玻璃化冷冻方法三种冷冻载体冻存卵裂期胚胎效果的比较

目的应用冷冻环、冷冻膜和自制麦管片三种冷冻载体,采用玻璃化冷冻方法冻存昆明小鼠卵裂期胚胎,比较三种载体的冻存效果。方法采集通过体外受精在体外培养第2天得到的4-8细胞期的昆明小鼠胚胎247个,对其中177个按载体不同随机分为冷冻环组59个,冷冻膜组59个,自制麦管片组59个;剩余的新鲜胚胎70个作为对照组,比较冻融后鼠胚的复苏率和囊胚形成率。结果冷冻环组、冷冻膜组和自制麦管片组的胚胎复苏率分别为98.3%、98.3%和94.9%,三组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;冷冻环组、冷冻膜组和自制麦管片组的囊胚形成率分别是84.5%、86.2%和82.1%,三组比较无统计学差异（P〉0.05）;新鲜对照组囊胚形成率为94.3%,与冷冻环组、冷冻膜组分别比较无统计学差异（P均〉0.05）,与自制麦管片组有统计学差异（P〈0.05）。结论采用玻璃化冷冻方法冻存小鼠卵裂期胚胎,使用冷冻环和冷冻膜作为冷冻载体具有复苏率高、囊胚形成率高的优点,更适合应用于临床。     

单胚胎玻璃化冷冻对小鼠胚胎体外发育的影响

目的:比较单胚胎玻璃化冷冻与慢速冷冻对小鼠分裂期胚胎损伤和体外发育的影响,探讨使用玻璃化冷冻保存大量胚胎的可行性。方法:选择8-细胞胚胎随机进行改良的玻璃化和慢速冷冻,复苏后培养至囊胚孵出,计数胚胎复苏率、卵裂球死亡率、囊胚形成率、细胞团数、孵出率,并进行组间比较分析。结果:玻璃化冷冻组复苏率、卵裂球死亡率、囊胚形成率、孵出率、细胞团数分别为100%、12.7%、75.7%、66.4%、112,慢速冷冻组分别为87.1%、31.0%、35.5%、58.7%、78,除囊胚孵出率其余各指标两组间差异均具有统计学意义。结论:单胚胎玻璃化法冻存小鼠分裂期胚胎复苏后细胞成活率高,结构完整,更好的保持了胚胎的发育潜能。     

不同时期和不同来源鼠胚玻璃化冷冻效果的比较

目的：比较不同时期、不同来源的鼠胚玻璃化冷冻的存活率以及发育为囊胚的成功率。方法：采用体外受精和体内受精的方式得到小鼠的2、4、8细胞期胚胎,对其进行玻璃化冷冻、解冻,观察胚胎的存活与囊胚形成,以未冷冻的胚胎作为对照组。结果：由体外受精和体内受精获得的2细胞期胚胎在冷冻复苏后的存活率分别为70.67%、72.06%,囊胚形成率分别为65.33%、67.62%;4细胞期胚胎冷冻复苏后的存活率分别为88%、89.71%,囊胚形成率分别为81.33%、83.82%;8细胞期胚胎冷冻复苏后的存活率分别为93.33%、94.12%,囊胚形成率分别为92%、94.12%。和对照组相比,2细胞和4细胞期胚胎冷冻复苏后囊胚形成率差异有统计学意义（P＜0.05）,而8细胞期的胚胎差异无统计学意义（P>0.05）。不同时期胚胎冷冻复苏后囊胚形成率间差异有统计学意义（P＜0.05）,受精方式对处于同一时期的胚胎在冷冻复苏后存活率和囊胚形成率均无明显影响。 结论：玻璃化冷冻可以作为小鼠胚胎保存的有效方法,相对2、4细胞期胚胎,冷冻效果最好的是8细胞期胚胎。     

