神经调节蛋白-1对小鼠心室肌细胞L型钙电流的影响

目的观察神经调节蛋白-1(NRG-1)对大鼠心室肌细胞L型钙电流(ICa-L)的影响。方法 C57小鼠取其心脏,经主动脉逆行插管后行Langendorff灌流,以酶解法分离获得单个心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术,记录NRG-1对L型钙电流(ICa-L)的影响。结果 0.05,0.1,0.2μmol/L NRG-1对ICa-L峰电流的抑制率分别为15.3%±2.2%,32.0%±4.7%,52.6%±6.1%(n=6,P0.05),并使电流-电压曲线上移,激活延迟,失活后恢复时间延长。结论 NRG-1通过延迟钙通道的激活,延长失活后恢复时间,抑制心肌细胞ICa-L。     

Ghrelin对大鼠心室肌细胞L型钙电流的影响

目的：研究一种具有生长激素释放活性的脑肠肽（Ghrelin）对大鼠心室肌细胞L型钙电流的影响。方法：采用酶解消化法获得大鼠单个心室肌细胞,通过全细胞膜片钳技术研究不同浓度（10 nmol/L、100 nmol/L及1μmol/L） Ghrelin对L型钙电流的影响。结果：10 nmol/L、100 nmol/L及1μmol/L Ghrelin依次抑制大鼠心室肌细胞L型钙电流峰电位,抑制率分别为：8.95%±2.13%、31.18%±4.78%及64.63%±8.57%,（P<0.05）;I-V曲线上移,通道半数失活电压从（-1.34±1.9） mV分别降至（-8.04±1.32）mV、（9.76±1.17）mV及（-11.81±0.73）mV（P<0.05）,并延长失活后恢复时间由给药前τ值63.23±9.32,分别增至98.95±10.74、109.56±13.42和127.39±16.13,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：Ghrelin通过加快L型钙电流的失活及延长失活后恢复时间,具有浓度依赖性地抑制L型钙电流。     

卡维地洛对大鼠心室肌细胞L型钙电流的影响

目的研究卡维地洛对大鼠心室肌细胞L型钙电流(ICa,L)的影响,探讨卡维地洛在离子通道水平的药理机制。方法用急性酶解法获得大鼠单个心室肌细胞,用标准全细胞膜片钳技术记录ICa,L,观察不同浓度卡维地洛对ICa,L的影响。结果①卡维地洛呈浓度依赖性抑制ICa,L,1μmol/L卡维地洛能使心肌细胞ICa,L电流-电压关系曲线明显上移,峰电流密度减少(7.80±0.65pA/pFvs4.89±0.52pA/pF,n=10,P<0.05),但激活电位、峰电位和翻转电位无明显改变。②卡维地洛能使ICa,L失活曲线明显左移,但对ICa,L激活和复活曲线无明显影响。③0.1μmol/L卡维地洛对钙电流无明显影响,但可以明显阻断异丙肾上腺素增加钙电流效应。同时,卡维地洛对钙电流的抑制效应不能被哌唑嗪和普奈洛尔阻断。结论卡维地洛呈浓度依赖性地抑制心室肌细胞L型钙通道。     

胰岛素对家兔右室心肌细胞L型钙电流的影响

目的研究不同浓度胰岛素对家兔右室心肌细胞L型钙电流(ICa-L)的影响。方法采用膜片钳技术记录家兔右室心肌的ICa-L,予150、400和1 000 pmol/L胰岛素干预后记录ICa-L的变化。结果 150、400和1 000 pmol/L胰岛素使ICa-L峰值由(5.92±0.53)p A/p F减至(4.71±0.12)、(3.31±0.39)和(1.83±0.22)p A/p F(n=8,P0.01);胰岛素使ICa-L的电流-电压曲线上移,但不改变其激活电位、电位峰值和反转电位。结论胰岛素对家兔右室心肌细胞ICa-L具有阻滞作用。这可能是胰岛素引起某些心律失常的重要机制。     

