手持式γ探测仪对荷人结肠癌裸鼠放射免疫定位研究

本文以手持式γ探测仪对荷人结肠癌细胞系Ｌｓ１７４Ｔ裸鼠进行体表放射免疫探测，为临床应用放射免疫引导外科手术（ＲＩＧＳ）提供了依据。以人结肠癌细胞系Ｌｓ１７４Ｔ免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠制备ＭｃＡｂＣＬ－３，胃蛋白酶消化法制备ＣＬ－３Ｆ（ａｈ′）２片段，Ｉｏｄｏｓｅｎ法以１２５Ｉ标记ＣＬ－３及其Ｆ（ａｂ′）２。两组荷瘤裸鼠注射标记物后分别于２４、４８、７２、９６、１２０、１４４和１６８ｈ以手持式γ探测仪（ＨＨＧＤ－Ｉ型）进行体表探测，测定Ｔ／Ｎ比值。１２５ＩＣＬ－３组Ｔ／Ｎ比值在１．２２～３．７９之间，第１６８小时最高；１２５ＩＣＬ－３Ｆ（ａｂ′）２组Ｔ／Ｎ比值在２．０～４．５之间，第７２～１４４小时最高。结果表明，荷瘤裸鼠腹注腔射１２５ＩＣＬ－３及１２５ＩＣＬ－３Ｆ（ａｂ′）２后标记物能特异性地浓集于肿瘤组织，以手持式γ探测仪进行体表探测Ｔ／Ｎ比值有明显意义，能明确定位肿瘤。Ｆ（ａｂ′）２用于ＲＩＧＳ裸鼠实验效果优于完整抗体。     

抗人肝癌mAb HAb18F（ab‘）2半成品的制备与质量控制

目的 制备符合人用标准的抗人肝癌ｍＡｂ ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ‘）２片段。方法 用胃蛋白酶消化经硫酸铵盐析的腹水抗体,然后在快速蛋白液相色谱（ＦＰＬＣ）上用Ｐｈｅｎｙｌ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＨＰ疏水柱纯化并进行质检。结果 经Ｐｈｅｎｙｌ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＨＰ疏水柱纯化后,Ｆ（ａｂ’）２片段的纯度可达９８．８％,回收率大于５０％,免疫活性为１：８０００,细菌,热原质检测均呈阴性。结论 本制备工艺周期短、     

单抗TIGTC—Ⅲ片段F(ab')2的制备及其放射免疫显像研究

目的:将抗人原发性肝癌(PLC)单抗TIGTC-Ⅲ,用胃蛋白酶法消化成F(ab′)2片段,标记131I后进行裸鼠人肝癌移植瘤的体内定位研究.方法:采用胃蛋白酶消化法,进行裸鼠体内核素显像.结果:消化产率为31.7%±2.4%,经细胞结合实验证明F(ab′)2具有良好的免疫活性,抗体片段进入裸鼠体内后,与完整抗体比,进入肿瘤的速度快,生物学分布特异性高,定位指数上升,血清本底下降迅速,生物半衰期明显缩短.结论:F(ab′)2与全抗体比较可使成像时间提前,定位清晰.     

抗rhTNF-α单克隆抗体F(ab′)_2片段的制备

采用胃酶消化抗ｒｈＴＮＦ－αＭｃＡｂ制备了其Ｆ（ａｂ′）２片段。对胃酶消化的时间，酶／抗体的比例及片段回收率等条件做了比较。结果显示，胃酶在ｐＨ４．２于３７℃消化１８ｈ，可制备出完整的Ｆ（ａｂ′）２片段；非还原型ＳＤＳ－ＰＡＧＥ发现，有９０％以上的ＩｇＧ被降解为Ｆ（ａｂ′）２片段；Ｓ－２００层析柱纯化Ｆ（ａｂ′）２片段的回收率达４５％；双抗体夹心竞争抑制ＥＬＩＳＡ法测定Ｆ（ａｂ′）２片段的竞争抑制效价为２．６×１０７。中和Ｌ９２９细胞毒活性试验的结果表明，１４８ｎｇ的Ｆ（ａｂ′）２片段可中和１个单位ｒｈＴＮＦ－α的细胞毒作用。     

手持式r探测仪对荷人结肠癌裸鼠放射免疫定位研究

本文以手持式ｒ探测仪对荷人结肠癌细胞系Ｌｓ１７４Ｔ裸鼠进行体表放射免疫探测，为临床应用放射免疫引导外科手术（ＲＩＧＳ）提供了依据。以人结肠癌细胞系Ｌｓ１７４免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠制备ＭｃＡｂ ＣＬ－３，胃蛋白酶消化法制备ＣＬ－３Ｆ（ａｂ＇）２片段，Ｉｏｄｏｇｅｎ法以＾１２５Ｉ标记ＣＬ－３及其Ｆ（ａｂ＇）２。两组荷瘤裸鼠注射标记物后分别于２４、４８．７２、９６、１２０、１４４和１６８ｈ以手持式ｒ探测仪     

