顶端钠离子依赖性胆汁酸转运体在小肠癌组织中的表达及其意义

目的:研究顶端钠离子依赖性胆汁酸转运体(ASBT)在小肠癌组织中的表达,探讨其在小肠癌发生中可能的意义。方法:采用免疫组织化学显色和蛋白印迹检测ASBT在人小肠腺癌、黏液腺癌、小细胞癌及其癌旁正常组织中的表达。结果:ASBT在癌旁正常小肠组织主要表达于小肠吸收细胞游离面的胞膜;在小肠癌中,ASBT表达明显下调,在小肠黏液腺癌和小细胞癌还可见ASBT的细胞核异位表达。结论:ASBT在小肠癌组织中表达下调和异位表达提示编码ASBT的基因第10溶质转运蛋白家族第2成员(SLC10A2)可能作为一种新的抑癌基因在小肠癌的发生过程中起重要作用。     

大肠癌组织RhoE、p53的表达及临床意义

目的 探讨凋亡抑制蛋白RhoE、p53蛋白在大肠癌组织中的表达与不同临床病理特征的关系,以及二者在大肠癌发生过程中的相关性.方法 采用免疫组织化学法检测48例大肠癌组织和30例正常肠组织中RhoE、053蛋白的表达.结果 肠癌组织中RhoE、p53蛋白阳性表达率分别为14.58%和62.5%,较正常组织差异非常显著(P<0.01);RhoE蛋白表达与Dukes分期明显相关(P<0.01)及淋巴结转移相关(P<0.05);肠癌组织中053与RhoE蛋白表达显著负相关(P<0.01).结论 RhoE在大肠癌组织中表达下调,并与大肠癌的Dukes分期密切相关,有可能作为判断病情和评价预后的新指标;RhoE蛋白的表达与p53蛋白的表达呈负相关,提示RhoE与p53蛋白可能存在相关信号通路,有望为大肠癌基因治疗提供新的靶点.     

结直肠癌组织中CD151表达及其临床意义

目的 探讨结直肠癌组织中CD151的表达及其与结直肠癌发生、发展和转移的关系.方法 采用实时荧光定量PCR技术检测22例肠癌组织及癌旁组织中CD151mRNA的表达,采用免疫组化SP法检测此22例及另67例石蜡包埋肠癌组织及癌旁组织中CD151蛋白的表达,并分析其与肠癌临床病理因素之间的关系.结果 CD151mRNA和蛋白在结直肠癌中的表达明显高于癌旁组织,其蛋白的表达与结直肠癌浸润深度、淋巴结转移和TNM分期密切相关,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 CD151可望成为与结直肠癌浸润、转移有关并提示预后不良的指标.     

促凋亡蛋白FasL结肠肿瘤细胞外源性凋亡中的作用

目的 探讨促凋亡蛋白Fas配体(Fas-ligand,FasL)在结肠癌、结肠腺瘤及正常结肠黏膜的表达差异.方法 应用免疫组织化学MaxVisionTM快捷法检测促凋亡蛋白FasL在62例结肠癌(肠癌组)、24例结肠腺瘤(腺瘤组)及21例正常结肠黏膜(正常组)组织中的表达.结肠癌Dukes分期为A期21例,B期10例,C期10例,D期16例.在光学显微镜下FasL的表达主要在细胞浆,细胞核和胞膜未见表达,表达程度采用半定量积分法.结果 FasL在肠癌组阳性表达率为19.35%(12/62例),明显低于腺瘤组的62.50%(15/24例)和正常组的47.62%(10/21例);其阳性表达肠癌组与腺瘤组及正常组相比,肠癌组明显低于腺瘤组与正常组,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05);腺瘤组与正常组FasL阳性表达相比未见差异(P>0.05);FasL在肠癌组16.67%(2/12例)及腺瘤组26.67%(4/15例)均见有高表达.肠癌组的FasL阳性表达与组织学类型有关,而与性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、血管浸润及远处转移等因素无关.结论 结肠腺瘤是结肠癌的早期阶段,由于FasL缺失,细胞的凋亡程序不能正常进行,致使肿瘤细胞逃避免疫监视,在结肠癌的发生中发挥作用.     

活化肝星状细胞促进肠癌奥沙利铂耐药

目的 研究活化肝星状细胞促进肠癌奥沙利铂耐药.方法 Western blot方法及免疫荧光方法检测肝星状细胞α-SMA及CollagenI蛋白表达,同时Western blot方法检测肠癌细胞上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白Vimentin与E-cadh...     

