稳定敲低人脐带间充质干细胞EPCR基因对其向成纤维细胞分化能力的影响

目的：构建稳定敲低人内皮细胞蛋白C受体（endothelial cell protein C receptor,EPCR）的人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs）,检测敲低EPCR对hUC-MSCs向成纤维细胞分化能力的影响。方法：根据EPCR基因mRNA序列,合成3条小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）导入hUC-MSCs,通过检测EPCR蛋白表达筛选干扰效果最佳的siRNA。根据最佳siRNA序列构建慢病毒载体,包装重组慢病毒,感染hUC-MSCs,Real-time PCR和Western blot验证敲低效率。体外构建转化生长因子-β1（transforming growth factor beta1,TGF-β1）诱导hUC-MSCs向成纤维细胞分化模型,Real-time PCR和Western blot检测诱导前后α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）和Ⅰ型胶原（type Ⅰ collagen,Col Ⅰ）表达水平,以反映诱导效果。结果：以EPCR最佳siRNA序列构建EPCR基因RNAi慢病毒载体,成功敲低hUC-MSCs内EPCR的mRNA（t=28.86,P=0.000）和蛋白（t=88.60,P=0.000）表达水平。EPCR敲低后,hUC-MSCs合成的COL1A1和COL1A2在mRNA（P=0.044,P=0.000）和蛋白（P=0.000,P=0.000）水平减少。体外TGF-β1诱导可增加hUC-MSCs内α-SMA（F=369.713,P=0.000;F=451.060,P=0.000）、COL1A1（F=42.051,P=0.000;F=759.041,P=0.000）及COL1A2（F=359.205,P=0.000;F=764.348,P=0.000）在mRNA和蛋白水平的表达,促进其向成纤维细胞分化。但敲低EPCR,α-SMA（P=0.002,P=0.002）、COL1A1（P=0.002,P=0.000）及COL1A2（P=0.000,P=0.000）在mRNA和蛋白的升高水平明显降低。结论：成功获得EPCR稳定敲低的hUC-MSCs,证实敲低EPCR可减少hUC-MSCs内Col Ⅰ表达,并减弱其向成纤维细胞分化的能力。     

氯化钴诱导低氧对3T3-L1脂肪细胞脂连蛋白表达的影响

目的研究体外模拟低氧对小鼠3T3-L1脂肪细胞脂连蛋白（ADPN）表达的影响。方法体外培养小鼠3T3-L1前脂肪细胞,将其诱导分化成为成熟的脂肪细胞,油红O染色鉴定脂肪细胞分化程度和脂质积聚情况。氯化钴（CoCl2）化学模拟脂肪细胞低氧环境,采用实时PCR（Real-TimePCR）检测低氧诱导因子-1α（HIF-1α）和ADPNmRNA的表达,蛋白质印迹法（Westernblotting）检测低氧诱导因子-1α（HIF-1α）的蛋白表达;酶联免疫吸附测定（ELISA）分析细胞培养上清液中ADPN蛋白的分泌水平。结果在CoCl,诱导3T3-L1脂肪细胞低氧的条件下,细胞内HIF-1αmRNA和蛋白的表达水平均显著上调;细胞内ADPNmRNA表达和细胞培养上清液中ADPN蛋白的分泌水平均显著下降;HIF-1αmRNA与ADPNmRNA的表达水平呈显著负相关（r=-0．854,P〈0．001）。结论CoCl2诱导低氧能够下调3T3-L1脂肪细胞ADPN的表达,该作用可能与脂肪细胞代谢功能障碍和胰岛素抵抗有关。     

高糖环境及雷帕霉素干预对肾小球足细胞Ⅳ型胶原和MMP-9表达的影响

目的探讨高糖培养环境及雷帕霉素干预对肾小球足细胞Ⅳ型胶原和基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达的影响。方法体外培养的小鼠肾小球足细胞分为空白对照组、高渗对照组、高糖组和高糖＋雷帕霉素干预组。Real-time PCR和Western blotting检测各组肾小球足细胞Ⅳ型胶原α3链（COL4A3）、α5链（COL4A5）mRNA及MMP-9mRNA和蛋白的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中Ⅳ型胶原的含量。结果与对照组比较,高糖组足细胞COL4A3、COL4A5mRNA表达及培养上清液中Ⅳ型胶原含量均升高（P〈0.05）,而足细胞MMP-9mRNA和蛋白表达均降低（P〈0.05）。与高糖组比较,雷帕霉素干预组足细胞COL4A3、COL4A5mRNA表达及培养上清液中Ⅳ型胶原含量均降低（P〈0.05）,足细胞MMP-9mRNA和蛋白表达均升高（P〈0.05）。结论雷帕霉素对高糖环境中足细胞Ⅳ型胶原和MMP-9表达异常具有逆转作用。     

