胚中脑黑质移植入震颤麻痹模型大鼠脑内的实验研究

将6 - 羟基多巴胺(6 - OHDA) 分两点注入SD大鼠左侧中脑黑质内侧端,制成震颤麻痹模型,毁损后6 ～8 周,用胚龄14～16 天同种胚鼠中脑黑质细胞悬液植入模型鼠尾壳核。实验分正常对照组,模型对照组,单纯胚中脑黑质移植组(MS组) ,含层粘蛋白Laminin 胚中脑黑质移植组(LMS组) ,含雪旺氏细胞胚中脑黑质移植组(SMS组) 。于移植后2 ～4 个月分别测试旋转试验,MS组、LMS组及SMS组与模型组间均有显著差异(P< 0-01) 。动物经测试后处死。脑切片观察发现,损伤侧中脑黑质DA神经元95% 以上死亡,移植组织位于尾壳核背侧或突入侧脑室,LMS组移植区> SMS组移植区> MS组移植区。三个移植区均见TH、GABA 免疫阳性细胞,其形态及大小与正常对照侧中脑黑质所见相似。LMS组与SMS组多巴胺阳性细胞突起较MS组多且长。本实验证明中脑黑质移植物Laminin 与雪旺氏细胞均能促进DA能神经元突起生长。     

胚胎中脑神经干细胞移植治疗大鼠帕金森病模型

目的：研究胚胎中脑神经干细胞（ mNSCs）移植对帕金森病（ PD）模型大鼠的治疗作用。方法分离培养大鼠胚胎mNSCs并进行EGFP基因修饰。前脑内侧束和纹状体立体定向注射6－羟多巴胺建立PD大鼠模型。将EGFP基因修饰mNSCs定向移植到PD大鼠纹状体区。免疫荧光组织化学鉴定移植细胞的存活、迁移和分化。行为学实验观察治疗效果。结果 EGFP基因修饰胚胎mNSCs移植能分化为多巴胺神经元和小胶质细胞。移植后行为学实验发现可改善运动功能。结论移植EGFP基因修饰胚胎mNSCs可改善PD大鼠的运动障碍。     

小鼠胚胎干细胞植入大鼠脑内存活和增殖

目的：观察小鼠胚胎干细胞（ES细胞）植入大鼠的隔区和海马内后存活和增殖的情况。方法：以SD大鼠为宿主，将BrdU标记的ES细胞植入宿主的隔区和海马内，移植后1、2、3、4和8周后取脑，冰冻切片，进行尼氏、BrdU、PCNA免疫组织化学染色，观察ES细胞存活和增殖的情况。结果：ES细胞移植入大鼠隔区和海马内后，从第1周到第3周，移植物呈团块生长，第4周移植物较第3周缩小，第8周未发现移植物；BrdU和PCNA（核增殖抗原）免疫染色结果阳性。结论：小鼠ES细胞移植入大鼠隔区和海马内后，可以存活增殖4周左右。     

小鼠胚胎干细胞植入大鼠脑内存活和增殖

【目的】观察小鼠胚胎干细胞 (ES细胞 )植入大鼠的隔区和海马内后存活和增殖的情况。【方法】以SD大鼠为宿主 ,将BrdU标记的ES细胞植入宿主的隔区和海马内 ,移植后l、2、3、4和 8周后取脑 ,冰冻切片 ,进行尼氏、BrdU、PCNA免疫组织化学染色 ,观察ES细胞存活和增殖的情况。【结果】ES细胞移植入大鼠隔区和海马内后 ,从第l周到第 3周 ,移植物呈团块生长 ,第 4周移植物较第 3周缩小 ,第 8周未发现移植物 ;BrdU和PCNA(核增殖抗原 )免疫染色结果阳性。【结论】小鼠ES细胞移植入大鼠隔区和海马内后 ,可以存活增殖 4周左右     