结直肠腺瘤及癌变组织CHOP蛋白表达与细胞凋亡的相关性研究

目的: 检测和探讨结直肠腺瘤及癌变组织C/EBP同源蛋白(CHOP)表达和细胞凋亡及其与临床病理的关系,并分析CHOP与细胞凋亡指数(AI)的相关性。方法: 采用免疫组织化学SABC法和原位末端标记法分别检测59 例正常肠黏膜、67 例结直肠腺瘤和56 例结直肠腺癌组织CHOP表达及细胞凋亡。结果: CHOP在伴高级别上皮内瘤变和恶变的腺瘤和腺癌组织阳性表达率均显著高于正常肠黏膜和早期腺瘤(P<0.05),且与腺瘤大小、病理类型和肠癌大小、浸润深度相关(P<0.05);伴高级别上皮内瘤变和恶变的腺瘤和腺癌组织AI显著高于正常肠黏膜和早期腺瘤(P<0.05),AI与腺瘤大小、病理类型和肠癌大小有关(P<0.05);伴高级别上皮内瘤变和恶变的腺瘤和腺癌组织CHOP阳性表达者AI显著高于阴性表达者(P<0.05),在具有某相同临床病理特征的腺瘤和肠癌组织中CHOP阳性表达者AI显著高于CHOP阴性表达者(P<0.05)。结论: CHOP和细胞凋亡异常共同参与结直肠腺瘤癌变,CHOP表达与细胞凋亡增加有关,CHOP可能通过促细胞凋亡介导腺瘤癌变。     

RBMS3抑制宫颈癌细胞增殖和转移的作用机制研究

目的 研究RNA结合基序单链相互作用蛋白3(RBMS3)对宫颈癌细胞增殖和转移的影响,并探讨其发挥作用的可能机制.方法 采用GEPIA网站分析RBMS3在宫颈癌组织中的表达情况.qRT-PCR和Western blotting检测RBMS3 mRNA和蛋白在宫颈癌组织和细胞系中的表达水平.构建RBMS3过表达慢病毒,感染宫颈癌细胞系Caski,分为NC组和oe-RBMS3组,采用MTS检测各组细胞增殖能力,Transwell实验检测各组细胞转移能力,移植瘤实验检测各组细胞体内成瘤能力.Western blotting检测各组细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白wnt3a、β-catenin及其下游靶蛋白cMYC、cyclinD1、MMP-2的表达.结果 GEPIA网站分析结果显示RBMS3 mRNA在宫颈癌组织中的表达显著低于在正常宫颈组织中的表达.qRT-PCR和Western blotting结果均显示RBMS3 mRNA和蛋白在宫颈癌组织中的表达显著低于其在癌旁组织中的表达,RBMS3 mRNA和蛋白在宫颈癌细胞系中的表达显著低于其在人鳞状上皮永生化细胞H8中的表达.与NC组相比,oe-RBMS3组Caski细胞增殖、转移和体内成瘤能力均降低,细胞中wnt3a、β-catenin、cMYC、cyclinD1、MMP-2蛋白表达均降低.结论 RBMS3可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制宫颈癌细胞增殖和转移能力.     

VAV3蛋白在喉鳞状细胞癌中的表达及作用机制

目的 研究VAV3蛋白在喉鳞状细胞癌组织中的表达情况,及其对喉癌临床分型、淋巴转移等影响,分析其可能的机制.方法 利用免疫组织化学方法检查VAV3蛋白在喉鳞状细胞癌组织及喉部非癌组织中的表达,检测VAV3蛋白对喉鳞状细胞癌侵袭,淋巴转移等影响.结果 VAV3蛋白在喉鳞状细胞癌组织中表达为69.76％,在喉部非癌组织中的表达为10％,前者明显高于后者,差异有统计学意义(x2=11.937,P=0.001).它的表达与临床分型、T分型及淋巴结转移有统计学意义(P＜0.05),与性别、年龄、吸烟、分型之间无统计学意义(P＞0.05).结论 VAV3蛋白在喉癌组织中高表达,且可促进喉癌组织侵袭、转移能力.VAV3蛋白高表达,可作为判断喉癌及预后的一种新的分子标志.     

