单克隆抗体治疗日本乙型脑炎的实验研究

本文应用JEV-McAb对感染JEV的小白鼠及幼山羊进行实验性治疗,并对乙脑免疫机理作一初步探讨。结果表明,JEV-McAb对经不同途径感染各种JEV毒株的小白鼠都有较好的保护作用,其效果明显优于PcAb。小鼠感染后120小时,大部分已发病,个别已濒死,这时给予混合McAb或其F(ab′)_2,仍可保护约半数存活。McAb对感染JEV的幼羊也有较好的     

肾综合征出血热病毒50kD结构蛋白的抗原位点分析

采用23株抗HFRS病毒McAb,以放射免疫沉淀及ELISA等试验,证实HFRS病毒的50kD蛋白为该病毒的核蛋白(NP)。用抗NP的McAb对经亲和层析纯化的NP以ELISA阻断试验进行抗原位点分析,结果表明该蛋白与一般有囊膜病毒的NP相比,有两点明显的不同。一是HFRS病毒的NP上不仅有组特异性抗原位点,而且有型特异性抗原位点,两者都至少分布在2个区域,这些抗原位点及其分布区域之间有部分重叠或比较靠近。二是HFRS病毒的NP上可能存在中和抗原及血凝抗原位点。     

单克隆抗体治疗日本乙型脑炎的实验研究

本文应用JEV-McAb对感染JEV的小白鼠及幼山羊进行实验性治疗,并对乙脑免疫机理作一初步探讨。结果表明,JEV-McAb对经不同途径感染各种JEV毒株的小白鼠都有较好的保护作用,其效果明显优于PcAb。小鼠感染后120小时,大部分已发病,个别已濒死,这时给予混合McAb仍可保护约半数存活。McAb对感染JEV的幼羊也有较好的保护作用。羊脑内注入JEV48小时后,出现发热不安等症状,这时由腹腔和椎管两种途径同时给予混合McAb,保护率达100％。但单一腹腔或椎管注射无效,可能与血脑屏障的作用有关。存活实验动物脑组织内未分离出病毒;而死亡实验动物病毒分离阳性,脑组织双PAP及HE染色证实JEV抗原阳性并伴有脑炎的病理学改变。中和活性是JEV-McAb的主要保护方式,中和效价高的McAb保护率也高。     

单克隆抗体治疗日本乙型脑炎患者的初步研究

将抗日本乙型脑炎(乙脑)病毒(JEV)的单克隆抗体(McAb)2H_4、2F_2、mC_3三种腹水等量混合后,制备成IgG或其F(ah′)_2。用0.3/0.15μm的微孔滤膜过滤除菌。经小白鼠体内急、慢性毒性试验,家兔体内发热试验,无菌试验,与人体重要脏器的交叉试验以及DNA测定等鉴定证实,该制剂安全可靠,适合于人体内注射应用。在小白鼠。幼山羊及恒河猴实验性治疗研究,证实有效的基础上,对临床症状典型,抗JEV-IgM抗体阳性的两个乙脑患儿,进行了探索性治疗:发现疗效良好,观察三月余,无异常反应。     

单克隆抗体治疗日本乙型脑炎患者的初步观察

将抗日本乙型脑炎(乙脑)病毒(JEV)的单克隆抗体(McAb)2H_4、2F_2、mC_3三种腹水等量混合后,制备成IgG或其F(ad’)_2。用0.3/0.15μm的微孔滤膜过滤除菌。经小白鼠体内急、慢性毒性试验,家兔体内发热试验,无菌试验,与人体重要脏器的交叉试验以及DNA测定等鉴定证实,该制剂安全可靠,适合于人体内注射应用。在小白鼠、幼山羊及恒河猴实验性治疗研究,证实有效的基础上,对临床症状典型,抗JEV-IgM抗体阳性的两名乙脑患儿,进行了探索性治疗;发现疗效良好,观察三月余,无异常反应。     

肾综合征出血热病毒单克隆抗体的研究进展

近年来,各种不同特性的抗HFRS病毒McAb不断产生。并得到广泛应用。在病原学方面,McAb不仅能区分HFRS病毒的型别,还可对其抗原性作进一步分析,并为深入研究HFRS病毒各种结构蛋白的抗原位点、特性及功能,病毒对机体的感染与免疫,以及疫苗(特别是亚单位疫苗)的研制等提供了有力的工具。在HFRS检验诊断和流行病学调查方面,采用McAb建立了一些新检测方法,敏感性和特异性得到提高。另外,通过McAb对HFRS病毒感染乳鼠保护作用的研究,为特异性治疗HFRS提供了实验依据。     

