As2O3联合γ分泌酶抑制剂对HepG2细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的:探讨As₂O₃通过Notch信号通路对HepG₂细胞凋亡的影响,阐明其作用机制。方法:体外培养的HepG₂细胞分为空白组、As₂O₃组、MW167组和联合组;采用不同浓度As₂O₃和MW167处理HepG₂细胞24、48和72 h,MTT法检测细胞增殖抑制率。根据MTT结果选取无细胞毒剂量As₂O₃和MW167(As₂O₃ 0.25 mg·L^-1、MW167 10 μmol·L^-1)分组干预HepG₂细胞48 h;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR和Western blotting法检测Notch-1、Bcl-2和Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平。结果:不同浓度As₂O₃和MW167处理HepG₂细胞均可抑制细胞增殖,呈剂量效应关系;无细胞毒剂量As₂O₃和MW167处理不同分组HepG₂细胞48 h后,与空白组比较,As₂O₃组、MW167组和联合组细胞凋亡率升高(P<0.05),其中以联合组升高最为明显;与空白组比较,As₂O₃组、MW167组和联合组细胞中Bcl-2 、Notch-1 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05),其中以联合组降低最为明显;与空白组比较,As₂O₃组、MW167组和联合组细胞中Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05),其中以联合组升高最为明显。结论:As₂O₃可诱导肝癌HepG₂细胞凋亡,其作用机制可能与通过Notch信号通路下调细胞中Bcl-2 、Notch-1基因和蛋白表达水平以及上调细胞中Caspase-3基因和蛋白表达水平有关联。     

三氧化二砷对人大肠癌细胞端粒酶活性及细胞凋亡的影响

目的：探讨三氧化二砷（As₂O₃）对人大肠癌细胞株 CCL-187 端粒酶活性及细胞凋亡的影响。方法：CCL-187 细胞分为对照组、1.0 μmol•L^-1As₂O₃ 组和 2.5 μmol•L^-1As₂O₃ 组，共同孵育1～6 d。MTT 法计算细胞生长抑制率，电镜下观察细胞形态学变化，RT-PCR 法检测细胞端粒酶 hTERT-mRNA 的表达，TRAP-PCR-ELISA 法检测细胞端粒酶活性。结果：1.0 μmol•L^-1 As₂O₃ 组细胞分化明显，2.5 μmol•L^-1As₂O₃ 组出现细胞凋亡。同时2组端粒酶 hTERT-mRNA 的表达均下调，端粒酶活性降低，且具有时间依赖性，与对照组比较差异有显著性（P<0.01 或 P<0.05）；2.5 μmol•L^-1 As₂O₃ 组与 1.0 μmol•L^-1 As₂O₃ 组比较差异也有显著性（P<0.01）。细胞生长抑制率与细胞端粒酶 hTERT-mRNA 的表达呈负相关（1.0 μmol•L^-1 As₂O₃ 组 r=－0.803，P<0.01；2.5 μmol•L^-1 As₂O₃ 组 r=－0.697，P<0.01），与端粒酶活性的下调呈负相关（1.0 μmol•L^-1 As₂O₃ 组 r=－0.836，P<0.01；2.5 μmol•L^-1 As₂O₃ 组 r=－0.792，P<0.01）；细胞端粒酶 hTERT-mRNA 的表达与细胞端粒酶活性呈正相关（1.0 μmol•L^-1 As₂O₃ 组 r=0.956，P<0.01；2.5 μmol•L^-1 As₂O₃ 组 r=0.988，P<0.01）。结论：As₂O₃ 对 CCL-187 细胞有促进分化及诱导凋亡的作用，其机制可能是下调细胞端粒酶 hTERT-mRNA 的基因表达，从而抑制端粒酶的活性。     

