丹皮炭止血活性部位的药效学筛选研究

牡丹皮为毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮,是中医临床常用中药之一,始载于<神农本草经>,列为中品,已有两千余年的药用历史.元代始即将牡丹皮制炭后用于临床,以治疗各种出血性疾病.长期的临床实践证明丹皮炭具有明显的止血作用,可用于吐血、崩漏及其他多种出血病症,疗效确切~([1]).然而目前国内外对丹皮炭止血机理的研究尚不深入,为探讨丹皮炭止血的机理,我们首先对丹皮炭止血作用主要活性部位进行筛选研究.     

藕节炒炭止血有效活性部位及其成分筛选研究

目的:通过藕节炒炭前后提取物、藕节不同提取部位及有效成分对小鼠凝血时间的影响观察,验证藕节炒炭止血的科学性,确定藕节炭止血作用的有效部位,为探讨止血作用机制奠定基础。方法:采用小鼠凝血时间作为主要(毛细玻管法)观察指标,分别对藕节炒炭前后受试液、藕节不同提取部位及有效成分进行了测定,18～22g昆明种小鼠,按体重、性别均衡、随机分组,分别给予相应受试药物。每天给药1次,连续10天。于最后一次给药后60min,用毛细玻璃管自小鼠目外眦采血,自采血开始计时,观察自采血至出现血丝的时间作为凝血时间,比较受试药物组凝血时间的变化。结果:通过凝血时间试验,对生藕节提取物、藕节炭提取物进行了凝血时间影响的筛选,确定藕节炒炭后止血作用优于生藕节的止血作用。在前次实验基础上对藕节石油醚提取部位、醋酸乙酯提取部位、水提取部位进行了凝血时间影响的筛选,确定藕节止血作用的有效部位为醋酸乙酯部位和水提取部位。进一步观察藕节炭醋酸乙酯提取物、3-表白桦脂酸对小鼠凝血时间的影响,提示两组受试药均能缩短小鼠凝血时间。结论:藕节炒炭后止血作用加强,醋酸乙脂提取部位、水提取部位为藕节炭止血作用的主要活性部位3,-表白桦脂酸为藕节炭止血作用的有效成分之一。     

藕节炭活性部位止血机制的研究

目的:确定藕节炭止血作用的有效部位和成分的基础上,探讨有效部位及其成分的止血作用机制。方法:大鼠灌胃给药(10.8g/kg),连续给药1周,末次用药后1 h0,.3%戊巴比妥腹腔注射麻醉,腹主动脉采血,0.109 mol/L枸橼酸钠抗凝(1:9体积)3,000 rpm离心10 min,分离血浆。测定血浆凝血酶原时间(PT),活化部分凝血活酶时间(APTT),纤维蛋白原(FIB)及D-二聚体含量,血小板聚集功能及血液流变学指标。EDTA-Na2抗凝,3000rpm离心10 min,分离血浆,放免法测定血浆TXB2和6-Keto-PGF1a。结果:三个受试药物不同程度缩短凝血酶原时间和部分活化凝血酶原时间,增加血浆纤维蛋白原的含量,降低血浆中纤维蛋白降解产物的浓度;提高血浆血栓烷B2含量,降低6-酮-前列腺素F1a含量。血小板聚集功能试验可见三个给药组不同程度提高血小板聚集率,对各受试药物进行血液流变学主要指标观察,可见血液粘度不同程度增加,红细胞电泳时间不同程度延长。结论:藕节凝血作用靶点涉及到凝血、抗凝及其血栓形成的整个过程,并由此导致血流动力学的改变,起到凝血的功效。但其有效成分表白桦脂酸的凝血作用靶点少,可能只对凝血、抗凝和血栓形成过程中某些部位起作用。     