促凋亡蛋白FasL在结肠肿瘤细胞外源性凋亡中的作用

目的探讨促凋亡蛋白Fas配体（Fas—ligand，FasL）在结肠癌、结肠腺瘤及正常结肠黏膜的表达差异。方法应用免疫组织化学Max Vision^TM快捷法检测促凋亡蛋白FasL在62例结肠癌（肠癌组）、24例结肠腺瘤（腺瘤组）及21例正常结肠黏膜（正常组）组织中的表达。结肠癌Dukes分期为A期21例，B期10例，C期10例，D期16例。在光学显微镜下FasL的表达主要在细胞浆，细胞核和胞膜未见表达，表达程度采用半定量积分法。结果FasL在肠癌组阳性表达率为19．35％（12／62例），明显低于腺瘤组的62．50％（15／24例）和正常组的47．62％（10／21例）；其阳性表达肠癌组与腺瘤组及正常组相比，肠癌组明显低于腺瘤组与正常组，差异有统计学意义（P〈0．01，P〈0．05）；腺瘤组与正常组FasL阳性表达相比未见差异（P〉0．05）；FasL在肠癌组16．67％（2／12例）及腺瘤组26．67％（4／15例）均见有高表达。肠癌组的FasL阳性表达与组织学类型有关，而与性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、血管浸润及远处转移等因素无关。结论结肠腺瘤是结肠癌的早期阶段，由于FasL缺失，细胞的凋亡程序不能正常进行,致使肿瘤细胞逃避免疫监视，在结肠癌的发生中发挥作用。     

泛素特异性蛋白酶10在宫颈鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的:研究泛素特异性蛋白酶10(ubiquitin-specific protease 10,USP10)蛋白在人体宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义.方法:采用免疫组织化学方法检测105例人体宫颈鳞状细胞癌及65例正常鳞状上皮组织石蜡切片中USP10蛋白的表达水平,并分析其表达与临床病理因素之间的相关性.结果:宫颈鳞状细胞癌组织中USP10阳性表达率为41.9%,而宫颈正常鳞状上皮组织中USP10的阳性表达率为61.5%.与正常鳞状上皮组织相比,USP10蛋白在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达明显下调,差异具有统计学意义.同时,USP10蛋白表达与宫颈鳞状细胞癌的FIGO临床分期及肿瘤浸润深度呈负相关,而与E-cadherin,P53蛋白表达呈正相关.结论:宫颈鳞状细胞癌组织中USP10蛋白表达的下调与宫颈鳞状细胞癌的恶性程度及预后相关.     

阿托伐他汀对人NK 细胞杀伤结肠癌细胞的影响及其机制研究

目的:探讨阿托伐他汀对人NK 细胞杀伤结肠癌细胞的影响及其机制。方法:不同浓度的阿托伐他汀作用于3 株结肠癌细胞(HCT-116、SW-480、Caco-2),CCK-8 法测定阿托伐他汀对结肠癌细胞生长抑制率的影响。SCGM 培养基体外扩增人NK 细胞,自动生化分析仪测定NK 细胞对3 株结肠癌细胞的杀伤活性;流式细胞仪检测结肠癌细胞MICA/ B 的表达率。结果:(1)NK 细胞的培养:培养前CD3- CD56+的NK 细胞占外周血单个核细胞的比例为4.5%,培养10 d 时NK 细胞的比例增至93.1%。(2)阿托伐他汀对3 株结肠癌细胞生长抑制率的影响:阿托伐他汀作用48 h 后,在浓度5 ~40 μmol/ L 的4 个实验组中,HCT-116 细胞的生长抑制率较对照组升高(P<0.05)。作用96 h 后,在1.25 ~ 40 μmol/ L 的所有浓度组(6 个)中,HCT-116 细胞的生长抑制率均显著高于对照组(P<0.05)。另外, HCT-116 细胞的生长抑制率随着阿托伐他汀浓度的升高而逐渐上升,相关分析显示,阿托伐他汀的浓度与HCT-116 细胞的生长抑制率呈正相关(r[48 h] = 0.13,r[96 h] = 0.22,P<0.05)。(3)NK 细胞经阿托伐他汀作用96 h 后,除浓度为20 μmol/ L 和40 μmol/ L 时抑制率高于对照组,其他各组对NK 细胞生长无明显影响。(4)阿托伐他汀对NK 细胞杀伤结肠癌细胞活性的影响:NK 细胞对HCT-116 细胞的杀伤活性在阿托伐他汀浓度2.5 ~10 μmol/ L 组均显著高于对照组,对SW-480 的杀伤活性在5 ~20 μmol/ L 组较对照组明显升高,对Caco-2 的杀伤活性在2.5 ~20 μmol/ L 组显著高于对照组(P<0.05),其中同一浓度时对HCT-116 细胞杀伤作用最强。(5)阿托伐他汀对结肠癌细胞MICA/ B 表达的影响:在阿托伐他汀浓度2.5 μmol/ L 及5 μmol/ L 组,HCT-116 细胞MICA/ B 的表达率与对照组比较显著升高(P <0.05),在10 μmol/ L 及20 μmol/ L 组,SW-480 细胞MICA/ B 表达率显著高于对照组(P <0.05),在2.5 ~40 μmol/ L 组,Caco-2 细胞MICA/ B 的表达率均较对照组显著升高(P<0.05)。结论:(1)阿托伐他汀能够呈剂量依赖性抑制结肠癌细胞HCT-116、SW-480 及Caco-2 的生长;(2)阿托伐他汀能够增强NK 细胞对结肠癌细胞的杀伤活性,可能与阿托伐他汀上调结肠癌细胞MICA/ B 的表达有关;(3)阿托伐他汀可以上调3 株结肠癌细胞MICA/ B 的表达率,提高结肠癌细胞的免疫原性。     