阿托伐他汀对HepG2细胞中脂代谢相关基因表达的影响

目的：探讨阿托伐他汀对HepG₂细胞中载脂蛋白A1（apoA1）天然反义转录（apoA1-NAT）的作用及对脂代谢相关基因表达的影响。方法：采用不同浓度阿托伐他汀（0、1、10和100 nmol·L^-1）干预HepG₂细胞,0 nmol·L^-1阿托伐他汀组为对照组,在不同时间点（6、12、24和48h）提取各组HepG₂细胞总RNA,采用Real-time PCR法检测HepG₂细胞中apoA1-NAT和脂代谢相关基因mRNA表达水平。结果：1和10 nmol·L^-1阿托伐他汀组HepG₂细胞形态正常。与6 h时比较,12、24和48h时10 nmol·L^-1阿托伐他汀组HepG₂细胞中apoA1-NAT表达水平明显降低（P<0.01）,且呈明显的时间依赖性。在相同条件下,48h时HepG₂细胞中apoA1 mRNA表达水平较6h时明显升高（P<0.01）。与对照组比较,100 nmol·L^-1阿托代他汀组HepG₂细胞中低密度脂蛋白受体（LDLR）、10 nmol·L^-1阿托代他汀组HepG₂细胞中清道夫受体B1（SRB1）及1和10 nmol·L^-1阿托伐他汀组HepG₂细胞中ATP结合盒式转运体A1（ABCA1）表达水平均有不同程度升高（P<0.01）。结论：阿托伐他汀通过抑制HepG₂细胞中apoA1-NAT表达,促进脂代谢相关基因表达,进而促进胆固醇逆转运过程。     

CaN抑制剂对H2O2诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡的影响

目的：探讨过氧化氢（H₂O₂）诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡以及钙调神经磷酸酶（CaN）抑制剂他罗利姆（FK506）对细胞的保护作用,为心肌缺血/再灌注所致的心肌损伤及拮抗机制提供实验依据。方法：将大鼠H9c2心肌细胞株体外培养进行实验,实验分为正常对照组（n=6）和H₂O₂各处理组（n=6）。正常对照组采用生理盐水,实验各组分别用50、100、200和400 μmol•L^-1 H₂O₂处理1、 6和24 h后,用罗丹明（Rhodamme-123）荧光探针检测心肌细胞线粒体膜电位(Δψmt)变化,用Annexin-Ⅴ/PI双染流式细胞术检测心肌细胞凋亡率;并采用100 μmol•L^-1 H₂O₂处理6 h建立大鼠心肌细胞凋亡的损伤模型,给予高、低剂量FK506（0.60和0.15 μmol•L^-1）干预,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率。结果：①100、200和400 μmol•L^-1 H₂O₂处理组1 h 时线粒体膜电位均较对照组显著升高（P<0.01）, 6和24 h时,200和400 μmol•L^-1组Δψmt值均低于100 μmol•L^-1 组（P<0.05）,且400 μmol•L^-1组低于200 μmol•L^-1组（P<0.05）;②200和400 μmol•L^-1 H₂O₂处理组1　h 时心肌细胞凋亡率和坏死率均较对照组显著增加（P<0.05）,24　h达高峰。③ 高、低剂量FK506干预组与单纯100 μmol•L^-1H₂O₂处理组比较,心肌细胞凋亡率均明显降低（P<0.01）,高、低剂量组比较差异无显著性（P>0.05）。结论：H₂O₂可损伤心肌细胞线粒体,引起线粒体膜电位下降,导致细胞凋亡。CaN抑制剂对H₂O₂诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡具有保护作用。     

