FA促进培养软骨细胞及基质发生异常矿化

采用视黄酸（Retinoicacid，RA）、抗坏血酸（VitaminC，Vc）比较研究大骨节病病区黄腐酸（Fulvicacid，FA）对体外培养肥大软骨细胞及基质的作用，发现病区FA可促进贴壁单层培养的软骨细胞形成异常的胞外基质，促进异常矿化。病区FA刺激软骨细胞产生的活性氧[1]使近细胞膜的软骨囊内蛋白颗粒减少，细蛋白纤维消失；粗长的胶原蛋白变细，胶原蛋白连接方式由正常的束状排列变为杂乱的网状；造成蛋白多糖结构散乱，使矿化位点混乱，而在伤损基质上发生片状不均匀较大量的钙化区。这种异常矿化过程与大骨节病人软骨损伤及修复性的病理矿化有相似之处，支持了大骨节病的自由基致病机理。     

大骨节病区FA对软骨细胞ALPase活性的影响

为探明大骨节病病区黄腐酸（Ｆｕｌｖｉｃａｃｉｄ，ＦＡ）对软骨内成骨过程中矿化的影响，采用４－甲基伞形酮磷酸酯（４－ＭｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌＰｈｏｓｐｈａｔｅ，４－ＭＵＰ）为碱性磷酸酶（ＡｌｋａｌｉｎｅＰｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＬａｓｅ）作底物，并结合Ｇｏｍｏｒｉ染色法，研究了ＦＡ对体外培养的肥大软骨细胞及基质在矿化过程中ＡＬＰａｓｅ活性影响。发现与视黄酸（Ｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄ，ＲＡ     

榆林大骨节病区水中黄腐酸对培养软骨细胞作用的观察

目的；本实验观察黄腐酸（ＦＡ）对软细胞，结构，生长，代谢和功能的影响，方法：用大骨节病病区水中ＦＡ，以不同浓度（５ｍｇ／Ｌ，１０ｍｇ／Ｌ，２０ｍｇ／Ｌ）作用于体外培养的兔关节软骨细胞，检测结果作Ｆ检验进行统计学处理，结果：显示实验组织细胞膜功能，蛋白质，ＤＮＡ，蛋白聚糖等不低于对照组或高于对照组，结论：ＦＡ对培养软骨细胞的ＤＮＡ合成，分裂增殖和细胞结构等没有影响。     

大骨节病患者血清对培养软骨细胞蛋白多糖代谢的影响

观察了大骨节病（ＫＢＤ）患者血清对培养软骨细胞蛋白多糖（ＰＧ）合成代谢和分解代谢的影响。实验结果表明：（１）在１０％ＫＢＤ血清存在下培养的静止软骨细胞其ＰＧ合成明显低于非病区健康对照组（Ｐ＜０．０１）；（２）培养液中添加ＫＢＤ血清（５％）培养的肥大软骨细胞其释放到培养液中的ＰＧ含量显著高于非病区健康对照组（Ｐ＜０．０１），其中低分子量ＰＣ的含量增加，缺乏透明质酸结合区，不能与透明质酸结合形成ＰＧ聚合体，以上结果指出ＫＢＤ患者血清中存在干扰ＰＧ代谢的物质。     

自由基引发的软骨细胞异常基质异常矿化异常——大骨节病病理化学过程初探

本文研究了自由基和黄腐酸对软骨细胞的损伤效应。结果表明自由基和黄腐酸可引起软骨细胞损伤。这种损伤的软骨细胞分泌异常基质,在异常基质中,羟基磷灰石的矿化异常,并在此基础上,提出了一个大骨节病的病理化学过程。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）对培养软骨细胞生长代谢的影响

本文报告了脱氧雪腐镰刀菌烯醇（ＤＯＮ）对培养软骨细胞生长代谢的影响。结果显示：在一代兔关节软骨细胞培养２４ｈ时，仅在培养液中加入１．０μｇ／ｍｌ的ＤＯＮ，即对软骨细胞产生致命性的损伤。在培养１２０ｈ时加ＤＯＮ，其毒性作用随ＤＯＮ浓度升高而损伤加重。在培养２１６ｈ时加入２．５μｇ／ｍｌ以下的ＤＯＮ，对软骨细胞的生长代谢没有明显的影响。简单讨论了ＤＯＮ与大骨节病的关系。     

T—2毒素对培养软骨细胞生长代谢的作用

报告了Ｔ－２毒素对培养软骨细胞生长代谢的作用，结果显示，在软骨细胞生长早期和旺盛时期，Ｔ－２毒素抑制细胞ＤＮＡ合成，影响软骨细胞的分裂增殖，同时也影响到细胞的代谢功能，其毒性作用随Ｔ－２浓度升高细胞损伤加重，对于较成熟的软骨细胞，其毒性作用不明显。     

