与细胞基因组整合、价格便宜、毒副作用小及可修饰等优点，亦存在蛋白瞬时表达导致调控细胞功能的持久性不足及制备等方面的技术局限性。本文综述了LNP-mRNA递送系统及其在CAR-T细胞治疗中的应用研究。     

三氧化二砷及其磁性纳米复合体对骨肉瘤作用的实验研究

目的:探讨三氧化二砷及其磁性纳米复合体对骨肉瘤的影响。方法:研究并比对了三氧化二砷、顺铂两种药物对骨肉瘤细胞MG-63的抑制作用,并制备磁性三氧化二砷-聚乳酸纳米粒子复合体,将其经尾静脉注入成骨肉瘤的裸鼠体内,与三氧化二砷、顺铂的疗效进行比较。结果:三氧化二砷可更有效地抑制MG-63细胞生长,引起细胞凋亡,并将细胞抑制于G1期。结论:磁性三氧化二砷纳米粒子可明显抑制裸小鼠骨肉瘤的生长,其可减少三氧化二砷的用量,从而减小毒副作用。     

健康脐带血LAK／IL—2细胞在肿瘤化疗中的应用

化疗存在不同程度的毒副作用 ,如骨髓抑制等 ,而生物治疗是一种有效的治疗方法。脐血 LAK/ IL- 2细胞对多种癌症已证实有良好疗效 ,而且脐血 LAK/ IL- 2制备、应用均较便利     

复方芜荑药膜的制备工艺及抗病毒活性的实验研究

目的 探讨中药复方芜荑药膜的制备及抗病毒作用机理。方法 利用新鲜猪巩膜采用离心法制备胶原膜。采用细胞病变法和MTT比色法对复方芜荑水、醇提液做体外抗HSV-I感染的实验研究。结果 此方法制得的胶原膜剂为I型胶原，复方芜荑水提液成分体外抗HSV-I感染的作用较强，细胞毒性小。结论 中药复方芜荑药膜的制备切实可行，治疗单疱病毒疗效确切，并可保护病变组织，是一种全新中药外用缓释剂。     

流式细胞术单分散细胞悬液样品的制备方法

流式细胞术是近年来发展的一项新技术,应用该项技术的重要环节是制备合格的单分散细胞悬液。本文对食管癌组织、脱落细胞和血液标本的悬液制备方法作了初步探讨,结果表明,胶原酶对实体肿瘤组织单细胞悬液制备是可行的。脱落细胞和血液样品容易得到合格的细胞悬液。并对影响流式细胞分析的一些因素作了简单的讨论。     

自制爬片装置用于细胞爬片及细胞染色

目的利用自制爬片装置改进细胞爬片的制备方法。方法通过自制装置和传统方法制备细胞爬片,苏木精- 伊红染色法（HE 染色）观察细胞生长状态,比较两种细胞爬片制备方法的差异;利用自制装置制备同时给予3 种不同干预处理的细胞爬片,验证其应用于制备多干预条件细胞爬片;制备同时含有3 种不同细胞的集成爬片,验证其用于制作细胞集成爬片的应用。结果自制装置可简化细胞爬片流程,细胞直接贴于载玻片上生长,未出现污染和增殖受限,制作多干预或多种细胞集成爬片效果明确,无相互干扰现象。结论自制装置能更简便地制备以满足普通染色及特殊染色实验要求的细胞爬片,是一种更好的制备细胞爬片的方法。     

DC-CIK细胞输注治疗急性髓细胞白血病50例分析

目的观察自体外周血移植联合自身白血病细胞冻融抗原负载的树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞(DC-CIK)细胞输注治疗急性髓细胞白血病的安全性和临床疗效。方法 50例初发急性髓细胞白血病患者抽取未缓解的骨髓细胞制备自身白血病细胞冻融抗原,在自体外周血干细胞采集时留取部分单个核细胞培养DC-CIK细胞,利用制备好的白血病冻融抗原共培养激活扩增DC-CIK细胞。待患者自体外周血造血干细胞移植后30～60d输注自身白血病细胞冻融抗原负载的DC-CIK细胞,每例每疗程回输细胞总数大于7×109,同时给予白细胞介素-2(IL-2)200万单位皮下注射,每天1次,连续10d皮下注射。观察患者接受细胞输注治疗的安全性及临床疗效,并与既往接受自体外周血移植但未输注DC-CIK细胞治疗的52例急性髓细胞白血病患者在临床疗效方面进行比较分析。结果接受自身白血病细胞冻融抗原负载的DC-CIK细胞输注治疗的50例患者中,4例在DC-CIK细胞输注过程中出现一过性畏寒发热反应,但最高体温均低于39℃(37.8～38.5℃),经物理降温后恢复正常。其他患者均未出现异常不适反应。患者接受DC-CIK治疗结束后随访6～24个月,总体生存率(OS)、无病生存率(DFS)均高于同期未输注DC-CIK细胞治疗的对照组患者,其中随访24个月时OS、DFS均显著高于未输注DC-CIK细胞治疗的对照组患者(P<0.05)。结论对急性髓细胞白血病患者采用自体外周血移植联合自身白血病细胞冻融抗原负载的DC-CIK细胞输注治疗不良反应小,有助于清除移植后微小残留病和提高患者生存率,提示该治疗方法对急性髓细胞白血病具有良好的治疗应用前景。     