三氧化二砷对小鼠骨髓造血微环境的影响

目的：了解三氧化二砷（As₂O₃）对正常小鼠骨髓基质细胞的影响。方法：采用体外小鼠骨髓基质细胞贴壁培养法、粒-单系祖细胞集落培养法和ELISA方法,观察不同浓度As₂O₃作用不同时间后CFU-F、骨髓基质细胞支持的CFU-GM及其分泌G-CSF、IL-11的数量变化。 结果：7 μmol·L^-1的As₂O₃使CFU-F、骨髓基质细胞支持的CFU-GM产率及其 分泌的G-CSF、IL-11的水平较对照组显著下降 (P<005)。3 μmol·L^-1的As₂O₃用药3 d或5 d骨髓基质细胞分泌G-CSF、IL-11的水平较对照组显著增加(P<0.05),持续用药7 d后,则无显著增加。结论：较低浓度As₂O₃对骨髓基质细胞集落形成及其支持CFU-GM生成无明显抑制作用,反而刺激骨髓基质细胞分泌G-CSF和IL-11,引起分泌高峰的As2O3浓度是3 μmol·L^-1,高峰时间为用药5 d,As₂O₃给药浓度过大、用药时间过长,均可使造血因子分泌量下降。      

Exendin-4对胰岛素抵抗人肝癌HepG2细胞脂代谢相关因子基因表达的影响

目的：探讨Exendin-4（Ex-4）对胰岛素抵抗（IR）人肝癌HepG₂细胞脂代谢相关因子表达的影响,阐明Ex-4改善IR的作用。方法：选取处于对数生长期的人肝癌HepG₂细胞,采用高浓度胰岛素诱导HepG₂细胞制备IR模型（HepG₂-IR细胞）,再将其分为对照组（不含胰岛素的HepG₂细胞）、IR组（IR模型,即HepG₂-IR细胞）和Ex-4组（IR模型中加入10 nmol·L^-1 Ex-4）。采用葡萄糖氧化酶法（GOD-POD）检测细胞中葡萄糖消耗量,采用油红O染色观察细胞形态及胞内脂滴形成情况,应用甘油三酯（TG）试剂盒检测细胞中TG水平,采用荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测细胞中乙酰辅酶A羧化酶（ACC）、脂肪酸合成酶（FAS）、固醇调节元件结合蛋白1c（SREBP-1c）和载脂蛋白B100（apoB100）等脂代谢相关因子mRNA表达水平。结果：HepG₂细胞建立IR模型后,与对照组比较,IR组HepG₂-IR细胞葡萄糖消耗量明显降低（P<0.01）;与IR组比较,Ex-4组HepG₂-IR细胞葡萄糖消耗量明显增加（P<0.05）。油红O染色法,与对照组比较,IR组细胞含脂率明显升高（P<0.05）;与IR组比较,Ex-4组细胞中含脂率明显降低（P<0.05）。与对照组比较,IR组细胞中TG水平明显升高（P<0.01）;与IR组比较,Ex-4组细胞中TG水平明显降低（P<0.05）。qRT-PCR检测,与对照组比较,IR组细胞中ACC、FAS和SREBP-1c mRNA表达水平明显升高（P<0.01）,apoB100mRNA表达水平明显降低（P<0.05）;与IR组比较,Ex-4组细胞中ACC、FAS和SREBP-1c mRNA表达水平降低（P<0.05）,apoB100 mRNA表达水平升高（P<0.01）。结论：Ex-4可通过调节人肝癌HepG₂细胞脂类代谢相关因子的表达进而改善IR。     

三氧化二砷对膀胱癌T24细胞增殖及APC基因表达的影响

目的:探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,As₂O₃）对人膀胱癌T24细胞增殖及腺瘤性结肠息肉病相关基因（adenomatous polyposis coli,APC）表达的影响。方法:采用2、4、8 μmol/L的As₂O₃处理T24细胞,MTT法检测T24细胞增殖抑制率;脱氧核糖核酸原位末端转移酶标记技术检测细胞凋亡;用RT-PCR及Western blot法分别检测As₂O₃对T24细胞中APC mRNA和蛋白表达的影响。结果:As₂O₃在2~8 μmol/L浓度范围内处理T24细胞72 h可有效抑制细胞增殖（P<0.01）;促进细胞凋亡（P<0.01）;增加APC mRNA和蛋白表达（P<0.01）。结论:在一定浓度范围内（2~8 μmol/L）As₂O₃可以有效抑制T24细胞增殖和诱导其凋亡,其机制可能与上调APC基因的表达有关。     

