苯环喹溴铵在大鼠肝微粒体中的代谢转化研究

目的:建立检测大鼠肝微粒体中苯环喹溴铵代谢产物的方法,验证其在大鼠体内的代谢途径。方法:采用大鼠肝微粒体体外温孵法,建立液相色谱-质谱法测定并分析肝微粒体中苯环喹溴铵及其代谢物。色谱及质谱条件如下:色谱柱为TSK-gelODS-80Ts,流动相为甲醇-40mmol·L-1的乙酸铵水溶液(含0.1%甲酸)梯度洗脱;正离子模式,扫描型离子检测。结果:在体外代谢系统中,根据质谱碎片信息检测出6个代谢产物,分别是苯环喹溴铵的二羟基、单羟基和氧化产物。结论:建立的液相色谱-质谱法能够准确灵敏地测定大鼠肝微粒体中苯环喹溴铵的代谢产物,验证了在大鼠体内苯环喹溴铵的代谢部位在环戊烷基上。     

大鼠和人肠道菌群对苯环喹溴铵代谢转化作用的研究

目的:研究大鼠和人肠道菌群对苯环喹溴铵(BCQB)代谢的影响。方法:采用体外肠道菌群代谢方法,将大鼠或人的粪便溶解于人工肠液中,搅拌混合后过滤,滤液加入1mg·mL-1的苯环喹溴铵溶液0.5mL,于37℃厌氧培养48h,采用高效液相色谱串联质谱法对大鼠或人肠内菌温孵液样品进行分离和定性分析,并设不加BCQB溶液的大鼠或人肠内菌温孵液为空白样品。结果:与空白样品比较,大鼠或人肠内菌温孵液样品中总离子流色谱中除BCQB峰外未见新增色谱峰,其质谱碎片信息显示只有BCQB的特征碎片离子,未检测到BCQB的代谢产物。结论:在离体条件下,BCQB不被大鼠和人的肠道菌群代谢。     

苯环喹溴铵药理毒理的研究进展

变应性鼻炎和慢性阻塞性肺病是当前两种发病率高、发病人群广泛、病程缠绵且危害显著的呼吸系统疾病。作为有针对性的新一代治疗药物,苯环喹溴铵是我国自主研发的具有自主知识产权的国家一类新药,具有广阔的应用前景。     

苯环喹溴铵对豚鼠鼻超敏反应的影响

目的:观察苯环喹溴铵对豚鼠超敏性鼻炎的治疗效果。方法:(1)以10%的2,4-二异氰酸甲苯酯(TDI)橄榄油溶液行豚鼠双侧鼻腔给药,建立豚鼠超敏性鼻炎的模型;另设溶媒对照组,以橄榄油溶液代替10%TDI橄榄油溶液行豚鼠双侧鼻腔给药。(2)将模型成功的豚鼠随机分模型对照组,苯环喹溴铵大、中、小剂量组和硫酸阿托品组;与溶媒对照组一起合计共6组。治疗2周后,观察各组豚鼠的症状、鼻分泌物、鼻黏膜组胺含量以及光镜下鼻黏膜组织形态学的变化。结果:模型组出现鼻痒、喷嚏、清涕、鼻黏膜组胺含量增高、嗜酸性粒细胞增多等变化。苯环喹溴铵治疗组上述变化明显减轻。结论:经鼻给予苯环喹溴铵,对于豚鼠鼻超敏性鼻炎有明显的治疗作用。     