自制载体冷冻小鼠原核期胚胎效果分析

目的 探讨自制冷冻载体冷冻保存昆明小鼠体内原核期胚胎的可行性.方法 首先,比较了两种流行的商业化载体:开放式拉长麦管(open pulled straw,OPS)和冷冻帽(cryotop)开展小鼠原核胚玻璃化冷冻保存效果.其次,以cryotop为对照,利用自制简易载体(cryotip)开展小鼠原核期胚胎的玻璃化冷冻保存.之后,利用ANOVA对各组胚胎在复苏后的体外培养卵裂率、囊胚率进行统计分析.结果 OPS和cryotop两组之间,胚胎在玻璃化冷冻/复苏后发育的2-细胞率、4-细胞率和囊胚率差异均无显著性(P＞0.05),但cryotop冷冻效果更接近对照组;cryotip玻璃化冷冻载体与cryotop相比,胚胎复苏后各组差异均无显著性(P＞0.05),数值上除了2-细胞发育率外,cryotip其他几项结果都稍微高于cryotop组.结论 OPS,cryotop,cryotip冷冻保存昆明小鼠体内原核期胚胎均是可行的;cryotop在冷冻效果上要优于OPS,笔者自制的cryotip因其成本低,制作简单,操作安全可靠,在实验中替代昂贵的商业化载体OPS和cryotop是可行的.     

采用小鼠模型探讨行囊胚活检后胚胎的冷冻时机

【目的】探讨行囊胚活检后,活检胚胎最佳的冷冻时机。【方法】258枚小鼠优质囊胚进行囊胚活检,分别在活检后0 h(n=43),0.5 h(n=39),1 h(n=50),2 h(n=49)进行玻璃化冷冻,仅行活检的新鲜囊胚(n=48)以及冷冻的未活检囊胚(n=29)分别作为对照组,观察各组的复苏率、重新扩张率和孵出率,并计数囊胚细胞总数、凋亡细胞数、囊胚DNA完整率和活检部位凋亡细胞数。【结果】各组的存活率、重新扩张率和孵出率无差别;平均囊胚细胞总数、凋亡细胞数、囊胚DNA完整率和活检部位凋亡细胞数差别无统计学意义。【结论】小鼠囊胚活检后不同时间点冷冻效果未观察到差异,可根据工作需要灵活安排活检囊胚的冷冻时间。     

3种不同载体对卵母细胞玻璃化冷冻效果的影响

目的以小鼠成熟卵母细胞(MⅡ期)为试验对象,应用3种不同载体对其行玻璃化冷冻,旨在分析载体对冷冻效果的影响。方法采用玻璃化冷冻技术冻存昆明种小鼠成熟卵母细胞,设新鲜对照组和玻璃化冷冻组,玻璃化冷冻组又分为开放式脉管(OPS)组、自制麦管组和Cryoleaf组。比较冻融后鼠卵的存活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果新鲜对照组和玻璃化冷冻组的受精率、卵裂率差异无统计学意义,但囊胚形成率差异有统计学意义(P<0.05);OPS组与自制麦管组的鼠卵存活率、受精率、卵裂率、囊胚形成率差异均无统计学意义;OPS组与Cryoleaf组比较,存活率差异有统计学意义(P<0.05),受精率、卵裂率、囊胚形成率差异均无统计学意义;自制麦管组与Cryoleaf组比较,存活率差异有统计学意义(P<0.05),而受精率、卵裂率、囊胚形成率差异均无统计学意义。结论载体的不同会对卵母细胞玻璃化冷冻效果形成一定程度的影响。     