大鼠胚胎卵巢移植的实验研究

目的探讨大鼠胚胎卵巢异体异位移植后的生长发育及功能。方法将大鼠胚胎的卵巢移植入去势成年雌性大鼠的肾被膜下,移植40d后取材进行组织学研究,观察移植效果;同时测定血清雌、孕激素等水平。结果移植后第40天,组织学观察,移植物内可见大量发育卵泡及黄体与间质腺,移植卵巢中有丰富的血管。血清雌、孕激素与正常成年大鼠间无显著性差异(P>0.05)。结论大鼠胚胎卵巢移植后能继续生长发育并具有内分泌功能。     

单点注射6-羟基多巴胺成功建立帕金森病大鼠模型的实验研究

目的 探讨成功建立帕金森病（Parkinson＇s disease,PD）大鼠模型的快速有效方法.方法 将Wistar大鼠92只,随机分为实验组（80只）及对照组（12只）,采用脑立体定向术,实验组在大鼠右侧中脑腹侧被盖区（ventral tegmental area,VTA）注入6-OHDA,经阿朴吗啡（Apomorphine,APO）诱导表现为恒定左侧旋转且旋转圈数﹥210 r/30 min的视为成功PD大鼠模型,对照组则在脑部相应位置注入生理盐水.免疫组化法观察成功模型毁损侧黑质酪氨酸羟化酶（TH）阳性神经元的形态及数量变化.结果 （1）行为学检测：模型组与对照组手术后分别死亡2只及1只,实验组78只大鼠中36只左侧恒定旋转圈数﹥210 r/30 min,造模成功率为46.2%,并且维持时间长.（2）免疫组化：成功大鼠模型毁损侧黑质区TH阳性的神经元较对侧及对照组明显减少（P＆lt;0.01）.结论 大鼠中脑VTA单点注射6-OHDA制作PD大鼠模型,易于定位,操作简单,动物死亡率低,模型成功率较高,成本较低,是较快建立稳定PD大鼠模型的可行方法.     

大鼠胚胎卵巢异体异位移植的实验研究

目的研究大鼠胚胎卵巢异体异位无血管皮下移植后的生长、发育及大鼠内分泌功能恢复情况.方法将孕龄为18-20 d的新鲜或冻融大鼠胚胎卵巢植入去势后4周的大鼠颈部皮下,通过阴道脱落细胞的观察和血清雌二醇（E2）、孕酮（P）的测定了解大鼠内分泌恢复情况,并对移植卵巢及自身子宫进行组织学观察.结果新鲜组和冷冻组分别有52.17%和38.01%的大鼠恢复了动情周期,激素水平分别在移植35 d和49 d恢复到正常水平,移植卵巢明显增大,内可见不同阶段的发育卵泡及黄体,子宫内膜有雌激素效应.结论大鼠胚胎卵巢异体异位无血管皮下移植后能存活、生长发育并具有与正常卵巢相似的内分泌功能.超速冷冻法能较好的保存胚胎卵巢的活性,复苏后与新鲜胚胎卵巢组织具有相同的生理活性.     