苯环喹溴铵染毒的大鼠一般生殖毒性试验

目的通过在大鼠生殖细胞成熟周期给予不同剂量的苯环喹溴铵(BCQDB),观察BCQDB对大鼠生殖能力及生殖系统的影响,为评价BCQDB的安全性提供依据。方法SD大鼠240只,随机分为4组,每组60只,雌雄各半。设一个溶剂对照组和3个给药组,给药剂量分别为27、162和972μg/kg,分别相当于人临床拟用剂量的6、36和216倍。观察指标:给不同剂量BCQDB后大鼠一般状况、体重变化;对大鼠生殖功能影响的指标有交配率、受孕率、生育率、出生存活率、着床率、吸收胎率、出生体重、离乳体重、生殖系统组织学检查等。结果雄性大鼠中剂量组(B)在给药后第1周、第5周和第6周体重高于对照组(P<0.05),其他2个剂量组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。雌性大鼠在给药期间各组体重增长差异无统计学意义。溶剂对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组的动物交配率分别为93.3%、90.6%、93.3%和90.9%;受孕率为92.9%、93.1%、85.7%和90.0%;生育率为86.7%、84.3%、80.0%和81.8%。镜下检查精子数目除高剂量组减少,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),其他2个剂量组差异无统计学意义。精子形态畸形率各组之间差异无统计学意义。观察精子活力发现各组均以Ⅰ、Ⅱ级居多。大鼠解剖肉眼观察未发现明显的异常变化。雄性大鼠低剂量组的脾脏重量高于对照组,其他各组的脑、心、肝、脾、肺、肾、睾丸、附睾以及睾丸、附睾与脑重量比与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。病理组织学检查未发现各组有明显的组织病理学改变。雌鼠交配前2周至受孕第6天连续给药,结果各剂量组动物的全孕程体重增长与对照组比较,差异无统计学意义,也未见其他与给药相关的中毒症状。在仔鼠生长发育中,高剂量组的离乳窝重、平均体重和心重有增加趋势,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);中剂量组的仔鼠也见体重有增加趋势,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);其余各组均差异无统计学意义。结论在本实验条件下,BQCDB27~162μg/kg无明显生殖毒性作用,但972μg/kg对大鼠精子显示了一定的生殖毒性反应。     

苯环喹溴铵抗炎止痒作用的初步观察*

目的：初步研究苯环喹溴铵的抗炎止痒作用。方法：在二甲苯诱导小鼠耳肿胀模型、冰醋酸诱发小鼠毛细血管通透性亢进模型和磷酸组胺致痒豚鼠模型上，观察苯环喹溴铵的抗炎和止痒作用。结果：苯环喹溴铵能较好地抑制二甲苯所致的炎症反应，降低冰醋酸诱发的小鼠毛细血管通透性增加，缓解磷酸组胺的致痒作用，并呈一定的量效关系。结论：苯环喹溴铵具有较好的抗炎止痒作用。     

苯环喹溴铵喷鼻剂的大鼠毒性作用研究

目的探讨苯环喹溴铵喷鼻剂对大鼠的急性毒性和慢性毒性作用。方法通过鼻黏膜给药,以Bliss法求出药物的半数致死量（LD50）;并以LD50的1／100,1／200,1／400作为大（3．00mg／kg）、中（1．50mg／kg）、小（0．75mg／kg）剂量,另设溶剂对照组,观察药物对大鼠的慢性毒性作用。结果大鼠鼻黏膜给药的LD50为300．38mg／kg,95％可信限为263．58～342．31mg／kg;各剂量组大鼠连续经鼻给药6个月,其一般体征、精神状态、毛发、体重、脏器系数、肾功能、肝功能、血液生化、血液学、大体解剖、组织病理学检查均未见明显毒性发生。用药期间大剂量组和中剂量组某些观察指标有些异常,但停药2周后均恢复。结论苯环喹溴铵喷鼻剂连续给药6个月,在设定剂量下,大、中剂量有一定的毒性反应出现,小剂量则无明显改变。     

