整合素β1和层黏连蛋白受体1在小鼠牙发育不同阶段牙胚组织中的表达及其意义

目的:研究小鼠磨牙发育不同阶段牙胚组织中整合素β1和层黏连蛋白受体1 (LAMR1的表达模式,探讨二者在小鼠磨牙牙胚组织发育过程中可能的作用机制及其意义。方法:取胚胎期第13.5天(E13.5)、 E14.5、 E16.5、 E18.5和出生后5 d (PN5)的小鼠,分别作为E13.5、 E14.5、E16.5、E18.5和PN5组,每组5只,分离小鼠头部,固定、脱钙、脱水、包埋和切片,HE染色观察各阶段小鼠牙胚组织形态表现,免疫组织化学染色观察小鼠磨牙发育不同阶段牙胚组织中整合素β1和LAMR1蛋白的表达分布情况和表达水平。结果:HE染色,E13.5组小鼠牙胚组织发育处于蕾状期,上皮细胞突入到外胚间充质中,形成上皮芽,状如花蕾;E14.5组小鼠牙胚组织发育处于帽状期,上皮芽体积增大,称为帽状期成釉器,成釉器周围外胚间充质细胞密度增加,形成牙乳头;E16.5组小鼠牙胚组织发育处于钟状早期,成釉器进一步长大,形似吊钟,初步具有牙尖形态;E18.5组小鼠牙胚组织发育处于钟状晚期,成釉器进一步发育,內釉上皮细胞向前成釉细胞分化,形态由立方状变为高柱状;PN5组小鼠牙冠发育完成,形成颈环、上...     

β-catenin在小鼠下颌第一磨牙发育过程中的表达

目的检测β-catenin在小鼠下颌第一磨牙牙冠形成的表达,探讨其在小鼠牙胚发育过程中的作用。方法取孕11天(E11.5)、孕13.5天(E13.5)、孕14.5天(E14.5)、孕16.5天(E16.5)、孕18.5天(E18.5)的ICR胎鼠及出生后24h、出生后3天及出生后7天(PN0、PN3、PN7)的小鼠,常规组织学处理并制备下颌第一磨牙冠状或矢状切片,用免疫组织化学实验方法检测β-catenin在下颌第一磨牙相关组织中的表达情况。结果β-catenin在小鼠下颌第一磨牙早期发育不同阶段呈现特异性的表达模式。在E11.5,上皮层可检测到β-catenin的表达;在E13.5,β-catenin的表达集中在向下方间充质凹陷的牙蕾上皮;在E14.5,在内釉上皮层及釉结节可以检测到β-catenin的强阳性表达;在E16.5、E18.5,在内外釉上皮、第二釉结节及邻近上皮的成牙本质细胞层可检测到β-catenin的表达。从出生后开始,在冠方的成牙本质细胞层、成釉细胞层,以及根方邻近上皮根鞘和上皮隔的牙乳头中的成牙本质细胞层内,可观察到β-catnein的阳性表达。结论 在牙胚发育过程中,β-catenin在牙源性上皮、釉结节及成牙本质细胞、成釉细胞中强表达,与牙冠形态发育及间充质细胞向成牙本质细胞分化密切相关。     

经典瞬时受体电位通道1在大鼠牙胚发育过程中的表达

目的研究经典瞬时受体电位通道1(TRPC1)在大鼠牙胚发育过程中的表达并探讨其意义。方法 制备大鼠牙胚发育各阶段(蕾状期E14.5、帽状期E16.5、钟状期E18.5、钟状晚期P1及牙根形成期P7)标本,进行TRPC1的免疫组化研究。结果 TRPC1在牙胚发育过程中呈动态时空表达。在蕾状期增厚的牙板上皮,帽状期和钟状早期的内釉上皮和外釉上皮,钟状晚期的成釉细胞和前成牙本质细胞及牙根形成期的成牙本质细胞和成釉细胞均可见阳性信号表达,且呈增强趋势。结论 TRPC1可能是一种新的参与调控牙胚细胞的增殖分化和牙齿发育矿化的跨膜信号转导分子。     

