let-7f-5p在不明原因复发性流产绒毛组织中的表达及其功能研究

目的：筛选与不明原因复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion, URSA)相关的微小RNA（miRNA）,探讨其在URSA发生中的作用及其可能机制。方法：通过对URSA绒毛组织进行miRNAs测序,初步筛选差异表达的miRNAs;利用实时荧光定量PCR,验证筛选所得miRNAs表达水平;利用DAVID软件对靶基因进行Pathway分析;利用实时荧光定量PCR,检测p53通路中靶基因及其下游基因的表达水平。结果：let-7f-5p在URSA绒毛组织中表达水平显著上升;let-7f-5p的靶基因富集于p53通路,通路中靶基因MDM-X和其下游靶标促生长基因MDM2水平显著下降,促凋亡基因p53表达水平显著上升。结论：let-7f-5p可能调控p53信号通路中MDM-X/MDM2/p53基因,促进细胞凋亡,最终导致URSA发生发展。     

ET-1及受体在不明原因复发性流产绒毛中的表达及其对滋养细胞迁移的调节

目的 通过检测内皮素-1(endothelin-1, ET-1)及受体(endothelin receptors, ETR)在不明原因复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion, URSA)绒毛组织中的表达,探讨其与URSA的关系。方法不明原因复发性流产患者30例(RSA组)及正常早孕人流妇女30例(正常组,即CTL组),采用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)及Western印迹法检测两组绒毛组织中ET-1、ETR-A、ETR-B mRNA及蛋白的表达。取体外培养的妊娠早期绒毛外滋养细胞Transwell迁移实验法检测ET-1、ETR-A阻断剂BQ-123及ETR-B阻断剂BQ-788受体对绒毛外滋养细胞迁移能力的影响。结果RSA组较正常组绒毛组织中ETR-B mRNA及蛋白表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05),而ET-1、ETR-A mRNA及蛋白在二组绒毛组织中的表达差异无统计学意义(P＞0.05)。ET-1促进HTR-8细胞迁移,ETR-B阻断剂阻断ET-1的促迁移作用。结论 ET-1可能通过ETR-B受体促进妊娠早期绒毛外滋养细胞迁移,URSA患者较正常组绒毛中ETR-B mRNA及蛋白表达降低可能与URSA相关。     

TLR2和TLR4在原因不明复发性流产绒毛和蜕膜中的表达及其意义

目的本实验通过检测原因不明复发性流产(URSA)患者和健康早孕者TLR2和TLR4在子宫绒毛和蜕膜中的表达,及外周血清中TNF-α及IL-10的水平,初步探讨TLR2和TLR4与URSA存在相关性,以及在URSA发生发展中的可能途径。方法前瞻性研究2008~2009年在浙江大学医学院附属妇产科医院和杭州市第一人民医院门诊患者。年龄在25~35周岁,孕龄<12周。将有≥3次自然流产的URSA患者作为研究组;将曾有正常生育史,本次要求行人工流产终止妊娠的早孕健康妇女作为对照组,分别选择20例。免疫组化检测TLR2和TLR4在两组绒毛和蜕膜中的表达;用ELISA法检测血清TNF-α及IL-10的水平,比较是否存在差异性。结果①TLR2在两组绒毛、蜕膜中表达差异无统计学意义(P>0.05);②TLR4在研究组绒毛、蜕膜表达明显增强,有显著统计学意义(P<0.05);③TNF-α在研究组中的水平明显增高,有显著统计学意义(P<0.05);IL-10在两组中的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TLR4可能是通过释放过量的Th1型细胞因子,导致Th1/Th2失衡,从而极可能参与URSA的发病。     

原因不明复发性流产患者蜕膜组织中Th17/Treg免疫失衡研究

目的 探讨原因不明复发性流产(URSA)患者蜕膜组织中Th17/Treg免疫平衡情况.方法 应用流式细胞技术检测URSA患者和正常早孕者蜕膜组织中Th17和Treg细胞频率,应用real-time PCR方法检测转录因子RORc和Foxp3 mRNA水平.结果 URSA患者蜕膜组织中Th17细胞在淋巴细胞和CD4+T细...     

