白眉蝮蛇毒精氨酸酯酶Ames试验

目的　研究白眉蝮蛇 (Agkistrodonhalysussuriensis)毒中精氨酸酯酶的致突变作用。 方法　用鼠伤寒沙门细菌营养缺陷型突变株TA97,TA98,TA10 0和TA10 2 ,采用平皿掺入法进行Ames试验 ,将实验分为加和不加代谢激活系统S92组平行试验。精氨酸酯酶设 6个浓度 :10 .0× 10 -3 ,5 .0× 10 -3 ,2 .5× 10 -3 ,1.2 5× 10 -3 ,0 .6 2 5× 10 -3 和 0 .312× 10 -3 U/mL。结果　加和不加代谢激活系统S9两种条件下 ,精氨酸酯酶不诱发鼠伤寒沙门细菌营养缺陷型突株的回复突变。Ames试验结果为阴性。结论　从致突变角度考虑 ,精氨酸酯酶在高于“蝮蛇清栓酶”(主要成分为精氨酸酯酶 )临床治疗剂量约 10 0 0倍的条件下仍然较安全。     

聚乙二醇修饰降纤酶的遗传毒性评价

目的检测聚乙二醇修饰降纤酶的遗传毒性。方法应用鼠伤寒沙门菌回复突变试验(Ames试验)、体外培养CHO细胞染色体畸变试验和小鼠骨髓微核试验检测聚乙二醇修饰降纤酶的遗传毒性。结果 Ames试验结果显示每平皿100、20、4、0.8、0.16 U各个剂量组,在加或不加S9代谢活化系统时对组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门菌TA97、TA98、TA100、TA102及TA1535所诱发的回复突变菌落数均与溶剂对照的突变菌落数相近。体外培养CHO细胞染色体畸变试验结果显示2.5、5.0和10.0 U.mL-1各个剂量组在加S9代谢活化系统于24 h和不加S9代谢活化系统于24 h、48 h培养的CHO细胞染色体畸变率与溶剂对照组比较均无显著差异(P>0.05)。小鼠骨髓微核试验显示425、850、1700 U.kg-1各个剂量组对ICR小鼠的微核诱发率与溶剂对照组比较均无显著差异(P>0.05)。结论聚乙二醇修饰降纤酶对鼠伤寒沙门菌无致突变性,对哺乳动物培养细胞的染色体无致畸变作用,对ICR小鼠无诱发骨髓嗜多染红细胞微核的效应。表明聚乙二醇修饰降纤酶在本实验条件下无遗传毒性。     

人参蜂王浆遗传毒性研究

目的评价人参蜂王浆的遗传毒性,为其实际应用提供安全性毒理学评价依据。方法用鼠伤寒沙门菌突变株TA97、TA98、TA100和TA102,Ames试验采用平板掺入法,受试物人参蜂王浆选择5个剂量级(6.25、12.5、25、50、100μL.皿-1)。结果未处理对照组的自发菌落回变数均在正常范围内,溶剂对照组的菌落回变数与未处理对照组相比无显著差异,阳性对照的菌落回变数均比未处理对照组增加一倍以上。受试物各剂量组(包括加S-9活化和不加S-9活化)的菌落回变数均与未处理对照组无显著差异,且没有剂量反应关系。结论在本试验条件下人参蜂王浆不引起鼠伤寒沙门菌的回复突变数增加,说明该人参蜂王浆无致基因突变作用。     

拉呋替丁鼠伤寒沙门氏菌基因回复突变试验

目的　体外观察拉呋替丁能否诱发鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株的回复突变。方法　Ames试验用TA97、TA98、TA10 0、TA10 2菌株并分加与不加肝微粒体酶活化系统( +/ -S9)试验。结果　拉呋替丁对四个菌株各剂量组的回复菌落数都未超过自然回复菌落数,Ames试验结果为阴性。结论　未见拉呋替丁致突变性。     

富马酸泰诺福韦双特戊酯的遗传毒性研究

目的 检测富马酸泰诺福韦双特戊酯(TDF)的遗传毒性,为临床用药提供理论依据.方法 应用鼠伤寒沙门细菌回复突变试验(Ames试验)、体外培养中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)细胞染色体畸变试验和小鼠骨髓微核试验检测该药物的遗传毒性.结果 该药物对鼠伤寒沙门菌无致突变性,对体外培养CHL细胞染色体无致畸变作用,对昆明小鼠无诱发骨髓嗜多染红细胞微核的效应,三个试验结果均呈阴性.结论 TDF不具有遗传毒性.     

