大鼠骨骼肌成肌细胞与乳鼠心肌细胞共培养对缝隙连接蛋白43表达的影响

目的 观察体外共培养的乳鼠心肌细胞与大鼠骨骼肌成肌细胞(简称L6细胞)以及乳鼠心肌细胞与转染外源性缝隙连接蛋白43(Cx43)基因的L6细胞(简称L6-Cx43细胞)间Cx43蛋白的表达情况,从而探讨共培养时心肌环境对成肌细胞的作用.方法 将乳鼠心肌细胞与4′,6-二脒基-2-苯基吲哚标记的大鼠骨骼肌成肌细胞进行共培养...     

大鼠2型糖尿病早期肾小管细胞聚核糖性死亡

目的 探讨2型糖尿病大鼠肾小管细胞聚核糖性死亡的形态学特点。方法 20只雄性SD大鼠分为正常组和2型糖尿病组,在光学显微镜和
电子显微镜下观察两组大鼠肾小管细胞结构的变化,用免疫组织化学染色、免疫印迹方法检测多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1（PARP-1）蛋白的
表达。结果 2型糖尿病早期肾小管细胞内有大量糖原聚集,细胞肿胀,部分细胞坏死,主要为空泡样坏死。免疫组织化学染色显示,2型糖尿病
肾小管上皮细胞PARP-1表达阳性。免疫印迹法显示2型糖尿病肾小管细胞中PARP-1蛋白表达增强。结论 2型糖尿病早期肾小管细胞发生了坏死,
聚核糖性死亡（PARP-1介导的细胞死亡）参与了2型糖尿病早期肾小管细胞的损伤。     

桉叶油联合维甲酸对SD胎鼠脑组织Pax3和缝隙连接蛋白43表达的影响

目的探讨桉叶油联合维甲酸(RA)对SD胎鼠脑组织转录因子Pax3、缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响。方法 SD孕鼠42只,随机分为6组,每组7只,正常对照组,RA组,溶剂对照组(花生油+RA),3个实验组(桉叶油高、中、低剂量+RA)。正常对照组自由摄食饮水,溶剂对照组于孕第7~14天每只花生油2ml灌胃,每天1次,孕第10天40mg/kg RA灌胃1次。桉叶油3个剂量组于孕第7~14天分别桉叶油300、200和100mg/kg灌胃,每天1次,孕第10天40mg/kg RA灌胃1次。RA组于孕第10天40mg/kg RA灌胃1次。各组于孕21天处死孕鼠取胚胎,Western blotting、免疫组织化学技术检测胎鼠脑组织的Pax3、Cx43蛋白的表达。Real-time PCR检测脑组织Pax3、Cx43 mRNA表达。阿利新蓝和茜素红进行骨骼染色,体视显微镜下观测椎骨发育,脊柱间隙。结果维甲酸灌胃各组胎鼠椎骨数量异常的胎鼠数与正常对照组比较差异无显著性,但在维甲酸灌胃各组中,胎鼠椎骨形态异常的异常率和胎鼠椎骨分裂的百分率最低值分别为55%(桉叶油高剂量+RA组)和45.8%(桉叶油低剂量+RA组),较正常对照组高(0)(P0.05)。在维甲酸灌胃各组中,桉叶油各组胎鼠椎骨形态异常的异常率和胎鼠椎骨分裂的百分率最高值分别为62.5%(桉叶油低剂量+RA组)和55.0%(桉叶油高剂量+RA组),较维甲酸组(73.7%,73.7%)和溶剂对照组低(68.2%,63.6%,P0.05)。与正常组胎鼠比较,维甲酸灌胃各组大脑组织的Pax3、Cx43蛋白及其mRNA的表达较正常组高(P0.05),在维甲酸灌胃各组中,桉叶油灌胃各组胎鼠脑组织Pax3、Cx43蛋白及其mRNA的表达较单纯RA灌胃组低,其差异有统计学意义(P0.05)。结论桉叶油对维甲酸引起胎鼠神经管缺陷有一定的拮抗作用。其机制可能与桉叶油拮抗维甲酸上调胎鼠神经组织的Pax3、Cx43蛋白过度表达有关     