胚鼠腹侧中脑组织联合胚肾组织脑内移植治疗帕金森病的实验研究

目的 :观察胚肾组织对DA细胞的作用 ,为临床治疗PD提供实验依据。方法 :采用 6-OHDA损毁黑质区和腹侧被盖区制作成功的PD大鼠模型 46只。随机分组 :实验组 1:分为VM 1组 (胚VM组织和胚肾组织联合培养移植组 ;N =6)和VM2组 (单纯VM组织培养移植组 ;N =6)。分别取 14天和 18天大鼠胚VM和肾组织 ,制备成约 (1～ 1.5 )× 10 5个细胞的细胞悬液 ,植入PD大鼠毁损侧尾壳核内。移植后 1天 ,行TUNEL、TH染色和流式细胞仪检测。实验组 2 :分为VM单独移植组 (singleVM组 ,N =12 ) ;VM和胚肾组织联合移植组 (Co移植组 ,N =12 ) ;空白对照组 (N =10 )。取 14天和 18天的胚VM和肾组织 ,制备胚VM细胞悬液 ,同时将肾组织修成 0 .2mm3的组织块。singleVM组每只动物分两点植入 9μlVM细胞悬液 ;Co移植组每只动物亦植入 9μl的VM细胞悬液 ,留针 10分钟后再植入0 2mm3的胚肾组织块。动物分别存活 3、6个月 ,存活期间用APO诱导 ,观察旋转行为行TH和HE染色。结果 :实验组 1:TH染色显示 ,移植后 1天VM 1移植组和VM 2移植组纹状体针道部位有大量THir阳性细胞 ,前者较后者THir阳性细胞数显著增多 (P <0 .0 5 )。TUNEL法显示移植后 1天VM1移植组和VM2移植组纹状体针道部位有大量TUNEL阳性细胞。前者较后者TUNEL阳性细胞数显著减少     

胚胎干细胞移植治疗帕金森病的进展

帕金森病是一种常见于中老年人的中枢神经系统变性疾病，主要症状表现为静止性震颤、肌肉僵直，运动减少、面具样脸、流涎等特点。该病病变主要是由于黑质、纹状体多巴胺能神经元系统的部分多巴胺能神经元的衰竭死亡。但其（特别是原发性帕金森病）确切的病因仍不清楚。     

帕金森病大鼠模型的改进及神经前体细胞移植治疗的行为学研究

目的 探讨提高6-羟多巴胺(6-OHDA)帕金森病大鼠模型成功率的技术改进方法，并对改进模型进行行为学评价?观察神经前体细胞定点移植对改进型PD大鼠模型行为学的影响。方法 6-0HDA双点微量注射于大鼠左侧大脑制备PD大鼠模型并观察其行为学变化。小鼠胚胎干细胞的培养和无血清神经诱导，神经前体细胞恼内移植，移植后PD大鼠行为变化。结果 改进注射方法后PD大鼠模型制备成功率为73.3％，较常规制备方法明显提高；神经前体细胞脑内移植后的PD大鼠的旋转次数明显减少；结论 使用6-OHDA双点注射选择性破坏大鼠多巴胺能神经元，可建立较稳定的且成功率较高的PD模型。小鼠ES细胞诱导的神经前体细胞脑内移植后PD大鼠旋转次数明显减少。     

建立类似于绝经期妇女帕金森病大鼠模型的实验研究

目的探讨利用6-羟基多巴(6-OHDA)制备模拟绝经期妇女帕金森病的大鼠模型。方法应用6-OHDA制备OVX PD模型大鼠,应用免疫组织化学染色、高效液相色谱法等技术对大鼠黑质(SN)的酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数目、纹状体多巴胺(DA)及其代谢物二羟基苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)含量进行考察并评价。结果阿朴吗啡可诱导出明显的PD大鼠旋转行为;大鼠损伤侧黑质TH阳性神经元数量较健侧显著减少(P<0.01),纹状体DA及其代谢物DOPAC和HVA含量也较健侧明显减少(P<0.01)。结论本模型具有绝经期妇女帕金森病的基本的病理特点。     

