HPLC法测定α-硫辛酸注射剂中杂质6,8-上硫辛烷酸的含量

目的 建立α-硫辛酸注射液中有关物质:6,8-上硫辛烷酸的含量测定方法.方法 采用HPLC色谱法进行测定,色谱柱为Sepax C18(150mm×4.6mm,5μm)柱;流动相为5mmol/L的磷酸二氢钾溶液(pH调至3.1)-甲醇-乙腈(50∶42∶8);流速为1.5mL/min;检测波长为215nm.结果 6,8-上硫辛烷酸在0.3～4.5μg/mL范围,呈良好的线性关系,线性方程为y=9588x-2899,R2=0.999;检测限达到2ng(S/N≥3),定量限为12ng(S/N≥10),3批小试和进口市售中α-硫辛酸注射液中6,8-上硫辛烷酸的平均百分含量分别为0.03％,0.03％,0.04％和0.167％,均未超过α-硫辛酸含量的0.2％.结论 所建立的已知杂质6,8-上硫辛烷酸的HPLC法能够快速、灵敏、准确测定6,8-上硫辛烷酸的含量,可适用于α-硫辛酸注射剂内该杂质的检测.     

双波长高效液相色谱法测定人血清中维生素A、E的含量

目的:建立双波长高效液相色谱同时测定人血清中维生素A、E(VitA、VitE)浓度的方法。方法:移取血清,加入乙腈乙醇混合溶液及正己烷,旋涡混合、离心,分离正己烷层氮气吹干,残渣用流动相溶解后进样。流动相为甲醇-水(92∶8);流速1mL·min-1;柱温30℃,紫外检测器在325nm和292nm检测VitA和VitE。结果:VitA保留时间为2.63min,浓度线性范围50~800μg·L-1,r2=0.9995,平均回收率为97.3%(RSD<5%),最低检出量0.4ng(S/N>3);VitE保留时间为7.61min,浓度线性范围2~16mg·L-1,r2=0.9999,平均回收率为96.2%(RSD<6%),最低检出量2ng(S/N>3)。40例健康成人血清VitA平均值为(389.0±138.0)μg·L-1,VitE平均值为(10.2±2.5)mg·L-1。结论:双波长HPLC检测血清中VitA和VitE浓度的方法灵敏度高,回收率和重现性良好,操作快速、简便。     

快速液相色谱法与常规高效液相色谱法测定克林霉素磷酸酯及有关物质的比较

目的 比较分析快速液相色谱法(UFLC)与常规液相色谱法(HPLC)测定克林霉素磷酸酯含量及有关物质.方法 UFLC法色谱柱采用Waters C18杂化柱(50mm×4.6mm, 2.5μm),流速1.5ml/min; HPLC法色谱柱采用Apollo C18(250mm×4.6mm, 5μm),流速1.0ml/min.两方法均以0.1mol/L磷酸二氢钾(85%的磷酸调Ph3.5):乙腈:甲醇(700:150:150)为流动相,检测波长210nm.结果 在UFLC法中,克林霉索磷酸酯在0.01～1.5mg/ml呈良好线性,r=0.9999;最低检测限为20ng;最低定量限为60ng;精密度RSD为0.41%.与HPLC法相比,该法测定克林霉索磷酸酯含量快速、准确、灵敏度高;但测定有关物质,其专属性、准确性不如HPLC法,杂质检出数目少且部分杂质分离不完全.结论 UFLC法可准确、快速、高效测定克林霉素磷酸酯含量,适合在工作量较大的检测项目如制剂含量、含量均匀度及溶出度中应用;但经简单方法转换建立的UFLC方法通常难以胜任对药物复杂体系如有关物质的分析.     

HPLC法测定人血浆中氨苄青霉素浓度

本文采用HPLC法测定血浆中氨苄青霉素的浓度,采用Spherisorb ODS柱,流动相为PB(0.05mol/L,pH=4.0):乙腈(78:22V/v),标准曲线范围0.22~13.89μg/ml,r=0.9997,保留时间为7.3min,回收率试验大于95%,日内和日间变异(RSD%),小于7%,最小检测浓度为0.22μg/ml,无内源性杂质干扰.     

