血管内皮生长因子165b抑制肿瘤血管生成的研究进展

研究认为血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）基因差异剪接后能够产生促进血管生成的VEGFxxx和抑制血管生成的VEGFxxxb。在VEGFxxxb家族中,VEGF165b在功能上具有代表性地位,表现出明显的抑制VEGF165所介导的血管生成作用。由于VEGF165b具有机体自然产生、不具有免疫原性的优势,有望通过强制高表达、外源性给予重组蛋白或促进VEGF外显子8b选择性剪接抑制肿瘤血管生成,从而用于肿瘤的治疗。     

贝伐珠单抗引起肝癌细胞HepG2的血管内皮生长因子受体2上调表达

目的 探讨贝伐珠单抗对肝癌细胞HepG2 血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF） 相关受体的影响。 方法 通过不同浓度的贝伐珠单抗降低培养液中VEGF 来模拟低浓度VEGF 的肿瘤微环境,RT-PCR、ELISA、Western lotting 检测肿瘤细胞VEGF 相关受体表达水平的变化。 结果 细胞培养液的VEGF 浓度大幅度下降（P ＜ 0.05） ;可溶性VEGFR2 的浓度出现了上升（P ＜ 0.05） ;HepG2 细胞VEGF 和VEGFR1 表达水平无明显变化（P ＞ 0.05） ;VEGFR2 表达水平出现了明显的上调（P ＜ 0.05）。 结论 贝伐珠单抗导致了肝癌细胞HepG2 大幅度上调了VEGFR2 的表达。     

外源性表达VEGF165b对人膀胱癌T24细胞侵袭力的影响

目的: 观察人膀胱癌T24细胞中外源性表达血管内皮生长因子(VEGF)变构体(VEGF165b)对T24细胞生存率、迁移率和侵袭力的作用,探讨VEGF165b对人膀胱癌细胞生物学特性的影响。方法: 构建VEGF165b表达载体pcDNA-VEGF165b;T24细胞根据处理因素不同分为T24细胞组(正常对照)、pcDNA3.0组(转染pcDNA3.0表达载体)和pcDNA-VEGF165b组(转染pcDNA-VEGF165b表达载体)。MTT法检测T24细胞生存率, Western blotting法检测T24细胞中VEGF165b、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平,Transwell小室法检测T24细胞迁移率和穿膜细胞数。结果: 与T24细胞组比较,pcDNA3.0组T24细胞中VEGF165b、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平无明显变化(P>0.05)。与T24细胞组和pcDNA3.0组比较,pcDNA-VEGF165b组细胞中VEGF165b蛋白表过水平明显升高(P<0.05),MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。T24细胞组、pcDNA3.0组和pcDNA-VEGF165b组细胞存活率比较差异无统计学意义(P>0.05)。与T24细胞组细胞迁移率(100%)比较,pcDNA3.0组细胞迁移率(97.2%±7.8%)无明显变化(P>0.05),pcDNA-VEGF165b组细胞迁移率(63.5%±10.4%)明显降低(P<0.05)。细胞侵袭力实验,与T24细胞组穿膜细胞数(70.8±8.5)比较,pcDNA3.0组穿膜细胞数(66.3±11.2)无明显变化(P>0.05),pcDNA-VEGF165b组穿膜细胞数(23.5±7.3)明显降低(P<0.05)。结论: 外源性表达VEGF165b对T24细胞增殖无明显影响,但可明显降低其迁移力和侵袭力。     

聚桂醇对人肝癌HepG2细胞增殖及迁移影响的体外研究

目的体外探讨聚桂醇对人肝癌HepG2细胞的生长、迁移影响及血管内皮生长因子(VEGF)的表达调控。方法应用MTS比色法观察不同浓度的聚桂醇对人肝癌细胞系细胞的生长抑制作用,并观察细胞在各时间点的抑制率;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力的变化;用细胞划痕实验观察对肝癌细胞迁移的影响;Western blot检测VEGF蛋白的表达变化。结果聚桂醇以剂量依赖的方式抑制HepG2细胞生长,0、20、40、60及80μg/ml聚桂醇对肝癌细胞的生长抑制率分别为0、26.78%、35.37%、51.52%和67.15%(P<0.05);聚桂醇能抑制肝癌细胞的克隆形成、迁移及VEGF蛋白表达,且抑制VEGF蛋白表达跟作用时间呈正相关。结论聚桂醇能抑制肝癌细胞增殖及迁移,影响VEGF蛋白表达。     