人参皂苷对过氧化氢诱导的HepG2细胞损伤的保护作用

目的：探讨人参皂苷对过氧化氢（H₂O₂）诱导的HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用,并阐明其作用机制。方法：体外培养HepG2细胞,采用不同浓度（0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8和1.0 mmol·L^-1）H₂O₂诱导HepG2细胞损伤。将HepG2细胞分为空白组、对照组、损伤组、人参皂苷对照组和人参皂苷保护组。10、20和40μmol·L^-1人参皂苷RH1、F1、RD、RO和RE分别孵育细胞3 h,H₂O₂损伤2 h,采用细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK-8）检测细胞存活率,CAA法检测细胞抗氧化活性,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）荧光探针法检测细胞中活性氧（ROS）水平,WST-1法检测细胞中超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果：H₂O₂半数抑制浓度（IC₅₀）为0.4 mmol·L^-1。与损伤组比较,10、20和40μmol·L^-1人参皂苷RH1、F1、RD、RO和RE预处理后,H₂O₂诱导氧化损伤的HepG2细胞存活率均有不同程度的升高,其中人参皂苷F1保护组细胞存活率升高最明显（P<0.05）。与对照组比较,10、20和40μmol·L^-1人参皂苷RH1、F1、RD、RO和RE保护组HepG2细胞存活率差异无统计学意义（P>0.05）。人参皂苷F1的半数效应浓度（EC₅₀）为（15.82±0.82）μmol·L^-1,CAA当量为（1 275.20±33.90）μmol TE/100 μmol·L^-1人参皂苷F1。与对照组比较,损伤组细胞中ROS水平明显升高（P<0.05）,SOD活性明显降低（P<0.05）;与损伤组比较,人参皂苷F1保护组细胞中ROS水平明显降低（P<0.05）,SOD活性明显升高（P<0.05）。结论：人参皂苷F1通过提高细胞抗氧化能力,降低细胞中ROS水平,提高细胞SOD活性对H₂O₂诱导的HepG2细胞氧化应激损伤起到保护作用。     

白血病耐药细胞中多药耐药基因MDR1与核转录因子κB的关系

目的:研究核转录因子κB与多药耐药基因MDR1在白血病化疗耐药中的作用,阐明核转录因子κB(NF-κB)与白血病多药耐药的关系及相关分子机制。方法：白血病细胞K562和阿霉素(ADM)诱导的耐药细胞K562/ADM分别应用ADM（0、0.25、0.50、1.00和2.00 μg·L^-1）或丝裂霉素(MIT)（0、2、4、8和16 mg·L^-1）　作用48 h,通过MTT法检测细胞生存率,计算细胞耐药指数;RT-PCR方法检测MDR1和IκB mRNA表达;Western blotting方法检测P-gp和P65的蛋白表达。结果：ADM和MIT分别作用后,与空白对照组比较,白血病细胞K562细胞生存率下降(P<0.01),呈剂量依赖性;ADM和MIT对耐药细胞K562/ADM生存率作用不明显;在mRNA水平上,与K562细胞比较,K562/ADM细胞的MDR1 mRNA高表达(P<0.01)。与空白对照组比较,ADM 0.50和1.00　 μg·L^-1>或MIT 4和8 mg·L^-1分别作用K562细胞和K562/ADM细胞,IκBα mRNA表达均下降(P<0.01),并呈剂量依赖性;在蛋白水平上,与K562细胞比较,K562/ADM细胞的P-gp蛋白高表达(P<0.01)。与空白对照组比较,ADM 0.50和1.00 μg·L^-1或MIT 4和8 mg·L^-1分别作用K562/ADM细胞,P-gp蛋白表达量升高(P<0.01),同时P65蛋白表达量升高,且呈药物剂量依赖性(P<0.01)。结论：MDR1基因及P-gp蛋白的高表达很可能是白血病细胞K562多药耐药性形成的关键机制,而NF-κB的激活可能参与了多药耐药的调控。     