单克隆抗体在细菌性痢疾研究中的应用

本文综述了利用单免隆抗体(McAb)技术研究细菌性痢疾的现状及进展。着重论述了McAb在福氏痢疾杆菌菌体抗原结构分析中的应用及提出的新观点,从而丰富了福氏菌抗原的理论并论及利用McAb建立的快速诊断方法对细菌性痢疾临床诊治及流行病学监测的重要意义;同时论述了McAb免疫保护机理的研究,在临床治疗中的尝试以及抗独特型McAb细菌性痢疾疫苗的研究进展。     

四川省分离的基因1型乙型脑炎病毒分子特征分析

目的 从四川省巴中市采集的蚊虫标本中分离乙型脑炎(简称乙脑)病毒(JEV),确定其基因型别,并分析相关的基因1型乙脑病毒PrM和E基因区段氨基酸序列特征.方法 对2004年采集蚊虫标本进行病毒分离,对新分离的乙脑病毒进行生物学、血清学及分子生物学鉴定.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增新分离JEV的PrM、E区段核苷酸序列,测序后应用Clustal X软件做碱基配对分析,MEGA4软件完成病毒进化分析,GENEDOC(3.2)软件完成氨基酸位点分析,根据蜱传脑炎病毒可溶性蛋白晶体结构为模板进行乙脑病毒E蛋白三维结构模拟预测分析.结果 共采集4668只蚊虫标本,主要是骚扰阿蚊和库蚊,分离到6株病毒,经鉴定均属于基因1型的乙脑病毒.将四川省分离的6个毒株结合我国新分离的基因1型乙脑病毒与减毒活疫苗株SA14-14-2株的PrM区段和E区段氨基酸比较,发现PrM区段在PrM2、64和65位存在基因1型乙脑病毒独有的氨基酸位点差异,E区段存在14处共同的氨基酸位点差异,其中在E129、222、327和366位点为中国目前分离到的基因1型乙脑病毒所特有的位点特征.结论 从四川省巴中市首次分离到基因1型的乙脑病毒,并发现基因1型乙脑病毒与减毒活疫苗株之间PrM、E基因区段存在氨基酸差异,但现行疫苗株理论上可以保护新分离的基因1型乙脑病毒.     

四川省分离的基因1型乙型脑炎病毒分子特征分析

目的 从四川省巴中市采集的蚊虫标本中分离乙型脑炎(简称乙脑)病毒(JEV),确定其基因型别,并分析相关的基因1型乙脑病毒PrM和E基因区段氨基酸序列特征.方法 对2004年采集蚊虫标本进行病毒分离,对新分离的乙脑病毒进行生物学、血清学及分子生物学鉴定.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增新分离JEV的PrM、E区段核苷酸序列,测序后应用Clustal X软件做碱基配对分析,MEGA4软件完成病毒进化分析,GENEDOC(3.2)软件完成氨基酸位点分析,根据蜱传脑炎病毒可溶性蛋白晶体结构为模板进行乙脑病毒E蛋白三维结构模拟预测分析.结果 共采集4668只蚊虫标本,主要是骚扰阿蚊和库蚊,分离到6株病毒,经鉴定均属于基因1型的乙脑病毒.将四川省分离的6个毒株结合我国新分离的基因1型乙脑病毒与减毒活疫苗株SA14-14-2株的PrM区段和E区段氨基酸比较,发现PrM区段在PrM2、64和65位存在基因1型乙脑病毒独有的氨基酸位点差异,E区段存在14处共同的氨基酸位点差异,其中在E129、222、327和366位点为中国目前分离到的基因1型乙脑病毒所特有的位点特征.结论 从四川省巴中市首次分离到基因1型的乙脑病毒,并发现基因1型乙脑病毒与减毒活疫苗株之间PrM、E基因区段存在氨基酸差异,但现行疫苗株理论上可以保护新分离的基因1型乙脑病毒.     