两组冷冻保护剂对卵裂期胚胎玻璃化冷冻效果的研究

目的：评价两组玻璃化冷冻保护剂对卵裂期胚胎的冷冻效果。方法以体外受精-胚胎移植周期患者受精后第3天废弃胚胎为实验对象,共102枚胚胎入选,随机分为乙二醇＋丙二醇（EG＋PROH）组52枚,乙二醇＋二甲基亚砜（EG＋DMSO）组50枚。比较观察两组玻璃化冷冻保护剂对卵裂期胚胎冷冻解冻后胚胎的复苏效果。结果玻璃化冻融后两组在复苏率上无显著差异,但在完整胚胎复苏率和卵裂球复苏率上EG＋PROH组显著高于EG＋DMSO组（P＜0.05）。结论对于卵裂期胚胎的玻璃化冷冻,选用EG＋PROH作为冷冻保护剂可取得较好的效果。     

不同胚胎冷冻方法对人类早期胚胎解冻后的复苏效果及临床结局的影响

目的 比较玻璃化冷冻与程序化冷冻对人类早期胚胎解冻后复苏效果及临床结局的影响.方法 辅助生殖技术获取的剩余可利用人类胚胎2 884枚,其中采用玻璃化冷冻复苏666个周期,解冻胚胎1 516枚、复苏1 383枚、移植胚胎1 375枚;程序化冷冻复苏506个周期,解冻胚胎1 368枚、复苏1 090枚、移植1 077枚.比较两种方法的复苏效果及临床结局.结果 玻璃化冷冻组胚胎复苏率、胚胎完整率分别为92.02％、92.11％,高于程序化冷冻组的79.68％、69.63％(P＜0.05);两组种植率、临床妊娠率、周期取消率、多胎妊娠率、早期流产率、新生儿胎龄、早产率、新生儿出生体重、出生缺陷率比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 玻璃化冷冻较程序化冷冻有更高的胚胎复苏率及胚胎完整率,胚胎利用率高,两种冷冻方法的临床结局相似,适用于人类胚胎的冷冻.     

玻璃化冷冻囊胚复苏移植与玻璃化冷冻胚胎复苏后继续培养至囊胚移植的妊娠结局比较

目的比较玻璃化冷冻囊胚复苏后移植与玻璃化冷冻胚胎复苏后继续培养至囊胚移植的临床妊娠结局。方法回顾性分析2013年1月至2014年12月在郑州大学第二附属医院生殖中心行玻璃化冷冻复苏后移植囊胚的不孕症患者134例(134个周期)的妊娠情况,其中卵裂期胚胎培养至囊胚冷冻复苏后移植者79个周期(A组),卵裂期胚胎冷冻复苏后继续培养至囊胚再移植者55个周期(B组)。比较2组患者临床妊娠率、着床率及早期流产率。结果 A组79个周期,复苏囊胚数151个,存活囊胚数133个,复苏率88.08%(133/151);获得可移植囊胚72个周期,妊娠周期46个,妊娠率为63.89%(46/72),着床率51.56%(66/128),早期流产率为15.21%(7/46)。B组55个周期227个胚胎,复苏存活170个胚胎,复苏率74.89%(170/227);其中45个周期共形成可移植囊胚93个,囊胚形成率为54.70%(93/170);获得妊娠周期23个,妊娠率为51.11%(23/45),着床率为36.56%(34/93),早期流产率13.04%(3/23)。A组囊胚复苏率高于B组卵裂期胚胎复苏率(P<0.05),且A组着床率显著高于B组(P<0.05),但2组临床妊娠率、流产率、异位妊娠率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论玻璃化冷冻囊胚复苏移植能获得较高的着床率和妊娠率,囊胚可能是玻璃化冷冻胚胎的较好阶段。     

慢速程序化冷冻人类扩张期囊胚的效果观察

目的：探讨慢速程序化冷冻在人类扩张期囊胚冷冻中的应用效果。方法收集2014年1~4月在本中心进行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)或卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)治疗的579个周期患者移植及冷冻后剩余的低质量胚胎(包括异常受精胚胎)发育成的扩张期囊胚87枚,用显微注射针刺穿囊胚腔使之皱缩,然后行程序化冷冻(囊胚组)。对照组为同期行程序化冻融的卵裂期胚胎。比较两组经冷冻复苏后的胚胎存活率。结果扩张期囊胚复苏率为80.46%,卵裂期胚胎复苏率为82.80%,两组比较差异无统计学意义(χ2=1.105, P>0.05)。结论扩张期囊胚经人工皱缩后行程序化冷冻行之有效,能明显提高囊胚的冷冻效率。     