异丙酚对家兔心室外膜心肌细胞动作电位和L-型钙电流的影响

目的研究异丙酚对家兔左、右心室心外膜心肌细胞动作电位和L-型钙电流的影响。方法酶解法分离家兔左、右心室心外膜心肌细胞。全细胞膜片钳技术记录左、右心室心外膜心肌细胞动作电位和L-型钙电流(ICa-L)在使用异丙酚前后的变化。结果在电流钳制下,左、右心室心外膜心肌细胞动作电位都具有从0期到4期的动作电位形态,2相平台期有心外膜心肌细胞特有的穹窿样突起。异丙酚使右室心外膜心肌细胞动作电位失去2相平台期穹窿样突起,呈三角形尖锥锋形。左、右心室心外膜心肌细胞动作电位时程复极化50%和90%(APD50和APD90)在异丙酚作用后都明显缩短,其中右室心外膜心肌细胞APD50和APD90缩短最为明显(P<0.05或0.01)。在电压钳制下,异丙酚使左、右心室心外膜心肌细胞ICa-L在同一指令电位下,电流幅度均明显减小,但右室心外膜心肌细胞ICa-L的减小幅度明显强于左室同层ICa-L的减小幅度(P<0.01)。异丙酚还使左、右心室心外膜心肌细胞ICa-L的I-V曲线上移,并且使右室心外膜心肌细胞ICa-L的I-V曲线处在所有I-V曲线最上部。结论异丙酚对右室心外膜心肌细胞动作电位和ICa-L的影响程度明显强于左室,从而引起左、右心外膜心肌细胞电不均一性。     

异丙肾上腺素对犬心房肌细胞动作电位及L型钙电流的影响

目的研究两种浓度的异丙肾上腺素（Isoproterenol，ISO）对犬心房肌细胞（AP）及L型钙电流（ICa，L）的作用。方法采用离体灌注和消化的方法获取心房肌细胞，用全细胞记录技术记录单个心房肌细胞AP以及ICa，L。结果低浓度ISO（10nmol／L）可延长APD，可使90％AP时程（APD90）延长34．4％，并降低AP平台期水平。高浓度ISO（1μmol／L）可减少APD，APD90减少32．1％。两种浓度的ISO均可诱发AP后除极及触发活动。10nmol／L和1μmol／L ISO分别增加ICa，L 36．7％和49．3％。结论两种浓度的ISO对心肌细胞ICa，L均有促进作用，Ca^2＋内流引起的肌浆网Ca^2＋释放可能是房性心律失常的发生机制之一。     

短期房颤对兔肺静脉心肌细胞有效不应期及L型钙电流的影响

目的研究在短期快速肺静脉起搏下,易诱发房颤（AF）的兔肺静脉心肌细胞有无急性电重构改变。方法建立兔肺静脉源性AF的动物模型,应用程序刺激的方法测定和计算肺静脉远、近两端的有效不应期之差（ΔERP）;并通过全细胞膜片钳技术记录钙离子流变化。结果在同样刺激条件下,不是所有实验动物均可诱发出AF。快速肺静脉起搏和AF时均引起肺静脉远、近两端心肌细胞ERP之差值（ΔERP）减小,同时在AF持续过程中还可引起钙电流减小。结论通过短期快速肺静脉刺激,发现易触发AF的肺静脉在AF发生和持续时,其肺静脉心肌细胞有急性电重构的存在,L型钙电流减小可能是短期AF导致肺静脉心肌细胞发生急性电重构的离子基础之一。     

大豆肽对大鼠心室肌细胞L-型钙通道电流的影响

目的探讨大豆肽对大鼠心室肌细胞L-钙通道电流(ICa-L)的影响。方法采用全细胞膜片钳技术观察不同剂量(0.03、0.1、0.3mmol.L-1)大豆肽酶法对急性分离的成年大鼠心室肌细胞L-型钙通道电流(ICa-L)的影响。结果大豆肽0.03、0.1、0.3 mmol.L-1均明显抑制ICa-L,分别使ICa-L峰值降低21.7%(P<0.05),23.6%和30.7%(P<0.01),该作用具有剂量依赖性。大豆肽使ICa-L的I-V关系曲线上移,但原有的I-V依赖性特征不变。结论大豆肽对大鼠心室肌细胞ICa-L具有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性。     

伊布利特对兔左室中层细胞L型钙电流的影响

目的观察伊布利特对正常心肌细胞L型钙通道电流(ICa-L)的影响。方法用全细胞膜片钳技术记录10-6,10-5mol/L伊布利特细胞外液对兔正常左室中层心肌细胞L型钙通道电流(ICa-L)活性的影响。结果①伊布利特灌流后ICa-LI-V曲线下移,低、高剂量伊布利特灌流后电流密度峰值明显增加(-8.34±2.67,-10.50±3.81pA/pFvs-5.68±1.53pA/pF,P均<0.01),且高剂量较低剂量灌流时增加更明显。②低、高剂量伊布利特灌流后失活曲线右移,且高剂量时右移更明显。高剂量时半数失活电压(V0.5)较低剂量和用药前显著降低,而低剂量与用药前无差异。三种状态的激活曲线无差异。结论伊布利特可能呈浓度依赖性影响心室肌细胞L型钙电流(ICa-L)活性。     