GDNF基因修饰神经干细胞移植治疗大鼠帕金森病

目的探讨孕14~15 d胎鼠中脑来源神经干细胞（mNSCs）被胶质源性神经营养因子（GDNF）基因修饰并移植于帕金森病
模型大鼠纹状体区的治疗作用。方法取孕14~15 d胎鼠解剖显微镜下分离中脑腹侧组织进行mNSCs培养,培养5 d后行GFP/
GDNF基因修饰。PD大鼠模型的建立参照大鼠脑立体定向图谱,立体定向中脑背盖腹侧区、内侧前脑束注射6-羟多巴胺。将
PD大鼠随机分组,将基因修饰的干细胞以及无基因修饰干细胞移植到帕金森病大鼠纹状体区,建立空白mNSCs（PBS替代）移
植组、GFP基因修饰mNSCs移植组、GDNF基因修饰mNSCs移植组3个实验组。移植细胞前后进行行为学评估,以腹腔注射阿
朴吗啡（APO 0.5 mg/kg）诱导PD大鼠旋转圈数作为细胞移植的治疗作用评估手段。免疫荧光组织化学鉴定移植细胞存活、迁
移和分化。结果GDNF基因修饰神经干细胞移植组较对照组和GFP基因修饰神经干细胞移植组有明显的行为改善;移植56 d
后,GDNF基因修饰mNSCs移植组较其他两组检测到更多细胞存活,向多巴胺能神经元分化较其他两组都有增加趋势。结论
GDNF基因修饰mNSCs移植可显著改善PD大鼠的运动障碍,其分子机制有待进一步研究。
     

羊膜细胞移植于帕金森病鼠纹状体的实验研究

目的　探讨非多巴胺能组织 -羊膜细胞移植治疗帕金森病 (PD)的作用机制。方法通过 6 -羟基多巴胺 (6 -OHAD)立体定向注射破坏一侧黑质 ,制成PD大鼠模型 ,然后将鼠成活羊膜细胞悬液植入受损侧纹状体 ,与死羊膜细胞移植及生理盐水假移植对照。结果发现活羊膜细胞移植可抑制大鼠的异常旋转行为 ,酪氨酸羟化酶 (TH)免疫组化结果显示在活羊膜细胞移植靶点周围出现了TH阳性物质。结论活羊膜细胞诱导了宿主纹状体残存多巴胺 (DA)神经纤维的再生 ,提示羊膜细胞能够分泌对在体DA神经元具有营养作用的物质。     

移植诱导中脑NSCs分化的多巴胺能神经元对PD大鼠治疗作用的实验研究

目的研究移植诱导中脑神经干细胞分化出的多巴胺能神经元对PD大鼠的治疗作用.方法利用纹状体提取液诱导大鼠胚胎中脑神经干细胞,使其部分分化为酪氨酸羟化酶(TH)阳性的多巴胺能神经元,继而把分化后的细胞移植到PD大鼠的纹状体内,免疫组化法证实移植细胞的存活并以诱发旋转行为的改善来观察其治疗作用.结果纹状体提取液能够诱导中脑神经干细胞分化出多巴胺能神经元而且这种经诱导后产生的细胞能够在PD大鼠体内长期存活并改善阿卟吗啡诱导的旋转行为.结论诱导中脑神经干细胞分化出的多巴胺能神经元对PD有一定的治疗作用.     

帕金森病大鼠模型激发自体脑内神经干细胞增殖的实验研究

目的　研究帕金森病 (Parkinson’sdisease ,PD)大鼠激发自体脑内神经干细胞的增殖情况。方法　选用SD大鼠 ,将 6 羟多巴胺 (6 OHDA)注入纹状体内制作PD大鼠模型 ,假手术对照组注入等量生理盐水 ,于不同时间点处死大鼠。处死前均注射 5 溴脱氧尿苷 (Brdu)。免疫组织化学方法动态检测Brdu和巢蛋白 (Nestin)的表达 ,以确定脑内增殖细胞和神经前体细胞数量 ,Brdu/Nestin免疫双标确定脑内神经干细胞的增殖情况。结果　同正常组、假手术对照组比较 ,PD大鼠损伤侧海马区、侧脑室室管膜下区和黑质区的Brdu 细胞、Nestin 细胞和Brdu /Nestin 细胞数在模型成功后的第 3、5、7天明显增加 ,14d后逐渐减少 ,2 8d后恢复到正常水平。结论　 6 OHDA纹状体内注射制作PD的模型大鼠能够激活自体神经干细胞增殖。     