地榆炒炭前后止血作用的研究

地榆是毛莨科植物地榆ＳａｎｇｕｉｓｏｒｂａｏｆｆｃｉｎａｌｉｓＬ .或长叶地榆ＳａｎｇｕｉｓｏｒｂａｏｆｆｃｉｎｌｉｓＬ .ｖａｒ .ｌｏｎｇｉｆｏｌｉａ (Ｂｅｒｔ.)ＹｕｅｔＬｉ的干燥根 ,后者习称“绵地榆”。地榆的炮制方法从古至今有多种 ,唐代有炙法 (《外台》) ;宋代有醋法 (《博济》)和炒法 (《传信》) ;明代有煨制 (《普济方》)和酒洗 (《万氏》) ;清代多用炒、炒黑、酒拌拌黑等炮制方法 ,现在根据不同的炮制目的有炒炭、醋炒、酒炒、盐水炒等炮制方法。地榆炒炭后长于收敛止血 ,常用于各种出血证 ,如用于清热止血的脏连丸 …     

卷柏炒炭后对止血作用的影响

目的 :探讨生卷柏及卷柏炒炭后是否具有止血作用及作用机理。方法 :用毛细玻管法和玻片法进行凝血时间测定 ,用凝血仪测定部分凝血因子。结果 :生卷柏没有缩短凝血时间的作用 ,对凝血因子的影响不大 ;卷柏炭具有缩短疑血时间的作用 ,能使PT和APTT减短 ,使FIB含量减少 ,具有凝血作用。结论 :卷柏生用没有止血作用 ,炒炭后具有止血作用。     

苍术麸炒前后正丁醇部位对湿阻中焦证大鼠的药效学研究

目的通过对比苍术麸炒前后正丁醇部位对湿阻中焦证大鼠的药效变化,以药效寻找物质基础,阐释麸炒苍术的炮制机理。方法以大鼠湿阻中焦证为模型,测定不同组别大鼠小肠推进率、血清胃泌素(GAS)水平、尿量、尿液的水孔蛋白2(AQP2)的量以及脾脏的质量。结果各给药组大鼠小肠推进率、GAS水平较模型组增高,经t检验麸品较模型组有差异;生品高剂量组能增加模型大鼠尿量、降低尿液AQP2的量,较模型组有差异;生品以及麸品正丁醇部位能增加模型大鼠的脾脏质量,且与造模组比较有显著性差异。结论提示苍术麸炒后正丁醇部位健脾和胃作用增强且燥性得以缓和,正丁醇部位是药效变化的有效部位之一。     

蒙药阿给炒炭前后的止血作用及其机制研究

目的:观察阿给炒炭前后对止血作用的影响,并初步探讨其止血作用的部分机理。方法:采用家兔外伤出血实验及试管凝血实验,观察阿给炮制前后对家兔出、凝血时间的影响。采用凝固法、比浊法、试管法测定家兔给药前后凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原含量(FIB)、血浆复钙时间(PRT)、优球蛋白溶解时间(ELT)、血小板最大聚集率(MPAR),分析阿给炮制前后对家兔凝血、纤溶系统及血小板功能的影响。结果:阿给生药中、高剂量组和炭药各剂量组均能明显缩短家兔凝血时间(P<0.01或P<0.05);生药和炭药各剂量组均能明显缩短家兔出血时间(P<0.01或P<0.05)。阿给生药及炭药各剂量组对PT均无显著影响(P>0.05);生药高剂量组和炭药各剂量组能明显缩短APTT(P<0.01或P<0.05)、延长ELT(P<0.01或P<0.05);生药高剂量组和炭药高剂量组均能明显缩短TT(P<0.01或P<0.05);炭药中、高剂量组能明显增加FIB(P<0.01或P<0.05);炭药高剂量组能显著缩短PRT(P<0.05)、增加MPAR(P<0.01)。结论:阿给生药能通过影响内...     

乌梅炒炭前后化学成分与药效变化及其炒炭止血原理研究

目的 通过对乌梅炒炭前后化学成分及药效变化进行研究,阐明乌梅炒炭的炮制原理。方法 采用液质联用技术鉴定乌梅炒炭前后的化学成分并进行多元统计分析,以小鼠肠推进和断尾实验比较乌梅炒炭前后药效的变化。结果 乌梅炒炭前后化学成分具有明显差异,正交偏最小二乘法-判别分析（orthogonal partial least-squares discrimination analysis,OPLS-DA）将乌梅与乌梅炭化学成分聚为2组并标示出6个主要差异性成分,其中柠檬酸-葡萄糖溶液（acid citrate dextrose,ACD）具有抗凝作用。药理实验结果表明,乌梅水煎液和乌梅炭水煎液均具有涩肠作用,乌梅炒炭后产生了止血作用,止血作用的活性部位为透析袋内相对分子质量较大的成分。结论 乌梅与乌梅炭均具有涩肠作用,乌梅炭的止血作用可能与其炒炭后ACD等成分含量降低及产生的相对分子质量大的物质有关。     