三氧化二砷对肝癌HepG2细胞形成血管生成拟态的影响及其机制

目的： 探讨三氧化二砷(AS2O3)对肝癌HepG2细胞血管生成拟态（VM）形成的影响,初步阐明AS2O3对VM抑制的可能作用机制。 方法： 应用CCK-8法测定AS2O3对HepG2细胞作用72 h的半数抑制浓度（IC50）;以Matrigel胶体外三维培养HepG2细胞,将其分为空白对照组、1/2 IC50 AS2O3组和IC50 AS2O3组,IPP软件计算VM的数量、长度和面积,Westernblotting法检测VM相关蛋白VE-cadherin、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、凋亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（caspase-3）和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果:AS2O3作用HepG2细胞72 h后 IC50为10 μmol•L^-1。与对照组比较,1/2 IC50 AS2O3组和IC50 AS2O3组VM数量、长度和面积明显减少（P<0.01）;与1/2 IC50 AS2O3组比较,IC50 AS2O3组VM数量、长度和面积亦明显减少(P<0.05);与对照组比较,1/2 IC50 AS2O3组和IC50 AS2O3组VE-cadherin和MMP-2蛋白表达水平降低（P<0.05）,而caspase-3和PCNA蛋白表达水平无明显变化（P>0.05）。结论：AS2O3　抑制HepG2细胞形成VM,其作用机制可能与抑制拟态通路相关蛋白VE-cadherin和MMP-2的表达有关。     

NU7026对人肝癌细胞HepG2生物学行为的影响

目的探讨NU7026对HepG2细胞的影响,为治疗肝癌提供理论基础。方法用NU7026作用HepG2细胞,将实验分为空白组、对照组和NU7026组。 CCK8实验检测NU7026对肝癌HepG2细胞存活率的影响。生长曲线实验和克隆实验检测HepG2细胞增殖能力,划痕实验检测HepG2细胞迁移能力,流式细胞术检测HepG2细胞凋亡和周期。结果与0 μmol/L组和DMSO组比较,15 μmol/L和20 μmol/L NU7026作用于HepG2细胞,细胞存活率明显下降(P＜0.05);与DMSO组相比,10 μmol/L NU7026作用于HepG2细胞24、48、72 h后,细胞存活率下降(P＜0.05);10 μmol/L NU7026作用HepG2细胞,细胞增殖能力和迁移能力下降(P＜0.05),细胞凋亡率增加(P＜0.05),细胞周期无明显改变。结论NU7026能抑制HepG2细胞增殖能力和迁移能力可能与促进细胞凋亡有关。     

DC-CIK细胞对人肝癌HepG2细胞增殖、迁移的影响

目的探讨经细胞因子从肝癌患者外周血贴壁单个核细胞(PBMCs)诱导的树突状细胞(DC)与杀伤细胞(CIK)对人肝癌HepG2细胞增殖、迁移的影响。方法用肝癌患者肝癌组织裂解物(肿瘤抗原)致敏经粒细胞巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-4(IL-4)等诱导该患者PBMCs产生的DC。用干扰素-γ(IFN-γ)、IL-2和人CD3单克隆抗体(human CD3monoclonal antibody,hCD3mAb)等诱导该PBMCs的悬浮细胞产生CIK细胞。用Tanswell培养小室将DC-CIK细胞与HepG2细胞在同一培养体系内经该小室膜分隔培养24、48h。CCK-8法检测HepG2细胞生长变化,并绘制其生长曲线;划痕实验检测其增殖、迁移能力。RT-PCR、Western blot分别检测其增殖细胞核抗原(PCNA)基因及其编码蛋白的表达。结果 CCK-8法检测显示,DC-CIK细胞对人HepG2细胞生长具显著杀伤作用,与对照组细胞比较,差异有统计学意义(P<0.01)。划痕实验、基因与蛋白水平检测表明,DC-CIK细胞可明显抑制该瘤细胞的增殖与迁移,能在基因与蛋白水平下调该瘤细胞PCNA的表达。结论 DC-CIK细胞可显著下调肝癌细胞的PCNA基因表达,明显抑制其增殖与迁移,以发挥其杀瘤作用。     