ICR小鼠下颌第一磨牙牙胚发育的动态组织学观察

目的了解ICR小鼠下颌第一磨牙牙胚的发育时序特点,为使用小鼠研究牙齿发育机制和相关影响因素提供实验基础。方法分别取E(胚胎)11.5、E12.5、E13.5、E14.5、E15.5、E16.5、E17.5和E18.5 d的胎鼠和PN(出生后)2 d的新生小鼠的头部或下颌骨,固定脱钙包埋后行连续切片,进行HE染色,在显微照相系统下进行观察记录,分析ICR小鼠磨牙牙胚发育的动态变化规律。结果 E11.5 d为牙胚发育始动,E12.5 d牙胚向蕾状期过渡,E13.5 d进入蕾状期,帽状期为E14.5~E15.5 d,钟状期开始于E16.5 d,出生后2 d牙体硬组织开始逐渐形成。结论 ICR小鼠胚胎11 d至出生后第2天是研究下颌第一磨牙牙胚发育机制的最佳时机。     

小鼠磨牙牙胚发育过程中Versican之多糖链的时空变化

目的检测versican之多糖链在小鼠磨牙牙胚发育过程中的时空变化。方法取胎龄分别为E11.5,E12.0,E13.5,E15.0,E16.5和E18.5 d的ICR胎鼠头部,常规组织学处理,制备5μm厚矢状或冠状切片,用免疫组织化学方法检测versican核心蛋白与其硫酸软骨素多糖链在下颌第一磨牙牙胚组织中的时空表达。结果从小鼠下颌第一磨牙牙胚开始发生到钟状晚期,versican核心蛋白与4-硫酸软骨素在牙源性上皮及其衍生组织共表达。在牙乳头间充质细胞中versican核心蛋白开始与6-硫酸软骨素共表达,从钟状早期4-硫酸软骨素开始在内釉细胞深层的牙乳头间充质细胞间表达,且其与6-硫酸软骨素呈互补表达模式。结论 versican之硫酸软骨素多糖链在牙胚发生过程中硫酸化模式呈现时间-空间特异性改变,这种特异性改变可能与小鼠磨牙牙胚的形态发生以及细胞增殖与分化密切相关。     

nesprin-1基因在小鼠心脏发育过程中的表达

目的检测小鼠心脏发育过程中nesprin-1基因mRNA和蛋白的表达及亚细胞定位。方法取小鼠胚胎12.5 d(embryo 12.5day,E12.5)、E14.5、E16.5、E18.5以及新生鼠、成年小鼠心脏,应用RT-PCR、Western blot、免疫荧光技术检测胚胎各时间点、新生鼠、成年鼠心脏nesprin-1基因mRNA和蛋白表达及细胞定位。结果在小鼠胚胎E12.5、E14.5、E16.5、E18.5以及新生鼠、成年小鼠心脏组织中,nesprin-1基因mRNA及蛋白均有表达,其表达量随着心脏的发育而逐渐增加,E16.5和E18.5表达最高,成年鼠表达最低。免疫荧光显示,nesprin-1的分布在各个时期均位于核被膜及核周间隙中。结论nesprin-1在小鼠心脏发育过程中表达呈动态变化,在心脏传导系统和心肌细胞发育成熟时期呈高表达,因此推测nesprin-1可能在心脏传导系统和心肌细胞的发育中有重要作用。     

Cav 1.2羧基末端水解片段在牙胚发育过程中的表达

目的 检测Cav 1.2羧基末端水解片段在SD大鼠下颌第一磨牙牙胚发育早期的表达,探讨其在牙胚发育过程中的作用。方法 制备大鼠磨牙牙胚各发育阶段标本(胚胎14.5、16.5、18.5d及出生后1d),采用免疫组织化学的方法分析Cav 1.2羧基末端水解片段在牙胚组织中的表达与分布。结果 Cav 1.2羧基末端水解片段在牙胚发育早期的不同发育阶段表达各异,P1钟状晚期在牙尖部位的成牙本质细胞呈强阳性表达,由牙尖部向根方阳性逐渐减弱。结论 Cav 1.2羧基末端水解片段在牙胚发育过程中呈时间-空间特异性表达,推测它可能与牙胚的发育及细胞的分化过程密切相关。     