大骨节病病区饮水中有机物对体外培养兔软骨细胞损伤的电镜观察

饮水有机物学说是目前大骨节病三大病因学说之一。本研究首先对陕西省榆林市大骨节病病区马家兔村及非病区长海则村和陕西省彬县大骨节病病区韩家村的饮用水采水200L,经XAD—7高效吸附树脂富集,甲醇—丙酮洗脱后,进行体外培养兔关节软骨细胞损伤实验。经透射电镜观察发现:正常对照组和溶剂对照组的软骨细胞生长正常,非病区对照组软骨细胞有微弱的损伤,病区组的软骨细胞有较明显的毒性损伤。     

大骨节病区患儿血清对体外培养兔软骨细胞影响的扫描电镜和透射电镜观察

本文研究了11例大骨节病患儿血清对培养兔软骨细胞的影响。传代兔关节软骨细胞在含5%病人血清的培养液内培养生长48小时及96小时、然后作扫描电镜和透射电镜观察。软骨细胞表面出现许多囊泡。粗面内质网扩张,线粒体肿胀和嵴断裂。胞浆内见到大量脂滴和髓鞘样结构。发生上述改变的原因有待进一步研究。     

硒对体外培养大骨节病软骨细胞生长及凋亡的影响

目的 观察硒对体外培养大骨节病(KBD)患者和正常人关节软骨细胞增殖和凋亡的影响,探索补硒防治KBD的作用,并为硒对正常软骨细胞生长的影响提供依据.方法 依据<大骨节病临床诊断标准>(GB 16003-1995),选择Ⅱ度和Ⅲ度KBD患者5例和非病区正常人意外事故者5例的关节软骨进行体外分离、培养.KBD组和对照组分别给予不同剂量的硒(0、0.0125、0.0250、0.0500、0.1000、0.2500、0.5000、1.0000 mg/L)进行干预,采用四氮唑蓝(MTT)法、流式细胞仪和免疫组化法观察细胞生长和凋亡情况.结果 对照组第6天时各剂量组的细胞增殖率(0.086±0.025、0.077±0.012、0.073±0.027、0.071±0.017、0.058±0.028、0.052±0.028和0.046±0.037)比0 mg/L组(0.138±0.026)明显降低(P均＜0.05);0.1000～1.0000 mg/L剂量组的平均细胞增殖率为负值(-0.001±0.001、-0.003±0.000、-0.003±0.001和-0.004±0.001),显著低于0 mg/L组(0.025±0.003,P均＜0.05);KBD组,与0 mg/L组(0.115±0.011)比较,0.2500 mg/L剂量组促进细胞增殖(0.128±0.037,P＜0.05),1.0000 mg/L剂量组细胞生长受到抑制(0.071±0.019,P＜0.05).对照组0.0500～1.0000mg/L剂量组的细胞凋亡率[(18.88±0.02)%、(17.58±0.01)%、(17.09±0.04)%、(56.00±0.02)%、(57.85±0.03)%]比0 mg/L组[(13.51±0.01)%]增高(P均＜0.05);KBD组,与0 mg/L组[(25.84±0.02)%]比较,0.0250～0.2500 mg/L剂量组的细胞凋亡率[(13.69±0.02)%、(15.96±0.03)%、(16.68±0.03)%、(16.67±0.02)%]降低,0.5000、1.0000 mg/L剂量组的细胞凋亡率[(59.58±0.03)%、(73.48±0.04)%]明显增高(P均＜0.05).KBD组0.0500～0.2500 mg/L剂量组的Fas表达[(41.2±1.5)%、(40.3±2.0)%、(50.2±2.5)%]低于同剂量硒干预的对照组[(52.4±1.0)%、(67.2±4.0)%、(75.1±5.0)%,P均＜0.05],0.0500、0.1000 mg/L剂量组的Caspase-3表达[(40.8±1.1)%、(45.1±2.1)%]低于同剂量硒干预的对照组[(68.0±3.0)%、(70.6±3.5)%,P均＜0.05].结论 适宜的补硒剂量(0.1000～0.2500 mg/L)具有促进KBD软骨细胞生长的作用,降低细胞凋亡率,但补硒剂量＞0.5000 mg/L时具有损伤作用;促进KBD软骨细胞生长的硒剂量并非也能促进正常人活体软骨细胞的生长.     

大骨节病病区饮水中有机物对体外培养兔软骨细胞DNA合成量的影响

饮水有机物学说是目前大骨节病三大病因学说之一。本研究首先对陕西省榆林市大骨节病病区马家兔村及非病区长海则村和陕西省彬县大骨节病病区韩家村的饮用水采水２００Ｌ，经ＸＡＤ－７高效吸附树脂富集，甲醇－丙酮洗脱后，进行体外培养兔关节软骨细胞损伤实验。病区组反映细胞分裂增殖能力的细胞ＤＮＡ合成量明显低于非病区组和正常对照组，并且存在显著的负的剂量－反应关系。     