缝隙连接蛋白43和黄体生成素受体在小鼠卵巢中的表达

目的 观察小鼠卵泡发育过程中缝隙连接蛋白43（Cx43）和黄体生成素受体（LHR）在小鼠卵巢中的表达以及黄体生成素(LH)对卵巢Cx43表达的影响,为这两种分子与卵泡发育的关系提供实验依据。 方法 选择出生后1d、4d、7d、2周、3周、4周、6周、8周龄雌性C57小鼠共8组,每组10只,取卵巢。HE染色观察卵巢形态、卵泡发育并测量颗粒细胞体积分数。免疫组织化学和Western blotting观察卵巢组织中Cx43及LHR的表达,Western blotting检测不同浓度黄体生成素（LH）孵育后对卵巢Cx43表达的影响。 结果 HE染色显示,出生1d小鼠卵巢中见原始卵泡,出生7d卵巢内出现初级卵泡,2周时出现窦前卵泡和少量窦卵泡,3周、4周时,出现较多大的窦卵泡,6～8周时出现黄体。卵泡颗粒细胞体积分数在2周后的卵巢中明显增加。Cx43表达在各阶段卵泡的颗粒细胞胞膜上,LHR表达在卵泡膜细胞、颗粒细胞及卵母细胞胞质中。Cx43和LHR出生后2周卵巢中的表达开始明显增加,并随卵泡发育表达逐渐增强,在3周、4周、6周和8周维持相对较高水平。LH体外干预可增加卵巢组织Cx43的表达。 结论 Cx43和LHR在卵泡发育中发挥重要作用,LH可能通过LHR促进卵巢卵泡颗粒细胞Cx43的表达。     

EZH2蛋白在食管癌组织中的表达

目的观察EZH2蛋白在食管鳞癌和腺癌组织中的表达,探讨EZH2蛋白与侵袭、转移程度不同的食管鳞癌及不同病理分级、组织类型食管癌之间的关系。方法采用免疫组织化学染色法、免疫印迹法,分析检测食管癌标本中EZH2蛋白的表达。结果食管癌组织标本均高表达EZH2蛋白,阳性染色定位于细胞核;部分正常组织、癌旁组织也有弱阳性着色。免疫印迹分析表明,食管鳞癌组织EZH2蛋白的表达明显高于癌旁及正常黏膜组织（P〈0．01）。癌旁组织高于正常黏膜组织（P〈0．05）。浸润、转移性食管鳞癌EZH2蛋白表达明显上调,与未发生浸润、转移的相比,差异有显著性（P〈0．05）。高分化鳞癌EZH2蛋白表达低于中、低分化者;但食管腺癌则相反,高分化腺癌的表达高于中、低分化者。结论EZH2蛋白在食管癌高表达,并与其组织类型、侵袭和转移特性密切相关。     

大鼠气管损伤修复过程中ABCG2转运蛋白的表达

目的观察离体大鼠气管上皮损伤修复过程中气管干细胞的动态变化.方法用氟脲嘧啶（5-FU）造成离体大鼠气管上皮损伤,应用间接免疫荧光法和Western blotting动态观测了修复过程中各时间点气管上皮ABCG2的表达.结果 1.5-FU作用12 h后大部分气管上皮脱落,残留的G0期细胞中部分可见ABCG2表达阳性.去除5-FU后3 h细胞数目增多,为扁平状,ABCG2阳性细胞数也随之增多;6～9 h上皮细胞由扁平变为立方,ABCG2阳性细胞数继续增多;24 h上皮细胞呈立方状,并连接成片,ABCG2阳性细胞较前明显减少;48 h气管上皮接近恢复假复层结构,此时仅见极少量ABCG2阳性细胞.正常气管上皮未检测到ABCG2表达.2.Western blotting分析表明,ABCG2表达量的变化趋势与免疫荧光结果一致.结论 ABCG2的表达与干细胞的数量呈正相关,可作为气管干细胞的标志物.     