Effect of three different loadings on vitrification of oocyte

目的 以小鼠成熟卵母细胞(MⅡ期)为试验对象,应用3种不同载体对其行玻璃化冷冻,旨在分析载体对冷冻效果的影响.方法 采用玻璃化冷冻技术冻存昆明种小鼠成熟卵母细胞,设新鲜对照组和玻璃化冷冻组,玻璃化冷冻组又分为开放式脉管(OPS)组、自制麦管组和Cryoleaf组.比较冻融后鼠卵的存活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率.结果 新鲜对照组和玻璃化冷冻组的受精率、卵裂率差异无统计学意义,但囊胚形成率差异有统计学意义(P<0.05);OPS组与自制麦管组的鼠卵存活率、受精率、卵裂率、囊胚形成率差异均无统计学意义;OPS组与Cryoleaf组比较,存活率差异有统计学意义(P<0.05),受精率、卵裂率、囊胚形成率差异均无统计学意义;自制麦管组与Cryoleaf组比较,存活率差异有统计学意义(P<0.05),而受精率、卵裂率、囊胚形成率差异均无统计学意义.结论 载体的不同会对卵母细胞玻璃化冷冻效果形成一定程度的影响.     

人类卵子改良程序化冷冻和玻璃化冷冻的比较研究

【】目的：研究两种冷冻方法对人类卵子冻融结果的影响。方法：分为程序化冷冻卵子与玻璃化冷冻卵子两组,对于卵子冻融后的复苏率、受精率以及优质胚胎率等指标进行比较。结果：程序化冷冻组卵子的复苏率(71.05%,108/152)显著低于(P<0.05)玻璃化冷冻组(81.75%,103/126),但优质胚胎率(41.07%,23/56)显著高于(P<0.05)玻璃化冷冻组(30.23%,13/53),而受精率、卵裂率及囊胚形成率无统计学差异。结论：玻璃化冷冻卵子可以获得较高的复苏率,但使用改良程序化冷冻试剂盒冻融卵子,可能较玻璃化冷冻获得更好发育潜能。     

OPS两步法玻璃化冷冻小鼠8-细胞胚胎生存发育率的研究

目的为实验动物、家畜和人类胚胎的冷冻保存探索简易、高效的玻璃化冷冻程序。方法以小鼠8-细胞胚胎为材料,在25℃室温和37℃恒温台条件下,利用玻璃化冷冻溶液EDFS30, 对小鼠8-细胞胚胎进行玻璃化冷冻保存,解冻后培养60 h后的囊胚发育率为其体外发育能力的考核指标,同时对解冻后培养1-3 h的胚胎进行移植以判定其体内发育潜力。OPS(Open-pulled straw)两步法冷冻保存,即胚胎首先移入预处理液(10％EG 10％DMSO)中平衡30 s,再移入玻璃化溶液中吸入OPS平衡15、25、35、45和60 s连同胚胎直接投入液氮中冷冻保存。结果小鼠胚胎8-细胞冷冻后囊胚发育率最佳组高达95．6％,与对照组(96．8％)差异无统计学意义(P> 0．05)。利用最佳冷冻组获得的165枚胚胎移植于11只假孕63-67 h的受体母鼠,结果有4只妊娠,产仔23只,妊娠产仔率为38．3％(23/60),与对照组37．9％(22/58)差异无统计学意义(P>0．05)。结论 EDFS33为玻璃化冷冻液,OPS两步法能有效地冷冻保存小鼠8-细胞胚胎。     

