荧光定量PCR对ELISA-HBsAg“灰区”标本的再分析

乙型肝炎病毒表面抗原 (ＨＢｓＡｇ)为乙型肝炎病毒感染的最主要病原标志和直接证据之一[1] ,因而ＨＢｓＡｇ是各采供血机构筛检献血者血液的必检项目。目前检测ＨＢｓＡｇ的主要方法ＥＬＩＳＡ简便、快速、特异、成本低 ,又有较高的灵敏度 ,特别适用于大批献血者筛查及健康体检。但由于该试验本身为方法学所限 ,高质量的进口试剂灵敏度才达 (0 1～0 2 )ｎｇ/ｍｌ,国产试剂灵敏度为 (0 5～ 1)ｎｇ/ｍｌ,而一般认为0 .1ｎｇ/ｍｌＨＢｓＡｇ即有传染性[2 ] ,因此对以低水平存在的血液ＨＢｓＡｇ进行有效检测 ,具有重要的临床和流行病学意义…     

两种HBsAg金标试纸条的使用比较

ＨＢｓＡｇ金标试纸条以方便、快速的特点用作流动采血及现场采血中作ＨＢｓＡｇ的初筛 ,但不同厂家生产的ＨＢｓＡｇ试纸条 ,其实用性存在差异。笔者对 2厂家试纸条检测结果作比较 ,同时以ＥＬＩＳＡ试剂作为对照 ,现报告如下。1　材料与方法1 1　材料　金标试纸条 :分别购自Ａ、Ｂ两厂家 ,批批检合格 ;ＥＬＩＳＡ试剂 :科华公司 ,批号 2 0 0 10 4 0 5。1.2　仪器　ＭＫ 2酶标仪 (芬兰 ) ;Ｗａｓｈ4洗板机 ;ＴＥＣＡＮＲＳＰ15 0全自动加样仪 (瑞士 ) ;ＨＢｓＡｇ 1ｎｇ/Ｌ、5ｎｇ/Ｌ质控血清 (卫生部临床检验中心 ,批号 0 10 7)。1.3　操…     

不宜采用混合血清以ELISA检测HBsAg

有少数检验部门为了减轻工作量、节省成本 ,采取将 5人份或 10人份血清等体积混合后再测ＨＢｓＡｇ(以下简称混合法 ) ,有关文献[1] 也指出其方法不妥 ,但该文献[1] 对结果的解释尚欠完整。为此我们对采用混合法检测ＨＢｓＡｇ的影响原因进行了实验探讨。1　材料与方法1 1　试剂　ＨＢＶ血清标志物 (ＨＢｓＡｇ、抗 ＨＢｓ)检测试剂为科华公司 (批号 :ＨＢｓＡｇ2 0 0 0 0 5 0 5 ;抗 ＨＢｓ 2 0 0 0 5 2 5 )。1 2　仪器　Ｅｌｘ80 0酶标仪 (ＢＩＯ ＴＥＫ)。1 3　方法1 3 1　ＨＢｓＡｇ强阳性和抗 ＨＢｓ强阳性混合血清标本的制备　将每次…     

应重视ELISA检测HBsAg灰区范围内样品的复检

ＥＬＩＳＡ测定ＨＢｓＡｇ常以Ｃｕｔ Ｏｆｆ(简称ＣＯ)值作为阴阳性的界定标准。我们对初次检测Ａ值位于灰区 (本室定为ＣＯ± 30 % )的 398份样品进行了复检。现报道如下。一、材料和方法1.材料　本院临床标本 ,ＥＬＩＳＡ初次测定ＨＢｓＡｇ的Ａ值介于ＣＯ值± 30 %的血清样品共 398份 ,其中溶血标本17份 ,脂血 2 4份 ,其他标本 35 7份。复检时对溶血及脂血样品嘱患者重新采血分离血清后复检。试剂为上海科华公司ＨＢｓＡｇ一步法酶免试剂盒。Ｂｉｏ 12 8Ｃ酶标比色计 ,Ｂｉｏ ＲａｄⅡ型洗板机。2 .方法　复检血清每人测三孔 ,第一孔为…     