C反应蛋白表达在2型糖尿病大血管病变中意义

目的:探讨C反应蛋白(CRP)与2型糖尿病(T2DM)大血管病变发生的关系。方法:将T2DM患者60人随机分为合并大血管并发症组与无大血管并发症组,每组各30例,正常对照组30例。检测病人血清中血脂、糖化血红蛋白(HbA1c)和CRP水平。结果:2型DM患者的CRP水平明显高于正常对照组(P<0.05),其中有大血管并发症组显著高于无大血管并发症组(P<0.05),Logstic回归分析显示,CRP水平是T2DM患者大血管并发症发生的独立危险因素。结论:CRP与T2DM的发生相关,升高的CRP是促使T2DM并发大血管病变的独立危险因素。     

糖尿病机械性痛模型大鼠P2X3受体的时空表达

目的探讨糖尿病机械性痛(DMA)模型大鼠中P2X3受体(P2X3R)的时空表达变化。方法腹腔注射链脲菌素(STZ)建立大鼠DMA模型。采用von Frey细丝法测定DMA大鼠机械性痛阈,在不同时间点取腰髓4~5(L4~5)节段的脊髓背角(SDH)和背根神经节(DRG)以及足底皮肤,通过免疫荧光观察P2X3R阳性产物的表达变化。进一步Western blotting检测SDH和DRG中P2X3R蛋白的变化。结果与对照组(CON组)相比,注射STZ 7d后大鼠机械性痛阈显著降低,在14d时达到最低并持续至28d(P0.05)。免疫荧光和Western blotting结果均显示L4~5节段DRG中P2X3R表达在14d和21d时显著增多,与CON组相比差异有统计学意义(P0.05),28d时恢复至CON组水平;而在SDH及皮肤中,P2X3R表达上调出现在21d和28d(P0.05)。结论在STZ诱导的DMA大鼠机械性痛的不同时程中,DRG、SDH和皮肤中P2X3R的表达均呈现与痛敏变化几乎平行的变化趋势,但后两者比前者的变化在时间上略晚。这些结果说明P2X3R可能在DMA机械性痛敏的维持阶段起重要作用。     

C-反应蛋白在2型糖尿病大血管并发症患者血清中的表达及临床意义

目的:探讨C-反应蛋白(CRP)在2型糖尿病(T2DM)大血管并发症患者血清中的作用及临床价值.方法:T2DM患者分为大血管并发症组(观察组)和无大血管并发症组(对照组)各45例,测定患者CRP浓度、空腹静脉血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbAlc)、空腹胰岛素(Fins)和血脂水平,记录血压水平和体重指数(BMI).结果:(1)观察组血清CRP浓度和血压水平明显高于对照组,相比较有统计学差异(P<0.05);而两组FPG水平和HbAlc值差异无统计学意义(P>0.05).(2)观察组血清TG、Fins水平和BMI明显高于对照组,相比较有统计学差异(P<0.05);而血清两组HDL-C、LDL-C水平差异无统计学意义.结论:联合检测血清CRP及血压、血脂、体质量及胰岛素等指标,对于T2DM大血管并发症患者的早期诊断、预防、治疗及预后评价具有重要的临床意义.     

骨形成蛋白-9于2型糖尿病时在肝组织中的表达

目的 研究2型糖尿病鼠肝组织骨形成蛋白-9(bone morphogenetic proteins-9,BMP-9)基因转录及蛋白表达的变化.方法 将大鼠随机分为2型糖尿病模型组与正常对照组,分别于造模后5、10、20 d处死,以RT-PCR及Western-blot对肝组织BMP-9基因转录及蛋白表达水平进行检测与分析.结果 2型糖尿病模型组BMP-9基因转录及蛋白表达水平与正常组相比均显著性降低(P＜0.05);并且2型糖尿病大鼠5、10、20 d处死组BMP-9基因转录及蛋白表达水平呈逐步下降趋势.结论 2型糖尿病大鼠肝组织BMP-9基因转录及蛋白表达水平较正常显著降低,这一变化可能与2型糖尿病的发生发展相关.     

