骨碎补含药血清对成骨细胞增殖、成骨的影响

目的研究骨碎补含药血清对成骨细胞的增殖、成骨的影响。方法取乳鼠颅骨,利用二型胶原酶反复消化,离心,提取成骨细胞。利用骨碎补含药血清干预,分别测定细胞增殖率、ALP活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量等,研究骨碎补含药血清对成骨细胞的增殖、成骨分化及其抗氧化性的影响;结果用含药血清干预,测定增殖率、ALP活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量、钙化结节量均高于空白对照组。结论骨碎补含药血清可以促进成骨细胞的增殖、成骨分化及其增强其抗氧化性。     

林蛙油含药血清对成骨细胞和破骨细胞增殖和活性的影响

目的探讨林蛙油含药血清对成骨细胞(Osteoblast,OB)增殖、分化和矿化能力的影响,及其对破骨细胞(Osteoclast,OC)分化的影响。方法源于大鼠颅盖骨的原代OB中加入不同浓度的林蛙油含药血清进行干预。MTT法观察林蛙油含药血清对OB增殖的影响,用硝基苯磷酸盐(p-nitrophenyl phosphate,PNPP)偶氮法观察林蛙油含药血清对OB碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响,茜素红(alizarin red S,ARS)进行矿化结节染色并计算面积以观察林蛙油含药血清对OB矿化能力的影响。RANKL诱导前破骨细胞株RAW264.7细胞6d后,加入林蛙油含药血清,用抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate Resistant Acid Phosphatase,TRAP)染色法观察TRAP阳性多核细胞。结果林蛙油含药血清可使体外培养OB的增殖率明显提高(P0.01),并可明显促进OB的矿化能力(P0.05),但其对OB的ALP活性影响作用不明显(P0.05)。此外,林蛙油含药血清对RANKL诱导体外培养的破骨前体细胞RAW264.7形成的成熟多核破骨细胞有抑制作用,表现为TRAP(+)成熟多核破骨细胞数明显减少(P0.01)。结论林蛙油含药血清可促进OB的增殖能力和矿化能力,并可抑制破骨细胞的形成。     

淫羊蕾含药血清对成骨细胞增殖与分化影响的实验研究进展

近年，含药血清试验已成为研究中药淫羊藿对成骨细胞作用的热点。笔者回顾了淫羊藿含药血清对成骨细胞增值与分化影响的相关实验研究的文献，从淫羊藿含药血清试验、成骨细胞体外培养、淫羊藿含药血清对成骨细胞作用机理等方面进行分析，进一步探讨淫羊藿对成骨细胞功能产生影响的有效部位、活性成分和作用机制，为中药淫羊藿防治骨质疏松奠定基础。     

含药血清对体外培养成骨细胞的影响

目的 研究中药骨康吸收后不同浓度血清对离体大鼠成骨细胞增殖的影响及其对成骨细胞分泌IL-6的影响。方法 采用胶原-胰蛋白酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞，然后以中药骨康吸收后血清，加入体外培养成骨细胞中进行培养，MTT法测成骨细胞增殖，ELISA法测培养上清中IL-6含量。结果 发现中药吸收后血清能促进成骨细胞的增殖和分化，各种浓度中以正常剂量药物灌胃后5h取血清含10％药物浓度最佳。同时，新生大鼠体外培养成骨细胞能够分泌IL-6，体外培养成骨细胞在培养后9d左右，IL-6的分泌达到高峰值，随后分泌IL-6的能力逐步下降，中药骨康含药血清可作用于成骨细胞，使其分泌IL-6的能力下降。结论 中药骨康含药血清能够促进成骨细胞的增殖与分化，从而促进骨形成同时可抑制成骨细胞分泌IL-6，这可能是中药骨康抑理骨吸收的机制之一。     