武汉市售餐具消毒柜现状调查

对武汉三镇十大商场销售的餐具消毒柜查验卫生许可证,选择不同品牌餐具消毒柜进行对ＨＢｓＡｇ抗原性破坏效果的试验观察。试验用染ＨＢｓＡｇ载体进行,于10ｃｍ×10ｃｍ玻璃片上,滴染含量为50μｇ/ｍｌＨＢｓＡｇ悬液002ｍｌ。试验时,在满载状态下,于餐具消毒柜每层内、外均选一点,布放染ＨＢｓＡｇ样片(每点2片)。消毒后,用ＥＬＩＳＡ法(试剂盒批号981018,实测试剂灵敏度为10ｎｇ/ｍｌ,上海科技实业有限公司提供)检测ＨＢｓＡｇ抗原性。调查结果,武汉市场销售32个厂家32个品牌的139种型号消毒碗柜,分4种类型:①上层臭氧、下层红外线,②红…     

成人与儿童HBV感染的检测报告

为了解ＨＢＶ感染的成人与儿童血清标志物的分布有何不同 ,笔者对 1 996～ 1 998年间门诊感染病人中成人 2 5 37例 ,儿童 1 0 2 0例 ,共计 35 5 7例的血清中ＨＢｓＡｇ ,抗ＨＢｓ ,ＨＢｅＡｇ ,抗ＨＢｅ ,抗ＨＢｃ用上海实业科华生物技术有限公司提供的ＥＬＩＳＡ法试剂盒检测 ,严格按说明书要求操作 ,并设立阴性 ,阳性质控血清 ,用意大利ＤＶ99ＯＢＶ4酶标仪读取ＯＤ值 ,其结果见附表。附表　ＨＢＶ五项标志物的阳性数和阳性率 (% )人群ＨＢｓＡｇ抗ＨＢｓＨＢｅＡｇ抗ＨＢｅ抗ＨＢｃ成人 185 9(73 2 8) 4 83(19 0 4) 5 36 (2 1 13) 1381(5…     

次氯酸钠对乙型肝炎表面抗原的破坏作用

用双博ＸＤ-150型消毒水雾发生器电解含5ｇ食盐的400ｍｌ水,生成次氯酸钠溶液(有效氯含量为810ｍｇ/Ｌ,ｐＨ值为868)。用含5%小牛血清的001ｍｏｌ/ＬＰＢＳ,将纯化ＨＢｓＡｇ(北京北方生物技术研究所提供)稀释至含量为50000ｎｇ/ｍｌ的ＨＢｓＡｇ悬液。以该悬液滴染不锈钢片(002ｍｌ/片),置37℃温箱烘干。然后,加上述消毒液005ｍｌ于片上。作用至规定时间,将片投入含1ｍｌ中和剂(经预试验选出为含10%吐温80、01%卵磷脂、05%硫代硫酸钠及10%小牛血清的ＰＢＳ)的试管中。中和作用10ｍｉｎ,用ＥＬＩＳＡ法检测ＨＢｓＡｇ抗原性。阴性对照为消毒…     

ELISA检测HBsAg影响因素的探讨

本文以ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法检测ＨＢｓＡｇ为例 ,从边缘效应、“ＨＤ ＨＯＯＫ”效应、内源物质 (包括溶血、脂浊、补体、ＲＦ、ＡＦＰ、自身抗体等 )的干扰和外源物质 (如血液抗凝剂等 )的干扰等方面探讨ＥＬＩＳＡ的影响因素。1　材料与方法1 1　材料　ＨＢｓＡｇＥＬＩＳＡ试剂盒由新创公司提供 ,批号0 5 0 1;ＨＢｓＡｇ标准品由卫生部临床检验中心提供 ,批号991。1 2　方法　参照《全国临床检验操作规程》ＥＬＩＳＡ双抗夹心法 ,按照试剂盒说明书进行操作。2　结果2 1　边缘效应　以 2 μｇ/ＬＨＢｓＡｇ标准品作为样品 ,采用 37℃…     