糖尿病对大鼠心肌细胞动作电位和瞬时外向钾电流的影响

目的探讨糖尿病对大鼠心室肌细胞动作电位(AP)和瞬时外向钾电流(Ito)的影响。方法通过链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,双酶法急性分离出对照组和糖尿病组心室肌细胞,全细胞膜片钳技术分别观察心肌细胞AP和Ito电流密度变化以及Ito动力学改变。结果与对照组比较,糖尿病组心肌细胞AP形态明显增宽,AP复极20%、50%和90%的时程均明显延长(64.3±7.5 ms vs 29.7±9.2 ms;174.3±6.8 ms vs 98.9±4.2 ms;276.7±8.3 ms vs 173.7±7.2 ms,P均<0.01,n=12);在钳制电位为+50mV时,与对照组比较,糖尿病组心肌细胞Ito的电流密度显著降低(11.51±1.37 pA/pF vs 17.43±1.98 pA/pF,P<0.05,n=12);与对照组比较,糖尿病组心肌细胞Ito的I-V曲线明显下移;失活曲线显著左移(P<0.01,n=12);失活恢复曲线明显减慢。结论糖尿病引起了心肌细胞AP时程延长,Ito幅度降低,并使Ito的失活加快以及失活后恢复减慢。     

外源性磷酸肌酸对缺血豚鼠心室肌细胞L型钙通道电流的影响

目的:观察不同浓度外源性磷酸肌酸(exogenous phosphocreatine,PCr)对豚鼠缺血心室肌细胞L型钙通道(ICa.L)电流的影响,探讨其治疗缺血性心力衰竭的电生理学机制。方法:单个心室肌细胞经酶解从豚鼠左心室获得,采用膜片钳全细胞模式记录ICa.L电流,通过灌注模拟缺血液并充以95%N2+5%CO2的混合气体建立缺血模型,将PCr加入模拟缺血液中分别配成5,10,20,30 mmol/L浓度。将细胞分成6组,分别予模拟缺血液,含有5,10,20,30mmol/L浓度PCr的模拟缺血液,台氏液灌流,后者充以95%O2+5%CO2的混合气体。10 min后记录各组的峰电流及电流密度。结果:与台氏液组相比,模拟缺血液组ICa.L峰电流密度降低(80.6±5.2)%(P0.05),含有5,10,20,30 mmol/L浓度PCr的模拟缺血液组ICa.L峰电流密度分别降低(53.8±6.7)%(P0.05);(41.8±8.2)%(P0.05);(38.1±7.4)%(P0.05);(36.6±9.7)%(P0.05)。10,20,30 mmol/L 3种浓度对ICa.L峰电流密度的影响无统计学差别。结论:PCr能明显增加缺血时受抑制的ICa.L峰电流及电流密度,这可能是其治疗缺血性心力衰竭的电生理学机制。PCr在低浓度(0～10 mmol/L)对ICa.L电流及电流密度的影响呈现明显的量效关系,浓度大于10mmol/L量效关系不明显。     

右美托咪定对心室肌细胞L型钙通道电流的影响

目的观察右美托咪定(DEX)对大鼠心室肌细胞L型钙离子通道电流(ICa-L)的影响,探讨其对心脏电活动影响的机制。方法取SD大鼠,用酶解法分离获得单个心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录ICa-L,观察不同浓度的DEX(0.6,1.8,5.4,10,200 ng/ml)以及1μmol/L育亨宾(α2肾上腺素受体拮抗剂)单独使用及与10 ng/ml DEX联合使用对ICa-L的影响。结果 0.6,1.8,5.4,10,200 ng/ml的DEX对峰电流的抑制率分别为8.8%±2.4%、14.6%±3.6%、21.4%±8.4%、25.2%±6.4%和32.1%±6.6%,使I-V曲线上移。小剂量(0.6,1.8,5.4 ng/ml)的DEX对ICa-L激活曲线无明显影响(n=6,P>0.05);大剂量(10和200 ng/ml)的DEX可使ICa-L激活曲线右移。0.6,1.8,5.4,10,200 ng/ml的DEX可使ICa-L失活后恢复时间延长。10 ng/ml的DEX可使ICa-L的峰值抑制约25.2%±6.4%,再向电极外液中加入育亨宾后ICa-L平均增加约15%(n=6,P<0.05)。1μmol/L育亨宾灌流前后ICa-L的峰值无差异(n=6,P>0.05)。结论 DEX对心室肌细胞ICa-L具有浓度依赖性地抑制作用,可能是通过细胞膜上的α2肾上腺素受体介导的。     