红细胞生成素对高糖诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响及其可能机制

目的：肾间质纤维化（ renal interstital fibrosia , RIF）的核心是肾小管上皮细胞转分化。探讨促红细胞生成素（Erythropoietin, EPO）对高糖诱导的正常人肾小管上皮细胞（human kidney cells, HK-2）转分化的影响及其可能机制。方法体外培养HK-2细胞,按随机数字表法分为空白对照组、高糖诱导组（高糖终浓度30 mmol/L）、甘露醇对照组（甘露醇浓度24．5 mmol/L）、EPO对照组（ EPO终浓度为20 U/mL）、5 U/mL EPO干预组、10 U/mL EPO干预组、20 U/mL EPO干预组及ROCK抑制剂（ Y27632）组（ Y27632终浓度为30μmol/L,加入Y2763230 min后加高糖,高糖终浓度为30 mmol/L）,各组均刺激24 h。应用RT-PCR法检测细胞 RhoA mRNA、ROCK1 mRNA 的水平;细胞免疫荧光法检测细胞 E-钙黏蛋白、α-平滑肌肌动蛋白（αsmoothmuscleactin,α-SMA）的表达;ELISA法检测上清液纤维连接蛋白（fibronectin, FN）的表达。结果 RT-PCR结果显示高糖诱导组RhoA mRNA及ROCK1 mRNA表达较空白对照组显著升高（1．400±0．022 vs 0．945±0．132,1．913±0．011 vs 1．007±0．002,P＜0．05）;5、10、20 U/mL EPO干预组,RhoA mRNA的表达水平（0．278±0．006、0．770±0．005、0．334±0．009）均较空白对照组（0．945±0．131）减少（P＜0．05）,ROCK1 mRNA的表达水平（1．418±0．006、0．919±0．004、0．477±0．002）较空白对照组（51．007±0．002）减少（P＜0．05）;ELISA及细胞免疫荧光结果显示高糖诱导组FN、α-SMA蛋白的表达较空白对照组明显增加[（14545．53±317．27）ng/mL vs （2582．50±87．20）ng/mL,0．335±0．006 vs 0．224±0．006,P＜0．05];直线相关性分析,高糖诱导组,5、10、20 U/mL EPO干预组RhoA mRNA与ROCK1 mRNA表达均呈正相关（P＜0．05）。高糖诱导组α-SMA较空白对照组上升,E-钙黏蛋白较空白对照组下降（P＜0．05）;EPO干预组及ROCK抑制剂组E-钙黏蛋白表达较高糖诱导组增加,而α-SMA表达下降（P＜0．05）;ELISA结果显示,EPO干预组ROCK抑制剂组FN表达较高糖诱导组下降（P＜0．05）,且下降程度与EPO浓度相关。结论 EPO可抑制高糖诱导的HK-2细胞转分化,从而延缓肾间质纤维化,其机制可能与RhoA/ROCK信号通路有关。     

