四种方法检测结核分枝杆菌的结果比较

四种方法检测结核分枝杆菌的结果比较山东省胸科医院（２５００１３）王海英，左芸，邵建邦痰结核分枝杆菌的检查是结核病诊断的重要依据。我们分别就厚涂片法、沉淀集菌法、罗氏培养法、Ｂａｃｔｅｃ快速培养法对肺结核的诊断价值加以评价。材料和方法１．标本采自本院肺...     

微孔板杂交法检测结核分枝杆菌的初步临床应用

目的：对ＰＣＲ－微孔板杂交法的临床应用进行评价。方法：取临床标本２６８例分别进行抗酸染色、培养、ＰＣＲ扩增产物电泳、ＰＣＲ微孔板杂交四种方法的比较。结果：在２１６份临床高度怀疑有结核分枝杆菌感染的患者标本中,ＰＣＲ－微孔板杂交法检测阳阳性为９８例,其检出率高于ＰＣＲ－电泳法（９１／２１８）、培养法（８１／２１８）和抗酸染色法（５６／２１８）,５０份临床证实无结核分枝杆菌感染的病人标本,四种方法均未     

Geno-typeMTBDRplus分子线性探针杂交技术在结核病诊断与耐药性检测中的应用价值

目的　评价Geno-type MTBDRplus 分子线性探针杂交技术显色法（以下简称杂交酶显色法）在结核病快速诊断及检测异烟肼（INH）和利福平（RIF）药物敏感中的应用。方法　选取2016 年1 月~2019 年12 月的临床确诊结核病患者的临床标本413 例,同时采用BD 960 液体培养法和杂交酶显色法进行结核分枝杆菌检测,并对其中108 株菌株进行异烟肼和利福平药敏检测,比较两种方法的一致性。结果　杂交酶显色法测得结核分枝杆菌358 例（86.68%）,BD 960 液体培养法测得结核分枝杆菌376 例（91.04%）;两种方法结果相符349 例（84.50%）。108 株菌株中杂交酶显色法和BD 960 液体培养法分别检出异烟肼敏感87 株（80.56%）和88 株（81.48%）,检出利福平敏感96 株（88.89%）和94 株（87.04%）。两种方法对结核分枝杆菌的鉴定及异烟肼、利福平药物敏感检测具有高度一致性。结论　与BD960 液体培养法相比,杂交酶显色法检测结核分枝杆菌及异烟肼和利福平药敏更为快速有效。     

应用MTD试剂盒对结核分枝杆菌复合群进行快速检测的评价

目的应用结核分枝杆菌直接检测（MTD）试剂盒对临床痰液样本及分离的结核分枝杆菌复合群，进行检出率和常规菌型鉴定法符合率的比较和评价。方法将10株标准菌种（其中1株为H37Rv、9株为非结核分枝杆菌）、94株临床分离菌株（其中48株经常规生化方法分型鉴定为结核分枝杆菌，46株分型法鉴定为非结核分枝杆菌）和40份临床痰标本分别用法国生物梅里埃公司生产的AMPLIFIED—MTD试剂盒进行检测。结果结核分枝杆菌复合群检测均呈阳性，非结核分枝杆菌检测均呈阴性，符合率均达到100％。临床痰标本用MTD检测的阳性检出率为65％（26／40），明显高于直接涂片法的12％（5／40）、培养方法的12％（5／40）、集菌涂片法的25％（10／40）。结论MTD试验是一套新的生物学检测技术，具有快速、灵敏的特点。     