日本乙型脑炎病毒单克隆抗体介导ADCC效应的研究

以日本乙型脑炎病毒(JEV)感染的BHK_2,细胞为靶细胞,小鼠脾细胞为效应细胞,测定了6株日本乙型脑炎病毒单克隆抗体(JEV-McAb)介导ADCC效应的活性。结果表明,2H_4、2F_2、nG_2、mG_9等种特异性及属特异性McAb无介导~(51)Cr释放的活性,而mC_3及2D_2两株亚组特异性McAb可介导ADCC效应;但mC_3和2D_2介导ADCC效应的活性也不相同。JEV-McAb的ADCC活性与血凝抑制(HI)、中和(NT)等功能之间无明显的关系,它是JEV-McAb的又一免疫学特征。小鼠感染JEV后,其脾细胞的ADCC活性下降,这可能与JEV的致病性有关。在JEV感染中,ADCC效应具有一定的保护功能。     

武汉市新分离2株乙型脑炎病毒E基因分型及序列分析

目的 对2009年武汉市新分离的2株乙型脑炎（简称乙脑）病毒进行基因分型和序列分析,了解本地乙脑病毒株的分子生物学特性。方法 将2009年从三带喙库蚊中分离的两株乙型脑炎病毒用RT-PCR法扩增E基因,将其进行测序,并用DNAstar and MegAlign软件与其他基因型代表株进行比对。结果 16组样品检出两株阳性（WHJX9-09、WHJX10-09）,这两株阳性均属于GI型。两株新分离JEV之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为98.9％和100％。同目前在武汉市使用的疫苗株SA-14-14-2相比,核苷酸同源性分别为87.4％、87.9％,氨基酸同源性为96.9％。共有15个氨基酸发生变异分布在3个不同结构域,中和位点没有变异但是神经毒力位点仍然存在。结论 武汉市本地新分离乙脑病毒基因型为GI型,不同于1988年在武汉检出的GⅢ型的基因型,和疫苗株SA-14-14-2相比,其神经毒力并没有减弱,但疫苗产生的抗体对新出现的GI型乙脑病毒仍有中和作用。因此提高乙脑疫苗的接种率并配合防蚊灭蚊措施对控制乙脑疫情依然至关重要。同时有必要对本市蚊虫及乙脑患者进行长期的病原学监测工作,为乙脑预测预警体系的建立提供科学依据。     

抗白血病患者IgM同种型和独特型McAb识别抗原表位的分析

本文应用间接ELISA试验,混合ELISA夹心试验,ELISA抑制试验对抗B-CLL患者血清IgM同种型和独特型McAb的特异性和亲和力进行了分析。并采用ELISA双抗体相加试验,检测了McAb识别抗原的表位。试验结果表明,14株McAb中10株为抗独特型McAb,4株为抗同种型McAb。对ELISA双抗体相加试验测得结果经微机集群处理分析,可将4株抗同种型McAb分成2组,10株抗独特型McAb分成4组。ELISA相加试验结果与间接混合ELISA抑制试验结果一致。结果提示,14株McAb至少可以识别6个不同的抗原表位。     

乙型肝炎表面抗体的抗独特型研究

用 HBsAg/a 决定簇的7A_4单克隆抗体(McAb_1)复合物,免疫同系 BALB/C 小鼠,制备了高效价抗独特型(Ab_2)血清和两株抗独特型 McAb(McAb_2).Ab_2血清和 McAb_2都能识别7A_4McAb_1的互补位独特型.Ab_2血清中有与异种(豚鼠、驴、兔和羊)抗—HBs 结合的抗体,两株 McAb 不能与异种抗-HBs结合的抗体,两株 McAb 不能与异种抗-HBs 结合,属非内影像 Ab_2γ.研究表明,HBsAg/a 决定簇的 McAb_1有不同的互补位,McAb_2可作为一种生物探针,用于区别 McAb_1的互补位.     