三氧化二砷对HL-60细胞MMP-2及MMP-9表达的影响

目的: 探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As₂O₃)对HL-60细胞基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9表达的影响。方法: 以HL-60细胞为对象,加入0.0、2.5、5.0、7.5 μmol/L As₂O₃干预48 h。RT-PCR检测MMP-2和MMP-9 mRNA的表达,Western blot检测MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结果: HL-60细胞MMP-2、MMP-9 mRNA的表达随着As₂O₃浓度的增加而减少,5.0和7.5 μmol/L As₂O₃组与对照组差异均有统计学意义(P < 0.05~P < 0.01)。As₂O₃呈剂量依赖性抑制HL-60细胞MMP-2、MMP-9蛋白的表达,As₂O₃各组与对照组差异均有统计学意义(P < 0.05~P < 0.01)。结论: As₂O₃可抑制HL-60细胞MMP-2、MMP-9的表达,这一效应可能是As₂O₃治疗白血病的分子机制之一。     

中药砒霜对多药耐药性白血病干细胞作用的研究

目的 探讨中药砒霜的主要有效成分三氧化二砷(As₂O₃)对白血病干细胞(LSCs)的增殖、凋亡和自我更新能力的影响。方法 以药物敏感细胞株K562细胞和白血病多药耐药株K562/ADM细胞为靶细胞,利用免疫磁珠法分选纯化K562细胞和K562/ADM细胞中的LSCs;MTT比色法测定As₂O₃对细胞增殖活性的影响;流式细胞术结合AnnexinⅤ/PI染色法测定细胞凋亡率;流式细胞术结合LSCs细胞表面标志物检测细胞群体中LSCs相对含量;甲基纤维素集落形成法检测细胞的自我更新和增殖能力。结果 低浓度As₂O₃作用后,K562细胞和K562/ADM细胞中LSCs的含量不同程度增高,高浓度时增高较缓或不明显,但凋亡LSCs的数量则随浓度的增高而增高;As₂O₃呈浓度依赖性地抑制两类LSCs(敏感性LSCs和耐药性LSCs)的增殖,并诱导部分LSCs凋亡,多药耐药性LSCs对As₂O_3<...     

人参皂苷单体Rh2对小鼠前胃癌MFC细胞的增殖抑制作用

目的： 探讨Ginseng Rh₂（G-Rh₂）对小鼠前胃癌MFC细胞的增殖抑制作用及其机制。方法： MFC细胞（密度为1.0×10⁹•L^-1）分为空白组、G-Rh₂组（3、10、30 mg•L^-1）组,MTT法检测MFC细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期;流式细胞仪和免疫细胞化学法检测细胞周期蛋白cyclin D₁、细胞周期依赖激酶（CDK）抑制蛋白p27^kip1在MFC细胞中的定性和定量表达。结果：与相应空白组比较,G-Rh₂（3、10、30 mg•L^-1）组在1、2和4 h细胞增殖活性随着剂量和时间增加而逐渐下降(P<0.05或P<0.01);与空白组比较,各药物处理组G₀/G₁期细胞比率随着剂量增加而上升(P<0.05或P<0.01),同时细胞周期蛋白cyclin D₁含量逐渐降低(P<0.05或P<0.01),细胞周期抑制蛋白p27^kip1含量逐渐升高(P<0.05或P<0.01)。结论：人参皂苷单体G-Rh₂可抑制MFC细胞增殖,可使MFC细胞周期阻滞在G₀/G₁期而抑制细胞活性,这一过程可能与p27^kip1升高、细胞周期蛋白cyclin D₁含量降低有关。     