弱阳性HBsAg的ELISA假阴性原因分析

ＥＬＩＳＡ检测肝炎病毒是目前最常见方法之一。但影响因素也较多 ,特别是低浓度样本易导致假阴性。本文通过加样时间、试剂平衡时间和溶血程度方面进行实验 ,以进一步探讨低浓度ＨＢｓＡｇ的干扰因素。1　试剂上海科华生产的ＨＢｓＡｇ试剂盒 ,卫生部临检中心提供的低值ＨＢｓＡｇ质控品。2　方法和结果方法 1是用 1ｎｇ/ｍｌＨＢｓＡｇ作样本 ,分别在 2 5℃加入反应板后放置 0ｍｉｎ、15ｍｉｎ、30ｍｉｎ、45ｍｉｎ和 6 0ｍｉｎ ,后按说明书操作。结果Ａ值分别为 0 .132、0 .148、0 .16 2、0 .188、0 .191,立即加样与 30ｍｉｎ以上比较差…     

检测乙型肝炎表面抗原的一步法试剂的钩状效应分析

卫生部下发的《血站管理办法 (暂行 )》中规定 ,对献血者血液乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)检测的质量标准是“ＨＢＶ表面抗原(ＨＢｓＡｇ)酶免疫吸附法 (ＥＬＩＳＡ) :阴性” ,但未要求用一步法还是二步法检测。目前 ,国内检测ＨＢｓＡｇ绝大多数采用ＥＬＩＳＡ中的双抗体夹心双位点一步法。用该方法检测ＨＢｓＡｇ ,当标本中的ＨＢｓＡｇ浓度过高时 ,会因钩状效应 (Ｈｏｏｋ)现象出现假阴性 ,而造成漏检 ,增加输血传播ＨＢＶ的风险度 ,严重威胁输血安全。ＨＢＶｅ抗原 (ＨＢｅＡｇ)和ＨＢＶ核心抗体 (ＨＢｃＡｂ)两项阳性时 ,大多数ＨＢｓＡｇ都…     

一种快速、灵敏测定谷胱甘肽S-转移酶A免疫荧光法的建立

本文运用对人ＧＳＴＡ有高度特异的单克隆抗体建立一种灵敏、快速检测血清中ＧＳＴＡ总浓度的时间分辨免疫荧光测定(ＴＲ ＩＦＭＡ)一步法。在反应板的每孔中加入溶于 1 5 0 μｌ反应缓冲液 ( 0 0 5ｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ ＨＣｌ,0 1 5ｍｏｌ/ＬＮａＣｌ,0 0 2ｍｏｌ/Ｌ二乙烯三胺戊醋酸 ,0 5 ｇ/ＬＮａＮ3,0 1ｍｌ/ＬＴｗｅｅｎ2 0 ,2 0ｍｇ/Ｌ苋紫 ,0 5ｇ/ＬＢＳＡ ,0 5 ｇ/Ｌ牛ＩｇＧ及 1 5ｍｇ/ＬＭＡＫ33 ＩｇＧ ,ｐＨ7 8)的Ｅ3+Ｕ ＬＤ45抗体 2 0 0ｎｇ ,然后加入 2 5 μｌ的校准液或标本各 2孔 ,室温下不断振荡 30ｍｉｎ。用洗涤…     