15种中西药物含药血清对大鼠成骨细胞增殖成熟的影响

目的：用含药血清体外观察15种中，西药物对大鼠新生鼠颅骨成骨细胞增殖成熟的影响。比较它们的作用，方法：将所试药物口饲大鼠，每日2次，连续5次，于末次给药后1h采血，分离获得含药血清，加入成骨细胞培养液中，培养3d,以MTT法和金氏法测定光密度值，探讨对成骨细胞增殖和细胞外液中碱性磷酸酶活性的影响。结果：所试15例药物的含药血清对成骨细胞增殖均无显作用；3种西药，4种中成药能显增强碱性磷酸酶活性，其作用强度分别依次为安雄、特乐定，福善美以及泰格，骨疏康，鹿茸健骨，仙灵骨葆。6种中医古方对碱性磷酸酶活性无显增强作用，结论：安雄胶囊（雄激素制剂）、特定乐片（氟制剂）、福善美片（双膦酸盐制剂）和中药泰格胶囊，骨疏康颗粒，鹿茸健骨胶囊，仙骨葆胶囊的含药血清在体外能促进成骨细胞化成熟。     

PDGF-BB对成年雌性大鼠成骨细胞雌激素受体α蛋白质表达影响的实验研究

目的通过研究PDGF—BB与ERα的关系，探讨PDGF—BB在骨代谢中的作用机理，并对其在骨质疏松症中的应用前景进行展望。方法①利用酶消化法分离培养成年雌性大鼠的成骨细胞；②对培养的成骨细胞及其雌激素受体α进行鉴定；③分别加入浓度为0ng／ml、0．1ng／ml、1ng／ml、10ng／ml的PDGF—BB，共同培养7d，并设阳性对照组和阴性对照组；④Western blotting化学发光法检测ER蛋白质，GIS-2010凝胶图象处理系统分析结果。结果①培养的细胞为成骨细胞，免疫组化显示ERα位于胞核；②SDS-PAGE电泳显示在66kD处有清晰的蛋白条带；③Western blot显示10ng／ml组、1ng／ml组、0．1ng／ml组ER。蛋白条带较0ng／ml组清晰，且10ng／ml组最明显。结论PDGF—BB具有促进成骨细胞雌激素受体α蛋白表达的作用，雌激素受体α蛋白含量随着PDGF—BB浓度的增加而呈增加的趋势。     

中药续断含药血清对成骨细胞增殖和骨基质蛋白产生的影响

目的 观察中药续断含药血清对体外培养的成骨细胞增殖和骨基质蛋白产生的影响.方法 ①制备大鼠含药血清:取雌性与雄性Wistar大鼠各12只,按性别随机分为4组,分别为:雄性给药组,雄性对照组,雌性给药组,雌性对照组,每组各6只,给药组按体重 (4.5 g生药/kg体重)分别给予续断水提液灌胃、对照组按体重分别给予等量生理盐水,灌胃1 w后取血,离心提取血清.②分离、培养大鼠的原代成骨细胞.③将各组大鼠血清稀释为2.5%、5%和10% 3个浓度分别培养大鼠成骨样细胞,采用四氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖能力,同时采用生化和放免法进行了细胞碱性磷酸酶(AKP)检测和细胞培养液骨钙素(OC)检测.结果 当培养基中含药血清浓度为2.5%、5%时,雌性给药组成骨细胞增殖率、AKP和OC的量均高于雄性给药组和雌性对照组(P<0.01);当血清浓度为10%时,雌性给药组与雌性对照组比较,存在显著性差异(P<0.05).雌性给药组与雄性给药组比较,无显著性差异(P>0.05).在各浓度的血清中,雄性给药组与雄性对照组之间均无显著性差异.结论 中药续断的含药血清具有刺激骨基质蛋白(碱性磷酸酶和骨钙素)生成和分泌的作用,并具有刺激成骨细胞增殖的作用.这种作用在雌性大鼠的血清中表达强于雄性大鼠.     

血小板衍生生长因子对骨代谢的影响

骨折、骨不连、骨缺损、骨质疏松等一直是困扰骨科界的难题。骨折愈合期漫长 ,易产生各种并发症 ;而骨不连、骨缺损目前临床上尚无有效治疗方法。除了组织工程 ,近年研究热点主要集中在骨组织的代谢调节 ,包括各种生长因子的调节以及细胞间信号传导等。作为一种调节骨组织代谢的重要因子 ,血小板衍生生长因子 (platelet derivedgrowthfactor,PDGF)越来越受到国内外学者的重视。笔者就PDGF对骨代谢的影响加以综述1　生物学特性PDGF是一种耐热、耐酸、易被胰蛋白酶水解的阳离子多肽 ,主要由成熟的血小板分泌 ,与血小板因子 4、纤维蛋白…     