IL-15与NK细胞在不明原因复发性流产中的临床意义

目的:探讨外周血白细胞介素(IL)-15与自然杀伤(NK)细胞亚群水平的表达和不明原因复发性流产(URSA)的关系,及其诊断URSA的价值。方法:以57例URSA患者为观察组,同期入院体检无不良孕产史的57例健康早孕者为对照组;酶联免疫法检测两组血清孕酮、绒毛膜促性腺激素β(HCG-β)、IL-15、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)及趋化因子配体5(CCL5)水平,流式细胞仪检测两组NK细胞水平;分析IL-15与NK细胞亚群的相关性及诊断URSA效能。结果:观察组血清孕酮及HCG-β水平低于对照组(P<0.05),观察组IL-15水平高于对照组(P<0.05)。观察组NK细胞CD56⁺CD16⁺型高于对照组(P<0.05),NK细胞CD56⁺ CD16^-与CD56^- CD16⁺型观察组低于对照组(P<0.05)。外周血IL-15水平和NK细胞CD56⁺CD16⁺...     

非对称性二甲基精氨酸在不明原因复发性流产患者绒毛及外周血的表达及其意义

目的 探讨不明原因复发性流产（URSA）患者绒毛及外周血非对称性二甲基精氨酸（ADMA）表达及其临床价值。方法 选取URSA患者168例,采用计算机产生随机数法将就诊患者以3〖DK〗∶1的比例分为训练集126例(URSA组)和测试集42例,另选取同期于我院进行终止妊娠的126例孕妇作为对照,对比训练集及对照组临床资料及外周血和绒毛组织ADMA表达,通过拟合曲线和阈值效应分析患者血清URSA表达与URSA发生的关系,采用多因素Logistics回归模型分析发生URSA的独立危险因素,构建列线图模型。结果 与对照组比较,URSA组患者IL-6、IL-117、Th17、Th17/Treg及血浆、绒毛组织ADMA表达显著增加,孕酮、IL-10、TGF-β及Treg显著降低（P＜0.05）。IL-6、IL-17、Th17、Th17/Treg及血浆ADMA、绒毛组织ADMA是发生URSA的独立危险因素,而IL-10、TGF-β及Treg是发生URSA的保护因素（P＜0.05）。当血浆ADMA≥1.43 μmol/L时,血浆ADMA每增加0.6 μmol/L,孕妇发生VRSA的风险增加17%,差异具有统计学意义（OR=0.115,95%CI：0.102~0.133,P＜0.05）;当绒毛ADMA≥1.92 μmol/L时,绒毛ADMA每增加0.6 μmol/L,孕妇发生URSA的风险增加14%,差异具有统计学意义（OR=1.192,95%CI：1.085~1.302,P＜0.05）。依据独立影响因素构建的列线图预测模型具有较高的区分度、准确性和临床适用性。结论 ADMA在URSA患者血浆及绒毛组织中的表达增加,是URSA发生的独立危险因素,对URSA的发生具有一定的预测价值     

主动免疫治疗对不明原因复发性流产孕妇胎儿异常的影响

目的:分析主动免疫治疗对不明原因复发性流产孕妇胎儿异常的影响。方法:选择200例不明原因的封闭抗体阴性的复发性流产妇女,分成两组:观察组和对照组,同意参加主动免疫治疗者入观察组,不同意参加主动免疫治疗者入对照组,采用传统常规安胎治疗,观察两组足月分娩率、早产率、胎儿畸形率、低体重儿率、巨大胎儿率、新生儿评分,及分娩后6个月复查新生儿体格,了解新生儿发育情况。结果:观察组早产率比对照组低、足月分娩率比对照组高,上述组间数据差异有明显的统计学意义(P<0.05);在低体重儿、巨大儿发生率、胎儿畸形发生率、新生儿Apgar评分、6个月后新生儿发育情况方面对比,两组间数据差异无统计学意义(P>0.05)。结论:主动免疫治疗是安全、有效的,对不明原因复发性流产的母婴无明不良影响,预后的良好、安全的。     

miR-30a-3p在复发性流产绒毛组织中的表达及对滋养细胞功能的影响

目的 观察miR-30a-3p在复发性流产患者绒毛组织中的表达,及其对滋养细胞(HTR-8)凋亡、迁移功能的影响.方法 采用qRT-PCR检测复发性流产患者(RSA组)及正常早孕妊娠(正常组)要求终止的患者各20例绒毛组织中miR-30a-3p的表达水平.在HTR-8细胞中转染miR-30a-3p前体分子,共分3组:m...     