微型细菌回复突变试验方法的建立及验证

目的 建立高通量评价药物遗传毒性的微型细菌回复突变（Ames）试验。方法 采用平皿掺入法进行标准Ames试验,采用6孔板掺入法进行微型Ames试验,两试验均设置阴性对照组和阳性对照组,2组又分别分为代谢活化和非活化2个亚组,各组培养基中分别加入菌液（鼠伤寒沙门菌组氨酸缺陷型菌株：TA97、TA98、TA100、TA102和TA1535）,活化组加大鼠肝微粒体酶（S9）混合液,阳性对照组再加入阳性诱变剂：Dexon（-S9）,应用于TA97、TA98和TA102;NaN₃（-S9）,应用于TA100和TA1535;2-AA（+S9）,应用于TA97、TA98、TA100、TA102和TA1535。凝固后37℃温箱培养约48 h,计数各组回变菌落数。结果 在标准Ames试验中,阴性对照组各个菌株回变菌落数均在本实验室自发回变菌落数正常值范围内。在两试验中,阳性对照组所诱导的回变菌落数均是阴性对照组的2倍以上,标准试验细菌回变菌落数约为微型试验的5倍。结论 在6孔板上进行微型细菌回复突变试验,大大减少了受试物的用量,提高了筛选速度。本实验室建立的微型细菌回复突变试验背景数据,用于遗传毒理的检测是高效可靠的。     

虾青素软胶囊遗传毒性研究

目的 研究虾青素软胶囊的遗传毒性.方法 采用鼠伤寒沙门氏茵回复突变试验(Ames试验)、小鼠骨髓细胞微核试验和小鼠精子畸形试验等实验方法对虾青素软胶囊的遗传毒性进行研究.结果 虾青素软胶囊鼠伤寒沙门氏茵回复突变试验受试物各剂量组回变茵落数均未超过自发回变组回变茵落数的2倍,结果为阴性;小鼠骨髓细胞微核试验和小鼠精子畸形试验受试物各剂量组与空白对照组比较,微核率及精子畸变率无明显差异(P＞0.05),实验结果为阴性.结论 在本实验条件下,虾青素无遗传毒性.     

鼠尾草酸的遗传毒性研究

目的 研究鼠尾草酸(carnosic acid,CA)的遗传毒性。方法 选用鼠伤寒沙门杆菌回复突变(Ames 试验)、体内哺乳动物红细胞微核、精子畸形以及单细胞凝胶电泳(彗星试验)四项致突变生物学试验进行筛选评价。结果 在6.25～50μg/mL 的剂量水平,CA 对鼠伤寒沙门菌株TA97、TA98、TA100、TA102 和TA1535 均无诱变性;此外,在受试剂量下小鼠骨髓嗜多染红细胞微核、小鼠精子畸形以及体内彗星试验的结果均为阴性(与溶剂对照比较,P> 0.05)。结论 在本实验条件下,CA 未见明显遗传毒性。     

白眉蝮蛇毒精氨酸酯酶Ames试验

目的　研究白眉蝮蛇(Agkistrodon halys ussuriensis)毒中精氨酸酯酶的致突变作用。方法　用鼠伤寒沙门细菌营养缺陷型突变株TA97,TA98,TA10 0和TA10 2 ,采用平皿掺入法进行Ames试验,将实验分为加和不加代谢激活系统S₉2组平行试验。精氨酸酯酶设6个浓度:10.0×10^-3,5.0×10^-3,2.5×10^-3,1.25×10^-3,0.625×10^-3 和0.312×10^-3 U/mL。结果　加和不加代谢激活系统S₉两种条件下,精氨酸酯酶不诱发鼠伤寒沙门细菌营养缺陷型突株的回复突变。Ames试验结果为阴性。结论　从致突变角度考虑,精氨酸酯酶在高于“蝮蛇清栓酶”(主要成分为精氨酸酯酶)临床治疗剂量约1000倍的条件下仍然较安全。     