柱前衍生HPLC-UV法测定盐酸美金刚胺中主药及有关物质的含量

目的:建立以柱前衍生高效液相色谱-紫外分光光度法测定盐酸美金刚胺中主药及有关物质含量的方法。方法:色谱柱为Hypersil ODS2 C18,衍生试剂为对硝基苯甲酰氯,流动相为乙腈-水(85∶15),流速为1.0mL·min-1,检测波长为220nm,柱温为室温,进样量为5μL。结果:盐酸美金刚胺检测浓度的线性范围为0.2～1.0mg·mL-1(r=0.9993),平均加样回收率为98.5%,RSD=1.42%,最小检测限为3.0ng(S/N≥3),平均有关物质含量均小于0.16%。结论:本方法操作简便,结果准确可靠、重现性好,可用于该制剂的含量测定。     

高效液相色谱-二极管阵列检测器法测定苯磺顺阿曲库铵的有关物质

目的 建立测定苯磺顺阿曲库铵中有关物质的高效液相色谱法。方法 采用高效液相色谱-二极管阵列检测器法。流动相梯度洗脱,流动相A为1.02%磷酸二氢钾缓冲溶液(用磷酸调节p H至3.1)-甲醇-乙腈(75∶5∶20),流动相B为1.02%磷酸二氢钾缓冲溶液(用磷酸调节p H至3.1)-甲醇-乙腈(50∶30∶20);色谱柱为Thermo Syncronis C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流量为1.0 m L/min,柱温为30℃,进样体积为20μL,检测波长为280 nm。结果 苯磺顺阿曲库铵质量浓度线性范围为0.005~1.0 g/L(r=0.999 9),检测限为5 ng/m L(S/N≥3);杂质E、杂质G、中间体Ⅻ和中间体ⅩⅢ的质量浓度线性范围分别为0.8~40.0μg/m L,1.2~60.0μg/m L,40~200μg/m L,1.6~80.0μg/m L(r≥0.999 8),检测限分别为40 ng/m L,30 ng/m L,100 ng/m L,80 ng/m L(S/N≥3)。结论 该法检测苯磺顺阿曲库铵的有关物质,灵敏度高、专属性强,结果准确可靠。     

维拉帕米及去甲基维拉帕米临床血药浓度的HPLC—FLU检测

目的 :建立一种简便的维拉帕米 ( Ver)及去甲基维拉帕米 ( Norv)血药浓度 HPL C- FL U的测定方法。方法 :色谱柱为Alltima C1 8柱 ( 15 0 mm× 4.6 m m,5 ︼m) ;流动相为甲醇 -水 -三乙胺 ( 5 2∶ 47.6∶ 0 .4) ,用冰醋酸调节 p H至 5 .41,流速 1ml/min。荧光检测激发波长 Ex=2 84nm,发射波长 Em=313nm。Ver和去 Norv的保留时间分别为 7.14min和 5 .17min,血样预处理采用乙腈直接沉淀法。结果 :Ver及 Norv血药浓度在 2 5～ 40 0 ng/ ml范围内线性关系良好 ( r≥ 0 .9997) ,最低检测限分别为 2 0 0 pg和 10 0 pg( r S/N≥ 3) ,最低检测浓度均为 2 0 ng/ ml。批内、批间精密度小于 5 %。结论 :本方法简便可靠 ,可较好地满足临床治疗药物监测工作的需要     

注射用头孢曲松钠中抗氧剂测定方法的建立

目的建立测定注射用头孢曲松钠中抗氧剂2,6-叔丁基-4-甲基-苯酚(BHT)的HPLC方法。方法Alltima C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈∶水(77∶23)为流动相,检测波长208nm,流速1.0ml/min,柱温为室温。结果色谱图中抗氧剂BHT与其他成分的分离度及其检出灵敏度完全满足检测要求,最小检出量为1.3ng。结论本法简便、专属、能有效控制产品的质量。     

HPLC法测定佐米曲普坦的含量及有关物质

目的:建立HPLC法测定佐米曲普坦的含量及纯度.方法:采用Zorbax SB-C18色谱柱,分别以甲醇:0.025mol/L磷酸二氢钾(16:84)和甲醇:0.025 mol/L磷酸二氢钾:三乙胺(25:75:0.5,pH=3.5)为流动相,流速为1mL/min,在检测波长为220nm处检测.结果:本品在0.01mg/mL～0.15mg/mL浓度范围内呈直线关系,本品中杂质的最小检测限为0.01%.对4批样品进行检测均未检出杂质,而粗品检出明显杂质.结论:本方法可用于含量测定和有关物质的检查.     