FPLC纯化单克隆抗体（Fab＇）_2片段

作者采用ＤＥＡＥ－４０ＨＲ阴离子交换色谱柱，在Ｗａｔｅｒｓ６５０Ｅ快速蛋白液相色谱系统（ＦＰＬＣ）建立了抗肝癌单克隆抗体（ＨＡｂ１８）Ｆ（ａｂ＇）２片段的快速纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ用胃蛋白酶消化１８ｈ后，上阴离子交换色谱柱纯化，用ｐＨ７．５１０ｍｍｏｌ／ＬＰＢ洗脱，即得到纯化的Ｆ（ａｂ＇）２．一次纯化周期仅需２５ｍｉｎ，一次上样量１２０～１６０ｎｇ蛋白，Ｆ（ａｂ＇）２得率为３４％，回收率为５１％。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定纯度大于９５％，免疫荧光法测定活性为１：４０００．该法操作简单、快速、实用性强，不需要高档次的色谱仪，只要有一台核酸／蛋白检测仪便可进行纯化，是实验室纯化Ｆ（ａｂ＇）２的理想方法．     

高效高活性抗体片段的制备

为高效地制备高免疫活性的抗体片段，我们试用了两种新的蛋白酶消化鼠源性单克隆抗体（ｍＡｂ）。纯化的ＩｇＧ１抗肺癌ｍＡｂ经无花果蛋白酶和菠萝蛋白酶消化后，抗体片段的产率分别为最大理论产率的７７．６％和９８．８％。两种酶制备的片段为Ｆ（ａｂ′）２与Ｆａｂ混合物。经细胞结合实验、细胞结合抑制实验及动物模型的肿瘤定位显像证明，两种酶所得片段均具有良好的免疫活性，其中无花果蛋白酶所制片段的免疫活性较高，而菠萝蛋白酶所获酶解片段产率较高     

^131I—McAbJHⅢFab′片段在荷瘤裸鼠体内的定位显像

用蛋白酶切技术制备ＭｃＡｂＪＨⅢＦａｂ′片段，回收率约１０％，片段活性相当于完整ＭｃＡｂ的１：１０＾２稀释浓度。同用氯胺Ｔ法标记ＭｃＡｂＪＨⅢＦａｂ′，对荷人肝细胞癌ＢＥＬ－７４０２裸鼠体内的放射免疫显像进行了研究，腹腔注射＾１３１Ｉ－ＭｃＡｂＪＨⅢＦａｂ′后２４～９６ｈ，肿瘤部位有放射性浓聚，以４８～７２ｈ影像最为清晰；而注射＾１３１Ｉ－ＭｃＡｂⅢ肿瘤部位也有积累现象，但本底消除更慢，＾１３１Ｉ     

肝癌单克隆抗体HAb18及其F（ab′）_2、Fab片段在小鼠体内的药代动力学研究

作者对１３１Ｉ标记的抗人肝细胞癌单克隆抗体ＨＡｂ１８及Ｆ（ａｂ′）２、Ｆａｂ片段在小鼠体内的药代动力学进行研究。结果表明：（１）３种标记物的药代动力学模式有很大差异，完整抗体ＨＡｂ１８的清除过程符合开放一空模型，清除速率与注射剂量有关。按照剂量从高至低，其Ｔ１／２（整体排泄）分别为４８．０８ｈ、４２．６５ｈ、４０．５４ｈ；Ｔ１／２（血液清除）依次为６１．４２ｈ、４８．０７ｈ、４１．０３ｈ。（２）抗体片段的清除速率明显快于完整抗体，清除过程呈双相下降，符合二室模型。Ｆ（ａｂ′）。整体排泄的Ｔ１／２ａ为５．２９ｈ，Ｔ１／２β为３９．３７ｈ；血液清除的Ｔ１／２ａ为４．２０ｈ，Ｔ１／２β为３４．６１ｈ。Ｆａｂ片段整体排泄的Ｔ１／２ａ为３．５１ｈ，Ｔ１／２β为２０．２２ｈ；血液清除的Ｔ１／２ａ为１．３９ｈ，Ｔ１／２β为２４．３９ｈ。提示：完整抗体适用于肿瘤导向治疗，显像诊断则以抗体片段为佳。     