Mutation R184Q of connexin 26 in hearing loss patients has a dominant-negative effect on connexin 26 and connexin 30

Hearing impairment is the most common sensory disorder worldwide. In a recent study, the authors have shown that a heterozygous missense mutation, p.R184Q, in the connexin 26 (Cx26) is causally related to hearing loss. However, the functional change in the Cx26R184Q mutant remains unknown. This study compared the intracellular distribution and assembly of mutant Cx26R184Q with that of the wild-type (WT) Cx26 and Cx30WT in tet-on HeLa cells and the effect that the mutant protein had on those cells. Fluorescent localization assay of WT Cx26 showed the typical punctuate pattern of gap junction channel between neighboring expression cells. Conversely, the p.R184Q missense mutation resulted in accumulation of the Cx26 mutant protein in the Golgi apparatus rather than in the cytoplasmic membrane. Cx26R184Q coexpressed with either Cx26WT or Cx30WT showed perinuclear localization by bidirectional tet-on expression system, suggesting the impairment of the ability of both WT proteins to intracellular trafficking and targeting to the plasma membrane. Therefore, we proposed that Cx26R184Q has a dominant-negative effect on the function of WT Cx26 and Cx30.     

大鼠创伤性脑损伤中内皮性脂酶表达变化 

目的 探讨内皮性脂酶(EL)在创伤性脑损伤(TBI)后的表达变化及定位情况.方法 应用健康成年SD大鼠40只,成功制备TBI模型31只.通过Western blotting检测脑损伤后EL表达的时相变化,免疫荧光化学方法检测EL在脑组织中的细胞定位.结果 Western blotting显示,大鼠脑损伤后,EL表达逐步增高,伤后3d升至最高点,之后逐渐下降,于损伤后2周时降至最低水平;免疫荧光双标记结果显示EL与神经元的标记物NeuN共定位.与凋亡相关的蛋白Caspase-3和Bcl-2在TBI后表达发生变化,并且细胞凋亡趋势与EL表达变化趋势基本一致.结论大鼠TBI后,EL表达增加,推测EL可能参与脑损伤后神经再生及神经元凋亡过程.     

2型糖尿病鼠脑梗死模型的建立及相关指标分析

目的：在具有胰岛素抵抗特征近似人类2型糖尿病（T2DM）的大鼠身上建立脑梗死模型。方法：SD雄性大鼠120只,其中90只用高脂高糖和链脲佐菌素（STZ）制成T2DM模型,另30只为对照组。对照组和T2DM成模大鼠随机分为假手术组（A1组、B1组）和手术组（A2组、B2组）。采用神经功能缺损量表（NSS）评分、TTC染色与HE染色观察神经功能缺损征、脑梗死体积及病理改变。结果：T2DM成模率为72％,血脂指标与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）,且血脂异常表现与临床T2DM患者近似。A2组NSS评分3—4级者占75％,脑梗死体积为（55．23±9．59）mm^3,脑梗死成模率为75％;B2组NSS评分3—4级者占60％,脑梗死体积为（54．33±6．39）mm^3,脑梗死成模率为53％。结论：高脂膳食结合STZ注射能复制出接近人类T2DM的动物模型,在此基础上制成的脑梗死模型稳定性和重复性好,是研究人类糖尿病脑梗死病理过程较为理想的动物模型。     

孤独症大鼠海马自噬相关蛋白的表达

目的 探讨细胞自噬在孤独症发病中的作用。 方法 健康繁殖期Wistar雌鼠20只(250～260g),雄鼠10只(280～290g),按2∶1比例合笼过夜,次日早上阴道涂片发现精子计为孕1d。在其孕12.5d时,10只雌鼠腹腔注射丙戊酸钠,其子代为孤独症模型组;10只注射同等剂量生理盐水,其子代为正常组。通过比较自梳理实验、三箱实验验证孤独症模型是否成功;Western blotting方法对比正常组与孤独症模型组大鼠生后42d（P42）海马自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1和P62表达的变化。 结果 1.成功建立孤独症动物模型,与正常组比较,自梳理实验显示, 模型组理毛时间较正常显著增加（P<0.05）,三箱实验结果显示,模型组大鼠交互能力障碍、缺乏对新鲜事物的偏好性;2.与正常组相比较,模型组大鼠P42d海马自噬相关蛋白LC3-Ⅱ表达显著降低（P<0.05）,Beclin 1表达显著降低（P<0.05）,P62表达显著升高（P<0.05）。 结论 孤独症大鼠P42d海马自噬活性降低,提示增强自噬可能是一个潜在的治疗策略。     