应用聚合酶链反应—反相膜杂交技术检测结核分枝杆菌

目的：探讨应用聚合酶链反应（PCR）－反相膜杂交技术检测结核分枝杆菌的价值。方法：收集52例活动性肺结核病人和12例非结核病人的痰标本,以双盲法进行痰涂片抗酸染色检查、结核菌培养、PCR－反相膜杂交技术,PCR－琼脂糖凝胶电泳技术检查对比。结果：涂片法、培养法、PCR－反相膜杂交法的敏感性分别为28．8％、42．3％、82．7％,PCR－反相膜杂交法的敏感性显著高于培养法和涂片法（P＜0．01）。PCR－反相膜杂交法和PCR琼脂糖凝胶电泳法的敏感性分别为82．7％和84．6％,特异性分别显91．7％和83．3％,前者特异性与后者相比差异有显著性（P＜0．01）。结论：PCR－反相膜杂交技术可应用于临床检测检测结核分枝杆菌。     

新型结核分枝杆菌核酸检测试剂盒的临床应用初步评价

目的通过对比实验,对结核分枝杆菌（TB）核酸检测试剂的临床使用效果进行评价。方法用分离培养法与圣湘生物结核分枝杆菌（TB）核酸检测试剂分别对202例临床收集的样本进行结核分枝杆菌的检测并对比其结果,同时,将两种检测方法的检测结果分别与测序法结果进行对比。结果结核分枝杆菌核酸检测试剂与培养法的阳性一致性百分比为100%,阴性一致性百分比为98.61%,总一致性百分比为99.01%;对2例不符样本进行测序复核,并对复核后的结果进行Kappa检验一致性分析,结果 Kappa值为1.000,表明结核分枝杆菌核酸检测试剂结果与金标准分离培养法的结果具有很好的一致性,表现出较好的准确性。结论结核分枝杆菌核酸检测试剂与分离培养法的结果具有很好的一致性,且阳性率较分离培养法更高,所需检测时间大为缩短,具有内标控制假阴性,结果准确,符合临床检测要求,具有较高的临床应用价值。     

改进聚合酶链反应检测方法提高结核分枝杆菌检出率

改进聚合酶链反应检测方法提高结核分枝杆菌检出率张捷，李小英，寇丽筠各种聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测临床标本的结核分枝杆菌（ＭＴＢ）已被国内外公认是一个快速可靠的检测方法。我们应用ＰＣＲ方法和杂交技术期间发现尚有许多问题有待探讨。如应用该法对临床１８２份...     

PCR-荧光探针法检测分枝杆菌的临床应用价值

目的 比较PCR-荧光探针法和改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的一致性,探讨两种方法在临床上的应用价值.方法 应用PCR-荧光探针法检测69例改良罗氏培养阳性的分枝杆菌核酸,比较两种方法检测结果的一致率;两种方法检测结果不一致样本进行测序验证,以测序结果作为金标准,分析两种方法检测结果的正确率及不一致的可能原因.结果 两种方法检测总一致率为89.9%,结核分枝杆菌检测一致率为87.5%,非结核分枝杆菌检测一致率为90.6%.PCR-荧光探针法和改良罗氏培养法共有7例检测结果不一致,与测序结果比对后,改良罗氏培养法检测的正确率为94.2%,PCR-荧光探针法检测的正确率为92.8%.结论 操作简单、快速,灵敏的PCR-荧光探针法与作为传统金标准的改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的一致性良好、正确率高,可作为临床分枝杆菌感染诊断的重要检测手段.     

用PCR—SSCP快速检测结核分枝杆菌耐利福平rpoB基因的突变

目的：了解本地区结核分枝杆菌对利福平（RFP）耐药基因的突变情况，探讨利用分子生物学方法直接快速检测结核分枝杆菌耐药基因型的试验方法。方法：针对rpoB基因设计一对引物（扩增产物为189bp)，采用聚合链酶反应－单链构象多态性银染（PCR－SSCP）方法，以标准结核分枝杆菌H38Rv为对照，检测临床分离的35株结核分枝杆菌rpoB基因突变情况并以药敏试验结果做对照分析。结果：以药敏试验结果为对照，35株临床分离株中有9株RFP敏感株的SSCP带与结核分枝杆菌标准株（H37Rv)相同，26株RFP耐药株中有24检测到突变图谱，与药敏试验结果对照阳性率为92．3％，特异性为100％，结论：RpoB基因是一种高度保守序列，结核分枝杆菌耐RFP是由于rpoB基因突变所致。本研究针对其高突变区域设计一对引物，运用PCR－SSCP法具有简便，快速、准确的特点，可以对临床标本中结构分枝杆菌进行检测，以满足临床早期诊治的需要。     