流动采血车上使用金标法快速检测HBsAg初检的讨论

我省属乙肝高发区,为了献血者的健康和提高输血安全有效及减少不必要的浪费,我中心采取了流动采血车上使用金标快速法初筛ＨＢｓＡｇ初筛阴性者才可采集全血,并留取血样,再用两个不同厂家ＥＬＩＳＡ法ＨＢｓＡｇ试剂进行复检。现将２０００年元月～１２月止,共８９４例无偿献血者的检测结果报告如下。１材料与方法１．１标本来源：８９４例血样来自本市两个采血点流动采血车无偿献血者,年龄在１８岁～５５周岁的适龄公民。１．２试剂：金标快速初筛ＨＢｓＡｇ纸条由厦门新创公司提供,灵敏度为＜１ｎｇ／ｍｌ。复检试剂ＥＬＩＳＡ法…     

252例低浓度HBsAg感染者乙肝标志物检测结果分析

目的 探讨低浓度ＨＢｓＡｇ感染者血清学乙肝标志物的表现模式以揭示其流行病学行征。方法 采用ＥＬＩＳＡ法对日常工作中的血清标本进行筛选。共收集到２５２份低浓度度和３８７份高浓度ＨＢｓＡｇ血清标本;并经ＭＥＩＡ确证后采用ＥＬＩＳＡ法对其六项血清学乙肝标志物进行检测;为表述方便,设定血清学乙肝标志物检测项目第１～５项的排列顺序分别为ＨＢｓＡｇ、Ａｎｔｉ－ＨＢｓ、ＨＢｅＡｇ、Ａｎｔｉ－ＨＢｅ、Ａｎｔｉ－ＨＢｃ－ＩｇＧ,并以出现阳性项目的序号为该模式的代码。结果 低浓度ＨＢｓＡｇ感染组的６．８６％;低浓度和高浓度组血清学乙肝标志物的表现模式分别有１０种和７种,各模式在两组间的检出率不完全相同（１３５、１４５、１３４５,Ｐ〈０．０５;１３、１５、１２３５、１２３４５,Ｐ〉０．０５）。且且间各模式的Ａｎｔｉ－ＨＢｃ－ＩｇＭ检     

肝癌患者HBV血清标志物与HBV DNA检测的临床意义

为了解肝癌患者乙型肝炎病毒血清标志物 (ＨＢＶＭ )与ＨＢＶＤＮＡ情况 ,我们对 6 8例肝癌患者进行了观察 ,现将结果报告如下。一、对象和方法1.对象　经确诊的肝癌患者 6 8例 ,男 6 1例 ,女 7例 ,年龄 2 8～ 83岁。2 .方法　所有病例均抽取静脉血 ,分离血清用酶联免疫吸附试验 (ＥＬＩＳＡ)进行ＨＢＶＭ (ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、抗 ＨＢｓ、抗 ＨＢｅ、抗 ＨＢｃ)检测 ,试剂由上海实业科华生物技术有限公司提供 ;ＨＢＶＤＮＡ用聚合酶链反应 (ＰＣＲ) ＥＬＩＳＡ法检测 ,试剂由上海浩源生物制品有限公司提供 ;所有操作步骤按说明书…     

镇宁县人群HBsAg检测情况报告

我县人群中ＨＢｓＡｇ携带为 5 5 5 % ,检测血清中乙型肝炎病毒表面抗原 (ＨＢｓＡｇ) ,对乙型肝炎的预防 ,流行病学调查、临床诊断以及预后等具有重要的意义。但检测方法不同 ,其结果差异较大 ,为了选择特异性强、灵敏度高、操作简便 ,适宜基层单位开展的检测方法 ,作者于 1 999年 6～ 1 2月在统一方法、统一标准和统一试剂的基础上 ,用酶联免疫法 (ＥＬＩＳＡ )与原用的反向间接血凝法(ＲＰＨＡ) ,对ＨＢｓＡｇ同时进行检测比较 ,现将结果报告如下。材料与方法1　来我站接种乙肝疫苗及预防性健康体检者的 1 1 0 0份血清标本。2　检测方法…     