川芎嗪对转基因多药耐药细胞K562/MDR耐药性的逆转作用

目的：研究川芎嗪（TMP）与环孢菌素A（CsA）单独及联合逆转人红白血病多药耐药细胞K562/MDR的多药耐药性（MDR）,并进一步探讨其耐药逆转机制。方法：分别以倍比稀释后不同浓度的TMP（50～6　400 mg?L^-1 ）和CsA（0.5～256 mg·L^-1 ）作用于体外培养的K562/MDR细胞72 h,采用MTT法检测细胞生长率,确定TMP和CsA的非细胞毒性剂量;采用非细胞毒性剂量,实验分为5组：G1组（TMP+ADM+K562/MDR）、G2组（CsA+ADM+K562/MDR）、G3组（TMP+CsA+ADM+K562/MDR）、阴性对照组（以K562/S代替K562/MDR）、空白对照组（以1640培养基代替药物）,检测各组细胞生长抑制50%的ADM浓度,即IC₅₀,计算耐药倍数和逆转倍数;利用荧光分光光度法检测各组细胞内ADM浓度;流式细胞术检测跨膜糖蛋白P-gp的表达情况。结果：TMP及CsA的非细胞毒性剂量分别为320和2.0 mg·L^-1,K562/MDR细胞的耐药倍数为19.2倍;TMP及CsA均能降低K562/MDR细胞的耐药性,逆转倍数分别为5.2及9.6倍,并且两者联合应用,逆转倍数为15.6倍;TMP和CsA单独及联合应用均能明显增加K562/MDR细胞内ADM浓度;TMP及CsA单独应用均能降低K562/MDR细胞P-gp的表达,并且两者联合应用使K562/MDR细胞P-gp的表达率明显降低,与阴性对照组比较差异有显著性（P<0.01)。结论：TMP和CsA单独及联合应用可逆转K562/MDR细胞对化疗药物ADM的MDR,且两者具有协同作用。其逆转机制可能为降低P-gp水平,升高细胞内ADM浓度,增强对ADM的敏感性,从而发挥治疗肿瘤的作用。     

黄芪甲苷对新生乳鼠心肌细胞过氧化氢损伤的保护作用

目的: 探讨黄芪甲苷(ASⅣ ) 对培养的心肌细胞氧化损伤的保护作用及其机制。方法: 体外培养的新生Wistar大鼠心肌细胞分为对照组、 0.1%二甲基亚枫（DMSO）溶剂组、H₂O₂损伤组 (0.2 mmol•L^-1)、阳性药黄芪注射液及 ASⅣ小、中、大（3 、10及30　mg•L^-1）剂量组。药物预先处理心肌细胞30 min 后,加入H₂O₂损伤心肌细胞24 h,观察ASⅣ对心肌细胞形态学的影响,MTT法测定心肌细胞存活力以及测量乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和一氧化氮（NO）含量的变化。结果: H₂O₂ 损伤组心肌细胞部分皱缩,细胞核暗淡,伪足消失;ASⅣ各剂量组心肌细胞损伤程度减轻,心肌细胞核折光性较H₂O₂ 损伤组好,伪足略变细; ASⅣ各剂量组细胞存活力均高于H₂O₂ 损伤组(P<0.05 或 P<0.01); ASⅣ10及30 mg•L^-1剂量组LDH、MDA含量低于H₂O₂损伤组(P<0.05 或 P<0.01),SOD、 NO含量高于H₂O₂损伤组 (P<0.05 或 P<0.01)。 结论:ASⅣ可对抗H₂O₂ 对心肌细胞的损伤,其机制与提高心肌细胞抗氧化损伤能力、诱导NO生成有关。     