T－2毒素对培养软骨细胞生长代谢的作用

报告了Ｔ－２毒素对培养软骨细胞生长代谢的作用。结果显示，在软骨细胞生长早期和旺盛时期，Ｔ－２毒素抑制细胞ＤＮＡ合成，影响软骨细胞的分裂增殖，同时也影响到细胞的代谢功能，其毒性作用随Ｔ－２浓度升高细胞损伤加重。对于较成熟的软骨细胞，其毒性作用不明显。     

透明质酸对体外培养大骨节病软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的 通过观察透明质酸(HA)对体外培养的大骨节病(Kashin-Beck disease,KBD)软骨细胞增殖、凋亡的影响,为临床上HA治疗KBD提供实验依据.方法 依据<大骨节病诊断标准>(GB 16003-1995)收集KBD患者和遭遇意外事故的病人(对照组)关节软骨,分离、体外培养关节软骨细胞.选用第2代细胞进行实验.两组软骨细胞分别给予不同剂量的HA,按HA剂量分为0、100、500 mg/L组.通过二苯甲唑溴盐(MTT)实验,测定第2、4、6天HA对KBD组、对照组软骨细胞增殖的影响.并通过流式细胞检测观察HA对软骨细胞凋亡的影响.结果 对照组在第4天时,500 mg/L组(0.140 ±0.049)促软骨细胞增殖作用大于0 mg/L组(0.116±0.021);KBD组在第6天时,500 mg/L组(0.179±0.081)与0 mg/L组(0.128 ±0.017)比较,显示了明显的促增殖作用(P<0.05).KBD组细胞凋亡率100、500 mg/L组(10.458±1.143、7.877±1.346)均较0 mg/L组(12.860±2.159)下降(P<0.05);对照组500 ms/L组(4.045±1.204)较0 mg/L组(7.128±1.244)细胞凋亡率下降(P<0.05).结论 HA对KBD软骨细胞具有促进增殖和抑制软骨细胞凋亡的作用,其中500 mg/L的HA改善KBD软骨细胞代谢的作用较100 mg/L明显.     

真菌毒素DON,T—2和NIV对培养软骨细胞作用的实验研究

采用软骨细胞体外单层培养方法，观察ＤＯＮ、Ｔ－２毒素和ＮＩＶ对幼兔关节软骨细胞的作用。结果显示；三种毒素对培养的软骨细胞均有较强的毒性作用，能抑制ＤＮＡ的合成和细胞的分裂增殖，特别是在培养的早期，亦即在细胞分离时受到的损伤尚未完全恢复和细胞分裂增殖的旺盛时期，其损伤作用更为明显。     

白细胞介素——1促进肥大软骨细胞PG的分解代谢

本文了白细胞介素－１和硫代腺苷蛋氨酸对培养的肥大软骨细胞蛋白多糖分解代谢及其质金属蛋白水解酶活性的影响。ＩＬ－１β能够明显促进培养的肥大软骨ＰＧ分解，释放到培养液中的ＰＧ其分子量明显降低，缺乏透明质酸结合区。     

大骨节病病区饮水中有机物对体外培养兔软骨细胞损伤的电 …

饮水有机物学说是目前大骨节病三大病因学说之一。本研究首先对陕西省榆林市大骨节病病区马家兔村及非病区长海则村和陕西省彬县大骨节病病区韩家村的饮用水采水２００Ｌ〈经ＸＡＤ－７高效吸附树脂富集，甲醇－丙酮洗脱后，进行体外培养兔关节软骨细胞损伤实验。     

大骨节病病儿血浆致培养兔软骨细胞损伤实验的形态学观察

目的：为探查外周血有白细胞坏死的大骨节病（KBD）病儿其血浆内有无KBD的致病因子,特进行本实验。方法：选干骺端损害X线阳性征且有外周血细胞坏死的KBD病儿血浆作用于培养（兔）软骨细胞以判定血浆内有无引起软骨细胞病变效应的致病因子。结果：实验组部分细胞的核染色质颗粒间出现淡紫红色小点动物,伴点状物周围染色质溶解,直至整个胞核转化为青灰均质的大团块;更后,团块内出现嗜酸性斑块、团块外出现环状体。电镜下见实验组细胞内众多染色溶解小灶、各小灶内有直径75－83nm的病毒核衣壳,呈外形六角,核心中空。结论：以KBD病儿血浆诱发出的培养软骨细胞的光镜下病变与KBD尸骨软骨细胞的B型凝固性坏死安全相同,实验复制出KBD的培养软骨细胞病变模型;病变的原因是来自KBD病儿血浆、继之出现于实验组病变细胞核内的某病毒;KBD病儿血浆内的病毒可能就是KBD的致病因子。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对培养软骨细胞影响的超微结构观察

采用体外软骨细胞培养方法，观察脱氧雪腐镰刀菌烯醇（ＤＯＮ）对幼兔关节软骨细胞超微结构的作用，结果表明ＤＯＮ对软骨细胞膜系统和细胞器具有明显的损伤作用，特别是对培养早期的软骨细胞具致命损伤。ＤＯＮ与大骨节病关系待进一步探讨。