混合游离脂肪酸对大鼠肺微血管内皮细胞Toll样受体4表达的影响及其介导的炎症反应机制

目的研究混合游离脂肪酸（FFA）对大鼠肺微血管内皮细胞（RRPMVECs）Toll样受体4（TLR4）的激活作用及其介导的链式炎症反应机制。方法以不同浓度的FFA处理体外培养的RPMVECs,Westernblotting检测TLR4蛋白的表达。用干扰小RNA（siRNA）转染体外培养的RPMVECs（TLR4 siRNA组和杂序siRNA组）,设立阴性对照组。分别用0．1mmol／LFFA、10ng／mL脂多糖（LPS）和5ng／mL肿瘤坏死因子-α（TNF-α）处理各组细胞,以未加药细胞作为相应的空白组。Real-TimePCR检测TLR4mRNA和NF-κB抑制蛋白激酶β（IKKβ）mRNA的表达,Westernblotting检测磷酸化核因子κB抑制因子（p-IκBα）和核因子κB（NF-κB）的表达,ELISA法检测细胞培养上清液中炎症因子白介素-1β（IL-1β）的表达。结果RPMVECs的TLR4蛋白相对表达量在0．1mmol／LFFA处理后显著增高（P〈0．05）,并随FFA浓度的升高而增加。在杂序siRNA和阴性对照组,TLR4mRNA的相对表达量在LPS和FFA处理后显著升高（P〈0．05）,TNF-α处理无明显变化;而在TLR4干扰组,3种处理后TLR4mRNA的表达均无显著变化。在杂序siRNA和阴性对照组,3种方式处理后RPMVECs的IKKβmRNA、p-IκBα及IL-1β的相对表达量均显著升高（P〈0．05）,而TLR4siRNA干扰抑制了其在FFA和LPS处理组的表达,但对TNF-α组无抑制作用。结论FFA通过TLR4／IKKβ／NF-κB信号通路介导RPMVECs的炎症反应。     

Rho激酶在低氧大鼠肺小动脉表达的研究

目的探讨Rho激酶（ROCKⅠ和ROCKⅡ）在慢性低氧大鼠肺小动脉产生和表达的变化及其在低氧性肺动脉高压形成过程中的作用。方法将36只健康雄性SD大鼠随机分为正常组、低氧1d、3d、1周、2周和3周组,每组6只。低氧处理为常压间断低氧,每天8h,各低氧组分别低氧1d、3d、1周、2周和3周。采用微导管法测定大鼠平均肺动脉压（mPAP）。分离和称量大鼠右心室（RV）及左心室加室间隔（LV＋S）重量,计算出RV／（LV＋S）。应用免疫组化法测定大鼠肺组织Rho激酶蛋白的表达,原位杂交法测定Rho激酶mRNA的表达。结果大鼠mPAP、RV／（LV＋S）随低氧时间延长出现升高趋势（P〈0．05）。正常组与各低氧组的肺小动脉壁的管壁厚度占外径的百分比（WT％）和管壁面积占血管总面积的百分比（WA％）均随低氧时间的延长出现升高趋势,低氧3周组大鼠的WT％和WA％均高于正常组（P〈0．05）。ROCKⅠ、ROCKⅡ免疫组化阳性染色强度和ROCKⅠ mRNA、ROCKⅡmRNA原位杂交阳性染色强度随着低氧时间的延长均出现升高趋势,低氧3周组ROCKⅠ、ROCKⅡ免疫组化阳性染色和ROCKⅠmRNA、ROCKⅡmRNA原位杂交阳性染色均显著高于正常组（P〈0．05）。ROCKI免疫组化、ROCKⅠmRNA原位杂交、ROCKⅡ免疫组化及ROCKⅠmRNA原位杂交阳性染色强度均与mPAP、wA％和wT％呈正相关（r分别为0．404、0．267和0．263;0．500、0．263和0．260;0．490、0．295和0．286;0．579、0．251和0．254,P均〈0．05）。结论低氧可导致Rho激酶产生和表达增加。Rho激酶可能通过促进肺小动脉收缩和肺小动脉重构参与低氧性肺动脉高压的发生。     

胶原类基因mRNA在口腔鳞癌组织中的表达

摘要：目的研究胶原类基因COL1A1、COL1A2、COL4A1、COL4A2、COL5A2 mRNA在口腔鳞状细胞癌（OSCC）及配对
正常口腔黏膜组织中的表达及意义。方法采用RT-PCR方法检测30例OSCC患者肿瘤组织及其配对的正常口腔黏膜中
胶原基因COL1A1、COL1A2、COL4A1、COL4A2、COL5A2 mRNA的表达;所得数据采用SAS6.12软件包进行t检验。结
果RT-PCR 检测结果表明,COL1A1 mRNA在OSCC 中的表达较其对照粘膜表达上调2.78 倍（P<0.001）。COL1A2、
COL4A1、COL4A2、COL5A2 mRNA在OSCC中的表达较其对照黏膜分别上调1.07、1.15、1.27、1.16 倍（P>0.05）。结论
在OSCC癌变过程中,COL1A1 mRNA过表达,可能是OSCC的一个靶基因;COL1A1在OSCC分类诊断中有应用价值。     