三氧化二砷对高迁移率族蛋白诱导的大鼠滑膜细胞增殖的抑制作用

目的： 探讨三氧化二砷（AS₂O₃）对高迁移率族蛋白1（HMGB1）诱导的大鼠滑膜细胞(RSC-364细胞)增殖的抑制作用及其机制。 方法： 将常规培养的RSC-364细胞分为正常对照组、HMGB1组及HMGB1加0、5、10、20、40和80 μmol•L^-1 AS₂O₃实验组; MTT法检测不同浓度AS₂O₃对RSC-364细胞生长的影响,RT-PCR检测STAT1 mRNA的表达变化,免疫细胞化学和流式细胞术检测STAT1、cyclin D1和增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达的变化。结果：① MTT结果显示,AS₂O₃可抑制HMGB1诱导的RSC-364细胞的增殖,80　μmol•L^-1 AS₂O₃作用24　h抑制率可达88.18%,其抑制作用呈时间和浓度依赖性（P<0.05或P<0.01）;② 与对照组比较,HMGB1组STAT1 mRNA及STAT1、PCNA 、cyclin D1蛋白表达量增强,AS₂O₃组STAT1 mRNA及STAT1、PCNA、cyclin D1蛋白降低,并呈剂量依赖性(P<0.01）;③ STAT1与cyclin D1蛋白表达呈正相关关系（r=0.842,P=0.001）。结论：AS₂O₃能够抑制HMGB1诱导的滑膜细胞的增殖,其机制可能与抑制STAT1的活性从而下调细胞周期调节蛋白cyclin D1的表达有关。     

白藜芦醇对肝癌HepG2细胞中脂肪合成的抑制作用及其机制

目的：探讨白藜芦醇（Res）对肝癌HepG₂细胞脂肪合成的影响,阐明其可能机制。方法：体外培养HepG₂细胞,分为Res组（40μmol·L^-1DMSO稀释的Res作用24h）和对照组（相同浓度的DMSO作用24h）。收集细胞上清,ELISA法检测2组细胞中甘油三酯（TG）和总胆固醇（TC）水平。采用实时荧光定量PCR （qRT-PCR）和Western blotting法分别检测2组细胞中脂肪合成酶乙酰辅酶A羧化酶（ACC1）、脂肪酸合成酶（FASN）、硬脂酰辅酶A去饱和酶（SCD1） mRNA和蛋白表达水平,采用Western blotting法检测2组细胞中氧链接N乙酰葡糖胺（O-GlcNAc）糖基化水平。结果：与对照组比较,Res组细胞中TG和TC水平均下降,但差异无统计学意义（t₁=1.886,P<0.05;t₂=2.457,P>0.05）;与对照组比较,Res组细胞中ACC1、FASN、SCD1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P<0.05或P<0.01）,O-GlcNAc糖基化水平明显降低（t=2.87,P<0.05）。结论：Res具有抑制肝癌HepG₂细胞脂肪合成的作用,其机制可能与降低细胞中O-GlcNAc糖基化水平和FASN表达有关。     

血管内皮生长因子165b对人肝癌HepG2细胞生物学特性的影响

目的：探讨血管内皮生长因子165b（VEGF165b）对人肝癌HepG₂细胞生物学特性的影响,并初步研究其作用机制。方法：HepG₂细胞分为空白组（仅加转染试剂）、对照组（转染阴性对照PcDNA3.0表达载体）和PcDNA-VEGF165b组（转染VEGF165b表达载体PcDNA-VEGF165b）。MTT法检测各组HepG₂细胞生存率,RT-PCR法和Western blotting法检测HepG₂细胞中VEGF165b和VEGF165 mRNA和蛋白表达水平,Transwell小室法检测HepG₂细胞迁移能力。结果：与空白组比较,对照组HepG₂细胞中VEGF165b和VEGF165 mRNA和蛋白表达水平无明显变化（P>0.05）。与空白组比较,PcDNA-VEGF165b组细胞中VEGF165b mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,VEGF165 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。空白组和对照组细胞生存率比较差异无统计学意义（P>0.05）;与空白组和对照组比较,PcDNA-VEGF165b组细胞生存率有所降低,但差异无统计学意义（P>0.05）。细胞迁移实验,空白组和对照组细胞迁移率比较差异无统计学意义（P<0.05）;与空白组和对照组比较,PcDNA-VEGF165b组HepG₂细胞迁移率明显降低（P<0.05）。结论：VEGF 165b能抑制VEGF165基因和蛋白的表达,VEGF165b对肝癌细胞增殖无明显影响,但可降低肝癌细胞的迁移能力。     