阿托伐他汀钙片有关物质的HPLC分析法

目的建立阿托伐他汀钙片有关物质的测定方法。方法采用反相HPLC法,测定阿托伐他汀钙片有关物质的含量。采用Syncronis C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相A为醋酸缓冲液∶乙腈∶四氢呋喃(61∶27∶12),流动相B为醋酸缓冲液∶乙腈∶四氢呋喃(47∶41∶12);流速为1.5mL·min~(-1);检测波长为260nm;柱温为35℃。结果阿托伐他汀钙杂质1、杂质2、杂质3、杂质4、杂质6与阿托伐他汀峰均可达到基线分离;检测限分别为阿托伐他汀2ng,杂质1 2ng、杂质2 2ng、杂质3 2ng、杂质4 2ng、杂质6 1.6ng,且重复性良好,总杂质RSD值为1.87%(n=6)。结论该方法稳定、可靠、专属性强,可用于阿托伐他汀钙片的有关物质检测。     

LC methods for acyclovir and related impurities determination

Acyclovir, guanine, and impurity A have been baseline separated with isocratic conditions at pH=3.0 and run time under 15 min by employing a SB-CN column from Agilent (150 mm x 4.6mm and 3.5 microm). Moreover, when run time was increased to 40 min six impurities (guanine, impurities A, F, G, Vir 3/4 and N(7)) plus acyclovir were separated in the same conditions. The mobile phase consisted of buffer A/acetonitrile 96:4 (v/v), being buffer A:25 mM H(3)PO(4) (Milli-Q H(2)O) brought to pH 3.0 with KOH. The same column provided separation for all the seven impurities described in pharmacopoeia, including impurity C, which coeluted with acyclovir in the previous conditions with a mobile phase prepared with 25 mM phosphoric acid (pH=1.8)/acetonitrile 96:4 (v/v). The method has been validated following ICH guidelines and it has demonstrated to be reliable for acyclovir and its impurities determination.     

反相高效液相色谱法测定两性霉素B中的相关杂质

目的：建立高效液相色谱法分离测定两性霉素B中有关物质。方法：采用KromasilC18色谱柱（250mm×4．6mm，5μm）；流动相（乙腈：甲醇：2．5nmaol／LEDTA=25：50：30）；检测波长λ=405nm；流速：1．0mL／min。结果：两性霉素B与14种相关杂质能完全分离，样品的浓度（C在14．07～26．0μg/mL范围内与各杂质峰面积响应值似）均呈良好的线性关系。结论：实验建立的方法简便、准确、可靠，适用于生产过程中间体、产成品杂质控制。     

Determination of pioglitazone hydrochloride in bulk and pharmaceutical formulations by HPLC and MEKC methods

High Performance Liquid Chromatographic (HPLC) and Micellar Electrokinetic Chromatographic (MEKC) methods have been developed for the determination of pioglitazone, a new englycemic antidiabetic agent. Pioglitazone and its unsaturated impurity were separated by MEKC in less than 7 min using a 43 cm x 50 microm i.d. uncoated fused-silica capillary with extended light path for better sensitivity (25 kV at 30 degrees C) and a background electrolyte (BGE) consisting of 20% acetonitrile (v/v) in 20 mM sodium borate buffer pH 9.3 containing 50 mM sodium dodecyl sulphate (SDS). The influence of various parameters on the separation such as pH of the buffer, SDS concentration, buffer concentration, organic modifiers, temperature and voltage were investigated. The MEKC method was compared with HPLC method using a 5 microm symmetry C18 column (250 x 4.6 mm i.d.) eluted with a mobile phase consisting of a mixture of 50% (v/v) acetonitrile and 10 mM potassium dihydrogen phosphate buffer, adjusting the pH to 6.0 with 0.1 M KOH. The HPLC method is capable of detecting all process related compounds, which may be present at trace levels in finished products. Both methods were fully validated and a comparison was made. The results confirm that the methods are highly suitable for its intended purpose.     