蚕砂炒炭前后对小鼠出血和凝血时间的影响

目的:研究蚕砂炒炭前后对小鼠出血时间和凝血时间的影响,为深入研究蚕砂炭止血机理提供数据支撑.方法:以昆明种小鼠为试验对象,随机分成空白组,蚕砂生品低、中、高剂量组,炒炭品低、中、高剂量组.采用剪尾法和毛细管法分别测定不同组别小鼠出血时间和凝血时间,并比较各组间差异.结果:与空白组相比,蚕砂生品低、中、高各剂量组能缩短小鼠出血时间和凝血时间,但组间差别均不具统计学意义(P>0.05),炒炭品低、中、高各剂量组出血时间和凝血时间明显缩短(P<0.01);与生品相比,蚕砂炒炭品各剂量组明显缩短出血和凝血时间(P<0.01),其中高剂量组更为显著.结论:蚕砂生品具有一定止血之功,炒炭后止血作用增强,且炒炭品止血与剂量存在关联,说明蚕砂用于止血时,宜采用炒炭制法.     

基于热分析技术及综合评价的栀子炭炮制工艺研究

目的优化栀子炭炮制工艺,并结合药效学研究对所得炮制工艺进行验证。方法运用热分析技术分别对栀子中不同有效成分进行热解特性分析,得出栀子炭最佳炮制温度范围;同时,以栀子炭中鞣质含量为指标,选择炒制温度、炒制时间2个因素,结合响应面法试验优化栀子炭炮制工艺,并通过药效学实验(止血实验)对栀子炭炮制工艺进行验证。结果热分析实验综合分析得出栀子炭最佳炮制温度为290.3～387.0℃;响应面法优化得出栀子炭最优炮制工艺为炒制温度330℃,炒制时间5.91 min;与空白组比较,新法组、传统组均能极显著缩短小鼠凝血时间(P0.01),生品组能显著缩短小鼠凝血时间(P0.05);新法组能显著缩短小鼠活化部分凝血活酶时间(APTT)(P0.05),对小鼠凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)的影响差异不显著。结论结合热分析技术和响应面法优化栀子炭炮制工艺,并进行相关药效学实验验证,结果合理可行,该法可为改进传统中药炮制工艺,合理量化炮制过程中火力火候参数提供借鉴。     

藕节“炒炭存性”标准的研究

目的:建立藕节"炒炭存性"的评判标准。方法:利用藕节不同程度的炒炭品对色素的吸附力、薄层鉴别、并以它们对小鼠的凝血时间同生品藕节相比较。结果:藕节炒炭存性的标准应该是炒炭后对柠檬黄的吸附力不得低于2.50mg/g,薄层鉴别中必须有B点荧光,小鼠的凝血时间最短为佳。结论:建立藕节"炒炭存性"的评价标准科学合理、简便可行。     

壁虎体外抗Bel-7402肿瘤细胞活性部位的筛选研究

目的:对壁虎体外抗Bel-7402肿瘤细胞的活性部位进行筛选研究,为壁虎抗肿瘤活性物质研究奠定基础。方法:采用超声﹑萃取的方法依次分级提取壁虎的石油醚部位、二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位,并采用噻唑蓝(MTT)法对不同极性部位的体外抗Bel-7402肿瘤细胞作用进行研究。结果:壁虎醇提物的石油醚部位、二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位在体外对Bel-7402肿瘤细胞抑制率分别为93.24%、74.81%、93.25%、91.03%和25.13%,抑制率从高到低依次为石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、二氯甲烷部位、水部位。结论:壁虎醇提物的石油醚部位、二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位对Bel-7402肝癌细胞均有一定抑制作用,其中以石油醚部位的抑制作用最强。     