rHuIFN—γ对裸鼠异种植物人结肠癌导向治疗的促？…

本文应用＾１３１Ｉ标记的抗人结肠癌单克隆抗体（ｍＡｂ）Ｓｃ３Ａ及其Ｆ（ａｂ′）２作为导向治疗剂，加ｒＨｕＩＦＮ－γ治疗荷人结肠癌裸鼠获得明显的抑瘤效果。结果表明，ｒＨｕＩＦＮ－γ＋＾１３１Ｉ－Ｓｃ３Ａ ｍＡｂ或＾１３１Ｉ－Ｆ（ａｂ′）２的抑瘤作用分别为８４．５％和９１．９％，明显优于ＰＢＳ＋＾１３１Ｉ－Ｓｃ３Ａ ｍＡｂ或＾１３１Ｉ－Ｆ（ａｂ′）２治疗组（分别为６９．６％或６０．５％）；Ｆ（ａｂ′）     

检测肾综合征出血热病毒抗体的自身血凝试验的建立

目的 建立一种快速检测肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）虱血液中病毒抗体的自身血凝试验方法。方法 采用木瓜酶消化法制备红细胞糖蛋白单克隆抗体（ｍｃＡｂ）的Ｆ（ａｂ）２片段，用硫酸鱼精蛋白提取ＨＦＲＳ病毒抗原，并用戊二醛法将两种蛋白偶联关双价试剂，以ＨＦＲＳ虱阳性血清与人“Ｏ”型血红细胞模拟全血标本。进行红细胞凝集试验。结果 抗红细胞ｍｃＡｂＦ（ａｂ）２片段与ＨＦＲＳ病毒抗原蛋白发生有效偶联，可使ＨＦＲＳ     

rHuIFN-γ对裸鼠异种移植物人结肠癌导向治疗的促进作用

本文应用１３１Ｉ标记的抗人结肠癌单克隆抗体（ｍＡｂ）Ｓｃ３Ａ及其Ｆ（ａｂ′）２作为导向治疗剂，加ｒＨｕＩＦＮ－γ治疗荷人结肠癌裸鼠获得明显的抑瘤效果。结果表明，ｒＨｕＩＦＮ－γ＋１３１Ｉ－Ｓｃ３ＡｍＡｂ或１３１Ｉ－Ｆ（ａｂ′）２的抑瘤作用分别为８４．５％和９１．９％，明显优于ＰＢＳ＋１３１Ｉ－Ｓｃ３ＡｍＡｂ或１３１Ｉ－Ｆ（ａｂ′）２治疗组（分别为６９．６％或６０．５％）；Ｆ（ａｂ′）２组优于完整的ｍＡｂ组，提示ＩＦＮ－γ具有良好的导向辅佐作用。上述结果可为临床应用提供重要的实验依据。     

抗人层粘连蛋白Fab‘的制备

用ＤＥＡＥ纤维素ＤＥ－５２反相吸附纯化抗人层粘连蛋白（ＬＮ）ＩｇＧ，ＩｇＧ回收率达１１．６ｍｇ／ｍｌ血清。胃蛋白酶消化ＩｇＧ成Ｆ（ａｂ＇）２，再用１０ｍｍｏｌ／Ｌ２－巯基乙醇３７℃反应９０ｍｉｎ还原成Ｆａｂ＇，回收率约８１％，放免效价为１：３５００。测得纯化的ＩｇＧ、Ｆ（ａｂ＇）２及Ｆａｂ＇分子量分别为１５００００、９００００、４５０００，与理论植相近。放免检测中用Ｆａｂ＇取代抗血清可纠正对血清Ｌ     

抗人层粘连蛋白Fab＇的制备

用ＤＥＡＥ纤维素ＤＥ－５２反相吸附纯化抗人层粘连蛋白（ＬＮ）ＩｇＧ，ＩｇＧ回收率达１１．６ｍｇ／ｍｌ血清。胃蛋白酶消化ＩｇＧ成Ｆ（ａｂ＇）２，再用１０ｍｍｏｌ／Ｌ２－巯基乙醇３７℃反应９０ｍｉｎ还原成Ｆａｂ＇，回收率约８１％，放免效价为１：３５００．测得纯化的ＩｇＧ、Ｆ（ａｂ＇）２及Ｆａｂ＇分子量分别为１５００００、９００００、４５０００，与理论值相近。放免检测中用Ｆａｂ＇取代抗血清可纠正对血清ＬＮ测定的误差，从而建立检测ＬＮ的准确、灵敏方法。     

无花果酶制备抗卵巢上皮癌单抗F(ab')_2片段

无花果酶制备抗卵巢上皮癌单抗Ｆ（ａｂ）２片段①李小平钱和年冯捷王建六②李文锦付天云（北京医科大学人民医院妇科肿瘤研究室，北京１０００３４）Ｆ（ａｂ）２制备多采用胃蛋白酶（Ｐｅｐｓｉｎ），但有些抗体对其有抗性，本室曾用其制备ＣＯＣ１６６－９和ＣＯＣ...     