注射用哌拉西林钠/三唑巴坦钠有关物质测定方法的研究

目的建立适合国内各生产企业注射用哌拉西林钠/三唑巴坦钠有关物质测定的方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Thermo Hypersil-ODS(4.6mm×25cm, 5μm);以乙腈-4g/L磷酸二氢钠溶液溶液(2:98)(用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.0)为流动相A,以乙腈为流动相B,梯度洗脱;检测波长220nm;流速1.5mL/min。结果与中国药典2015年版所收载的有关物质检查法比较,梯度洗脱方法提高了杂质检出能力,共检出14个已知杂质,杂质分离完全,杂质谱更加完整,能够同时控制二聚体等聚合物杂质。经方法学验证,各杂质在线性范围内线性关系良好,回收率结果方法准确可靠。结论该方法能够全面的反应本品的杂质情况,适合国内各企业样品的检测。     

液相色谱结合液质联用法测定酮康唑原料药及复方酮康唑软膏中的有关物质

摘要：目的 建立一种复方酮康唑软膏中有关物质的液相色谱及液相色谱质谱测定方法。方法 采用Agilent HPLC,选择 ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(250mm×4.6mm,5mm),以10mmol/L四丁基硫酸氢铵溶液-乙腈(85:15)为流动相A,10mmol/L 四丁基硫酸氢铵溶液-乙腈(20:80)为流动相B,流速为1mL/min,检测波长为220nm。经优化流动相比例确定了线性梯度洗脱, 开展了专属性、线性、准确度、精密度、重复性、稳定性和耐用性等方法学研究。并将该方法应用于酮康唑原料药及复方酮康 唑软膏中有关物质的检测。在液相色谱-四级杆飞行时间质谱方法中,选择0.1%甲酸水溶液为流动相A,乙腈为流动相B,梯度 洗脱,通过二级质谱数据推导了酮康唑的裂解规律。结果 通过检测酮康唑原料药、复方酮康唑软膏并结合降解实验结果发 现,酮康唑与相邻杂质均可实现基线分离。根据确定的HPLC方法对比了不同来源复方酮康唑软膏有关物质的差异。建立了基 于高分辨质谱的酮康唑及其杂质的结构解析方法,修正了酮康唑及杂质E的特征子离子的产生过程及结构,并确认了酮康唑的 主要降解杂质为杂质D。结论 本方法灵敏度较高、重复性较好,为复方酮康唑软膏的质量控制提供了一种可行的分析方法, 适用于该产品的质量控制。基于高分辨质谱的结构解析方法也为酮康唑中其他杂质的结构推断提供了研究基础。     

高效液相色谱法测定紫杉醇亚微乳含量简

目的建立测定紫杉醇亚微乳含量的高效液相色谱法。方法以ZorbaxXDBC-18柱（250mm×4．6mm,5μm）为色谱柱,甲醇-水-乙腈（23：41：36）为流动相,流速为1．5mL／min,柱温为40℃,检测波长为227nm,进样量为10μL。样品经无水乙醇稀释后进样。结果紫杉醇峰与三杉尖宁碱（紫杉醇杂质I）、7-表-10-去乙酰基紫杉醇（紫杉醇杂质Ⅱ）峰的分离度分别为2．40,1．67。紫杉醇质量浓度在9．6—96μg／mL范围内与峰面积呈良好线性关系（r=0．9999）,定量限为3ng,紫杉醇亚微乳含量测定的平均回收率为99．99％,RSD为0．49％（n=9）。结论该方法简便、准确、专属性好,适用于紫杉醇亚微乳的含量测定。     

A stability-indicating HPLC assay method for docetaxel

A novel stability-indicating high-performance liquid chromatographic assay method was developed and validated for docetaxel in the presence of degradation products generated from forced decomposition studies. A gradient HPLC method was developed to separate the drug from the degradation products, using a Hichrom RPB HPLC column. Mixture of water and acetonitrile was used as mobile phase. The flow rate was 1.0 ml/min and the detection was done at 230 nm. Using the above method one can carry out the quantitative estimation of impurity namely DCT-1 and docetaxel. The developed gradient LC method was subsequently validated.     