转化生长因子β1和E-钙黏附分子在人牙胚发育过程中的表达及意义

目的：观察转化生长因子β1（TGF-β1）和E-钙黏附分子（E-cadherin）在人牙胚发育过程中的表达,探讨其对牙齿发育的作用及意义。方法：胎龄8~34周胎儿尸体36例,取连牙胚的下颌骨,制成4 μm厚的连续石蜡切片。采用SABC免疫组化方法,观察TGF-β1 和E-cadherin在人牙胚中的分布。结果：TGF-β1和E-cadherin在人牙胚发育的不同时期均有表达。TGF-β1在蕾状期和帽状期的牙蕾上皮、牙板、内釉细胞和外釉细胞均呈阳性表达,钟状期在内釉细胞、釉结、中间层、牙板、成釉细胞、成牙本质细胞呈强阳性表达,靠近成牙本质细胞的牙乳头细胞和牙囊呈阳性表达。E-cadherin在蕾状期和帽状期的牙蕾上皮、牙板上皮、钟状早期的成釉细胞、外釉细胞中呈阳性表达,在钟状中期成釉细胞、成牙本质细胞中呈强阳性表达,外釉上皮和靠近成牙本质细胞的牙乳头细胞中呈阳性表达,在钟状晚期接近硬组织处的成釉细胞、成牙本质细胞、上皮根鞘呈强阳性表达。结论：TGF-β1是参与牙胚细胞分化及形态发生的重要调节因子,E-cadherin与牙釉质和牙本质的发育、分泌及矿化密切相关。     

转化生长因子β3 mRNA在小鼠磨牙牙胚发育过程中的表达

目的:探讨转化生长因子β3(TGFβ3)mRNA在小鼠磨牙牙胚发育过程中的表达及其意义。方法:制备小鼠磨牙各发育阶段标本,用原位杂交分析TGFβ3mRNA在牙胚中的表达与分布。结果:TGFβ3mRNA在小鼠磨牙牙胚不同发育阶段呈时间-空间特异性模式表达。TGFβ3mRNA在蕾状期和帽状期的上皮强表达,在牙胚发育晚期的成牙本质细胞和成釉细胞的表达随细胞分化程度而增强。结论:TGFβ3mRNA在牙形态发生过程中可能通过自分泌和旁分泌机制协同调控上皮-间充质相互作用及成牙本质细胞和成釉细胞的分化。     

EMMPRIN在小鼠磨牙牙胚形态发生过程中的表达

目的 研究细胞外基质金属蛋白酶诱导因子EMMPRIN(basigin/CD147)在小鼠磨牙牙胚发育各阶段的表达,探讨其可能的生物学作用。方法 选择不同胎龄(E11、E13、E14、E15、E16、E18)和出生后1 d (P1)小鼠作为实验对象。Real-Time PCR定量检测小鼠牙胚发育各阶段下颌（E11和E13）及牙胚（E14、E15、E16、E18和P1）组织中EMMPRIN mRNA表达。原位杂交和免疫荧光染色观察EMMPRIN mRNA和蛋白在牙胚组织及相应发育阶段的颌面部发育器官中的定位表达。结果 Real-Time PCR结果显示,E13胎鼠下颌标本中EMMPRIN mRNA的表达约为E11胎鼠1.6倍(P<0.01); P1小鼠牙胚组织中EMMPRIN mRNA表达约为E14胎鼠的2倍（P<0.01）;EMMPRIN mRNA表达随牙胚组织发育呈现递增趋势。原位杂交和免疫荧光染色观察显示,在E14胎鼠牙胚组织中EMMPRIN mRNA和蛋白表达定位一致,但E15、E16、E18胎鼠 EMMPRIN mRNA与蛋白表达定位有所不同;相应发育时段胎鼠下颌骨的Meckel软骨（E14）、视网膜（E15）、大脑血脑屏障（E15）及颚骨骨化中心（E16）中EMMPRIN 蛋白表达均呈现强荧光信号。结论 EMMPRIN的表达贯穿于早期牙胚发生和发育的多个阶段,但牙胚发育帽状期和钟状期阶段EMMPRIN mRNA与蛋白表达并不完全一致。EMMPRIN有可能以外分泌或旁分泌方式,通过调控上皮间质的相互作用参与牙胚发育及形态发生。     