GSB中药血清对rMSCs定向诱导分化为成骨细胞的影响

目的观察GSB中药血清对大鼠MSCs定向诱导分化成骨的影响。方法将培养的rMSCs分为对照组（C组）[含10%胎牛血清,100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的完全培养液]、诱导组（O组）[完全培养液,加诱导培养液（0.1μmol/L地塞米松、10mmol/Lβ-甘油磷酸钠及50μg/ml维生素C）,加20%空白血清]和含药血清诱导组（G组）[完全培养液加诱导培养液诱导培养液中加入20%含药血清）。显微镜下观察细胞形态变化,生化法测定上清中Ca^2＋浓度,Gomori改良钙钴法进行ALP染色,Von Kossa法进行矿化结节染色,RT-PCR法测定Ⅰ型胶原（COLL1）和脂蛋白脂酶（LPL）的表达,放免法测定上清中骨钙素含量。结果O组和G组在加入诱导培养液3-4天后梭形细胞比例减少,细胞变形成多角形、乃至方形,部分区域细胞成多层生长;改良Gomori钙钻法碱性磷酸酶染色阳性细胞,Von Kassa染色发现钙盐沉积;培养9d后细胞Ca^2＋浓度开始升高,并随时间持续显著增长,且G组明显高于O组。自第15d后,O组和G组细胞ALP活性随时间延长而明显增高,且G组显著高于O组;培养的第14d,G组骨钙素分泌量明显高于O组。成骨诱导剂作用MSCs12d后,COLLⅠ mRNA表达阳性,LPL mRNA表达阴性,且G组比O组COLLⅠ mRNA表达更强。结论补肾填精中药GSB促进骨钙素分泌、增强ALP活性、促钙盐沉积,具有增强成骨诱导剂诱导rMSCs向成骨细胞分化,并促进成骨细胞成熟作用。     

阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞护骨素及护骨素配体mRNA表达的影响

目的研究阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL表达的影响,探讨阿胶强骨口服液治疗骨质疏松的分子机制。方法 3月龄Wistar大鼠(雌雄各半)30只,随机分为阿胶强骨口服液,雌激素,及生理盐水对照组,灌胃7d后,制备实验组和对照组的含药血清。将新生SD大鼠分离的颅骨成骨细胞,制成单细胞悬液,消化传代,取二代培养的成骨细胞,制成细胞悬液。培养细胞被分为5组,分别加同体积药液,对照组仅加培养液,继续培养。采用MTT比色分析、3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法测定成骨细胞增殖,用放免法测定细胞内BGP含量,RT-PCR测定胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL mRNA的表达。结果阿胶强骨口服液含药血清以剂量依赖方式促进成骨细胞的增殖,与对照组相比,差异显著(P<0．05)。成骨细胞OPG基因mRNA表达在阿胶强骨口服液含药血清100ml／L时最强,与雌激素组比较无显著性差异(P>0 05),且明显高于对照组(P<0．05)。成骨细胞RANKL基因mRNA表达在1000ml／L阿胶强骨口服液含药血清与雌激素组比较无显著性差异(P<0 05),且明显低于对照组(P<0．05)。结论阿胶强骨口服液可在细胞水平上促进骨的合成代谢及前成骨细胞的有丝分裂,分子水平上调节 OPG／RANKL表达而治疗骨质疏松。     

骨康防治去势大鼠骨质疏松的实验研究

目的探讨补肾活血类中药骨康口服液对去势大鼠所造成的骨质疏松的影响。方法通过切除大鼠卵巢造成绝经后骨质疏松模型,观察了中药骨康口服液不同剂量对造模大鼠骨质疏松的防治作用及其对去势大鼠股骨骨生物力学的影响,并与尼尔雌醇作阳性对照。结果中药骨康中、低剂量的去势大鼠股骨扭转试验最大扭矩高于模型组（Ｐ＜０．０５）,中、低剂量组股骨ＢＭＤ、ＢＭＣ高于模型组（Ｐ＜０．０５）。股骨ＢＭＤ值与股骨最大扭矩值呈直线相关（ｒ＝０．７４１５,Ｐ＜０．０１）。结论推测骨康可能能提高去势大鼠骨的骨矿含量及骨密度,并促进去势大鼠骨结构的再建,改善骨的内部构造,从而提高大鼠骨的机械性能。     