槐花制炭后新止血成分的药理研究

目的:观察槐花制炭前后饮片、提取物止血作用的改变,以及主要成分、特征性成分的止血作用强度,探索槐花制炭后新的止血成分。方法:以出血时间(BT)和血浆复钙时间(RT)为止血作用的特异性指标,观察槐花生品、炭品,炭品的特征性提取物A和B(SCE A和B)及主要成分灌胃给药后对正常大鼠止血作用的影响,分析其制炭后可能存在的新止血成分。结果:槐花生品,炭品能显著缩短正常大鼠BT和RT,其中炭品作用强于生品。SCE A和SCE B均能显著缩短正常大鼠BT和RT,其中SCE B作用优于SCE A。进一步研究SCE B中提取得到的成分1(槐树皂苷Ⅰ)和2(异鼠李素-3-O-芸香糖苷)及其主要成分(芦丁、鞣质),均能显著缩短正常大鼠BT和RT,其中成分2的作用最优。结论:槐花生品,炭品及槐花制炭后2种提取物和上述4种成分止血作用均显著增加,其中成分2作用显著,提示该成分可能是槐花炭发挥止血作用的新有效成分,也表明槐花炒炭后止血作用增加应是多种成分的协同结果。     

基于CRITIC法计算权重系数的Box-Behnken响应面法优化栀子炭微波炮制工艺研究

目的优化栀子炭微波炮制工艺。方法以HPLC法测定传统炒制方法炮制的栀子炭中京尼平苷及鞣质的量作为评价指标,采用CRITIC法计算权重系数,结合Box-Behnken响应面法,优化栀子炭微波炮制工艺,并对栀子炭微波炮制品的药效进行验证。结果 CRITIC法得出炒制栀子炭京尼平苷、鞣质的权重系数分别为0.27、0.73,微波炮制栀子炭的Box-Behnken响应面法得出最佳工艺为微波功率600 W,微波时间6 min,样品质量120 g,京尼平苷、鞣质量分别为35.19、4.76 mg/g。通过药效验证表明微波炮制栀子炭与传统炒制栀子炭均能够缩短小鼠的出血时间和凝血时间,两者药效无明显区别。结论微波炮制工艺节能高效、可操作性强,该方法可以作为丰富传统炮制工艺的一种手段和方法。     

生、炒王不留行抗氧化活性的比较研究

目的：研究两种王不留行（Sapolzaria vaccaria L）种子提取物的抗氧化活性。方法：采用DPPH法分别测定王不留行与炒王不留行的乙醚、乙酸乙酯、正丁醇和水等不同极性溶剂提取物的抗氧化活性。结果：炒王不留行水提取部位、正丁醇提取部位、乙醚提取部位和乙酸乙酯提取部位的半数抑制浓度分别为0．50、0．15、0．0881和0．023mg／ml；王不留行水提取部位、正丁醇提取部位、乙醚提取部他和乙酸乙酯提取部位的半数抑制浓度分别为0．82、0.26、0.185和0．048mg/ml。炒王不留行的抗氧化活性大于王不留行；两种王小留仃乙酸乙酯提取物的抗氧化活性均最强，结论：王不留行与炒三不留行所含抗氧化成分存在一定的差异。     

