肝细胞生长因子在人肝细胞中的表达及对肝细胞损伤的保护作用

目的　构建肝细胞生长因子 (HGF)真核细胞表达载体 ,并观察其在人正常肝细胞中的表达以及对细胞增殖和抗损伤能力的影响。方法　利用基因重组技术将HGF与绿色荧光蛋白 (GFP)融合并构建真核表达质粒 ,通过脂质体介导法 ,导入正常人肝细胞系中。用荧光显微镜以及免疫组织化学方法观察HGF表达情况。采用 [3 H] TdR掺入DNA法、PCNA免疫组织化学观察肝细胞DNA合成 ,了解肝细胞增殖能力的变化。用CCl4造成急性肝细胞损伤 ,通过测定细胞存活率、细胞内丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、K+ 的漏出量了解肝细胞的抗损伤能力。结果　酶切鉴定证实HGF片断已克隆到pEGFP N3 的BamHⅠ和SalⅠ位点之间 ,在转染人正常肝细胞后 ,利用荧光显微镜观察可见到绿色荧光蛋白的表达 ,用免疫组化方法进一步证实了HGF蛋白在细胞中的表达。 [3 H] T转导HGF的肝细胞的DNA合成明显增加 (转染 96h后 ,[3 H] TdR掺入量为对照组的 7倍 )。PCNA免疫组化结果显示转导HGF的肝细胞阳性率明显增加 ,肝细胞增殖活性增加。转导HGF的肝细胞抗CCl4损伤的能力明显增强 ,肝细胞存活率显著提高 (83%与 6 1% ,P <0 0 5 ) ,细胞内丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、K+ 的漏出显著降低 (分别为 35 16U·L-1与 6 5 31U·L-1,P <0 0 1,5 5 9mmol/L与 6 0 2mmol/L ,P     

肝细胞生长因子对自发性高血压大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨局部心肌注射重组腺病毒-肝细胞生长因子(Ad-HGF)对自发性高血压大鼠(SHR)心肌细胞凋亡的影响.方法 30只SHR为心肌纤维化模型,随机抽取6只作为阳性对照组,其余24只再随机平分为腺病毒组、Ad-HGF组.腺病毒组、Ad-HGF组SHR开胸,左心室壁5点分别注射0.1 ml null-Ad5和5×1...     

肝细胞生长因子对兔心肌梗死后心肌细胞的影响

目的探讨外源性肝细胞生长因子对心肌梗死后心肌细胞的影响.方法36只新西兰兔随机分为3组:假手术组、对照组和干预组.结扎左冠状动脉前降支复制急性心肌梗死模型.干预组静脉注射给予肝细胞生长因子2 mg·kg-1·12 h-1,48h后测心功能,梗死区/缺血区质量比代表梗死范围.TUNEL法染色检测细胞凋亡,确定心肌细胞凋亡指数.Western blot法测定凋亡蛋白bcl-2、ERK1及pERK1的表达.结果①干预组心肌梗死范围显著小于对照组(P＜0.01)左室功能得以改善;②干预组心肌细胞凋亡指数显著低于对照组(P＜0.05);③干预组梗死心肌周围bcl-2表达显著高于对照组(P＜0.05);④实验组ERKl的表达不明显,但pERK1的表达显著升高.结论外源性肝细胞生长因子能显著减少急性心肌梗死后的梗死范围、抑制心肌细胞凋亡及改善左室功能,作用途径可能与促进抗凋亡蛋白bcl-2表达有关.ERK1/2磷酸化可能作为外源性肝细胞生长因子的信号通路参与了心肌保护作用.     