药物治疗对不明原因复发性流产患者Th1、Th2细胞

目的:通过观察安胎种子丸治疗对不明原因复发性流产(URSA)患者Th1、Th2细胞闪子的影响,探讨其治疗URSA的机理.方法:33例URSA患者用安胎种子丸治疗,每次6克,3次/日,3个月为一疗程.采用酶联免疫吸附法分别榆测33例URSA患者治疗前后和正常妇女(30例)血清Th1(IL-2)细胞因子、Th2(IL-10)细胞因子水平,观察治疗前后患者血清中Th1(IL-2)、Th2(IL-10)水平的变化.结果:治疗前URSA患者IL-2水平明显高于正常妇女,IL-10水平明显偏低,差异均有显著性(P<0.05);治疗后与治疗前相比,IL-2水平明显降低,IL-10水平明显升高,差异均有显著性(P<0.05).结论:安胎种子丸可能通过调节细胞因子平衡而达到保胎作用,初步揭示其安胎的机理.     

原因不明反复流产患者主动免疫治疗前后免疫细胞的变化

目的：探讨主动免疫治疗前后原因不明反复流产（URSA）患者免疫细胞表达水平的变化。方法选择 URSA 患者65例作为实验组,另选择30例健康未孕妇女作为对照组。采用丈夫淋巴细胞对 URSA 患者进行主动免疫治疗,分别于治疗前和治疗后2周采集患者外周血并检测其免疫细胞的标志,检测对照组外周血中免疫细胞的标志作为对照。结果治疗前, URSA 患者的 CD4＋细胞百分比、CD4∶ CD8比值和 NK 细胞百分比明显高于对照组（41.75±4.34vs36.04±3.85,1.75±0.65vs1.44±0.47,17.10±5.43vs9.87±4.76,P ＜0.05）;治疗后,三者均下降,治疗前后比较具有明显差异（41.75±4.34vs35.83±5.72,1.75±0.65vs1.41±0.51,17.10±5.43vs11.27±3.02,P＜0.05）。结论 URSA 患者的免疫系统处于活跃状态,T 细胞和 NK 细胞的变化可能与 URSA 的发生有关。淋巴细胞免疫治疗是治疗 URSA 的有效手段。     

原因不明性复发性流产综合治疗后妊娠结局的研究

目的探讨原因不明性复发性流产患者给予孕激素治疗、主动免疫治疗及被动免疫治疗等综合治疗后的妊娠结局。方法回顾性分析102例原因不明性复发性流产病例,其中综合治疗组(观察组)52例,孕激素治疗组(对照组)50例。综合治疗组孕前及孕早期给予丈夫淋巴细胞免疫治疗,孕早期给予孕激素及免疫球蛋白治疗;孕激素治疗组孕早期仅给予孕激素。追踪两组患者的妊娠结局。结果给予综合治疗患者妊娠成功率达96.2%(50/52),单纯补充孕激素的患者妊娠成功率为40.0%(20/50),两者差异有统计学意义(χ2=6.37,P=0.012)。观察组妊娠期糖尿病的发生率为16.0%(8/50),对照组为25.0%(5/20),差异无统计学意义(P=0.518)。观察组分娩后新生儿Apgar评分7分的发生率为98.0%(49/50),对照组为95.0%(19/20),差异无统计学意义(P=0.915)。新生儿男女比例观察组为1.27∶1,对照组为1.22∶1,差异无统计学意义(P=0.857)。结论给予孕激素、主动免疫治疗及被动免疫治疗等综合治疗方法对于URSA患者是安全、有效的。     

EP1在不明原因复发性自然流产中的作用研究

目的研究前列腺素E2受体亚型EP1在不明原因复发性自然流产(URSA)中表达水平变化,分离鉴定子宫平滑肌细胞,并用特异性siRNA抑制EP1的表达,观察其对子宫平滑肌收缩率的影响,为抗RSA药物研究提供新的理论依据。方法用荧光定量PCR检测两组子宫平滑肌细胞膜上EP1的表达分布情况;应用图像分析系统测量正常组和URSA组病人子宫平滑肌细胞收缩率;用特异性siRNA抑制URSA组子宫平滑肌细胞EP1的表达,分析其对在子宫平滑肌细胞收缩率的影响。结果 URSA组子宫平滑肌细胞中EP1的表达水平显著高于正常组(P<0.01),同时URSA组中子宫平滑肌细胞的收缩率显著高于正常组(P<0.01);EP1特异性siRNA和阴性对照siRNA处理URSA组子宫平滑肌细胞后,EP1特异性siRNA处理子宫平滑肌细胞收缩率较阴性对照siRNA处理组显著下降(P<0.05)。结论在RSA病人中,外在刺激或内在因素导致EP1表达上调可能是促使子宫的异常收缩而发生流产的一个重要原因。因而PGE2/EP1系统可作为治疗RSA的一个潜在靶点。     