出生后小鼠牙不同发育期DKK1表达的形态学特点及其意义

目的：探讨Wnt 通路抑制因子Dickkopf1（DKK1）在出生后小鼠牙发育各阶段的时空表达特点,为阐明Wnt信号通路调控牙发育机制提供理论依据。方法：选择出生后第0.5、6.5、12.5、18.5、24.5和30.5天的昆明小鼠并按时间分组,每组3只。颈椎脱臼法处死小鼠,分离包含第一磨牙的下颌骨组织后进行固定、脱钙处理,制作厚度为5μm的下颌第一磨牙牙体-牙周组织联合切片。采用苏木素-伊红（HE）染色观察下颌第一磨牙的发育状态,应用免疫组织化学染色方法观察小鼠牙体组织和牙周组织中DKK1的表达特点。结果：小鼠出生后第0.5天时,下颌第一磨牙牙胚处于钟状晚期;第6.5天时,下颌第一磨牙牙釉质发育基本完成,可见上皮根鞘向根方延伸;第12.5天时,冠部牙本质发育完成,牙根形成约1/3;第18.5天时,牙根形成约2/3;第24.5天时牙根发育达到全长;第30.5天时根尖孔缩窄,牙根发育基本完成。小鼠出生后第0.5天时,牙胚中无DKK1阳性表达;第6.5天时,成牙本质细胞中DKK1呈弱表达;从第12.5天到30.5天,成牙本质细胞中DKK1仍呈阳性表达,而牙周膜中开始出现 DKK1 表达,且随时间延长表达逐渐增强,牙槽骨和细胞性牙骨质中也出现 DKK1 的阳性表达,牙髓组织中始终呈阴性表达。结论：出生后小鼠牙不同发育期DKK1呈规律性表达,提示其可能参与了牙本质和牙周组织的发育过程。     

人牙齿发育过程中增殖细胞核抗原的表达

目的 探讨人牙齿发育过程中的细胞增殖状况。方法 制备人牙齿发育各阶段标本,采用SP法对增殪细胞核抗原进行免疫组化研究。结果 增殖细胞核抗原在人牙齿发育各阶段具有不同的表达模式。结论 牙胚内存在广泛的细胞增殖,成釉细胞系和成牙本质细胞系的增殖状态呈现出连续发展过程。     

Wnt5a在小鼠牙骨质发育中的表达特点及其对成牙骨质细胞分化的影响

目的：探讨Wnt家族5A蛋白（Wnt5a）在小鼠出生后牙骨质中的表达特点以及其对体外培养成牙骨质细胞分化的影响,阐明Wnt非经典通路调控牙根发育的机制。方法：选择出生后0.5、4.5、10.5、16.5、20.5、24.5、26.5和30.5d昆明小鼠并按以上相应时间点分组,每组3只;在相应时间点采用脱臼法处死小鼠,分离下颌第一磨牙及牙周组织。免疫组织化学染色法观察小鼠牙体和牙周组织中Wnt5a的表达特点。将小鼠成牙骨质细胞OCCM30分为实验组和对照组。实验组加入200μg·L^-1重组Wnt5a蛋白,对照组无添加;提取细胞总RNA。RT-PCR法检测2组OCCM30细胞中Ocn、Opn、Alp、Bsp、Wnt5a和Runx-2基因的相对表达水平。结果：小鼠出生后0.5d,第一磨牙牙胚中无Wnt5a阳性表达;出生后4.5d,成釉细胞和成牙本质细胞中Wnt5a阳性表达较强;出生后16.5d,可见成牙骨质细胞中Wnt5a呈阳性表达;出生后20.5~30.5 d,成牙本质细胞和牙周膜细胞中Wnt5a呈阳性表达。与对照组比较,实验组成牙骨质细胞中Ocn和Alp基因相对表达水平降低（P<0.05）。结论：Wnt5a在牙根发育过程中的表达特点为从无到有,呈现规律性表达;Wnt5a下调分化基因的表达,在牙骨质发育中发挥重要作用。     