银参胶囊遗传毒性研究

目的探讨银参胶囊的遗传毒性。方法选用SPF级健康ICR小鼠,通过Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠睾丸染色体畸变试验等遗传毒性试验验证银参胶囊的安全性。结果 Ames试验中,银参胶囊在8~5 000μg/皿剂量范围内,无论是否加入哺乳动物肝脏微粒体酶(S9),鼠伤寒沙门菌TA97,TA98,TA100,TA102等4株菌的回复突变菌落数均未出现剂量依赖性增加;微核试验中,2 500,5 000,10 000 mg/kg剂量组均未见骨髓中含微核的嗜多染红细胞数增加;小鼠睾丸染色体畸变试验中,药物质量分数为2 500,5 000,10 000 mg/kg时,细胞的染色体畸变率均未出现剂量依赖性增加。结论银参胶囊未显示致突变作用,可初步判定其在遗传毒性方面是安全的。     

酸枣仁油的致突变作用的研究

目的对酸枣仁油进行毒理学试验,探讨酸枣仁油是否有致突变作用。方法①小鼠急性毒性试验:一次最大限量法。②Ames试验:选用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102试验菌株,采用平板掺入法。③小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验。结果酸枣仁油对雌雄小鼠经口LD50均>10g/kg,为实际无毒级物质;骨髓嗜多染红细胞微核实验和Ames试验未发现破酸枣仁油对小鼠有致突变作用。结论从毒理学角度可以认为酸枣仁油作为保健食品用于人体是安全的。     

微孔板与标准平皿Ames试验比较研究

目的 使用鼠伤寒沙门菌和大肠埃希菌及阳性剂开展基于6孔板、24孔板和标准10 cm平皿的Ames试验，为确立标准化微孔板Ames试验奠定研究基础。方法 6种不同鼠伤寒沙门菌（TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535、TA1537）和1种大肠埃希菌（WP2 uvrA）经鉴定及扩增后，分别使用标准平皿、6孔板和24孔板在有无S9代谢活化条件下使用不同浓度的阳性剂开展平板掺入法Ames试验。所有样本置37℃培养约48 h后进行菌落计数。结果 所有试验条件下均出现浓度相关性的回复菌落形成率增加，且最高浓度条件下的菌落数高于对照组3倍。然而微孔板中可出现阴性背景菌落数过少的情况，阳性剂的用量也不能照搬标准平皿中的浓度设置。结论 本研究所用条件可成功开展基于6孔板和24孔板的Ames试验，其试验条件和背景数据需要经过摸索与积累。     

丙烯酸-2-乙基己酯的3项致突变试验研究

目的验证丙烯酸-2-乙基己酯(2-EHA)的遗传毒性。方法采用鼠伤寒沙门菌回复突变试验(Ames试验),小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠淋巴瘤细胞TK基因突变试。Ames试验设每皿0.08、0.4、2.0、10.0和50.0μl剂量组,另设自发对照组、溶剂对照组和阳性对照组;微核试验设278、555、1 110和2 220 mg/kg·bw剂量组,另设溶剂对照和阳性对照组;TK基因突变试验设12.5、25、50和100μmol/L剂量组,另设溶剂对照和阳性对照组。结果 Ames试验中,加或不加S9的情况下,受试物对TA97、TA98、TA100和TA102菌株均未显示致突变作用。微核试验中,各剂量组微核率与对照组比较,差异无统计学意义。TK基因突变试验两较高剂量组突变频率均高于溶剂对照100×10-6以上,试验结果为阳性。结论综合考虑前期试验结果及国外相关研究,认为丙烯酸-2-乙基己酯具有遗传毒性的可能性较小。     