镁锌合金对成骨细胞整合素表达的影响

目的 观察镁锌合金(Mg-Zn)对小鼠前成骨细胞(MC3T3-E1)整合素表达的影响.方法 将MC3T3-E1细胞以1.0×105个/ml密度接种于Mg-Zn和左旋聚乳酸(PLLA)上,共培养1、3、6、9、12和15 d后,收集细胞,利用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法检测整合素亚基α2、α5和β1(Itgα2、Itgα5和Itgβ1)mRNA的表达水平.结果 Itgβ1 mRNA表达水平最高,且随着时间的延长而增高(P<0.01),但两组材料差异无统计学意义(P>0.05);Mg-Zn表面Itgα5 mRNA表达水平随着时间延长而增高(P<0.01),除第1天外,PLLA表面Itgα5 mRNA表达水平均低于Mg-Zn表面(P<0.01);Itgα2 mRNA表达水平随着时间延长而增高,在第9天时到达高峰,随后逐渐降低.在第1、3、6天Mg-Zn表面Itgα2 mRNA表达水平高于PLLA(P<0.01),而第9、12、15天时两组差异无统计学意义(P>0.05);Mg-Zn表面Itgα2 mRNA表达水平除了第15天外均高于Itgα5 mRNA(P<0.01).结论 与PLLA比较,Mg-Zn能够提高成骨细胞Itgα5 mRNA和Itgα2 mRNA表达水平,有利于促进成骨细胞与材料表面的黏附.     

中药骨康对去势大鼠骨矿含量和骨密度的影响

本实验旨在观察骨康口服液对通过切除卵巢诱发的绝经后骨质疏松症大鼠模型骨矿含量(BMC)和骨密度(BMD)的影响。通过双能X线扫描．结果显示：给药3个月时骨康组大鼠胫骨干骺端处的BMC和BMD显著高于造模组;骨康高、低剂量组与阳性对照组无显著差异。提示骨康和尼尔雌醇均可显著提高去势大鼠胫骨干骺端处的BMC和BMD．二者作用相当,且BMC和BMD的变化较一致。     

印度刺猬蛋白调节成骨细胞中p38丝裂素活化蛋白激酶表达的研究

目的 观察印度刺猬蛋白(Ihh)对成骨细胞p38丝裂素活化蛋白激酶(p38 MAPK)的调节作用.方法 取子鼠颅盖骨分离培养成骨细胞,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测成骨细胞中p38 MAPK的表达量,检测成骨细胞在不同浓度(0、10、50、200μg/L)及不同时间(0、1、2、3d)的Ihh作用下p38 MAPK的表达,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖.结果 成骨细胞表达p38 MAPK；Ihh促进成骨细胞增殖,促进p38 MAPK的表达(P＜0.05)；阻断p38 MAPK信号转导通路后,成骨细胞增殖明显受抑制,但不能明显抑制Ihh刺激下的成骨细胞增殖(P＜0.05).结论 p38 MAPK在成骨细胞增殖分化中起作用,Ihh通过p38 MAPK通路促进成骨细胞增殖.     

基于Wnt信号通路研究骨康方对过表达DKK1大鼠骨形成影响

目的利用腺病毒过表达技术研究Wnt信号通路抑制因子Dickkopf1(DKK1)在大鼠骨形成中的作用并观察骨康方(补肾健脾活血方)对过表达DKK1转染大鼠骨形成的影响作用。方法选取成年SD大鼠18只,利用过表达DKK1(Ad-DKK1)腺病毒转染其中6只大鼠,空载腺病毒(Ad-EV)转染另外6只大鼠,用生理盐水对剩余的6只大鼠进行注射并设为对照组(NC)。转染成功后,每组随机选3只给予骨康方干预,另外3只给予等体积生理盐水,观察大鼠骨密度、Wnt信号通路相关因子DKK1,LRP6,β-catenin,APC,RUNX2,OPG表达量的变化。结果腺病毒成功转染大鼠,Ad-DKK1转染组DKK1表达量明显高于Ad-EV组及NC组,Ad-DKK1组骨密度低于Ad-EV组及NC组(P0.05);②中药干预后,Ad-DKK1组、Ad-EV组、NC组大鼠骨密度升高,Wnt信号通路抑制因子DKK1、APC表达量降低,Wnt信号通路成骨相关因子LRP6,β-catenin, RUNX2,OPG表达量升高(P0.05)。结论①过表达DKK1可导致大鼠股骨骨密度降低;②骨康方干预后,大鼠股骨骨密度升高,LRP6,β-catenin, RUNX2,OPG表达量增加, DKK1、APC表达量降低。     