伊贝沙坦对兔心室肌细胞L-型钙通道电流的影响

目的 研究伊贝沙坦(irbesartan)对正常家兔心室肌细胞L-型钙电流(ICa-L)、内向整流性钾电流(IK1)、快钠流(INa)以及跨膜动作电位的影响。方法 应用膜片钳全细胞记录方法记录各项离子流和跨膜动作电位。结果 (1)伊贝沙坦呈浓度依赖性阻断ICa-L；(2)伊贝沙坦可使ICa-L I—V曲线上移，但不改变其激活电位、峰值电位和反转电位；(3)伊贝沙坦呈使用依赖性阻滞ICa-L；(4)伊贝沙坦对ICa-L激活曲线无明显影响，但ICa-L失活后再激活的恢复时间常数(τ)明显延长；(6)伊贝沙坦对IKl和INa无明显影响；(7)伊贝沙坦(100nM)可使单个心室肌细胞动作电位时限缩短，对静息电位(RP)、动作电位幅度(APA)无影响。结论 伊贝沙坦作用于L-型钙通道的失活态从而阻断ICa-L。     

丹酚酸B对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流和L型钙电流的阻滞作用

目的研究从丹参中分离提取的药物单体——丹酚酸B对大鼠心肌细胞上的瞬时外向钾电流(Ito)、内向整流钾电流(IK1)和L型钙电流(ICa,L)的电生理学作用。方法用酶解法分离大鼠心室肌细胞,全细胞膜片钳技术记录Ito、IK1和ICa,L。每个细胞采用加药前后自身对照,用含100μmol/L丹酚酸B的细胞外液灌流心室肌细胞,记录加药前、后的电流,所有数据均在细胞破膜后20min内完成。结果 100μmol/L的丹酚酸B对Ito和ICa,L具有抑制作用,使Ito和ICa,L最大激活峰值电流密度下降,电流密度-电压曲线下移;且丹酚酸B主要抑制Ito的快速电流成分Itof,而对Ito的缓慢电流成分Itos无明显作用。在60mV测试电压下,Itof的最大激活峰值电流密度从23.51±3.29pA/pF降为16.85±2.36pA/pF,抑制率为28.31%±10.6%(n=8,P0.05)。在-10mV测试电压下,100μmol/L丹酚酸B作用后ICa,L的最大激活峰值电流密度从-8.66±-2.40pA/pF降为-5.91±-2.14pA/pF,抑制率为31.84%±10.23%(n=11,P0.05)。丹酚酸B使Ito通道失活后的恢复减慢,但不改变ICa,L的通道动力学。丹酚酸B对IK1无显著作用。结论丹酚酸B对Ito和ICa,L具有阻滞作用,而对IK1无显著作用。     

Effect of allitridi on calcium current in rat ventricular myocytes

Background Allitridi is an active compound that is extracted from the garlic. It has effects of anti-atherosclerosis, anti-arrhythmias and lowering blood pressure. But the controversy about the effect on cardiac contractility still exists. Methods Whole-cell patch clamp recording technique was used to record ICa,Lin single cell isolated rat ventricular myocytes. The nifedipine- sensitive L-type calcium current was recorded in the rat ventricular myocytes. Results Allitridi decreased the calcium channel current in a dose-dependent and voltage-dependent manner in ventricular myocytes of rats. The current-voltage curve was shifted upwards, on which active potential,peak potential and reverse potential showed no significant changes. The inactivation curve was shifted to more negative potential, but the activation curve and recovery curve were not altered. Allitridi had no effect on frequent-dependency of calcium current. Conclusion These results show that allitridi could concentration-dependently decrease calcium channel current in ventricular myocytes of rats.     

米诺环素对大鼠心室肌细胞L型钙电流的影响

目的 研究米诺环素对大鼠心室肌细胞L型钙电流（Ica-L）动力学特性的影响.方法 以酶解法分离获得单个心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术,研究米诺环素对Ica-L的影响.结果 10、50、250 μmol/L米诺环素对峰电位的抑制率分别为11%±5.86%,54.79%±6.32%,71.73%±5.29%,使Ica-LI-U曲线上移,激活曲线右移,并延长失活后恢复时间.结论 米诺环素通过延长钙通道的激活及失活后恢复时间,抑制心肌细胞Ica-L,预防钙超载.     