液质联用法测定人血浆中沙格雷酯的浓度

目的建立人血浆中沙格雷酯质量浓度的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定方法。方法色谱柱为Elipse XDB-C18柱,流动相为乙腈-0.01 mol·L-1醋酸铵(体积比为65∶35),血浆样品经乙腈沉淀蛋白处理,以选择反应监测(selected reaction monitoring,SRM)扫描方式检测,测定健康男性受试者经口给予盐酸沙格雷酯后血浆中沙格雷酯的质量浓度。结果沙格雷酯线性为5.0¹ 000μg·L-1,定量下限为5.0μg·L-1。日内、日间精密度(Relative Standard Deviation,RSD)均不大于9.0%,准确度(Relative Error,RE)为-6.5%1 000μg·L-1,定量下限为5.0μg·L-1。日内、日间精密度(Relative Standard Deviation,RSD)均不大于9.0%,准确度(Relative Error,RE)为-6.5%².6%。沙格雷酯在健康男性血浆中主要药动学参数tmax为(0.49±0.21)h,ρmax为(725±264)μg·L-1,t1/2为(0.58±0.21)h,AUC0-t为(534±111)μg·h·L-1,AUC0-∞为(540±111)μg·h·L-1。结论该方法适用于沙格雷酯在健康人体内药动学的研究。     

苯环喹溴铵的毒蕈碱样乙酰胆碱受体亚型选择性研究

目的探讨苯环喹溴铵对毒蕈碱样乙酰胆碱受体(M受体)亚型的选择性。方法以表达单一M受体亚型的CHO细胞株进行细胞与[3H]-QNB的饱和实验,并进行竞争抑制药和[3H]-QNB与M受体亚型的竞争结合实验,计算Kd值和Ki值。通过离体膀胱肌条实验评价苯环喹溴铵干预乙酰胆碱对离体膀胱肌条的收缩作用,计算pA2值。观察苯环喹溴铵对麻醉犬心率、心电图的影响及其对小鼠气管分泌功能的影响。结果苯环喹溴铵对3种细胞的抑制强度为CHOM3>CHOM1>CHOM2,对CHOM3和CHOM1的抑制能力相似,明显高于对CHOM2的抑制能力(P<0.01)。苯环喹溴铵可拮抗乙酰胆碱对离体膀胱肌条的收缩作用,使量效曲线平行右移,PA2值为7.09±s0.06。与溶媒组相比,苯环喹溴铵经鼻给药后对麻醉犬的心率和心电图无明显影响(P>0.05)。苯环喹溴铵大剂量组给药后1h、2h和中剂量组给药后2h能明显减少小鼠气管分泌物的分泌(P<0.01)。结论苯环喹溴铵是一种可选择性作用于M1和M3受体亚型的拮抗药。     

苯环喹溴铵对大鼠变应性鼻炎的治疗作用

目的探讨苯环喹溴铵对大鼠变应性鼻炎的治疗作用及机制。方法以卵清白蛋白(Ova)和Al (OH)_3建立大鼠变应性鼻炎模型。将60只大鼠随机分为模型组,苯环喹溴铵大、中、小剂量组,倍氯米松组和溶媒对照组,每组10只大鼠。各组动物经鼻给予相应药物2 wk后,观察各动物的症状和鼻黏膜组织形态学的状况,对各动物单侧鼻分泌物进行称重,并检测血清和鼻黏膜中Ova特异性IgE。结果模型组大鼠症状评分、鼻分泌物重量、血清和鼻分泌物中Ova特异性IgE水平及鼻黏膜病理学评分均高于溶媒对照组(P<0.01)。与模型组相比,苯环喹溴铵各剂量组大鼠的鼻炎症状均得到明显改善(P<0.01);大、中剂量组大鼠鼻黏膜的组织形态改变明显减轻(P<0.01);大剂量组大鼠血清和鼻黏膜中的Ova特异性IgE水平以及鼻分泌物量均明显降低(P<0.01)。结论经鼻给予苯环喹溴铵,对于大鼠变应性鼻炎有明显的治疗作用,其作用机制之一可能是通过降低Ova特异性IgE来实现的。     