Beclin1和Bcl2在侵袭性垂体腺瘤中的表达及关系

目的检测Beclin1和Bcl2在侵袭性垂体腺瘤组织中的表达,探讨其与垂体腺瘤侵袭性的关系及2者之间的相关性。方法61例垂体腺瘤手术标本按侵袭性垂体腺瘤综合判定方法分为侵袭组（32例）和非侵袭组（29例）,采用免疫荧光检测Beclin1和Bcl2蛋白的表达,RT-PCR法检测Beclin1和Bcl2mRNA的表达,分析侵袭组和非侵袭组Beclin1和Bcl2表达水平的差异和相关性。结果侵袭组Beclin1蛋白和mRNA表达均低于非侵袭组（P〈0．01）;而Bcl2蛋白和mRNA表达均高于非侵袭组（P〈0．01）。Pearson相关分析显示：侵袭组中Beclin1和和Bcl2mRNA的表达呈负相关（r=-0．42,P=0．028）。结论Beclin1在侵袭性垂体腺瘤中的表达下降,垂体腺瘤的侵袭性与Bcl2蛋白及mRNA的高表达,Beclin1蛋白和mRNA的低表达密切相关;自噬活性的减低可能导致垂体腺瘤侵袭性增强,而其活性减低可能是Beclin1和Bcl2相互作用的结果。     

垂体肿瘤转化基因1在系统性硬化症中的表达及作用

目的 研究垂体肿瘤转化基因（PTTG1）在系统性硬化症（SSc）中的表达及其对成纤维细胞的作用。方法 收集皮肤活检组织,其中SSc患者组21例,正常组22例。分别应用实时荧光定量聚合酶链式反应法（Real-time PCR）检测皮肤组织中PTTG1基因表达水平;应用免疫组化方法检测皮肤组织中PTTG1蛋白表达水平;应用小干扰RNA（siRNA）降低成纤维细胞中PTTG1基因表达,通过 Real-time PCR 方法检测细胞中 PTTG1 及与细胞纤维化密切相关的几个基因α-SMA、COL1A1、COL1A2、COL3A1的表达变化;通过细胞实时增殖检测系统检测细胞增殖。结果 与正常对照相比,SSc患者皮肤组织中PTTG1的表达水平明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;与正常对照相比,SSc患者皮肤组织中阳性细胞增多,PTTG1蛋白表达明显升高;原代皮肤成纤维细胞中PTTG1表达水平和α-SMA、COL1A1、COL1A2、COL3A1均存在正相关,差异具有统计学意义（R²=0.8192,P<0.05;R²=0.6398,P<0.05;R²=0.316,P<0.05;R²=0.3723,P<0.05）;同时,原代皮肤成纤维细胞中PTTG1干扰后,细胞增殖被显著抑制,纤维化相关基因（COL1A1、COL1A2、PAI-1）表达下降,胶原蛋白的基因表达降低。结论 SSc患者中存在PTTG1过度表达,干扰PTTG1可降低成纤维细胞活性,提示PTTG1与SSc纤维化程度密切相关。     

全反式维甲酸对高糖环境下HK-2细胞转分化的影响及其可能机制

目的：探讨全反式维甲酸（ATRA）对高糖环境下正常人肾小管上皮 HK‐2细胞株转分化的影响及其可能机制。方法将体外培养的 HK‐2细胞按随机数字表法分为以下7组：空白组、高糖组、高渗组、高糖＋低浓度ATRA组、高糖＋中浓度ATRA组、高糖＋高浓度ATRA组、Rho激酶抑制剂Y27632干预组。采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT‐PCR）检测各组细胞RhoA及ROCK1 mRNA表达水平,采用细胞免疫荧光检测高糖环境下 HK‐2细胞α‐平滑肌肌动蛋白（α‐SMA）及E‐钙黏蛋白的表达变化。结果 RT‐PCR结果显示：空白组与高渗组RhoA及ROCK1 mRNA表达水平比较,差异均无统计学意义（P＞0．05）;高糖组RhoA及ROCK1 mRNA表达水平较空白组、高渗组高,差异均有统计学意义（P＜0．05）;予以ATRA或Y27632干预后, RhoA及ROCK1 mRNA表达较高糖组减少,差异均有统计学意义（P＜0．05）,且呈现ATRA浓度依赖性。相关性分析示,高糖组及各ATRA干预组RhoA mRNA与ROCK1 mRNA表达水平呈正相关（P＜0．05）。细胞免疫荧光检测结果显示：空白组与高渗组α‐SMA及E‐钙黏蛋白表达水平比较,差异均无统计学意义（P＞0．05）;高糖组α‐SMA表达水平较空白组高,E‐钙黏蛋白表达水平较空白组低,差异均有统计学意义（P＜0．05）;予以ATRA或Y27632干预后,α‐SMA表达明显减少,E‐钙黏蛋白表达明显增多,差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论 ATRA可部分逆转高糖环境下 HK‐2细胞转分化的过程,其机制可能与抑制RhoA／ROCK信号通路有关。     