捐血前HBsAg快速筛查试验的意义

本中心于 1998年 1月 1日开始了捐血前ＨＢｓＡｇ快速筛查试验。本文就应用快速筛查试验前 (1997年 )后 (1998年 ) ,ＨＢｓＡｇ、抗 -ＨＣＶ及ＡＬＴ等阳性血液的采集情况 ,分析捐血前实施ＨＢｓＡｇ快速筛查试验的意义。1　资料和方法1 1　资料　来自深圳市血液中心 1997～ 1998年采集的 6 794 4份无偿捐血的检验报告。1 2　采血及检验法　 1997年 ,直接采血后 ,相应项目再以ＥＬＩＳＡ法检测。 1998年 ,采血前以乳胶凝聚法作ＨＢｓＡｇ初筛试验 ,合格者采血后再以ＥＬＩＳＡ法检测。1 3　统计学方法　采用卡方检验。2　结果通过捐血前ＨＢ…     

乙肝病毒感染与婚前保健

预防乙肝病毒感染 ,提高婚姻保健质量 ,是婚前检查的一项重要内容。本文总结了我市自 1 997年 4月全面开展婚前检查门诊以来对ＨＢＶ感染的检查结果。材料与方法1 材料来源 :1 997年 4月至 2 0 0 0年 1 2月来我院进行婚前检查的 962 4人。检出ＨＢｓＡｇ( + )者81 2人 ,其中 785人作了乙肝五项检测2 检测项目 :ＨＢｓＡｇ筛查用ＥＬＩＳＡ法 ;ＨＢｓＡｇ、抗 -ＨＢｓ、ＨＢｅＡｇ、抗 -ＨＢｅ、抗 -ＨＢｃ采用ＥＬＩＳＡ法 ,试剂均由上海科华实业公司提供。3 诊断标准 :参照ＨＢＶ感染与婚育指导及婚前保健工作指导。结　　果1 ＨＢｓＡｇ…     

一步法ELISA检测HBsAg的假阴性问题

一步法ＥＬＩＳＡ检测ＨＢｓＡｇ的假阴性问题扬州市第一人民医院（２２５００１）曹莉霖用国产一步法ＥＬＩＳＡ试剂检测乙肝标志物时，当发现ＨＢｅＡｇ（＋）和ＨＢｓＡｇ（－）的情况，如将标本稀释后再测ＨＢｓＡｇ，有部分会转为（＋）。这种因试剂和方法的原因而出...     

ELISA一步法检测HBsAg的钩状效应

ＥＬＩＳＡ一步法检测ＨＢｓＡｇ的钩状效应上海市东方医院（２００１２０）吕红根，张淼发本文用ＥＬＩＳＡ一步法检测ＨＢＶ标志物时，发现２３例ＨＢｅＡｇ阳性而ＨＢｓＡｇ阴性。经用生理盐水对标本作１：１０，１：２０及１：１００稀释后再作ＨＢｓＡｇ测定，２１例...     

牡丹江市中小学生HBsAg及抗-HBs携带情况调查

为了搞好中小学生乙型肝炎的预防工作 ,我站于 1 996～ 1 998年对牡丹江市中小学生作了ＨＢｓＡｇ及抗 -ＨＢｓ携带情况调查。小学生 (8～ 1 0岁 ) ,初中生 (1 3～ 1 5岁 ) ,高中生 (1 6～ 1 8岁 )。ＨＢｓＡｇ检测采用ＥＬＩＳＡ法 ,测试剂盒由中外合资上海宝业科华生物技术有限公司提供。抗 -ＨＢｓ的检测 1 996～1 997年采用反向间接血凝法 ,1 998年同ＨＢ ｓＡｇ检测。1 996年ＨＢｓＡｇ检测小学生 90 5 9名 ,ＨＢ ｓＡｇ阳性 32 8名 ,阳性率为 3 6 2 %;1 997年 91 0 3名 ,ＨＢｓＡｇ阳性 36 2名 ,阳性率为 3 97%;1 998年 86 76名 ,ＨＢ…