LC-ESI-MS测定新的抗胆碱能化合物苯环喹溴铵在大鼠胆汁、尿液和粪便中的含量

目的：首次建立了LC-ESI-MS法测定大鼠胆汁、尿液和粪便中苯环喹溴铵的浓度,对该药在大鼠体内的排泄规律进行研究,为该药在大鼠体内的代谢转化途径的研究和临床试验提供依据。方法：生物样品经过C18固相小柱提取后,采用LC-ESI-MS法进行测定。以1-乙基-苯环喹溴铵为内标,在Hanbon Lichrospher5-C18色谱柱上,甲醇-（含40mmol/L醋酸铵和1%甲酸）水溶液（70：30,v/v）为流动相,流速为0.8mL/min分析胆汁样品;甲醇-（含40mmol/L醋酸铵和1%甲酸）水溶液（75：25,v/v）为流动相,流速为1.0mL/min分析尿液、粪便样品;以气动辅助电喷雾离子化（ESI）为接口技术,选择性正离子监测方式,苯环喹溴铵的分子离子（[M]^＋m/z330.2）和内标1-乙基-苯环喹溴铵的分子离子（[M]＋m/z344.2）作为测定离子。结果：胆汁、尿样、粪便中苯环喹溴铵的回收率均大于77%,日间和日内的变异系数均小于15%。胆汁中苯环喹溴铵在30.15～1507.50ng/mL浓度范围内线性关系良好（r=0.9995）,最低定量限为30.15ng/mL。尿液中苯环喹溴铵在3.02～1507.50ng/mL浓度范围内线性关系良好（r=0.9997）,最低定量限为3.02ng/mL。粪便中苯环喹溴铵在3.02～1507.50ng/mL浓度范围内线性关系良好（r=0.9995）,最低定量限为3.02ng/mL。结论：该方法专属性强,准确可靠,灵敏度高,可满足大鼠鼻腔给药排泄研究中药物浓度测定的要求。     

苯环喹溴铵长期经鼻给药对小鼠学习记忆能力的影响

目的观察苯环喹溴铵对小鼠学习记忆能力的影响及其形成原因。方法 50只筛选出的雄性昆明小鼠随机分为5组:溶媒组,苯环喹溴铵高、中、低剂量组(5.86、2.93、1.47mg·kg~(-1))及戊乙奎醚组(2.25mg·kg~(-1)),给药容量为5μL·10g~(-1),经鼻给药,每日1次,持续1mo。以Morris水迷宫和跳台实验测试苯环喹溴铵对其学习记忆能力的影响。另取50只昆明小鼠(雌雄各半)随机分为5组,以LC-ESIMS法测定小鼠在经鼻给予苯环喹溴铵5.86mg·k~g(-1)后10、45min及3、12、48h脑组织和血浆中苯环喹溴铵的浓度(给药后每个时间点各10只小鼠)。结果苯环喹溴铵各剂量组,对小鼠在Morris水迷宫和跳台实验中的学习记忆能力均无明显影响(P>0.05);小鼠在给药后各时间点,脑组织中苯环喹溴铵的浓度均在定量下限以下(苯环喹溴铵在脑匀浆中的定量下限为0.5405μg·L~(-1)),而给药后48h血浆中苯环喹溴铵的浓度为(4.01±0.52)μg·L~(-1)。结论苯环喹溴铵长期经鼻给药对小鼠的学习记忆能力没有影响,可能是由于其难以通过血脑屏障所致。     

HPLC-MS法测定人血浆中的阿立哌唑

目的:建立HPLC-MS法测定人血浆中阿立哌唑浓度的方法。方法:以盐酸洛哌丁胺为内标,采用Thermo Hypersil-HyPURITY C18(150 mm×2.1 mm,5μm)色谱柱;以20 mmol.L-1醋酸铵溶液(0.7%乙酸,0.1%TFA)-甲醇-乙腈(37∶50∶13)为流动相;柱温:40℃;流速:0.3 mL.min-1。结果:标准曲线线性范围为1.0~200ng.mL-1;萃取回收率为72.03%~74.35%;方法回收率为97.00%~100.80%;日内RSD在5.74%~10.69%;日间RSD在5.87%~11.26%。结论:本方法快速、灵敏、准确、简便,适用于阿立哌唑血药浓度测定及药动学研究。     