中药浮海石致突变的实验研究

目的研究中药浮海石致突变性。方法本试验采用鼠伤寒沙门菌回复突变试验(Ames试验),哺乳动物培养细胞(CHL)染色体畸变试验和小鼠骨髓细胞微核试验观察了浮海石的致突变作用。结果浮海石生理盐水浸提液0.5~5000μg/皿剂量下Ames试验结果阴性;250~1000μg/mL剂量下对CHL细胞无损伤作用,10~40g/kg剂量下对小鼠骨髓细胞染色体无致畸变作用。结论浮海石无致突变作用,用于临床是安全的。     

益母草碱对胚胎-胎仔发育毒性和遗传毒性的评价

目的 检测益母草碱的发育毒性和遗传毒性。方法 在SD孕鼠妊娠第6~15天经口灌胃给予500、1 000和2 000 mg/kg体重的益母草碱,同时设溶媒对照组,经口灌胃0.5% CMC-Na溶液。妊娠第20天剖杀孕鼠,分析其生殖毒性。分别采用反映基因突变的鼠伤寒沙门菌回复突变试验（Ames试验）、反映染色体畸变的细胞染色体畸变试验（体外培养CHO）和ICR小鼠骨髓微核试验（体内）检测益母草碱的遗传毒性。结果 在500、1 000和2 000 mg/kg剂量益母草碱的作用下孕鼠的增重与对照组相比,差异均无统计学意义;各受试剂量组孕鼠各项指标与对照组相比,差异均无统计学意义;各剂量组胎鼠各类指标与溶媒对照组相比,无明显差异。Ames试验结果提示：在0.5、5、50、500、5 000 μg/皿受试剂量下,在有或无代谢活化S9系统时,与溶媒对照组相比,受试物对组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门菌（TA97、TA98、TA100、TA102及TA1535）所诱发的回复突变菌落数均相近。染色体畸变试验结果显示：250、500和1 000 μg/ml 3个剂量的受试物,对有或无代谢活化系统S9培养的CHO细胞的染色体畸变率无明显影响。微核试验显示100、500和2 000 mg/kg各个剂量组对ICR小鼠的微核诱发率与溶媒对照组比较均无显著差异（P>0.05）。结论 益母草碱在500、1 000和2 000 mg/kg剂量下未观察到明显的母体毒性、胚胎毒性、胎儿毒性和致畸作用。益母草碱对鼠伤寒沙门菌无致突变性,对哺乳动物培养细胞的染色体无致畸变作用,对ICR小鼠无诱发骨髓嗜多染红细胞微核的效应。上述结果表明在本试验条件下,益母草碱无发育和遗传毒性。     

赤苷脉通注射液的致突变研究

目的探讨中药制剂赤苷脉通注射液的致突变性。方法采用鼠伤寒沙门氏组氨酸营养缺陷型菌株回复突变实验(Ames实验)、中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)染色体畸变实验和小鼠骨髓微核实验来检测赤苷脉通注射液的致突变作用。结果 Ames实验中,赤苷脉通注射液在312.5～5 000μg.皿-1剂量范围内,无论加或不加S9,鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97,TA98,TA100,TA102和TA1535 5株菌的回复突变菌落数均未出现剂量依赖性的增加;染色体畸变实验中,非活化条件或代谢活化条件下,药物质量浓度为1 200,600和300μg.mL-1时,细胞的染色体畸变率均未出现剂量依赖性增加;微核实验中,在1 150,575和287.5mg.kg-1剂量组中均未见骨髓中含微核的嗜多染红细胞数增加。结论在该实验室条件下,Ames实验、CHL细胞染色体畸变实验和小鼠骨髓微核实验结果均为阴性,即中药制剂赤苷脉通注射液无潜在的遗传毒性。     