miR-496过表达抑制结肠癌细胞生长和转移

目的:研究miR-496过表达对结肠癌细胞生长和转移的影响及其分子机制。方法:运用生物信息学软件筛选miR-496靶向相互作用蛋白;real-time PCR和Western blot法测定结肠癌细胞系HT29、HCT116、SW480以及正常结肠上皮细胞NCM460中miR-496、CTNNB1 mRNA和β-catenin蛋白的表达;运用Lipofectamine 2000将miR-496 mimics转染HT29、HCT116和SW480细胞,分别命名为HT29-miR-496 mimics、HCT116-miR-496 mimics和SW480-miR-496 mimics细胞,转染scramble为阴性对照;运用MTT法、乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒法、克隆形成实验和Transwell分别测定细胞活力、LDH漏出率、克隆形成能力和转移能力;萤光素酶报告基因实验测定miR-496启动子活性;Western blot法测定β-catenin、真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1)、p-4E-BP1、低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6)、p-LRP6、MMP-7、MMP-9、MMP-13以及TIMP-2的蛋白水平。结果:miR-496与β-catenin内源性相互作用;miR-496在HT29、HCT116和SW480细胞中低表达,而在NCM460高表达;β-catenin在HT29、HCT116和SW480细胞中高表达,而在NCM460低表达;培养24 h、48 h、72 h、96 h的HT29-miR-496 mimics、HCT116-miR-496 mimics和SW480-miR-496 mimics细胞活力、LDH漏出率、克隆形成率和转移的细胞数均显著低于对照组(P0.05);萤光素酶报告基因实验结果显示转染miR-496 mimics细胞中的miR-496启动子活性明显增加(P0.05),分别是对照组的1.75倍、2.04倍和1.61倍。Western blot实验结果显示miR-496过表达抑制β-catenin蛋白表达,p-4E-BP1和p-LRP6的蛋白水平降低;siRNA或miR-496过表达介导的β-catenin表达下调能显著抑制MMP-7和MMP-9的表达,促进TIMP-2的表达。结论:miR-496在结肠癌细胞中低表达,在正常结肠上皮细胞中高表达;miR-496过表达抑制结肠癌细胞的生长和转移,其机制是通过抑制Wnt/β-catenin通路进一步抑制MMP-7和MMP-9表达,促进TIMP-2表达,从而抑制结肠癌细胞的恶性表型。     

蟾蜍灵对结肠癌SW-480细胞polo-like kinase-1表达及细胞凋亡的影响

目的：观察蟾蜍灵对人结肠癌细胞系增殖的抑制作用，并探讨其作用机理。 方法： 采用不同浓度的蟾蜍灵作用结肠癌SW-480细胞后，采用MTT法检测细胞的恶性增殖，分别采用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡情况，分别采用Western blotting、Northern blotting分别检测polo-like kinase-1 (PLK1)蛋白、mRNA水平。 结果： 蟾蜍灵能抑制结肠癌细胞的恶性增殖，且与浓度相关。蟾蜍灵能诱导结肠癌细胞凋亡，且呈浓度依赖性。流式细胞仪检测发现，蟾蜍灵将细胞阻滞在G2/M期。蟾蜍灵能下调结肠癌PLK1蛋白、mRNA水平，且呈药物浓度和作用时间依赖性。 结论： 蟾蜍灵有效地抑制结肠癌SW-480细胞增殖，其机制可能与其下调PLK1表达，从而诱导凋亡有关。     