shRNA慢病毒抑制BGC823细胞株GnT-V表达的载体构建

目的构建针对N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V（GnT-V）基因的shRNA（short harpin RNA,siRNA前体）表达载体,鉴定GnT-V基因干扰效率。方法体外设计并合成针对GnT-V基因的慢病毒shRNA干扰载体,通过PCR及测序证实载体构建成功。将慢病毒颗粒以最适滴度转染人低分化胃癌细胞株BGC823,应用Real-Time PCR、Western blotting检测GnT-V抑制效率。结果构建的慢病毒载体的序列通过PCR、测序等鉴定证实与设计序列相同;Real-Time PCR检测显示干扰组BGC823细胞GnT-V mRNA表达率下降88.04%,Western blotting显示干扰组BGC823细胞表达GnT-V蛋白量较空白载体对照组明显减少。结论构建的shRNA表达载体可在mRNA和蛋白水平上有效抑制BGC823细胞株GnT-V基因的表达。     

hnRNPU过表达抑制PIM1诱导的细胞衰老的机制研究

目的:探讨人前病毒整合位点1（PIM1）诱导细胞衰老的分子机制。方法:构建过表达PIM1的2BS细胞系,通过Western印迹法和衰老相关β-半乳糖苷酶染色实验测定过表达PIM1是否诱导细胞衰老。免疫沉淀联合质谱分析测定PIM1是否能有效免疫沉淀核异质核糖核蛋白U（hnRNPU）蛋白。运用Real-timePCR和Western印迹法测定PIM1是否影响hnRNPUmRNA和蛋白表达水平。构建同时过表达PIM1和hnRNPU的2BS细胞系,运用Western印迹法和衰老相关β-半乳糖苷酶染色实验检测hnNRPU过表达对PIM1诱导的细胞衰老的影响。结果:与空载对照组相比,过表达PIM1组中衰老信号通路关键基因p53、p21和p16的表达显著增加（p53,t=4.36,P<0.05;p21,t=3.814,P<0.05;p16,t=4.72,P<0.01）,衰老细胞的比例增加（t=6.831,P<0.01）。免疫沉淀联合质谱分析结果显示PIM1能有效免疫沉淀hnRNPU蛋白。PIM1过表达对hnRNPU的mRNA表达水平没有影响（t=0.295,P=0.783）,但是能抑制hnRNPU蛋白的表达（t=33.85,P<0.001）。与只过表达PIM1细胞相比,同时过表达PIM1和hnRNPU细胞,衰老信号通路关键基因p53、p21和p16的表达下降（p53,t=15.317,P<0.001;p21,t=8.012,P<0.01;p16,t=14.08,P<0.001）,衰老细胞的比例降低（t=10.38,P<0.01）。结论:hnRNPU过表达抑制PIM1诱导的细胞衰老。     