抗人白细胞间素-2多克隆及单克隆抗体的生物学特征

利用人工合成的白细胞间素2(IL-2)多肽片段,用中和试验、竞争ELISA和染色IL-2分泌细胞的碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶桥联酶标技术,对己制备的抗人IL-2多克隆抗体及单克隆抗体(McAb)的表位特异性、中和活性、亲和常数及杭天然IL-2的反应性进行了全面鉴定。结果表明:利用多种免疫方案、融合前强化加强免疫及多个脾脏混合融合制备策略所获得的McAb,在生物学特征上表现出多样化,即这些McAb的表位特异性、中和活性、亲和力及抗天然IL-2活性各不相同。其中抗IL-2 C末端的McAb为首次报道。这组McAb适用于对IL-2研究的不同目的。     

西尼罗病毒与乙脑病毒免疫交叉反应的实验研究

为明确西尼罗病毒(WNV)与乙型脑炎病毒(JEV)的免疫交叉反应,本文分别用WNV全抗原与JE减毒活疫苗免疫小鼠,采用间接免疫荧光试验检测血清中2种病毒IgG抗体水平及其交叉反应情况。结果表明:WNV组在第4次免疫后的14天和35天出现2个高峰,平均效价分别为6088和4305;JEV组第4次免疫后,小鼠血清JEV抗体呈现缓慢上升的趋势。无论是在WNV全抗原免疫小鼠血清中还是在JE减毒活疫苗免疫小鼠血清中,同一血清对WNV抗原和JEV抗原均有反应,且抗体效价差异有显著性。在抗WNV抗体阳性血清中,两者交叉反应相对较强,在抗JEV抗体阳性血清中,两者交叉反应较弱。WNV与JEV存在一定交叉反应,但是否有交叉保护作用则需要中和试验等进一步证实。     

一种快速检测乙型脑炎病毒滴度的荧光灶试验方法的建立、验证及应用

目的:建立快速荧光灶试验(fluorescence focus assay,FFA)滴定乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)的方法,验证该法替代病毒蚀斑法测定乙型脑炎减毒活疫苗(简称乙脑减毒活疫苗)滴度的可行性并将该法作初步应用。方法:利用原核表达方式构建JEV非结构蛋白1(...     

抗结核杆菌TB-15C3 McAb特异性和敏感性的研究

前文报道建立了抗结核杆菌McAb 5个杂交瘤细胞株,制备出McAb,这5种McAb采用ELISA法检测了7种抗原,除大肠杆菌外、均出现不同反应。因而有必要进一步筛选特异性强和稳定性高的抗结核杆菌McAb,以提供结核菌的菌种鉴定、分型、抗原提纯以及为结核病人血清学诊断等应用。现将筛选出来的1株TB-15C_3McAb,与6株分枝杆菌进行了交义试验,结果报告如下。     

抗人IgA单克隆抗体的特性分析和初步应用

用常规免疫法和脾内直接注射抗原(SIgA)法免疫小鼠,平行作细胞融合实验,建立4株分泌抗人IgA McAb杂交瘤细胞株,所得McAb对人IgA有较高特异性和抗体效价,经免疫印染法表明对α重链呈特异性。用抗原竞争抑制ELISA和ELISA添加试验分析McAb的抗原结合位点,均表明McAb A4与A1b、A3b、A9针对不同的抗原位点。用于检测EB病毒VCA和EA的IgA抗体,显示满意的特异性和敏感性,这将为有关试剂的生产提供稳定的抗体来源。     

单克隆抗体作单纯疱疹病毒糖蛋白的特性鉴定以及临床应用

应用本室制备的8株抗单纯疱疹病毒糖蛋白单克隆抗体(抗HSV McAb)进行了系列研究,①鉴定出一种新的HSV糖蛋白g30K、gC的一种新形式,以及gC和gD;②建立了HSV感染的临床标本作抗原抗体分型检测的McAb-ELISA双夹心法,检测961份标本效果良好,并己在全国各地一些医疗单位推广使用;③证明McAb治疗家兔实验性单纯疱疹性角膜炎(HSK)有显著效果,并探讨其治疗机理主要为中和作用和ADCC效应;④对部分志愿者用McAb治疗单纯疱疹性角膜炎、妇女生殖器疱疹和小儿口腔疱疹性糜烂,取得明显疗效。     

抗单纯疱疹病毒单克隆抗体的研究——Ⅲ、单克隆抗体的体外中和作用及动物体内保护作用

单克隆抗体(McAb)具有高度特异性,在病毒性疾病的诊断、防治及研究中具有广阔的应用前景。作者曾报道建立了产生抗单纯疱疹病毒(HSV)McAb的杂交瘤细胞系,并在临床检测HSV抗原中应用抗HSV McAb,发现其具有特异性强、敏感度高等优点。本文报道抗HSV McAb在体外及动物体内HSV感染中的中和作用及保护作用,旨在为研究抗HSV McAb的免疫学特性及临床治疗应用提供实验证据。