去势后雌性大鼠体内成骨细胞活性变化的实验研究

目的了解去势后不同时相雌性大鼠体内成骨细胞功能的变化特点,分析其机理。方法6个月龄清洁级健康雌性SD大鼠40只,随机均分为去卵巢组和假手术组,实验时间为4个月。分别于2、16周时每组各处死10只大鼠,取L4和血清,检测骨源性碱性磷酸酶(BALP)、骨钙素(BGP);透视电镜观察成骨细胞的分泌功能和电镜下的形态学变化。结果去势组大鼠体内BGP、BALP水平2周时皆升高,16周时与对照组差异无显著性意义。透视电镜下观察2周时成骨细胞功能活跃,16周时功能趋于静止。结论雌激素减少时,大鼠体内的成骨细胞可出现短暂的功能活跃,而后发生的成骨功能低下是导致骨质疏松症的一个因素。     

瑞舒伐他汀对体外培养人成骨细胞增殖及LRPS、Runx2基因表达的影响

目的 观察不同浓度的瑞舒伐他汀对体外培养的人成骨细胞增殖及LRPS,Runx2基因表达的影响,探讨瑞舒伐他汀影响骨代谢可能的分子机制。方法 (1)成骨细胞的培养与鉴定;(2)给予不同浓度(0,10-6 , 10-7 ,10-8,10-9 mol/L)的瑞舒伐他汀刺激体外培养的人成骨细胞,24 h后采用CCK-8比色法检测细胞的增殖能力,用荧光定量PCR法检测LRPS , Runx2的相对表达水平。结果 瑞舒伐他汀可明显促进细胞增殖(P<0.05),并促进成骨细胞LRPS , Runx2基因的表达(P<0.05),10-7mol/L增殖最明显、基因的表达量最高。结论 瑞舒伐他汀可促进成骨细胞的增殖,可能与LRPS , Runx2基因表达增加有关。     

神经肽对大鼠成骨细胞胰岛素样生长因子-1及其受体基因表达的影响

目的观察神经肽类物质降钙素基因相关肽（CGRP）、P物质（SP）在鼠成骨细胞表面受体的分布，探讨神经肽对大鼠成骨细胞胰岛素样生长因子（IGF）-1和胰岛素样生长因子1型受体（IGF-1R）基因表达的调控作用。方法取出生1d的Wistar大鼠颅盖骨成骨细胞进行体外原代和传代培养，应用免疫组织化学技术检测体外培养的鼠成骨细胞表面神经肽受体的分布情况，用不同浓度的CGRP和SP分别对传代成骨细胞处理6、12和24h，原位杂交技术检测观察成骨细胞二种目的基因（IGF-1、IGF-1R）的mRNA表达强度变化以及时间效应和剂量．效应的关系。结果（1）大鼠成骨细胞表面有CGRP、SP受体表达。（2）CGRP可以刺激成骨细胞IGF-1mRNA表达，以10^-8mol／L作用12h最为明显。CGRP亦能够上调成骨细胞IGF一1RmRNA表达，而且维持时间达24h具有明显的剂量时间依赖性。（3）SP可以刺激成骨细胞IGF-1mRNA表达，以10^-6mol／L作用12h最为明显。SP亦能够上调成骨细胞IGF-1RmRNA表达，而且维持时间达24h具有明显的剂量时间依赖性。结论神经肽CGRP，SP通过增强IGF-1的自分泌作用即诱导内源性IGF基因表达来间接地调节成骨细胞活性，从而发挥成骨效应。