自体CIK细胞过继免疫治疗恶性肿瘤的实验研究

目的:观察细胞因子活化的杀伤细胞(CIK细胞)治疗恶性实体瘤的疗效.方法:分离患者自体外周血单核细胞(PBMC),用γ-IFN、抗CD3单克隆抗体、IL-2、IL-1等细胞因子诱导激活,并大量扩增培养.制备成细胞因子活化的杀伤细胞(cytokin induced killer即CIK),应用该细胞治疗中晚期恶性肿瘤患者23例.结果:3例患者完全缓解,5例患者部分缓解,7例好转,7例病情稳定,1例进展,治疗总有效率为34.8%.23例患者治疗后生命质量明显提高.治疗过程中除2例患者出现发热外(体温38.5℃左右),其他无任何不良反应.结论:CIK细胞过继免疫治疗恶性肿瘤疗效确切,副作用小,并能有效改善和提高患者的机体免疫功能.     

单克隆抗体技术及其在治疗自身免疫性疾病方面的研究进展

单克隆抗体技术是现代生命科学研究的重要技术手段之一,随着分子生物学和细胞生物学的发展,单克隆抗体制备技术也不断发展完善,从最初的杂交瘤技术到目前的转基因小鼠制备技术,单克隆抗体的发展经历了从鼠源性到全人源化的转变。越来越人源化的单克隆抗体在基础研究、医学诊断和临床治疗等领域展现出了优势和应用前景。在治疗自身免疫性疾病方面,单克隆抗体药物可以通过抑制细胞及生长因子活性、阻滞和下调受体信号通路活性、耗竭异常免疫细胞及介导信号等方式发挥疗效,且不良反应少,对肌体正常免疫功能无明显损害。     

试剂盒法制备细胞块的效果及其技术要点

目的:探讨应用细胞块制备试剂盒制备细胞块效果以及制块过程中的技术要点。方法:应用细胞块制备试剂盒法制备细胞块,常规包埋制片后进行HE染色及免疫组化染色,观察其效果。结果:细胞块制备试剂盒制成的细胞块不散,可对微量标本进行处理,具备组织学优点;满足标本连续切片,并可永久保存标本;能满足免疫组化检测需要。结论:细胞块制备试剂盒法操作简单,技术难点不多,质量容易控制,便于基层医院推广。     

人自体肿瘤细胞凋亡抗原负载的DC疫苗的临床应用研究

目的 探讨人自体肿瘤细胞凋亡抗原负载的树突状细胞(DC)疫苗的实验室制备、临床应用安全性及初步疗效.方法 1例卵巢腺瘤Ⅱ～Ⅲ级,(种植灶)低分化腺癌患者,右卵巢癌术后22个月,发现腹腔转移半个月.患者签署知情同意书后,造血动员,无菌100ml抗凝全血,制备DC疫苗.收获DC疫苗前对培养上清进行细菌内毒素、细菌、真菌及支原体检测.检查合格后分4次腹股沟淋巴结富集区皮内注射.在回输前1天及每次回输后第3天抽血,进行血常规、肝功能、白介素(IL)系列及自然杀伤(NK)细胞项目检查.结果 制备的DC疫苗质量检查合格,回输后患者无任何不适反应.血常规及肝功能值均在正常范围内,无明显变化,IL-2、IL-4和IL-12有明显提高,NK细胞回输后也提高至约2.45～3.40倍.结论 自体肿瘤细胞凋亡抗原负载的DC疫苗回输是安全的,且显示出一定的疗效.     

猪主动脉脱细胞血管基质制备

目的研究脱细胞血管基质的制备方法。方法采用胰蛋白酶、低渗溶液、化学除垢剂法处理猪胸主动脉来制备脱细胞血管基质，标本作苏木素-伊红染色，大体、光镜及扫描电镜、透射电镜观察。结果经该法处理的血管细胞全部脱除，胶原纤维、弹性纤维无断裂，细胞外基质保持完好。结论酶、低渗溶液、化学除垢剂联合法是制备脱细胞血管基质的较好方法。