肝癌单克隆抗体HAb18及其F（ab′）2,Fab片段在小鼠体内…

作者对＾１３１Ｉ标记的抗人肝细胞癌单克隆抗体ＨＡｂ１８及Ｆ（ａｂ′）２，Ｆａｂ片段在小鼠体内的药代动力学进行研究，结果表明：（１）３种标记的药代动力学模式有很大差异，完整抗体ＨＡｂ１８的清除过程符合开放一室模型，清除速率与注射剂量有关。按照剂量从高至低，其Ｔ１／２（整体排泄）分别为４８．０８ｈ，４２．６５ｈ，４０．５４ｈ，Ｔ１／２（血液清除）依次为６１．４２ｈ，４８．０７ｈ，４１．０３ｈ。（２）抗     

兔抗人ClqIgG（Fab＇）_2的制备及鉴定

本文利用硫酸铵盐析及ＤＥＡＥ纤维素层析提取兔抗人ＣｌｑＩｇＧ．经胃蛋白酶消化及ＳＰＡ－Ｓｅｐｌｉａｒｏｓｅ４Ｂ层析，制备了兔抗人ＣｌｑＩｇＧ（Ｆａｂ＇）＿２．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析分子量为９３ＫＤ；经Ｃｌｑ－ＥＬＩＳＡ滴定其效价为１０￣（－４）．与人ＩｇＧ无交叉反应；当该制剂预先经人Ｃｌｑ处理后，阻断其与Ｃｌｑ特异结合的能力，在合适的条件下可抑制Ｃｌｑ与Ｒａｊｉ细胞上ＣｌｑＲ的结合。表明用该法制备的兔抗人ＣｌｑＩｇＧ（Ｆａｂ＇）＿２具有较好的纯度及特异性，可用于ＣｌｑＲ功能的研究。     

用氯胺T碘化法标记单克隆抗体及其F（ab′）2的免疫活性鉴定

用氯胺Ｔ碘化法标记单克隆抗体及其Ｆ（ａｂ′）_２的免疫活性鉴定邓敬兰，唐晓燕，陈敏，乔宏庆（第四军医大学西京医院核医学科，西安７１００３２）作者采用氯胺Ｔ碘化法［１～２］，对抗胃癌细胞的单克隆抗体（ＭＧ７）ＩｇＧ及其Ｆ（ａｂ′）２片段共进行了６２次１?..     

嵌合抗CD20抗体Fab片段在大肠杆菌中的表达及活性鉴定

目的：构建抗ＣＤ２０嵌合抗体Ｆａｂ片段表达载体,并在大肠杆菌中进行高效可溶性分泌表达。结果：利用ＰＣＲ方法从抗ＣＤ２０单链抗体（ＳｃＦｖ）表达载体上扩增抗ＣＤ２０抗体轻链可变区基因（ＶＬ）、重链可变区基因（ＶＨ）,然后将ＶＨ、ＶＬ基因重组到Ｆａｂ表达载体ｐＹＺＦ中,构建抗ＣＤ２０Ｆａｂ表达载体ｐＹＺＦ１ｃｄ２０,并在２７Ｃ７菌中高效表达。结果：经Ｆａｂ表达载体转化的２７Ｃ７菌株,进行表达培养,经分     

工程化人源性抗-HBs Fab抗体的制备、纯化和鉴定

用获得的表达人源性抗 ＨＢｓＦａｂ片段的大肠杆菌,发酵表达该抗体的可溶Ｆａｂ片段。以羊抗人Ｆａｂ抗体偶联ＨｉＴｒａｐ柱,用Ａｃｔｉｓｅｐｅｌｕｔｉｏｎｍｅｄｉｕｍ作为洗脱液,在ＦＰＬＣ上纯化。用ＳＤＳ ＰＡＧＥ及蛋白印迹法分析、鉴定,用固相放兔法检测其活性单位。蛋白印迹及ＥＬＩＳＡ显示转化菌株有抗 ＨＢｓＦａｂ片段的表达。经ＦＰＬＣ纯化的抗体Ｆａｂ片段呈单一峰,与抗 ＨＢｓ阳性血清相似。纯化后的抗体Ｆａｂ片段达到电泳纯,具有较高的活性。