Rakicidin B药动学和安全性初步研究

目的 对海洋微生物来源的化合物rakicidin B开展药动学和安全性初步评价。方法 采用静脉和口服给药初步研究rakicidin B的药动学和急性毒性。鼠伤寒沙门菌回复突变试验检测rakicidin B的遗传毒性。结果 SD大鼠口服给予5.0mg/kg rakicidin B后血浆中基本检测不到药物;SD大鼠静脉0.2mg/kg,Cmax为490.67ng/mL,AUC(0~0.083)为376.07h·ng/mL;rakicidin B口服毒性低,大鼠口服最大耐受量MTD大于1000mg/kg;静脉毒性MTD大于1.0mg/kg;rakicidin B在本试验所确定的125μg/皿剂量范围内,对鼠伤寒沙门菌回复突变(Ames)标准试验菌株无明显致突变性。结论 Rakicidin B总体安全性好,无急性毒性作用及无遗传毒性。研究结果为rakicidin B进一步的临床前试验研究提供参考。     

乙醇胺某些致突变试验研究

目的检测乙醇胺的诱变性,为其安全性评价提供资料。方法采用3种致突变试验:鼠伤寒沙门菌回复突变试验(Ames试验),小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠淋巴瘤细胞TK基因突变试验。Ames试验设剂量组为0.08、0.4、2.0、10.0和50.0μl/皿,另设空白、溶剂、阳性对照组;微核试验设剂量组为343.75、687.5和1 375.0 mg/kg,另设阴性、阳性对照;TK基因突变试验设剂量组为4、6、8和10 mmol/L,另设阴性、阳性对照组。结果 Ames试验中,加或不加S9的情况下,乙醇胺对TA97和TA100菌株有致突变作用。微核试验中,雌雄鼠微核率均呈现剂量-反应关系;雄鼠低、中两剂量组以及雌鼠中剂量组的微核率与阴性对照组比较,差异具有统计学意义。TK基因突变试验各剂量组突变频率与阴性对照比较,差异均无统计学意义。结论在本次实验条件下,测试剂量范围内,Ames试验、微核试验结果提示阳性,TK基因突变试验显示阴性。乙醇胺遗传毒性尚需结合其他检测系统进行探究和验证。     

降血糖活性成分Bellidifolin遗传毒性研究

目的研究降血糖活性成分Bellidifolin的遗传毒性。方法整体试验采用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验；体外试验采用鼠伤寒沙门菌组氨酸营养缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四个菌株，对Bellidifolin进行Ames实验。结果小鼠骨髓嗜多染红细胞微核发生率结果显示Bellidifolin高、中、低剂量组与阴性对照组比较均差异无显著性(均P＞0.05)；Ames实验显示,在实验设置浓度和加S9或不加S9的实验条件下，受试物对各菌株所诱发的回变菌落数,均未超过对照的2倍。结论实验结果为阴性，未见Bellidifolin有致突变性作用。     

雷公藤内酯醇的遗传毒性评价

目的 观察雷公藤的主要有效成分之一雷公藤内酯醇的遗传毒性。方法 采用鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames试验)、体外培养CHO细胞染色体畸变试验和小鼠骨髓微核试验检测雷公藤内酯醇的遗传毒性。结果 Ames试验提示在每皿1.6~1000 μg受试剂量下,在加或不加S9代谢活化系统时,受试物对组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102及TA1535所诱发的回复突变菌落数均与溶媒对照的突变菌落数相近。体外培养CHO细胞染色体畸变试验结果显示0.01、0.02和0.04 μg/ml 3个剂量的受试物,对加与不加S9代谢活化系统培养的CHO细胞的染色体畸变率无明显影响。小鼠骨髓微核试验设180、360、720 μg/kg 3个剂量,在720 μg/kg剂量时,雷公藤内酯醇有诱发骨髓嗜多染红细胞微核率增高的效应。结论 在本实验条件下,雷公藤内酯醇对鼠伤寒沙门氏菌无致突变性,对哺乳动物培养细胞染色体无致畸变作用,720 μg/kg剂量下对ICR小鼠有诱发骨髓嗜多染红细胞微核率增高的效应。提示雷公藤内酯醇对人体可能具有潜在的遗传毒性。