肝细胞生长因子神经保护作用的研究进展

肝细胞生长因子又称离散因子，最初作为肝细胞有丝分裂原从肝部分切除大鼠的血液中分离得到，因其活性不具种属特异性并可刺激肝细胞合成DNA而得名。HGF具有广泛的生物学效应，参与多种细胞的增殖、迁移和形态发生。近年来，人们对HGF在基础及临床方面的研究皆已取得了很大进展，研究发现HGF还是一种新的神经营养因子。现仅就其神经保护作用，尤其在缺血性损伤中作用的研究进展综述如下。     

肝细胞生长因子对兔心肌梗死后心肌细胞凋亡及心脏功能的影响

目的　观察外源性肝细胞生长因子对心肌梗死后心肌细胞凋亡及心功能的影响。方法　 3 6只新西兰兔随机分为 3组 :假手术组、对照组和干预组。结扎左冠状动脉前降支复制急性心肌梗死模型。干预组静脉注射给予肝细胞生长因子 2mg·kg- 1 ·( 12h) - 1 ,48h后测心脏功能 ,取出心脏 ,梗死区 缺血区质量比为梗死范围。TUNEL法染色检测细胞凋亡 ,心肌凋亡阳性细胞数占总心肌细胞数的千分比为心肌细胞凋亡指数。免疫组化法检测抗凋亡蛋白bcl 2的表达。结果　①干预组心肌梗死范围显著小于对照组 (P <0 .0 1) ,左室功能得以改善 ;②干预组心肌细胞凋亡指数显著低于对照组 (P <0 .0 5 ) ;③干预组梗死心肌周围bcl 2表达显著多于对照组 (P <0 .0 5 ) ,且与细胞凋亡指数呈负相关 (r =-0 .691;P<0 .0 5 )。结论　外源性肝细胞生长因子能显著减少急性心肌梗死后的梗死范围、抑制心肌细胞凋亡及改善左室功能 ,其作用途径可能与促进抗凋亡蛋白bcl 2表达有关     

肝细胞生长因子对胰腺作用研究进展

1982年Strain等首先报道从血小板提取到一种肝细胞生长因子。1年后相继有报道从人血清、兔血清及急性肝衰病人血浆中提取到能促进体外培养的肝细胞DNA合成的因子,因其对培养肝细胞具有强大的促进有丝分裂作用,故称之为肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）,又名离散因子（scatter factor）。其受体c-MET是原癌基因c-met的产物。HGF及其受体在几种正常的上皮组织高度表达,它们包括胰腺、胃、肠、皮肤、子宫、肺脏以及肾脏。现在认为HGF是由间叶细胞产生并作用于数种上皮细胞的多效性因子。     

转化生长因子对心肌细胞胶原合成的影响

目的 探讨转化生长因子β1（TGF－β1）对风湿性心脏病（风心病）心肌细胞胶原合成的作用。方法 利用成熟心肌细胞体外培养模型，用反转录－聚合酶链反应和Western蛋白印迹方法检测20ng/ml人TGF－β1刺激后不同时间后，以及不同浓度人TGF－β1（5,10,20ng/ml)刺激和正常人和风心病患者心肌细胞I，Ⅲ型前胶原mRNA和I型胶原蛋白表达的影响。结果 人TGF－β1对正常人心肌细胞胶原合成无刺激作用，但可促进风心病患者心肌细胞I，Ⅲ型前胶原mRNA和I型胶原蛋白的表达，且上调作用与刺激时间和浓度均呈依赖关系。结论 TGF－β1是风心病心肌细胞合成分泌胶原的重要刺激因子，在风心病心肌细胞表型改变参与心肌纤维化的调控中起着关键性的作用。     

合成天麻素对心肌细胞中毒性损伤的保护作用

本文应用MMC中毒性心肌损伤的细胞病理模型,从细胞水平观察到合成天麻素可使MMC所致心肌细胞变性减轻,坏死减少,SDH、LDH活性明显增强。这可能与天麻素促进心肌细胞能量代谢,增强了抗损伤的作用有密切关系。     

肝细胞生长因子对子宫内膜癌细胞增殖影响的实验研究

目的观察肝细胞生长因子(HGF)对子宫内膜癌细胞HEC-2B增殖的影响及子宫内膜癌细胞HEC-2B中HGF受体C-met的表达,了解HGF对子宫内膜癌细胞的作用及其机制。方法体外培养人子宫内膜癌细胞HEC-2B,用RT-PCR的方法检测HEC-2B中HGF受体C-met有表达。对HEC-2B进行24 h血清饥饿后用不同剂量的HGF作用于HEC-2B。用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)分析细胞的增殖力,用流式细胞仪检测细胞的增殖周期。结果C-met在HEC-2B细胞中稳定表达,HGF促进细胞的增殖,并在一定的范围内有剂量依赖关系,各处理组与对照组相比,P<0.05。当HGF浓度达到60 ng.mL-1时,增殖水平较对照上调约1.9倍。结论HGF/C-met能够在体外促进子宫内膜癌细胞的增殖。     