下调lncRNA DNM3OS通过靶向miR-193a-3p增强人直肠癌细胞系SW-480的放疗敏感性

目的 探讨lncRNA DNM3OS对直肠癌SW-480细胞的增殖、凋亡以及放射敏感性的影响及分子机制.方法 选取30例直肠癌患者癌组织及癌旁组织,RT-qPCR检测DNM3OS和miR-193a-3p的表达水平;将抑制DNM3OS的表达载体、过表达miR-193a-3p载体转染至SW-480细胞,将DNM3OS与抑制...     

RACK1高表达促进人结肠癌细胞的生长和增殖

目的：研究RACK1高表达对人结肠癌细胞增殖能力的影响。方法：采用脂质体转染术分别建立 RACK1表达下调的SW620细胞系、RACK1表达上调的SW480细胞系以及对照细胞系;采用CCK-8细胞增殖测定、软琼脂集落形成实验、EdU掺入实验以及流式细胞术检测RACK1表达改变对 SW620和SW480细胞增殖的影响;采用Western blot分析RACK1表达改变对G1/S期限制点调控蛋白Cyclin D1和p27蛋白表达的影响。结果：下调RACK1的表达抑制SW620细胞的生长、软琼脂集落形成能力,降低EdU标记的S期细胞数目,阻滞细胞周期于G1/S期;而上调RACK1的表达增强 SW480细胞的生长、软琼脂集落形成能力,增加EdU标记的S期细胞数目,促进细胞周期G1/S期进程。结论：RACK1高表达促进人结肠癌细胞的生长和增殖。     

Curcumin induces apoptosis in HCT-116 human colon cancer cells in a p21-independent manner

Several micronutrients present in fruits and vegetables exhibit anticancer activity as a result of their actions on molecular targets involved in carcinogenesis and tumor progression. Curcumin, a phenolic phytochemical derived from the rhizome of Curcuma longa, exhibits both cancer-preventative activity and growth inhibitory effects on neoplastic cells. Several studies report that curcumin inhibits cancer cell proliferation and induces apoptosis in cancer cells through p21-mediated cell cycle arrest. Cancer cells that are deficient in p21 are also reported to be more prone to undergo apoptosis in response to a variety of cytotoxic agents. In this study, we determined whether curcumin-induced cytotoxicity in cultures of HCT-116 human colon cancer cells was dependent on p21 status. Curcumin killed wild-type HCT-116 cells in a dose- and time-dependent manner, as measured in an MTT cell viability assay. Moreover, an equivalent cytotoxic effect by curcumin was observed in both p21^+/+ and p21^−/−HCT-116 cells, indicating that curcumin-induced cytotoxicity was p21-independent. Primary cultures of human dermal fibroblasts were less sensitive than HCT-116 colon cancer cells to lower doses of curcumin, suggesting a degree of selectivity for neoplastic cells. Western blot analysis showed that cell death in curcumin-treated cultures of p21^+/+ and p21^−/− HCT-116 cells was associated with a reduction in pro-caspase-3 and PARP-1 cleavage, which are indicative of apoptosis. We conclude that curcumin-induced apoptosis in HCT-116 colon cancer cells does not depend on p21 status.     

双歧杆菌脂磷壁酸对结肠癌细胞Toll样受体表达的影响

目的通过研究双歧什菌脂磷壁酸（lipoteichoic acid，LTA）对结肠癌细胞中Toll样受体（TLR）表达的影响，探讨TLR在启动双歧杆菌LTA抗肿瘤信号转导通路中的作用。方法用RT-PCR检测结肠癌细胞HCT-116经双歧杆菌LTA处理前后11R的表达变化。结果结肠癌HCT-116细胞有TLR的基础表达，且经LTA处理后受体的表达增强，呈剂量依赖件。结论双歧杆菌LTA可上调TLR的表达，提示双歧杆菌LTA诱导肿瘤细胞凋亡的信号转导途径可能由TLR启动。     