纤维粘连蛋白及骨形成蛋白-2、4在牙胚发育中的表达研究

目的 观察纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)和骨形成蛋白-2、4(BMP-2、4)在大鼠牙胚发育中的表达,探讨其在成牙本质细胞分化及成熟过程的时空表达关系,为明确牙齿发育的分子调控网络提供理论和实验基础.方法 获取SD大鼠蕾状期和钟状期第一磨牙牙胚,通过免疫组化LsAB法观察FN和BMP-2、4的表达差异及相互关系.结果 FN在蕾状期和钟状期都有表达,蕾状期主要分布在牙上皮、牙间质,周围非牙间质细胞为阴性,钟状期主要分布在成牙本质细胞分化活跃的区域和分化中的内釉上皮细胞.钟状期BMP-2、4的表达较强,主要分布在成牙本质细胞分化活跃的区域. 结论 BMP-2、4和FN在牙齿发育的蕾状期和钟状期均有表达,但表达的阳性分布区不同.     

转化生长因子β3在小鼠牙胚钟状晚期以后发育中的表达和分布

目的:观察转化生长因子β3(transforming growth factor β3,TGF-β3)在小鼠牙胚钟状晚期以后发育中的表达分布,探讨其在小鼠牙胚钟状晚期以后发育中的作用.方法:取近交系BALB/C小鼠出生后4 d (4 days postnatal,4dpn)、11 d (11dpn)及18 d (18d...     

大鼠胚胎皮肤前体复合物裸鼠移植模型的构建

目的 筛选大鼠胚胎皮肤裸鼠移植的最佳妊娠时间窗,探索研究胚胎皮肤及其附件发育机制并进行干预的新方法。方法 获取不同胎龄(E14.5d、E16.5d、E18.5d)的携带少量皮下组织的大鼠胚胎皮肤前体复合物(ESPCs),以皮瓣下埋植的方式移植到裸鼠背部。7d后打开皮瓣并暴露成活的ESPCs,观察其成活后胚胎皮肤及附件生长发育的组织学变化。结果 E16.5d、E18.5d移植物可顺利成活并继续生长发育,最终生成带皮肤附件的完整的皮肤结构;E14.5d移植物则形成畸胎瘤样肿物。结论 通过皮瓣下埋植可成功移植大鼠ESPCs;E16.5d左右为ESPCs移植的最佳妊娠时间。     

低氧诱导因子-1α在小鼠椎体发育中的表达及其意义

目的探讨低氧诱导因子（HIF）-1α在小鼠胚胎椎体发育过程中的表达规律及其调节作用。方法在解剖显微镜及光学显微镜下观察小鼠胚胎椎体骨发育的演变过程;应用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和免疫组化方法,检测小鼠胚胎椎体在发育不同时段HIF—-1α表达状况,及与血管内皮生长因子（VEGF）、软骨和骨标记基因的表达关系。结果胚胎第13．5天（E13．5）时,软骨性脊柱形成;E15．5时,椎体内形成小的骨化核,之后初级骨化中心逐渐增大,并向头尾两端延伸。E13．5时。可检测到HIF—-1α的mRNA表达,E14．5时,HIF—-1α的表达水平达高峰（组间比较P〈0．05）。其后逐渐降低,至出生前只有很少量表达;VEGF mRNA表达时相同HIF—-1α表达一致;软骨和骨标记基因的表达与形态学演变相符。E14．5时,免疫组化检测到HIF—-1α蛋白在椎体中心表达,延续表达时间较mRNA长。结论椎体发育表现为软骨内成骨过程,存在低氧环境,伴随有HIF—-1α mRNA及蛋白量的增加及其下游基因VEGF的表达,这可能与HIF—-1α激活下游基因启动椎体软骨内骨化过程有关。