三磷酸腺苷发光法在耐多药结核分枝杆菌诊断中的运用

目的通过与罗氏固体培养法比较,评估三磷酸腺苷发光法检测耐多药结核分枝杆菌的可行性。方法采用三磷酸腺苷发光法与罗氏固体培养法同时检测和分析149例临床分离的结核分枝杆菌。结果三磷酸腺苷发光法与罗氏固体培养法的一致率为92．6％（138／149）,差异无统计学意义（X^2=0．57,P=0．45）。三磷酸腺苷发光法检测时间为（6．6±2．1）d,明显快于传统罗氏固体培养法的28d（t=422．7,P〈0．001）。结论与常规检测方法比较,三磷酸腺苷发光法具有快速、简便、准确性高等优点,对耐多药结核患者的早期诊断和耐药结核分枝杆菌流行的控制有很大帮助,适合实验室开展。     

HIV/AIDS患者分枝杆菌检出情况分析

目的 分析人类免疫缺陷病毒（HIV）感染/获得性免疫缺陷综合征（AIDS）患者合并分枝杆菌感染的实验室检出情况。方法 收集2018年1月—2021年12月首都医科大学附属北京佑安医院HIV/AIDS患者送检的1 379例分枝杆菌抗酸染色样本、1 975例分枝杆菌培养样本、1 406例结核分枝杆菌（MTB）聚合酶链反应（PCR）检测样本和522例γ-干扰素释放试验（IGRA）样本实验室检测结果,分析不同检测方法分枝杆菌阳性检出情况和联合检出情况。结果 抗酸染色、培养、MTB-PCR、IGRA分枝杆菌阳性率分别为3.41%、5.47%、5.83%、11.49%。同时送检抗酸染色和MTB-PCR或IGRA时,抗酸染色阳性率有所上升;同时送检培养和MTB-PCR或IGRA时,培养法阳性率有所上升;4种方法均送检时阳性率高,且易鉴别出MTB和非结核分枝杆菌（NTM）。MTB-PCR和IGRA为鉴定MTB的特异性方法,2种方法鉴定结果一致性较好。结论 抗酸染色法和培养法检测HIV/AIDS患者合并分枝杆菌感染阳性率较低,PCR和IGRA可有效鉴别MTB和NTM。临床高度怀疑HIV/AID患者分枝杆...     

BACTEC MGIT 960仪的临床应用评价

目的评价BACTEC MGIT 960仪的临床应用效果。方法 BACTEC MGIT 960、罗氏和直接涂片抗酸染色3种方法对送检标本进行检测,观察结核分枝杆菌阳性检出情况,BACTEC MGIT 960和罗氏培养时间。结果共有1 998例送检标本,污染率4.30%（86/1 998）,1 912例标本列入本次统计,786份标本的结核分枝杆菌检测阳性率为41.10%（786/1 912）。3种方法的结核分枝杆菌检测阳性率分别为39.22%（750/1 912）、34.83%（666/1 912）和25.05%（479/1 912）,差异有统计学意义（P〈0.05）;BACTEC MGIT 960和罗氏培养总的平均时间分别为11.82和20.64d,两种方法比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论结核分枝杆菌的检测率由高到低的检测方法为BACTEC MGIT 960仪、罗氏培养、抗酸涂片。BACTEC MGIT960培养时间明显短于罗氏。BACTEC MGIT 960仪在分枝杆菌培养中,阳性检出率高、培养时间短,有很好的应用前景。     