HPLC-MS法测定人血浆中厄贝沙坦的浓度

目的建立快速、灵敏的HPLC-MS法测定人血浆中厄贝沙坦的浓度,并研究厄贝沙坦片在健康人体内的药动学。方法以对乙酰氨基酚为内标,血浆样品经乙酸乙酯萃取后,以乙腈-水（40：60,v／v）为流动相,经Sinochrom ODS-BP C18柱分离,以负离子方式检测,扫描方式为选择离子监测（SIM）。用于定量分析的离子分别为m／z 427．35（厄贝沙坦）和m／z 150．10（对乙酰氨基酚）。结果测定血浆中厄贝沙坦方法的线性范围为20～5000ng·mL^-1（r〉0．997）,定量下限20ng·mL^-1。日内RSD％为3．8％～6．1％,日间RSD％为3．3％～14．4％,厄贝沙坦提取回收率为71．3％～87．9％;内标对乙酰氨基酚提取回收率为93．7％。每个样品分析时间为4．0min。应用此法研究了20名健康受试者单剂量口服150mg厄贝沙坦片后的药动学特点。结论该法选择性强,灵敏度高,适用于厄贝沙坦的临床药动学研究。     

HPLC-MS测定血浆中的奥曲肽药物浓度

目的建立血浆中奥曲肽药物浓度的测定方法并应用于药物动力学研究。方法采用Waters Micromass ZQ液相色谱-质谱联用仪。色谱条件:Waters C18(150 mm×3.9 mm,2.1μm)色谱柱;流动相为乙腈-水-甲酸(20∶80∶0.1),流速为0.2 mL.min-1;质谱条件:Micromass ZQ电喷雾质谱仪,离子源:ESI;极性(检出模式)。结果奥曲肽在选择离子通道上的保留时间为7.38 min,内标在选择通道(m/z)保留时间为8.65 min,奥曲肽的血药浓度范围为0.50~40.00 ng.mL-1,定量下限为0.50 ng.mL-1,日内、日间误差<12%。用此方法测定了18例志愿者皮下注射0.1 mg的醋酸奥曲肽后的血药浓度。结论该方法简单、灵敏、可靠,适合体内奥曲肽的药物动力学研究。     

HPLC-MS/MS法测定血浆中莪术醇浓度及Beagle犬体内的药代动力学研究

建立HPLC-MS/MS法测定血浆中莪术醇含量，研究其在Beagle犬体内药代动力学特征。Beagle犬9只，随机分为3组，分别静脉推注不同剂量(7.5，10.0和12.5 mg·kg^-1)的莪术油脂肪乳剂，按设定时间股静脉取血，采用HPLC-MS/MS法测定莪术油脂肪乳剂主要有效成分莪术醇血浆浓度，计算莪术醇药代动力学参数。莪术醇血浓度线性范围为0.25～100 ng·mL^-1；相对回收率为91.33%～103.17%，绝对回收率为31.61%～37.20%，单次静脉注射不同剂量莪术油脂肪乳剂后，其主要有效成分莪术醇Beagle犬体内代谢过程基本符合三室模型，莪术醇主要药代动力学参数AUC呈明显剂量相关性。本法操作简便、快速、灵敏度高、专属性强，可用于莪术醇体内药代动力学的研究。     

HPLC-MS/MS法测定血浆中十肽化合物LXT-101及Beagle犬药代动力学研究

建立HPLC-MS/MS法测定血浆中十肽化合物(LXT-101)的浓度，并应用于Beagle犬的药代动力学研究。血浆样品采用乙腈直接沉淀蛋白的方法，内标(IS)选用¹²⁷I-LXT-101，采用ESI-MS/MS二极质谱，选择反应监测(SRM)方式进行检测。LXT-101的线性范围为0.5～500.0 ng·mL^-1(r²>0.993 0)，绝对回收率为85.2%～90.7%，日内、日间精密度(RSD%)均小于10.9%，准确度(RE)在±1.8%之内。血浆中的最低检测限(LOQ)为0.5 ng·mL^-1。该法操作简便、快速、灵敏度高。可检测出低剂量肌注(im)给药后犬体内的血药浓度，适于临床前药代动力学研究。