不同级别胚胎玻璃化冷冻时长对复苏周期 临床结局的影响

目的 探讨不同级别胚胎玻璃化冷冻时长对复苏周期妊娠结局的影响。方法 回顾性分析2016年1月至2021年12月在中国人民解放军联勤保障部队第九〇四医院生殖中心行玻璃化冷冻胚胎复苏移植的2210个周期,按胚胎级别分为4类：卵裂期1级、2级、3级胚胎及囊胚期胚胎;按时间分为6组：第1组≤180d（1122个周期）,第2组180~<360d组（507个周期）,第3组360~<720d组（216个周期）,第4组720~<1080d（195个周期）,第5组≥1080d（170个周期）,比较各组患者的基本情况、临床结局。结果 解冻卵裂期1级胚胎妊娠率、种植率随冷冻时间延长降低,其中第1组最高,分别为68.3%和70.7%（P<0.05）;解冻卵裂期2级胚胎随冷冻时间延长妊娠率、种植率比较,差异有统计学意义（P<0.05）,其中1、4、5组比较,差异有统计学意义（P<0.05）;解冻囊胚期胚胎妊娠率、种植率随冷冻时间延长降低,第1组最高,分别为66.7%和62.3%（P<0.05）;各组卵裂期及囊胚期胚胎活产率、流产率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 随着冷冻时间的延长,卵裂期优质胚胎及囊胚妊娠率、种植率有下降趋势;胚胎的短期冷冻（≤180d）可提高临床妊娠率;胚胎冷冻时间延长虽不影响活产率、流产率,但仍鼓励取卵后半年内择优移植。     

新鲜周期和复苏周期囊胚培养及移植的临床结局分析

目的:比较新鲜周期和复苏周期囊胚培养及移植的临床结局,探讨囊胚移植的最佳方案。方法:回顾分析2012年1月至2014年8月在郑州大学第三附属医院生殖中心行常规体外受精/卵胞质内单精子注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)患者的临床资料。根据培养方式分为A组(新鲜胚胎行囊胚培养后移植,58个周期)、B组(新鲜胚胎行囊胚培养冷冻复苏后移植,285个周期)和C组(冷冻胚胎复苏后行囊胚培养再移植,84个周期)。比较新鲜胚胎和冷冻胚胎复苏后的囊胚形成率及可利用囊胚形成率以及3组患者的囊胚种植率、生化妊娠率、临床妊娠率、多胎率和早期流产率等指标。结果:新鲜胚胎的囊胚形成率及可利用囊胚形成率均高于冷冻胚胎(χ2=8.561和4.037,P<0.05);3组患者的生化妊娠率、临床妊娠率及早期流产率比较差异有统计学意义(χ2=44.376、6.255和9.167,P<0.05),B组患者的生化妊娠率及临床妊娠率均高于A组,早期流产率低于A组;3组间囊胚种植率和多胎率比较差异无统计学意义(χ2=4.234、1.172,P>0.05)。结论:新鲜胚胎较冷冻胚胎有较高的囊胚形成率,新鲜囊胚冷冻后择期复苏移植能提高患者的妊娠率,是目前最佳的囊胚培养和移植方案。     

玻璃化冷冻保存人类早期胚胎的临床应用

目的 探讨玻璃化冷冻技术在人类早期胚胎冻存中的临床应用价值.方法 回顾性分析本中心822个冷冻胚胎复苏周期,依据胚胎冷冻方法的不同分为玻璃化冷冻组(490个周期)和程序化冷冻组(332个周期),比较两组胚胎复苏率、复苏胚胎完整率、胚胎种植率、临床妊娠率等数据.结果 玻璃化冷冻复苏组与程序化冷冻复苏组胚胎复苏率分别为98.8％和82.9％,复苏胚胎完整率分别为96.8％和63.1％,胚胎种植率分别为32.0％和18.1％,临床妊娠率分别为53.9％和33.1％,两组数据比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 玻璃化冷冻法比程序化冷冻法更适合于人类早期胚胎的冷冻保存.     