人血管内皮生长因子165的克隆和大肠杆菌中的表达

目的 克隆和在大肠杆菌中表达人血管内皮生长因子１６５（ＶＥＧＦ１６５）。方法 利用ＰＣＲ的方法众胎脑ＣＤＮＡ库扩增得到人ＶＥＧＦ１６５的全长ＣＤＮＡ并测定其核酸序列。利用基因重组技术构建ＶＥＧＦ１６５的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达,用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表达产物。结果 经测序表明,克隆的ＶＥＧＦ１６与文献报道相符。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ结果表明经用ＩＰＴＧ诱导后,ＶＥＧＦ１６５在大     

血管内皮生长因子165基因对人胃癌细胞侵袭性的影响

目的:探讨血管内皮生长因子165(VEGF165)基因对胃癌细胞侵袭性的影响及可能机制.方法:通过体外培养人胃腺癌细胞BGC-823,观察胃癌细胞转染VEGF165基因对其迁移能力及侵袭相关分子MMP-2、u-PA mRNA表达的影响.应用Millicell小室分析VEGF165转染前后胃癌细胞迁移能力的变化;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)研究VEGF165转染前后BGC-823的MMP-2、u-PA mRNA表达变化.结果:迁移实验结果显示Ad-VEGF165组胃癌细胞迁移能力高于Ad-GFP组及对照组[(212.000 0±10.148 8) vs (142.666 7±14.502 8) and (148.333 3±7.571 8),P<0.05];RT-PCR结果显示VEGF165转染后促进了BGC-823的MMP-2、u-PA mRNA表达,Ad-VEGF165组MMP-2、u-PA的mRNA水平明显高于Ad-GFP组及对照组[MMP-2 mRNA:(0.664 6±0.048 6)vs (0.409 6±0.066 8) and (0.380 3±0.025 4);u-PA mRNA:(0.821 6±0.079 8) vs (0.406 0±0.115 8) and (0.404 3±0.062 0);均为P<0.05].结论:经VEGF165转染后,胃癌细胞迁移能力增强,MMP-2、u-PA的mRNA表达增加,提示VEGF在肿瘤的侵袭过程中发挥促进作用,MMP-2、u-PA可能与此作用有关.     

猫爪草总皂苷对人肝癌HepG2细胞活性的影响

目的观察猫爪草总皂苷体外对人肝癌HepG2细胞活性的影响。方法采用系统溶剂法提取猫爪草总皂苷,3H-TdR掺入法和集落形成实验观察猫爪草总皂苷对HepG2细胞增殖的影响。结果猫爪草总皂苷对HepG2细胞增殖和集落形成均有显著性的抑制作用,呈现较好的量效关系。结论猫爪草总皂苷能较好地抑制HepG2细胞增殖。     

孕早期外周血VEGF165b降低对预测子痫前期的作用研究

目的:分析血管内皮生长因子165b(VEGF165b)在子痫前期(PE)患者血清中的表达,探讨孕早期外周血VEGF165b作为预测PE发生的生物学指标的临床意义。方法:酶联免疫吸附试验(ELISA)和竞争性酶免疫分析(cEIA)分别检测47例PE患者和42例无高血压正常孕妇、40例未怀孕正常妇女血清中VEGF165b、VEGF的含量。ROC曲线分析孕12周VEGF165b预测PE发生的灵敏度。结果:孕12周,正常孕妇组血清VEGF165b含量[(4.49±1.57)ng.ml-1]与未怀孕组[(0.42±0.18)ng.ml-1]相比显著升高(P<0.01),发展成PE患者的外周血VEGF165b含量[(1.19±0.50)ng.ml-1]与正常孕妇组相比显著降低(P<0.01);ROC曲线显示孕12周VEGF165b预测PE发生具有较高的灵敏度(89.8%)。结论:孕早期母体外周血VEGF165b显著降低可预测PE发生。     

VEGF165反义RNA表达对人胃癌细胞恶性生物学行为的影响

目的利用本室构建的反义VEGF165（血管内皮生长因子,vascular endothelial growth factor）真核表达载体,研究VEGF反义RNA表达对人胃癌细胞生物学表型的影响. 方法用阳性脂质体介导的基因转染技术,将VEGF反义RNA重组体转入人胃癌细胞系,观察转染细胞的细胞周期、增殖能力及致瘤生长情况等生物学表现. 结果 VEGF反义RNA重组体转染胃癌细胞后,斑点杂交、间接免疫荧光等分析显示,反义RNA基因转染技术可使VEGF的表达明显减弱;与未转染的细胞相比,G2/M期细胞增加(0.39),而S期细胞减少(0.54);克隆形成率(2.2%)低于未转染细胞(4.0%);肿瘤细胞接种裸鼠后33 d时,VEGF反义RNA表达人胃癌细胞所致的移植瘤体积（345±136) mm3明显小于未转染细胞所致的移植瘤体积（1534±363) mm3. 结论 VEGF反义RNA可以通过抑制肿瘤组织血管生成而防治肿瘤的生长,另外VEGF的表达可能与细胞增殖能力有关.     