鼻腔滴入胰岛素改善2型糖尿病大鼠海马阿尔茨海默病样改变

 目的：2型糖尿病（type 2 diabetes, T2D）时大脑出现胰岛素水平下降及胰岛素信号通路下调,使大脑海马tau蛋白出现过度磷酸化的阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)样改变。本研究选取2型糖尿病大鼠,皮下注射及鼻腔滴入胰岛素,观察大脑AD样病变的改变,并探讨其机制。方法：高糖、高脂、高蛋白喂饲3个月后链脲佐菌素腹腔注射制备T2D大鼠模型。运用2种方法干预：鼻腔滴入胰岛素（T2D+I-I）及皮下注射胰岛素（T2D+S-I）。检测血浆葡萄糖、血浆胰岛素和脑脊液胰岛素水平,免疫印记方法检测大脑海马总tau蛋白和tau蛋白部分位点磷酸化状态、胰岛素信号转导途径中关键酶磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)/Akt及糖原合成激酶3β(glycogen synthase kinase 3β, GSK-3β)活性。结果：T2D组大鼠血浆葡萄糖及胰岛素水平显著升高,脑脊液胰岛素水平显著降低,大脑海马组织中tau蛋白呈过度磷酸化状态,PI3K/Akt活性下降, GSK-3β磷酸化水平升高; T2D+I-I组大鼠血浆胰岛素及葡萄糖水平无显著改变,但大脑海马tau蛋白过度磷酸化状态显著好转,PI3K/Akt活性显著升高,GSK-3β活性显著下降; T2D+S-I组大鼠血糖显著下降,但血浆及脑脊液胰岛素水平无显著改变,大脑海马tau蛋白磷酸化水平有轻度改善,但变化不显著。结论：运用鼻腔滴入胰岛素可减轻T2D时大脑海马组织的AD样病变;外周皮下胰岛素注射对T2D时AD样病变无明显作用。     

Prevalent connexin 26 gene (GJB2) mutations in Japanese

The gene responsible for DNFB1 and DFNA3, connexin 26 (GJB2), was recently identified and more than 20 disease causing mutations have been reported so far. This paper presents mutation analysis for GJB2 in Japanese non-syndromic hearing loss patients compatible with recessive inheritance. It was confirmed that GJB2 mutations are an important cause of hearing loss in this population, with three mutations, 235delC, Y136X, and R143W, especially frequent. Of these three mutations, 235delC was most prevalent at 73%. Surprisingly, the 35delG mutation, which is the most common GJB2 mutation in white subjects, was not found in the present study. Our data indicated that specific combinations of GJB2 mutation exist in different populations.     

Spontaneous motor activity in fat-fed, streptozotocin-treated rats: a nonobese model of type 2 diabetes

We investigated the effects of diabetes on the spontaneous motor activities (SMA) of streptozotocin-treated rats fed a high-fat diet (HFD), a new nonobese model of type 2 diabetes. The daily changes in the duration of SMA were assessed via infrared cells, which detected all movements of rats that had been fed for 3 weeks with a standard or HFD and then injected with vehicle or 50 mg/kg of streptozotocin. Five to six days after streptozotocin injection, the daily body weight and the levels of duration of SMA of the diabetic rats were depressed, manifest by a substantial decline in the frequency of occurrence of nocturnal SMA episodes. The dramatic depression of daily duration of SMA levels observed in the rats given a HFD and treated with streptozotocin appears to be related solely to the diabetic state and not to body weight and/or HFD consumption, since the HFD (and/or related metabolic effects) remained ineffective in altering this feature in rats that grow normally. By thoroughly separating the prediabetic and the diabetic phases, we have been able to more readily explore the deleterious effects of the stages of both of these phases on changes in daily SMA levels.