诱导性共刺激分子表达与原因不明复发性流产的相关性研究

目的 探讨诱导性共刺激分子(EOS)的表达与原因不明复发性流产(URSA)的关系.方法 采集10例诊断为难免流产的URSA患者(URSA组)和10例正常早孕妇女(正常对照组)的部分蜕膜组织和外周血,采用流式细胞术检测蜕膜组织和外周血CD3+和CD4+T细胞中ICOS的表达;Real-Time PCR检测蜕膜组织中ICOS mRNA的表达情况.结果 URSA组蜕膜组织中ICOS+ CD3+T淋巴细胞亚群所占百分比为(0.612±0.693)％,显著高于正常对照组的(0.056±0.103)％,差异有统计学意义(P＜0.001).URSA组外周血ICOS+ CD4+T淋巴细胞亚群所占百分比为(1.943±0.762)％,显著高于正常对照组的(0.221±0.127)％,差异有统计学意义(P＜0.001).URSA组蜕膜组织中ICOS mRNA的相对表达量较正常对照组显著升高[(9.875±1.464)vs(2.701±1.737)],差异有统计学意义(P＜0.05).结论 蜕膜组织中ICOS的表达异常与URSA的发病具有密切关系.     

药物治疗对不明原因复发性流产患者Th_1、Th_2细胞因子的影响

目的:通过观察安胎种子丸治疗对不明原因复发性流产(URSA)患者Th1、Th2细胞因子的影响,探讨其治疗URSA的机理。方法:33例URSA患者用安胎种子丸治疗,每次6克,3次/日,3个月为一疗程。采用酶联免疫吸附法分别检测33例URSA患者治疗前后和正常妇女(30例)血清Th1(IL-2)细胞因子、Th2(IL-10)细胞因子水平,观察治疗前后患者血清中Th1(IL-2)、Th2(IL-10)水平的变化。结果:治疗前URSA患者IL-2水平明显高于正常妇女,IL-10水平明显偏低,差异均有显著性(P<0.05);治疗后与治疗前相比,IL-2水平明显降低,IL-10水平明显升高,差异均有显著性(P<0.05)。结论:安胎种子丸可能通过调节细胞因子平衡而达到保胎作用,初步揭示其安胎的机理。     

淋巴细胞免疫治疗不明原因复发性流产妊娠结局分析

目的探讨不明原因复发性流产患者采用淋巴细胞免疫治疗后的临床疗效,分析流产次数、患者年龄与妊娠结局的关系。方法不明原因复发性流产患者604例,于孕前、孕后采用淋巴细胞皮内注射法进行免疫治疗,观察并分析其妊娠结局。结果妊娠成功者420例,成功率84.67%,再次流产者76例,流产率15.33%,其他108例(现孕周<28周4例,未孕40例,失访56例,异位妊娠4例,不明原因胎死宫内1例,胎儿畸形引产3例);流产次数≤3次者治疗后妊娠成功率明显高于流产次数>3次者(P<0.05);年龄≤35岁者妊娠成功率明显高于年龄>35岁者(P<0.05)。结论淋巴细胞主动免疫治疗不明原因复发性流产的疗效肯定,治疗后妊娠成功率高,建议连续自然流产2次或以上者及早干预治疗。     