噬菌体生物扩增法检测结核性胸膜炎患者胸水临床应用研究

目的评价噬菌体生物扩增法检测胸水中结核分枝杆菌对诊断结核性胸膜炎的临床应用价值。方法采用噬菌体生物扩增法技术对73例结核性胸膜炎患者．20例非结核性胸膜炎患者胸水中的结核分枝杆菌进行检测．同份标本同时进行涂片抗酸染色、罗氏培养。结果73例结核性胸膜炎胸水,噬菌体生物扩增法阳性率为49．3％（36／73）、涂片抗酸染色阳性率为2.7％（2/73）、罗氏培养阳性率为4．1％（3／73）。20例非结核性胸膜炎。噬菌体生物扩增法、涂片抗酸染色、罗氏培养都未检出阳性。结论噬菌体生物扩增法检测胸水中结核分枝杆菌只需2天时间,操作简便、灵敏度高、特异性强,不需要特殊仪器设备,可作为诊断结核性胸膜炎的一种好方法．     

结核-聚合酶链反应在诊断结核性胸腔积液中的价值

目的：阐明结核－聚合酶链反应（ＴＢ－ＰＣＲ）在诊断结核性胸腔积液中的作用。方法：以胸膜活检病理结果为标准，总结了１１８例胸腔积液ＴＢ－ＰＣＲ的检测结果，并与结核菌涂片，培养两种方法进行对比，结果：ＴＢ－ＰＣＲ，涂片，培养三种方法的阳性率分别为３３％，０和５％，前者高于后两者（Ｐ〈０．００１），但ＴＢ－ＰＣＲ的假阴性率较高（６７％），结论：用ＴＢ－ＰＣＲ法诊断结核性胸腔积液的价值有限，最好做胸膜活检     

环介导等温扩增技术快速检测痰标本中结核分枝杆菌的初步评价

目的评价环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术在结核分枝杆菌诊断中的应用价值。方法收集246份疑似肺结核患者的痰标本,分别进行涂片镜检,罗氏培养以及实时定量PCR和LAMP法检测。结果涂片镜检,罗氏培养实时定量PCR和LAMP法对结核分枝杆菌的检出率分别为30.89%,45.53%,54.47%,57.32%。以罗氏培养结果作为金标准,LAMP法诊断的敏感性为96.19%（101/105）,特异性为76.87%（103/134）,两种方法检测结果的一致性是Κ=0.71,两法具有很好的吻合性。以实时定量法为标准,LAMP法的敏感性为90.07%（127/141）,特异性为93.33%（98/105）,两法检测结果的一致性是κ=0.83,P〈0.001。结论 LAMP法检测结核分枝杆菌具有较高的敏感性和特异性,与罗氏培养和RT-PCR有着较高的吻合性,很适合作为临床检测项目开展。     

桐乡市426例痰分枝杆菌培养阳性标本的菌种鉴定和耐药检测分析

目的：通过对426例临床诊断为肺结核且痰分枝杆菌培养阳性的标本进行分枝杆菌菌种鉴定和菌株对异烟肼、利福平的耐药检测,以评估本市非结核分枝杆菌的发病率和肺结核患者的耐药情况。方法在门诊1746例患者中,筛选426例痰分枝杆菌培养阳性的标本进行分枝杆菌菌种鉴定和异烟肼、利福平的耐药检测。结果痰分枝杆菌培养阳性的患者有26例（6.1%）为非结核分枝杆菌,在400例痰分枝杆菌培养阳性且鉴定为结核分枝杆菌的有37例为耐异烟肼和（或）利福平的耐药菌株,其中耐多药结核分枝杆菌（MDR-TB）为12例。结论分枝杆菌菌种鉴定有助于减少肺结核误诊误治,通过药敏检测可以及早发现、治疗耐多药结核病,从而控制耐多药结核病的广泛传播。     