肝细胞生长因子抑制AngⅡ诱导心肌成纤维细胞增殖和胶原合成

目的检测肝细胞生长因子(HGF)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的SD大鼠心肌成纤维细胞(CFbs)增殖和胶原合成的影响,探讨其在高血压心室重构中的作用。方法用消化法培养CFbs,以HGF和(或)AngⅡ刺激CFbs,以蛋白免疫印迹方法分析CFbsⅠ型胶原蛋白合成,MTT法检测CFbs的增殖。结果AngⅡ促进CFbs增殖和Ⅰ型胶原蛋白的合成,HGF可抑制这些作用。结论HGF能抑制AngⅡ诱导的SD大鼠CFbs增殖和心肌胶原沉积,从而减少AngⅡ引起的高血压心室重构,实现保护心脏的作用。     

肝细胞生长因子及其受体c-Met在子宫内膜癌中的表达

目的　探讨肝细胞生长因子 (HGF)及其受体c Met蛋白表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系。方法　应用免疫组化法检测 2 0例正常子宫内膜 ,4 6例子宫内膜癌组织中HGF及c Met蛋白的表达。结果　①正常子宫内膜HGF及c Met在增生期内膜的表达明显高于分泌期子宫内膜的表达。②子宫内膜癌c Met表达与临床分期、病理分级明显相关 (P <0 .0 5 ) ,Ⅰ、Ⅱ期低于Ⅲ、Ⅳ期 ,G1、G2 级低于G3 级。与年龄、肌层浸润、淋巴结转移无关 (P>0 .0 5 )。半定量分析 :HGF表达与子宫内膜癌Ⅲ +Ⅳ期有关 (P <0 .0 5 )。结论　HGF/c Met系统在子宫内膜癌的侵袭进展中起重要作用 ,c Met可能成为判断子宫内膜癌预后的良好参考指标。HGF及c Met联合检测对于判断子宫内膜癌预后有重要意义     

肝细胞生长因子及其受体c-Met在喉鳞状细胞癌中的表达

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF) 及其受体c-Met 蛋白表达与喉鳞状细胞癌临床病理特征的关系.方法 应用免疫组化法检测25例正常喉黏膜,46例喉鳞状细胞癌组织中HGF及c-Met蛋白的表达.结果 (1)正常喉黏膜HGF及c-Met低表达或阴性.(2)喉鳞状细胞癌c-Met表达与临床分期、病理分级明显相关(P＜0.05),Ⅰ、Ⅱ期低于Ⅲ、Ⅳ期.无淋巴结转移低于有淋巴结转移(P＜0.05).半定量分析:HGF表达与喉鳞状细胞癌Ⅲ Ⅳ期有关(P＜0.05).结论 HGF/c-Met系统在喉鳞状细胞癌的侵袭进展中起重要作用,c-Met可能成为判断喉鳞状细胞癌预后的良好参考指标.HGF及c-Met联合检测对于判断喉鳞状细胞癌预后有重要意义.     