CTRP3对TGF-β1麟诱导的血管外膜成纤维细胞增殖及α-SMA表达的影响

目的探讨C1q肿瘤坏死因子相关蛋白3（CTRP3）对转化生长因子B1（TGF-β1）诱导的血管外膜成纤维细胞（AFs）增殖以及α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）表达的涮节作州。方法采用细胞贴壤法培养SD大鼠胸主动脉AFs;CCK-8检测不同浓度CTRP3（0．1、1、100和50μg／mL）对AFs增殖的影响：免疫荧光、Real—TimePCR和Westernblotting检测CTRP3对AFsOt—SMA表达的影响。结果CTRP3可呈剂量依赖性抑制TGF-1β1诱导的AFs增殖,随着浓度升高,其抑制能力增强,浓度为10μg／mL时,其对AFs增殖的抑制作州最强（P〈0．01）;免疫荧光、Real-Time PCR和Westernblotting结果显示,CTRP3可明显抑制TGF-β1睫导的α-SMArnt／NA和蛋白表达（P〈0．01）。结论CTRP3可在体外抑制TGF-β1诱导AFs的增殖和α—SMA表达,提爪其潜作的改善病理性血管重构作用。     

多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖聚合酶-1(PARP-1)在高糖致大鼠肾脏系膜细胞细胞外基质沉积中的作用

目的探讨多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖聚合酶-1(PARP-1)在高糖(25 mM)致大鼠肾脏系膜细胞细胞外基质沉积中的作用。方法①体外培养大鼠肾脏系膜细胞株(MCs 1097),使用高糖(25 mM)处理大鼠肾脏系膜细胞,部分实验组中应用PARP-1抑制剂PJ34(3×10-6M)进行干预处理。②RT-PCR和Western blot检测PARP-1、纤维粘连蛋白(FN)、胶原Ⅳ(COLⅣ)的mRNA及蛋白表达。③高通量比色测定法检测PARP-1的活性。结果①高糖显著诱导大鼠肾脏系膜细胞PARP-1 mRNA和蛋白的表达,分别较低糖对照组增加72.3%和68.4%(P<0.05),PJ34可明显抑制高糖诱导的PARP-1 mRNA和蛋白的过度表达,mRNA和蛋白分别为高糖组的31.8%和55.5%(P<0.05)。同时,高糖显著诱导大鼠肾脏系膜细胞PARP-1激活,高糖组为低糖对照组活性的1.77倍(P<0.05),PJ34可显著抑制高糖诱导的PARP激活,活性降低为高糖组的67.8%(P<0.05)。②高糖显著增加COLⅣ和FN表达,PJ34显著抑制高糖诱导的COLⅣ和FN mRNA过度表达(分别为高糖组的68.2%和54.7%(P<0.05);COLⅣ和FN蛋白水平的变化与RNA水平变化相一致,PJ34可显著抑制高糖诱导的COLⅣ和FN蛋白表达(分别为高糖组的54.0%及66.6%(P<0.05)。结论高糖可以诱导培养的大鼠肾脏系膜细胞内PARP激活,PARP-1表达增加,PJ-34预处理可以明显降低高糖诱导的大鼠肾脏系膜细胞内PARP的激活以及下游FN及COLⅣ的高表达,提示PARP1参与了肾脏系膜细胞细胞外基质沉积的发生发展过程。     

前列腺癌根治术后HMGB1表达的意义

目的调查HMGB1在人类前列腺癌细胞链中的表达及对前列腺癌根治术预后的影响。方法通过实时荧光定量反转录聚合酶链反应检测前列腺癌细胞株DU-145、PC-3以及LNCaP和正常前列腺细胞株RWPE-1中HMGB1的mRNA和蛋白表达水平。免疫组化法测定168例前列腺癌患者标本中的HM GB1蛋白表达水平。比较前列腺癌患者中HMGB1表达阳性和阴性组间的临床指标。探讨HMGB1蛋白的表达是否可以预测前列腺癌根治术后患者生化复发的危险性。结果三个前列腺癌细胞株DU-145、PC-3以及LNCaP与正常前列腺细胞株RWPE-1相比较,HM GB1的mRNA和蛋白表达水平都较高。前列腺癌根治术后患者的HM GB1蛋白表达阳性比率为60.1%（101/168）。标本中HMGB1蛋白表达阳性与患者的病理分期、Gleason评分、术前PSA和生化复发等因素相关。前列腺癌患者中HMGB1蛋白表达阳性相比于阴性其无生化复发生存时间较短（23.1 months vs.15.6 months）（P〈0.001）。HM GB1蛋白表达可以预测前列腺癌根治术后患者无生化复发的生存时间（hazard ratio=2.348,95%CI=1.373,6.361,P=0.001）。结论前列腺癌细胞株中HMGB1的mRNA和蛋白表达水平都较高,可能和前列腺癌的发病有关,可能作为一种新的瘤标预测前列腺癌根治术后生化复发的危险性。     