大鼠帕金森氏病模型的建立

用Ｗｉｓｔａｒ大白鼠６４只，经微量注射６－羟多巴胺入右侧黑质区后，观察大鼠的行为和黑质及尾壳核细胞形态学变化。结果如下：①６４只大鼠中，３５只（５４．７％）恒定转向左侧且结果稳定，与帕金森氏病的症状相类似，被视为帕金森氏病旋转鼠模型。②在旋转鼠右侧黑质和尾壳核内，酪氨酸羟化酶样（多巴胺能）神经元和神经纤维末稍明显减少或消失，而左侧黑质和尾壳核内无明显变化。结果提示：６－羟多巴胺能选择性地损毁多巴胺能神经元及纤维末稍，从而建立稳定的帕金森氏病旋转鼠模型。     

应用6-羟多巴胺建立鼠帕金森病动物模型的研究

目的：建立稳定的类似人类帕金森病病理改变的ＰＤ动物模型　。方法：于黑质致密部，黑质旁部及纹状体区等不同部位采用不同剂量神经毒素６－羟多巴胺注射，造成黑质多巴胺神经元不同程度损伤　。运用免疫组织化学方法，对各种不同程度损伤的帕金森病鼠黑质区和纹状体ＴＨ阳性神经元及神经纤维进行计数，并观察其与旋转行为，注射部位及剂量的关系。结果：（１）．　单侧黑质致密部６－羟多巴胺８μｇ注射，可以造成注射侧黑质区ＴＨ神经元９５％以上的缺失。（２）．　单侧黑质旁部６－羟多巴胺８μｇ注射，可以造成注射侧黑质区ＴＨ神经元７０％以上的缺失。（３）．　单侧纹状体区６－羟多巴胺三点注射，可造成注射侧黑质区ＴＨ神经元３０％～４０％的缺失　。结论：　６－羟多巴胺不同部位和不同剂量注射，可以建立模拟临床上不同病程时期ＰＤ动物模型，其症状稳定，为帕金森病的发病机制的研究，药物治疗及各种移植治疗提供了条件。     

还原型谷胱甘肽对帕金森病大鼠氧化应激水平的影响

目的观察还原型谷胱甘肽 (GSH )对帕金森病 (PD)大鼠模型黑质抗氧化水平和线粒体呼吸链功能的影响。方法应用 6 羟基多巴胺 ( 6 OHDA)立体定向注射制作PD大鼠模型。将 2 4只大鼠随机分为 3组 (每组 8只 ) :模型组 ,治疗组 ,假手术组 ,分别给予相应处理 45d ,给药后测定各组大鼠黑质区谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)、丙二醛 (MDA)、活性氧 (ROS)及线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ水平。结果 ( 1)GSH能使模型大鼠黑质区GSH Px活性增强 ,MDA和活性氧水平降低 ( 11.3 0± 0 .49,1.2 6± 0 .15 ,42 .2 5± 2 .88)。 ( 2 )GSH能增强黑质呼吸链酶复合体I活性 ( 2 90 5 .2 8± 5 2 .15 )。结论GSH能减轻PD模型大鼠黑质区氧化应激损伤 ,并对线粒体呼吸链具有一定保护作用。     

PSI诱导PC12细胞帕金森病模型中ERp29蛋白表达

目的：探讨泛素-蛋白酶体系统（UPS）功能障碍诱发帕金森病（PD）细胞模型的作用机制，为深入研究PD的发病机制提供理论依据。方法：建立PSI诱导的PC12细胞模型，实验组、对照组分别加入PSI和DMSO（终浓度为10 μmol•L^-1）孵育 36 h后提取蛋白，应用荧光差异凝胶电泳（DIGE）系统获得差异蛋白点，运用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪（MALDI-TOF Pro MS）鉴定出差异蛋白。结果：实验组与对照组比较，在36 h可见细胞内嗜酸性类Lewy小体形成及细胞凋亡（细胞核呈固缩状或碎裂状），凋亡百分率为25.53%。实验组内质网蛋白ERp29与对照组比较表达量显著降低，差异有显著性（P<0.01）。结论：内质网应激（ERS）在UPS功能障碍引起PD的病理变化过程中起重要作用。