低剂量静脉注射人免疫球蛋白治疗不明原因反复流产的效果及对可溶性人白细胞抗原G的影响

目的 评估低剂量静脉注射人免疫球蛋白(IVIG)治疗不明原因反复流产(URSA)的效果及对外周血可溶性人白细胞抗原G(sHLA-G)的影响.方法 将60例URSA患者分为试验组和对照组两组,每组30例.试验组在妊娠前静脉给予IVIG 0.2g/kg;确定妊娠后给予同等剂量IVIG,每4周1次,至妊娠20周.对照组给予传统中药或孕激素治疗.观察两组的活产率和有效率(超过以往妊娠4周及以上为有效).于治疗前和妊娠6～8周随机留取试验组和对照组静脉血各15份,同期健康育龄期未孕及早孕6～8周妇女的静脉血标本各20份.采用酶联免疫吸附法检测血清sHLA-G、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-10(IL-10)水平.结果 试验组应用IVIG后的妊娠率为93.3%(28/30). 试验组的活产率和有效率分别为85.7%(24/28)和92.9%(26/28),明显高于对照组的56.7%(17/30)(P=0.021)和 63.3%(19/30)(P=0.011). 试验组应用IVIG后有1 例(3.3%)患者发生轻微恶心,减慢IVIG输入速度后反应消失.对照组和试验组患者孕前血清sHLA-G水平分别为(61.37±35.57)和(62.70±37.24)U/ml,明显低于健康育龄期妇女的(88.49±25.37)U/ml(P<0.05). 妊娠后试验组患者的血清sHLA-G和IL-10水平分别为(34.19±14.21)U/ml和(11.71±2.75)pg/ml,明显高于对照组的(23.71±12.83)U/ml(P=0.043)和(8.71±3.01)pg/ml(P=0.008).结论 孕前后应用低剂量IVIG治疗URSA安全有效,其可能是通过上调患者体内sHLA-G和IL-10水平来改善胚胎发育.     

可溶性Tim-3对原因不明性复发性流产患者Th1／Th2分化的免疫调节作用及其机制

目的：观察可溶性T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3（sTim-3）在原因不明性复发性流产（URSA）患者血清中表达水平的变化及其对Th1/Th2细胞分化的调节,探讨sTim-3在URSA病理过程中的免疫机制。方法：选择52例URSA患者作为URSA组,选取同期正常妊娠孕妇20人作为正常妊娠组,育龄非孕者20人为健康对照组。采用ELISA法检测3组研究对象血清sTim-3和半乳糖结合蛋白9（Galectin-9）水平;双抗体夹心ELISA法检测血清中Th1型细胞因子干扰素γ（IFN-γ）和白细胞价素2（IL-2）、Th2型细胞因子IL-4和IL-10水平。结果：与健康对照组比较,URSA组患者血清sTim-3（t=7.34,P<0.05）及Galectin-9水平（t=4.86,P<0.05）均升高;URSA组患者血清sTim-3水平明显高于正常妊娠组（t=5.63,P<0.05）,而Galectin-9水平则低于正常妊娠组（t=2.76,P<0.05）。正常妊娠组（t=2.81,P<0.05;t=2.84,P<0.05）和URSA组（t=3.66,P<0.05;t=2.91,P<0.05）研究对象血清IFN-γ及IL-2水平低于健康对照组;URSA组患者血清IFN-γ和IL-2水平明显高于正常妊娠组（t=6.11,P<0.05;t=5.95,P<0.05）。与健康对照组比较,正常妊娠组和URSA组研究对象血清IL-4和IL-10水平升高（t=2.53,P<0.05;t=2.52,P<0.05;t=2.69,P<0.05;t=2.33,P<0.05）;URSA组患者血清IL-4和IL-10水平明显低于正常妊娠组（t=6.48,P<0.05;t=7.76,P<0.05）。结论：sTim-3表达增加和Th1/Th2稳态调节失衡可能是导致URSA患者反复流产的关键免疫机制之一。     

免疫治疗不明原因习惯性流产对封闭抗体表达的影响及意义

目的探讨免疫治疗不明原因习惯性流产（URSA）对封闭抗体（BA）表达的影响及临床意义。方法设110例URSA患者为治疗组,选择健康对照组90例及妊娠对照组80例,检测和比较三组BA、IL-6、IL-10、CD4＋CD25＋chghTeg,采用免疫治疗BA阴性URSA患者。结果治疗前治疗组BA阳性率、IL-6、IL-10、CD4＋CD25＋highTreg显著低于健康对照组、妊娠对照组（P〈0．05）;治疗后治疗组BA阳性率显著高于治疗前（P〈0．01）;IL-6、IL-10、CD4＋CD25＋highTreg与健康对照组无显著差异（P〉0．05）;治疗组96例BA阳性者中94例（97．92％）成功妊娠,显著高于BA阴性患者（P〈0．01）。结论URSA与免疫因素有关,通过免疫治疗能够有效提高URSA患者BA阳性率及妊娠成功率。