携目的基因的靶向超声微泡对肝癌HepG2细胞增殖活性的影响

目的 制备一种靶向肝癌HepG2细胞的载单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶(HSV-TK)基因超声微泡,并考察其体外寻靶能力及对HepG2细胞的增殖抑制作用.方法 用机械振荡法制备超声微泡,生物素-亲和素桥连方式构建靶向载HSV-TK超声微泡.检测其一般特性,并进行体外实验检测其对HepG2细胞增殖的影响.结果 靶向载HSV-TK超声微泡可较多地聚集在HepG2细胞表面,通过检测增殖细胞核抗原(PCNA)及噻唑蓝(MTT)法,发现载基因靶向微泡组的增殖能力明显下降,细胞凋亡明显增加,细胞侵袭实验表明载基因靶向微泡组(22.18±2.01)较对照组及载基因非靶向微泡组明显减少,对HepG2细胞增殖及侵袭能力有较好的抑制作用.结论 携目的基因靶向超声微泡对肝癌HepG2细胞在体外有较好抑制效果.     

外源性表达VEGF165b对顺铂诱导人膀胱癌T24细胞损伤的影响及其机制

目的:观察人膀胱癌T24细胞中外源性表达血管内皮生长因子(VEGF)变构体VEGF165b对顺铂(DDP)诱导人膀胱癌T24细胞损伤的作用,并探讨相关机制。方法:构建VEGF165b表达载体pcDNA-VEGF165b;T24细胞分为对照组、VEGF165b组(转染VEGF165b表达载体)、DDP组和VEGF165b+DDP组(DDP联合转染VEGF165b表达载体)。MTT法检测各组细胞存活率;Western blotting法检测各组T24细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和caspase3表达;TUNEL法检测细胞凋亡数。结果:MTT法检测,与对照组比较, VEGF165b组24和48 h时T24细胞存活率无明显变化(P>0.05);与DDP组比较,VEGF165b+DDP组24和48 h时细胞存活率均明显降低(P<0.05)。Western blotting法检测,与对照组比较,DDP组细胞中cleaved-caspase3/pro-caspase3比值升高(P<0.05),Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05);与DDP组比较,VEGF165b+DDP组细胞中cleaved-caspase3/pro-caspase3比值升高(P<0.05),Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05)。TUNEL法检测,与对照组(5.1±2.7)和VEGF165b组(7.4±3.2)比较,DDP组的凋亡细胞数(26.3±8.2)的凋亡细胞数增加(P<0.05)。与DDP组比较,VEGF165b+DDP组的凋亡细胞数(41.3±6.9)增加(P<0.05)。结论:外源性表达VEGF165b能通过增加细胞凋亡促进DDP对T24细胞的损伤,其机制与VEGF信号通路受抑制有关联。     

柴胡皂甙d对肝癌细胞VEGF和Ang-2表达的影响

目的观察柴胡皂甙d(saikosaponins-d,SSd)对人肝癌SMMC-7721细胞血管内皮生成因子(vascular endo-thelial growth factor,VEGF)和血管生成素-2(angiopoietin-2,Ang-2)表达的影响,探讨其抗癌作用机制。方法肝癌SMMC-7721细胞株经LPS诱导,加入不同终浓度的SSd(2.5、5、10、20 mg/L)作用48 h,并以300μmol/L终浓度的Nimesulide(COX-2选择性抑制剂)作为阳性对照,采用MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学法测定肝癌细胞内VEGF和Ang-2蛋白表达,RT-PCR法检测VEGF mRNA表达,ELISA法检测培养上清中VEGF含量。结果 SSd可显著抑制肝癌SMMC-7721细胞的生长、增殖。与LPS诱导组比较,10 mg/L SSd作用组肝癌细胞VEGF蛋白表达率、mRNA表达水平和培养上清中VEGF含量均显著降低[VEGF蛋白:80.0%vs 60.0%;mRNA表达:(0.83±0.07)vs(0.09±0.03);培养上清中VEGF含量:(655.00±5.56)vs(446.15±5...     