Sirt4在心肌细胞中增强血管紧张素Ⅱ对GATA结合蛋白4的激活作用

目的 探索Sirt4在大鼠原代心肌细胞中对GATA结合蛋白4(GATA-binding protein 4,GATA4)活性的影响.方法 构建过表达Sirt4(Ad-Sirt4)以及干扰Sirt4表达(Ad-shSirt4)的腺病毒并且在体外培养大鼠原代心肌细胞,将构建好的腺病毒及其相应的对照腺病毒(Ad-GFP/Ad-U6)分别感染大鼠原代心肌细胞,感染24 h后用PBS或1μmol/L血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)处理细胞48 h.采用Western blot及Real-time PCR检测GATA4的表达,通过免疫荧光及细胞核分离法检测GATA4的核转运,利用双荧光素酶报告基因法检测GATA4下游分子心房利钠肽(atrial natriureticpeptide,ANP)、脑利钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)的启动子活性.结果 Sirt4在大鼠原代心肌细胞中不会影响GATA4的蛋白及mRNA水平(P＞0.05).与对照组比较,Sirt4过表达显著增加AngⅡ诱导的GATA4磷酸化,而干扰Sirt4表达降低GATA4的磷酸化水平.在大鼠原代心肌细胞中下调Sirt4表达可以明显抑制AngⅡ引起的GATA4入核;Sirt4过表达显著增加GATA4下游分子ANP、BNP的启动子活性(P＜0.01).结论 Sift4可以在大鼠原代心肌细胞中促进AngⅡ对GATA4的激活效应.     

HGF基因治疗下颌骨缺损修复的实验研究

目的：探讨肝细胞生长因子（HGF）基因治疗对下颌骨缺损修复的促进作用。方法：新西兰大耳白兔30只,平均分为10组,在兔下颌骨体部造成直径5mm圆形贯通性骨缺损,其中5组将含有人HGF全长cDNA片段的表达型质粒-pUDKH按照每只250μg的剂量直接应用于骨缺损局部,另外5组应用等剂量空质粒pUDK作为对照。于手术后第2、4、6、8、12周分批处死两组动物,拍摄骨缺损区的X线片,并记录X线片的相对骨密度值,比较两组骨缺损愈合的情况。结果：手术后X线片示,HGF组优于对照组。两组间相对骨密度（RBD）差异显著（P＜0．05）。手术后第2、4周HGF组高于对照组（P＜0．05）,第6、8、12周两组间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：pUDKH对下领骨缺损的修复具有促进作用,HGF基因治疗有望用于促进骨缺损的修复。     

脑神经胶质瘤病人脑脊液TSGF及HGF对新生血管生成相关因子的影响

目的:探讨恶性肿瘤特异性生长因子(TSGF)及肝细胞生长因子(HGF)对脑神经胶质瘤进展的影响及与新生血管生成相关因子的关系.方法:选择87例胶质细胞瘤病人,WHO胶质细胞瘤分级(Ⅰ级29例,Ⅱ级26例,Ⅲ级21例,Ⅳ级11例,检测各级病人脑脊液TSGF及HGF、血管内皮生长因子(VEGF)、内皮生长因子(EGF)及促血管生成素1(Ang-1).结果:Ⅱ级病人TSGF及HGF均较Ⅰ级明显升高(P<0.01),Ⅲ级病人TSGF及HGF均较Ⅰ级、Ⅱ级明显升高(P<0.01),Ⅳ级病人TSGF及HGF均较Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级明显升高(P<0.01).Ⅱ级病人VEGF较Ⅰ级明显升高(P<0.01),Ⅲ级病人VEGF均较Ⅰ级、Ⅱ级明显升高(P<0.01),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及Ang-1均较Ⅰ级明显升高(P<0.01),Ⅳ级病人VEGF均较Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级明显升高(P<0.01),bFGF及Ang-1均较Ⅰ级、Ⅱ级明显升高(P<0.01).TSGF与VEGF、bFGF及Ang-1均呈正相关关系(P<0.05～P<0.01),HGF与VEGF亦呈正相关关系(P<0.01).结论:脑脊液内TSGF及HGF水平升高是导致神经胶质瘤分级进展的重要因素,其过程与新生血管生成相关因子水平升高密切相关.     

胰岛素样生长因子结合蛋白在人类恶性肿瘤中的研究进展

胰岛素样生长因子(insulin—like growth factor，IGF)系统由IGF及其受体和胰岛素样生长因子结合蛋白(insulin-like growth factor binding protein，IGFBP)组成，体内外研究表明，它们调控着细胞的生长和增殖。IGF是一种强力的促细胞分裂素，其作用决定于IGF与其受体的相互作用。IGFBP是由6种与IGF高亲和力结合蛋白组成的家族，不仅具有运载蛋白的功能，而且通过IGF依赖性或非依赖性机制抑制或促进IGF的作用。近年的研究表明，IGFBP与肿瘤的发生、发展密切相关。