黄芩甙对大鼠心室肌细胞触发性心律失常的影响及其机制

目的研究黄芩甙对触发性心律失常的影响,探讨黄芩甙抗心律失常的机制。方法酶解法分离大鼠心室肌细胞,全细胞膜片钳技术记录黄芩甙作用前后的L型钙电流(ICa-L)的变化,外科手术得到心室乳头肌,标准玻璃微电极技术记录黄芩甙作用前后跨膜动作电位(TAP)的变化以及哇巴因诱发的延迟后除极(DAD)和触发活动(TA)的影响。结果①在电压钳制下,黄芩甙对ICa-L均有明显抑制作用,随浓度的增加,对ICa-L的抑制作用逐渐增强。10,20和40μmol/L的黄芩甙对ICa-L的最大电流密度抑制作用分别由15.8±1.2pA/pF减小到11.3±0.9,8.2±0.8,4.9±0.6pA/pF(P均<0.05)。黄芩甙对ICa-L的抑制作用具有非常好的量效性,半效抑制浓度为27.7±1.9μmol/L。显著上抬I-V曲线。②20μmol/L黄芩甙明显缩短动作电位时程,抑制哇巴因诱导的DAD和TA。结论黄芩甙能抑制触发性心律失常,这可能与黄芩甙抑制心肌细胞ICa-L内流,减少细胞内Ca2+超载有一定关系。     

绝对不应期电刺激对心力衰竭豚鼠心室肌细胞钙离子流的影响

目的探讨绝对不应期电刺激(ARPES)对心力衰竭(简称心衰)心室肌细胞收缩和钙离子流的作用。方法应用单细胞收缩动缘检测仪,在单纯基础刺激和一定延时后同时给予ARPES,观察细胞收缩并测定以F360/F380反映细胞内钙瞬变。应用膜片钳技术中记录单纯基础刺激和ARPES(延迟后10ms刺激)所诱发动作电位(APSA1,APARPES),并比较动作电位时程(APD)。分别以APSA1和APARPES为测试电压,记录AP电压钳下的细胞膜L型钙通道电流(ICa-L)。结果①ARPES使单个心衰心室肌细胞收缩幅值增高15.53%±5.31%(P<0.05),收缩和舒张速度峰值均增加(分别增加10.60%±3.02%,23.2%±8.26%,P<0.05或0.01,n=6);F360/F380幅值增加16.82%±7.03%(P<0.01,n=6)。②ARPES延长动作APD。③与APSA1电压钳记录的ICa-L相比,APARPES电压钳记录的ICa-L减弱程度明显减少,其单位膜电容下的电流强度的整合值增加(P<0.01)。结论ARPES提高衰竭心肌收缩力与增强单个心室肌细胞钙瞬变相关。     

不同旋体氨氯地平对大鼠心室肌细胞L型钙离子流和细胞内钙离子浓度的影响

目的探讨不同旋体氨氯地平(Aml)对大鼠心室肌细胞L型钙离子流(ICa-L)及细胞内钙离子浓度的影响。方法采用酶消化法分离大鼠心室肌细胞,以全细胞膜片钳技术分别记录加入0.1,0.5,1,5和10μmol/L左旋、右旋和混旋Aml后大鼠心室肌细胞ICa-L及通道动力学参数的变化;采用荧光探针Fura-2/AM测定细胞内钙离子浓度,观察加入1,5,10,50和100μmol/L左旋、右旋和混旋Aml后细胞内钙离子浓度的变化。结果加入不同浓度左旋和混旋Aml后,随着浓度增加,ICa-L及峰值电流呈浓度依赖性阻滞、I-V曲线上移、稳态激活曲线和稳态失活曲线左移、失活后恢复时间延长(P<0.05);细胞内钙离子浓度逐渐降低,左旋和混旋Aml对细胞内钙离子浓度影响的半效抑制浓度分别为8.13和16.19μmol/L(P<0.05),但不同浓度右旋Aml对ICa-L、通道动力学参数和细胞内钙离子浓度均无影响(P>0.05)。结论左旋和混旋Aml对ICa-L有阻滞作用,而右旋Aml对ICa-L无阻滞作用。