刺五加叶皂苷B对过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用

目的：探讨刺五加叶皂苷B（C-B）对过氧化氢（H₂O₂）诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响,阐明其对氧化应激损伤所致的心肌细胞凋亡的抑制作用。方法：乳鼠心肌细胞行原代培养,取自主搏动良好的心肌细胞随机分为正常对照组、H2O2 损伤组(200 μmol•L^-1H2O2诱导心肌细胞凋亡)、100 mg•L^-1C-B 组和200 mg•L^-1 C-B 组,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞存活率,AnnexinⅤ-FITC 流式细胞术检测凋亡率,分光光度法检测Caspase-3活性,免疫印迹法检测细胞Caspase-3、PARP、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果：与正常对照组比较,200 μmol•L^-1H₂O₂组心肌细胞有损伤性改变,细胞
存活率明显降低（P<0.001）,凋亡率升高（P<0.001）,Caspase-3活性增加（P<0.01）,细胞Bcl-2蛋白表达减少,Caspase-3及Bax蛋白表达增多,PARP蛋白降解增多。与H2O2损伤组比较,100及200 mg•L^-1C-B组心肌细胞损伤性改变均减轻,细胞存活率增加（P<0.05或P<0.01）,凋亡率降低（P<0.001）,Caspase-3活性降低（P<0.05或P<0.01）,细胞Bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达和Caspase-3蛋白表达减少,PARP蛋白降解减少（依据电泳条带的宽窄及明暗度判断蛋白表达程度）,且200 mg•L^-1C-B组的作用更明显。结论：C-B对H₂O₂诱导的心肌细胞凋亡有一定的抑制作用,可能与其调节细胞内凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达有关。     

三氧化二砷对黑素瘤B16细胞黏附和迁移的影响

目的:了解三氧化二砷(As₂O₃)对黑素瘤B16细胞迁移能力的影响,评价As₂O₃抗肿瘤侵袭和转移能力。方法:用Transwell侵袭转移模型评价As₂O₃抗黑素瘤B16细胞的侵袭和转移作用。MTT法检测B16细胞的黏附能力。流式细胞术检测B16细胞表面黏附分子CD44的表达情况。结果:As₂O₃可显著抑制B16细胞的迁移和黏附能力(P<0.05~P<0.01),降低细胞表面黏附分子CD44的表达(P<0.01)。结论:As₂O₃具有抗黑素瘤B16细胞侵袭和转移作用,降低细胞表面黏附分子CD44的表达可能是其机制之一。     

三氧化二砷对小鼠恶性黑素瘤抑制机制的探讨

目的:探讨三氧化二砷(As₂O₃)对小鼠B₁₆细胞实体瘤的生长抑制作用及对端粒酶活性表达的影响,旨在为临床治疗黑素瘤提供理论和实验依据。方法:以不同浓度As₂O₃作用的鼠黑素瘤B₁₆细胞荷瘤小鼠,用TRAP-PAGE-银染法检测药物作用后瘤体组织端粒酶活性的表达;通过测定荷瘤小鼠瘤体大小和肿瘤组织内微血管密度来反映不同剂量As₂O₃的抑瘤作用。结果:As₂O₃能抑制鼠B₁₆细胞实体瘤的生长,破坏肿瘤组织微血管的形成(P<0.01);As₂O₃能明显抑制鼠B₁₆细胞实体瘤端粒酶的活性。结论:As₂O₃对于B₁₆细胞实体瘤的生长有显著的抑制作用,这可能与其抑制肿瘤组织内微血管的形成和端粒酶表达活性有关。