基于Rho/ROCK信号通路的麦粒灸对自发性高血压大鼠主动脉血管内皮功能保护作用机制探讨

目的 观察麦粒灸对自发性高血压大鼠(SHR)降压作用及主动脉血管内皮功能的保护并探讨其可能的机制`。方法 将SHRs随机分为模型组和麦粒灸组,WKY大鼠设为空白组。模型组、空白组不施灸,麦粒灸组实行麦粒灸治疗。观测各组大鼠血压、血清一氧化氮（NO）含量、主动脉形态学改变。采用Western blot法和qPCR法测定各组大鼠主动脉组织中RhoA、ROCK1和RhoA、ROCK1 mRNA表达水平。结果 与模型组相比,麦粒灸组血压下降,主动脉内膜增生不明显,仅部分内膜脱落,血清NO含量明显上升,主动脉RhoA、ROCK1和RhoA、ROCK1 mRNA含量显著下降,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 麦粒灸能有效降低SHR血压,保护主动脉血管内皮功能,其机制可能与抑制Rho/ROCK信号通路表达相关。      

容量激活性氯离子通道在大鼠低氧性PASMCs中的表达及与p38MAPK通路的关系

目的 探讨容量激活性氯离子通道（CLC3）在大鼠低氧性肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）中mRNA和蛋白表达的变化以及其与p38MAPK信号通路的关系.方法 取10只雄性SD大鼠,用酶消化法获得PASMCs并且进行原代培养,用小鼠抗大鼠SMα-actin免疫荧光细胞化学的方法进行鉴定.经培养鉴定的PASMCs随机分为：常氧组（N组,n=6）,低氧组（H组,n=6）,DMSO对照组（D组,n=6）,SB203580干预组（SB组,n=6）,Anisomycin干预组（A组,n=6）,用免疫印迹技术检测CLC3蛋白的表达,半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术测定CLC3 mRNA水平的表达.结果 与N组比较,H组PASMCs中CLC3 mRNA和蛋白的表达量均显著上调（P均＜0.01）;与D组比较,SB组CLC3 mRNA和蛋白的表达均上调（P均＜0.01）,A组mRNA的表达明显下调（P＜0.01）,蛋白的表达轻微下调（P＞0.05）.结论 低氧可上调大鼠PASMCs中CLC3 mRNA和蛋白的表达;p38MAPK通路抑制剂SB203580能上调PASMCs中CLC3 mRNA和蛋白的表达;p38MAPK通路激活剂Anisomycin可下调PASMCs中CLC3 mRNA和蛋白的表达.     

NFATc1对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和上皮间质转化的影响

目的:检测活化T细胞c1核因子（NFATc1）对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖、迁移和上皮间充质转化（EMT）的影响。方法:qRT-PCR检测NSCLC细胞H1650、H460、H1299及正常人支气管上皮细胞BEAS-2B中NFATc1表达水平,将si-NFATc质粒转染至H1650细胞中,通过CCK-8增殖及集落形成实验、划痕和Western 印迹实验分别检测转染后H1650细胞增殖、迁移及EMT的影响。结果:NFATc1 mRNA在H1650、H460、H1299细胞中的相对表达水平高于BEAS-2B细胞（t=10.732,P<0.001;t=4.705,P=0.009;t=4.792,P=0.009）,且H1650细胞中NFATc1 mRNA表达水平高于H460、H1299细胞（t=3.593,P=0.023;t=7.505,P=0.002）;转染si-NFATc1组NFATc1 mRNA（t=9.325,P<0.001）,NFATc1蛋白（t=10.254,P<0.001）,细胞的OD值（t=7.954,P<0.001）均低于si-NC组,细胞集落形成数（t=12.210,P<0.001）,迁移率（t=8.951,P<0.001）低于si-NC组;si-NFATc1组E-cadherin蛋白表达水平高于si-NC组（t=6.352,P<0.001）,Vimentin和N-cadherin蛋白的表达（t=6.012,P<0.001;t=10.241,P<0.001）低于si-NC组。结论:NFATc1在H1650细胞中表达水平增加,敲低其表达水平后可减弱细胞增殖、迁移和EMT。