ELK-3蛋白在肝癌组织中的表达及其对肝癌HepG2细胞迁移和侵袭能力的影响

目的：探讨转录因子ELK-3与肝癌患者临床病理特征的关系及ELK-3对人肝癌HepG2细胞迁移和侵袭能力的影响,并阐明其作用机制。方法：选取80例肝癌患者癌组织及49例癌旁正常组织石蜡标本、18例肝癌患者癌组织及癌旁正常组织新鲜术后标本,采用免疫组织化学法和Western blotting法检测ELK-3蛋白在肝癌及癌旁正常组织中的表达,探讨ELK-3与肝癌患者临床病理特征的关系。选取处于对数生长期的人肝癌HepG2细胞,设立对照组（control-siRNA）和ELK-3干扰组（ELK-3-siRNA）,将ELK-3 siRNA转染至HepG2细胞,通过细胞划痕实验及体外Transwell小室实验观察肝癌HepG2细胞的迁移和侵袭能力。结果：石蜡组织标本免疫组织化学染色,与癌旁正常组织比较,肝癌组织中ELK-3蛋白阳性表达率明显升高（P<0.05）,且ELK-3蛋白阳性表达率与肝癌患者肿瘤数、TNM分期、Edmondson分级和门静脉浸润有关联（P<0.05）。新鲜术后标本Western blotting法检测,与癌旁正常组织比较,18例肝癌患者肝癌组织中ELK-3蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与对照组比较,ELK-3-siRNA组细胞的迁移距离明显变短（P<0.05）,侵袭细胞数明显减少（P<0.05）。结论：ELK-3在肝癌组织中的表达水平明显升高。干扰ELK-3会抑制肝癌细胞的迁移和侵袭,表明ELK-3蛋白可以通过抑制肝癌细胞的迁移和侵袭对其产生影响,从而在肝癌发生发展过程中起重要作用。     

白花丹素对肝癌索拉菲尼耐药细胞HepG2R增殖和凋亡的影响及其机制

目的：探讨白花丹素（PLB）对肝癌索拉菲尼耐药细胞HepG2R增殖和凋亡的影响,阐明其可能机制。方法：体外培养肝癌HepG2细胞,建立索拉菲尼耐药细胞模型HepG2R,MTT法鉴定耐药倍数和筛选药物作用浓度及时间,依据其结果选择索拉菲尼和PLB作用浓度分别为5μmol·L^-1和2μmol·L ^-1,各组药物作用时间为48 h。将HepG2R细胞随机分为对照组、索拉菲尼（5μmol·L^-1）组、PLB （2μmol·L ^-1）组和索拉菲尼（5μmol·L^-1）联合PLB （2μmol·L ^-1）组（联合组）。MTT法检测各组细胞活力,克隆形成实验检测各组细胞克隆形成率,Hoechst33342实验和细胞流式术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中cleaved Caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白表达水平,计算Bax/Bcl-2比值。采用活性氧（ROS）检测试剂盒检测细胞中ROS水平。结果：随着索拉菲尼浓度的升高,HepG2和HepG2R细胞活力逐渐降低,耐药细胞HepG2R对索拉菲尼的半数抑制浓度（IC₅₀）值是HepG2的4.5倍（P<0.05）。随着PLB浓度升高和作用时间延长,耐药细胞对索拉菲尼敏感性升高。与对照组、索拉菲尼组和PLB组比较,联合组耐药细胞克隆形成率降低（P<0.05或P<0.01）。Hoechst33342实验,对照组细胞核淡染,索拉菲尼组和PLB组细胞核少部分浓染、明亮;联合组细胞核大部分浓染,细胞核染色质固缩、明亮。流式细胞术和Western blotting法检测,与对照组、索拉菲尼组和PLB组比较,联合组细胞凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.01）,细胞中cleaved Caspase-3蛋白表达水平和Bax/Bcl-2比值明显升高（P<0.05或P<0.01）。联合组细胞中ROS水平明显高于其他各组（P<0.05或P<0.01）。结论：PLB能改善肝癌对索拉菲尼的耐药情况,其机制可能与升高耐药细胞中ROS水平有关。