耐多药结核分枝杆菌KatG及rpoB基因变异的研究

目的用聚合酶链反应（PCR）一直接测序法检测肺结核患者临床痰分离株结核分枝杆菌KatG及rpoB基因突变：了解耐药分子机制及探索痰标本结核分枝杆菌耐异烟肼（INH）、利福平（RFP）直接检测的可行性。方法对47例耐INH、RFP的结核分枝杆菌临床痰分离株行PCR一直接测序法检测KatG及rpoB基因突变。结果47例耐INH、RFP分离株结核分枝杆菌KatG及rpoB基因突变阳性分别为29／47（61．7％）、43／47（91．5％），两者同时突变26例（55．3％）。结论PCR一直接测序法敏感、特异，可快速检测结核分枝杆菌KatG及rpoB基因突变，适合于临床肺结核患者痰标本耐药性的快速检测。     

寡核苷酸法检测结核病患者血清IgG抗体的临床应用评价

目的评价结核分枝杆菌IgG抗体寡核苷酸酶联免疫法在结核病血清学诊断中的临床应用价值。方法对285例结核病[菌阳肺结核（涂片阳性/培养阳性）124例,菌阴肺结核（涂片、培养均为阴性）161例]、38例非结核病的其他呼吸系统疾病患者及49名健康志愿者同步进行抗酸杆菌涂片、培养及结核分枝杆菌IgG抗体寡核苷酸酶联免疫法检测。结果结核分枝杆菌IgG抗体寡核苷酸酶联免疫法诊断菌阳肺结核的敏感性为67.7%（84/124）,诊断菌阴肺结核的敏感性为33.5%（54/161）,诊断结核病的总体敏感性为48.4%（138/285）,总体特异性为92.0%（80/87）,其中在非结核病的其他呼吸系统疾病患者中的特异性为86.8%（33/38）,在健康志愿者中的特异性为95.9%（47/49）。结论结核分枝杆菌IgG抗体寡核苷酸酶联免疫法有极高的特异性和一定的敏感性,可用于结核分枝杆菌IgG抗体的血清学检测,能为临床诊断提供可靠的参考依据。     

聚合酶链反应-微孔板杂交技术用于结核分枝杆菌的检测

目的建立结核分枝杆菌的ＰＣＲ酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）方法，使ＰＣＲ结果判定更加客观。方法我们使用玻璃粉吸附提纯模板ＤＮＡ，将ＰＣＲ引物５′端标记生物素，用ＰＣＲ产物与微孔板中预先包被的克隆靶基因杂交，然后用酶标链霉亲和素与杂交体中的生物素结合，最后用酶底物与所标记酶进行显色反应，通过测定其吸光度来判断结果。结果所建立的ＰＣＲＥＬＩＳＡ检测法可提高检测的灵敏度和特异性。对５０份来自结核病人高度怀疑有结核分枝杆菌的标本检测表明，ＰＣＲＥＬＩＳＡ检出２２份阳性，比抗酸染色法（７／５０）、培养法（１３／５０）和ＰＣＲ电泳法（１８／５０）检出率高，而２０份证实无结核分枝杆菌的标本，几种方法检查均为阴性。结论该法可敏感、特异和客观地检测临床标本中的结核分枝杆菌。     

肺结核病人痰标本中结核分枝杆菌检查结果分析

[目的]评价肺结核病人痰标本中结核分枝杆菌的直接涂片显微镜检和培养检查的临床效果。[方法]采用直接厚涂片萋-尼氏法抗酸染色显微镜检和BACTEC-TB960快速培养系统对1340例肺结核病人痰标本进行检测。[结果]快速培养法检测的阳性率为36.6％，直接涂片镜检的阳性率为24.6％，两种检测法的阳性率有显著性差异（P〈0.01）；两种方法联合检测的阳性率为4l％，高于培养法阳性率（P〈0.05）。痰标本的留取时间对培养法检出率有很大影响，晨痰检出率高于即时痰（P〈0.05）。[结论]提高肺结核病人痰标本中结核分枝杆菌检出率的有效方法是采用直接涂片镜检与培养法联合进行检测，同时应重视痰标本留取时间对检出率的影响。