玻璃化冷冻在卵巢过度刺激综合征全胚胎冷冻中的应用

目的比较慢速程序化冷冻法(慢速法)和玻璃化冷冻法(玻璃化法)对卵巢过度刺激综合征全胚胎冷冻分裂期胚胎发育潜能的影响。方法选择为避免过度刺激而行全胚胎冷冻的不孕患者162例,按其冷冻方法的不同,分成慢速程序化冷冻组和玻璃化冷冻组,并对其随后进行首次解冻移植的胚胎复苏率、胚胎种植率、妊娠率和多胎妊娠率进行分析。结果玻璃化冷冻组72例胚胎解冻后,其溶解率、复苏率、种植率、妊娠率、多胎妊娠率分别为7.84%、96.08%、52.38%、69.44%和50.00%,慢速程序化冷冻组90例胚胎解冻后,上述指标分别为17.79%、90.38%、30.32%、52.22%和19.15%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论玻璃化冷冻法能够更好地保存胚胎复苏后的发育潜能,更适合卵巢过度刺激综合征患者胚胎的冷冻保存。     

冷冻载体对小鼠卵母细胞玻璃化冷冻效果影响的研究

目的探讨不同冷冻载体对小鼠卵母细胞快速玻璃化冷冻回收率、复苏率和解冻后胚胎发育潜能的影响。方法以小鼠卵母细胞为实验材料,以玻璃化冷冻方法冻存小鼠卵母细胞,分别以冷冻叶片（A）组、冷冻小钩（B）组、电镜铜环（C）组、自制冷冻叶片（D）组为冷冻载体冷冻小鼠卵母细胞,通过对解冻后卵子回收率、复苏率、卵子受精率及早期胚胎发育率等分析判断冻存效果。结果回收率D组明显低于其他3组,差异有统计学意义（P〈0.01）;D组与其他3组卵母细胞冷冻保存后卵子复苏率、胚胎受精率、继续发育潜能的比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 4种玻璃化冷冻载体都是小鼠卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中可行的冷冻载体,自制叶片组的卵子回收率明显低于其他3组,需更进一步熟练叶片制作的技术和实验人员操作技能。     

不同冷冻方法对小鼠卵母细胞冻存的影响

目的：：探讨不同冷冻方法对小鼠卵母细胞存活率及其发育潜能的影响。方法：采用玻璃化冷冻技术,选取开放式载体与封闭式载体分别冻存带卵丘细胞(COC)或剥除卵丘细胞(OD)的小鼠卵丘复合体,复苏后分别作体外受精,胚胎培养。结果：开放式载体冻存组存活卵数76.79%略高于封闭式载体冻存组72.98%,无统计学意义(P >0.05);两组内 COC 组的卵子存活率显著高于 DO 组,但有统计学差异(P <0.05),COC 组的受精率、囊胚率略高于 DO 组,无统计学差异(P >0.05)。结论：(1)封闭式载体有效避免了潜在的污染问题,但不同载体对卵子存活率无显著影响。(2)卵丘细胞在玻璃化冷冻卵母细胞中可以起到保护作用,并对胚胎后期的发育有一定的改善。     

一种安全有效的卵母细胞封闭式玻璃化冷冻载体

目的 探讨封闭式玻璃化冷冻载体冻存小鼠卵母细胞的可行性.方法 以小鼠MII期卵母细胞为模型,以开放式玻璃微细管法(GMP)为对照组,比较两种玻璃化冷冻载体对小鼠卵母细胞冷冻后的存活率、受精率、卵裂率及囊胚率的影响.结果卵母细胞经冻融后,封闭式冷冻载体组和GMP组的存活率、受精率、卵裂率和囊胚率均没有明显差异(92.80%vs 93.11%,49.80%vs 51.67%,36.73%vs 35.83%,12.65%vs 14.17%%;P>0.05).结论 封闭式冷冻载体能安全、有效的冷冻保存小鼠卵母细胞.