黄芩炒炭过程中主要成分与色度值的变化规律及其止血作用研究

目的 通过分析黄芩Scutellariae Radix炒炭过程中化学成分与色度值的动态变化规律及其止血作用评价,以期为黄芩炒炭过程中的质量控制提供科学依据,同时为黄芩炒炭终点的判断奠定基础。方法 制备不同炮制程度的黄芩炭样品（H1～H10）,采用紫外-可见分光光度法测定不同炮制程度黄芩炭样品的总黄酮含量和炭吸附力;采用HPLC法测定不同炮制程度黄芩炭样品中没食子酸、5-羟甲基糠醛、野黄芩苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素及千层纸素A含量;采用分光测色仪测定不同炮制程度黄芩炭样品的L^*（亮度值）、a^*（红绿色值）、b^*（黄蓝色值）、E_ab^*（总色值）;采用SPSS 19.0和SIMCA 14.1软件进行颜色与主要成分的关联分析。最后,采用剪尾法及玻片法进行不同炮制程度黄芩炭样品对正常小鼠止血及凝血时间的药效评价。结果 在黄芩炭炮制过程中,随着炭化程度的增加,样品中总黄酮、没食子酸、5-羟甲基糠醛、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A的含量呈先增后降的趋势,野黄芩苷呈下降趋势。样品粉末的L^*、b^*、E_ab^*值呈降低趋势,a^*值呈先增后降趋势。L^*值、b^*值和E_ab^*值与野黄芩苷、黄芩苷、汉黄芩苷呈正相关,a^*值与没食子酸、5-羟甲基糠醛、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A呈正相关,总黄酮与L^*、a^*、b^*、E_ab^*呈正相关。主成分分析（principal component analysis,PCA）结果显示,不同炮制程度黄芩炭样品各自归类成簇,可区分不同程度的炮制品。回归分析显示,仅没食子酸、5-羟甲基糠醛、汉黄芩素可通过色度值结合回归方程来预测含量,其余成分则不能。结合PCA、炭吸附力及药理实验结果表明,黄芩炭炮制前后炭吸附力和止血、凝血作用差异较大,样品H7（180 ℃、9 min）炭吸附力作用较强,结合止血及凝血时间,H7样品止血作用较好。结论 黄芩炒炭过程中的颜色与化学成分的变化存在相关性,可为黄芩炒炭终点判断提供数据支撑。     

掌叶大黄不同炮制品泻下、止血作用的比较研究

比较掌叶大黄四种炮制品(生大黄、熟大黄、大黄炭与酒大黄)的泻下、止血作用差异.方法①用墨汁推进度实验方法,观察掌叶大黄炮制品泻下作用的差异.②用毛细玻璃管法和小鼠断尾法观察掌叶大黄炮制品止血作用的差异.结果①掌叶大黄不同炮制品中,生大黄泻下作用最强,熟大黄、酒大黄稍缓,大黄炭有止泻作用.②掌叶大黄不同炮制品中,大黄炭的止血效果最强,生大黄次之,熟大黄、酒大黄止血作用不显著.结论掌叶大黄不同制品组的泻下作用与止血作用均存在差异,应对证用药.     

蒙药碱面与食用碱面的药效学比较研究

目的：比较蒙药碱面与食用碱面的药效。方法：采用炭末法观察蒙药碱面与食用碱面对正常小鼠和阿托品抑制模型小鼠的肠推进作用。结果：蒙药碱面与食用碱面对小鼠肠蠕动均有显著促进作用，但蒙荮碱面的药效明显优于食用碱面。结论：在临床应用中不适于完全用食用碱面代替蒙药碱面。     

从栀子黄废液中分离富集栀子苷的研究

目的：研究大孔树脂吸附法分离富集栀子黄废液中栀子苷的工艺条件及参数。方法：以栀子苷含量为考察指标，优选大孔树脂分离富集栀子黄废液中栀子苷的最佳工艺条件。结果：HPD-400分离精制栀子苷较为合适的工艺：吸附流速2．0ml／min；洗脱流速1．0mL／min；采用梯度洗脱法洗脱，经浓缩干燥后得到淡黄色的栀子苷产品，栀子苷含量达到83．4％。结论：此工艺简便易行，可较好地富集栀子黄废液的主要有效成分栀子苷，为工业化生产提供了方法依据。     

固本祛毒合剂的药效学研究

目的：探讨固本祛毒合剂非特异性免疫功能和益气补脾补肾作用。方法与结果：对固本祛毒合剂进行药效学研究，结果表明固本祛毒合剂能改善环磷酰胺抑制白细胞、血小板及造成溶血性贫血等副作用，改善^60Co照射抑制白细胞、粒细胞及血小板等副作用，提高小鼠耐缺氧时间，恢复免疫力低下小鼠的网状内皮系统吞噬能力。结论：固本祛毒合剂能够提高机体非特异性免疫功能，具有一定的益气补脾补肾作用。