磷酸化蛋白质组学鉴定PTPLAD1调控的结肠癌细胞酪氨酸磷酸化蛋白质

目的:用磷酸化蛋白质组学的方法鉴定并分析结肠癌细胞中含蛋白酪氨酸磷酸酶样A结构域蛋白1(PTPLAD1)调控的酪氨酸磷酸化蛋白。方法:运用siRNA技术沉默PTPLAD1的表达,于细胞培养条件下运用氨基酸稳定同位素标记技术(stable lsotope labeling with amino acids in cell culture,SILAC)标记细胞,用酪氨酸磷酸化抗体免疫沉淀富集酪氨酸磷酸化蛋白,用LTQ-Orbitrap XL质谱鉴定因敲低PTPLAD1所出现的差异表达的酪氨酸磷酸化蛋白,进一步利用Ingenuity Pathway Analysis(IPA)软件对这些差异蛋白进行生物信息学分析。结果:用real-time PCR筛选得到有效的siRNA干扰片段,Western blot验证其干扰效果及有效干扰时间。质谱鉴定PTPLAD1调控的差异酪氨酸磷酸化蛋白共20个,其中显著上调的8个,显著下调的10个,主要为转录因子及肿瘤标志物相关蛋白。IPA软件的结果表明PTPLAD1调控的差异酪氨酸磷酸化蛋白的功能主要与器官发育分化、维持组织分化类型及细胞凋亡、增殖相关。结论:成功鉴定出PTPLAD1调控的差异酪氨酸磷酸化蛋白,可以为后续研究PTPLAD1在结肠癌的发生发展中的作用及机理提供基础。     

Deep sequencing identifies deregulation of microRNAs involved with vincristine drug-resistance of colon cancer cells

Background: Vincristine (VCR) is a chemical that is widely used in tumor therapy. While long-term use can make tumor cells resistant to VCR, the underlying mechanisms of this resistance are still unclear. Objective: This study aimed at investigating the role of microRNA (miRNA) in colon cancer drug resistance. Methods: HCT-8 colon carcinoma cells were cultured and treated with different VCR concentrations to establish an HCT-8/VCR resistant cell line. Whole-genome screens, HiSeq 2500 sequencing, and bioinformatics methods were used to detect and analyze differences in miRNA expression between the drug-resistant HCT-8/VCR cells and non-resistant HCT-8 cells. Differential expression profiles of miRNAs were constructed based on sequencing result. Results: The HCT-8/VCR resistant colon carcinoma cell line was established. With regard to the difference in drug resistance between HCT-8/VCR and HCT-8 cells, 24 miRNAs showed statistically significant differences in their expression (fold change > 4), of which 17 were up-regulated. Seven miRNAs were down-regulated. Conclusion: As abnormal expression of miRNAs was associated with VCR resistance of colon carcinoma cells, differences in miRNA expression may play a key role in VCR resistance of colon cancer cells.     

抗β-catenin抗体制备及在结肠癌病理检测中的应用

制备和纯化兔抗小鼠β-catenin抗体,分析其在结肠癌诊断中的应用价值。应用重组小鼠β-catenin蛋白,常规免疫雄性新西兰兔制备抗β-catenin抗体,并用盐析法和离子交换层析技术进行纯化,用免疫印迹法(Westernblot)检测β-catenin抗体的纯度和特异性以及结肠癌细胞系SW48和HCT116中β-catenin蛋白的表达。用免疫组化SP法检测β-catenin在正常结肠组织和结肠癌组织中的不同表达。结果,用重组小鼠β-catenin蛋白免疫新西兰兔7周后,应用间接ELISA法检测静脉血中β-catenin抗体效价为1∶204800(A450=1.01)。将β-catenin经SDS-PAGE分离,可见1条相对分子质量(Mr)为92000的蛋白条带。与文献报道相符。用抗β-catenin血清做Westernblot分析显示,在Mr为92000处有1条明显的区带,证明是抗β-catenin特异性抗体。从人结肠癌细胞株SW48和HCT116提取全细胞蛋白,经用所制备的β-catenin抗体反应,均可观察到β-catenin蛋白的表达。人结肠组织切片经抗β-catenin抗体免疫组化染色,在正常结肠组织细胞膜中可见棕黄色颗粒,而在结肠癌组织的细胞浆中可见棕黄色颗粒。制备了高效价、特异性的兔抗β-catenin抗体。用该抗体检测证实,正常结肠组织β-catenin表达在细胞膜中,而结肠癌组织β-catenin则在细胞浆中表达。提示结肠癌发