四乙酰核糖HPLC法测定

为了建立高效液相色谱法分离测定四乙酰核糖纯度及相关杂质的方法,以YWG－18为分析柱,以35％乙腈为流动相,流速为1ml/min,检测波长为210nm,对四乙酰核糖进行了HPLC法测定在50ug/ml-10000ug/ml浓度范围内呈线性关系（r=0.99997),且测定方法性较好（RSD＜1％）,精密度＜1％,证明本方法简单准确,重现性好,可用于分离测定四乙酰核糖纯度及相关质。     

HPLC法测定曲安奈德益康唑乳膏中的有关物质

目的:建立HPLC法测定曲安奈德益康唑乳膏中有关物质的方法。方法:采用高效液相色谱法,色谱条件为:色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Kromasil100-5C18,4.6mm×250mm,5μm),柱温为45℃;以0.077%醋酸铵缓冲液(用磷酸调节pH值至3.0)-甲醇(80∶20)为流动相A;甲醇-乙腈(40∶60)为流动相B;流速为1.0mL/min;梯度洗脱;检测波长为240nm和225nm。结果:在225nm检测波长下,阴性样品色谱峰、曲安奈德峰及其杂质峰对硝酸益康唑及其杂质检测无干扰,加已知杂质的供试品溶液中益康唑、益康唑杂质A、杂质B、杂质C、咪康唑及未知杂质峰和相邻色谱峰分离度均符合要求;在240nm检测波长下,阴性样品色谱峰、硝酸益康唑及其杂质色谱峰对曲安奈德及其杂质检测无干扰,加已知杂质的供试品溶液中,曲安奈德、曲安奈德杂质A(曲安西龙)、杂质B、杂质C及未知杂质与相邻色谱峰分离度均符合要求。结论:经过对拟定的有关物质方法的方法学验证,表明本方法具有重现性和科学性,可用于曲安奈德益康唑乳膏有关物质检查。     

Systematic Approach for Trace Level Quantification of 2-N-butyl-4-spirocyclopentane-2-imidazole-5-one Genotoxic Impurity in Irbesartan Using LC-MS/MS

2-N-butyl-4-spirocyclopentane-2-imidazoline-5-one has been highlighted as a potential genotoxic impurity in irbesartan. A sensitive LC-MS/MS method was developed and validated for the determination of 2-N-butyl-4-spirocyclopentane-2-imidazoline-5-one in irbesartan. Good separation between 2-N-butyl-4-spirocyclopentane-2-imidazoline-5-one and irbesartan was achieved with Symmetry C18 (100×4.6 mm, 3.5 μm) column using 65:35 v/v mixture of 0.1% formic acid and acetonitrile as mobile phase with a flow rate of 0.7 ml/min. The proposed method was specific, linear, accurate, and precise. The calibration curve shows good linearity over the concentration range of 0.1-2.0 μg/ml, which matches the range of limit of quantitation-20×limit of quantitation of estimated permitted level (1.0 μg/ml) of 2-N-butyl-4-spirocyclopentane-2-imidazoline-5-one. The method was validated as per International Conference on Harmonization guidelines and was able to quantitate 2-N-butyl-4-spirocyclopentane-2-imidazoline-5-one impurity at 1.0 μg/ml with respect to 2 mg/ml of irbesartan. 2-N-butyl-4-spirocyclopentane-2-imidazoline-5-one was not present in the three studied pure and formulation batches of irbesartan and the developed method was a good quality control tool for quantitation of 2-N-butyl-4-spirocyclopentane-2-imidazole-5-one at very low levels in irbesartan.