大鼠局灶性脑梗死后神经细胞凋亡与坏死的时空动态演变

目的:探讨大鼠局灶性脑梗死后神经细胞凋亡与坏死的时间、空间分布的动态演变及二者时空、时效关系的比较。方法:采用光化学法制作大鼠局灶性脑梗死的模型,利用苏木精-伊红染色与TUNEL技术观察局灶性脑梗死3～48h,3～6d后神经细胞凋亡与坏死情况。结果:坏死细胞主要集中于梗死区,凋亡细胞分布于半暗带区,二者均呈半球状向四周放射性扩展;光照后3h梗死中心有大量坏死细胞出现,而凋亡细胞于梗死后6h才出现,随着梗死时间的延长,二者均有明显的增加,坏死细胞于梗死后24h达高峰,凋亡的神经细胞在3d达高峰。结论:局灶性脑梗死后坏死细胞主要位于梗死区,凋亡细胞主要分布于半暗带区,并均呈半球状向四周放射性扩展。细胞凋亡的出现较晚,可能使抗凋亡成为治疗脑梗死的一种有效的途径之一。     

局灶性脑梗死大鼠半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和9的表达：空间分布特征及时间演变规律

目的：观察大鼠局灶性脑梗死后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和9表达的时间和空间分布的动态演变。方法：实验于2004-03／06在山东省泰山医学院微循环重点实验室完成。选择Wistar大鼠84只，随机分为正常组6只、假手术组6只、局灶性脑梗死组72只，局灶性脑梗死组根据光照后时间分为30min，3，6，9，12，24，36，48h，3，4，5，6d共12组，每组6只。采用光化学方法制作大鼠局灶性脑梗死模型。动物处死前1h注射10g／L伊文思兰1mL。正常组不作任何处理，假手术组仅暴露完整的颅骨，按要求时间点麻醉处死大鼠取脑组织，观测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和9的表达采用免疫组织化学分析。结果：参加实验的84只大鼠全部进入结果分析。①脑梗死后30min即有半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和9阳性细胞出现，呈半球状向四周放射样扩展，随脑梗死时间的延长逐渐增多，二者均在48h表达至高峰，但前者表达更显著(P&;lt;0．05)，阳性细胞局限于脑梗死区周围。②正常对照组、假手术组均未发现半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和9的阳性表达。结论：①局灶性脑梗死后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和9表达部位一致，以坏死区为中心呈放射状空间分布特征。②二者均在30min开始表达，48h时半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3较半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9表达增多，这种时间变化规律说明细胞凋亡的级联反应最终通路有放大作用。     

大鼠局灶性脑梗死后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9的表达及白花丹参叶的干预效应

目的：观察大鼠局灶性脑梗死后促进细胞凋亡的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9表达的变化规律及白花丹参叶的保护作用方法：实验于2004—03／06在山东省泰山医学院微循环重点实验室完成。取50只Wistar大鼠，随机分为局灶性脑梗死组和白花丹参叶预处理组两组符25只，每组义按光照后时间分为30min．12，24，48，72h等5个亚组，每亚组5只。造模前，白花丹参叶预处理组大鼠给予20g／kg白花丹参叶水提物灌服，1次／d，连续7d，然后两组同时采用光化学法制作大鼠局灶性脑梗死的模型。利用免疫组化染色技术观察局灶性脑梗死后不同时间点大鼠脑半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9表达的变化，并观察大鼠一般情况。结果：50只大鼠全部进入结果分析。①局灶性脑梗死组大鼠梗死后30min即有半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3，9阳性细胞出现，呈半球状向四周放射样扩展，随梗死时间的延长逐渐增多，二者行均在48h表达至高峰，但半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达更显著（P〈0．05），阳性细胞局限于梗死区周围。②预防性应用白花丹叶水提物后，大鼠出现明显的嗜睡现象，受损皮质表面积红染区、蓝染区明显减小，各时点半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9的阳性反应均明显减少，较单钝梗死组有显性差异（P〈0．05）。结论：局灶性脑梗死后可诱导仁胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9的表达，白花丹参对脑梗死具有保护作用，其分子机制可能为抑制了半胱氨酸天冬氧酸蛋白酶3,9的表达。     

局灶性脑梗死大鼠半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和9的表达空间分布特征及时间演变规律

目的观察大鼠局灶性脑梗死后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和9表达的时间和空间分布的动态演变.方法实验于2004-03/06在山东省泰山医学院微循环重点实验室完成.选择Wistar大鼠84只,随机分为正常组6只、假手术组6只、局灶性脑梗死组72只,局灶性脑梗死组根据光照后时间分为30 min,3,6,9,12,24,36,48 h,3,4,5,6 d共12组,每组6只.采用光化学方法制作大鼠局灶性脑梗死模型.动物处死前1 h注射10 g/L伊文思兰1 mL.正常组不作任何处理,假手术组仅暴露完整的颅骨,按要求时间点麻醉处死大鼠取脑组织,观测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和9的表达采用免疫组织化学分析.结果参加实验的84只大鼠全部进入结果分析.①脑梗死后30 min即有半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和9阳性细胞出现,呈半球状向四周放射样扩展,随脑梗死时间的延长逐渐增多,二者均在48 h表达至高峰,但前者表达更显著(P＜0.05),阳性细胞局限于脑梗死区周围.②正常对照组、假手术组均未发现半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和9的阳性表达.结论①局灶性脑梗死后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和9表达部位一致,以坏死区为中心呈放射状空间分布特征.②二者均在30 min开始表达,48 h时半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3较半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9表达增多,这种时间变化规律说明细胞凋亡的级联反应最终通路有放大作用.     

大鼠局灶性脑梗死后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9的表达及白花丹参叶的干预效应

目的:观察大鼠局灶性脑梗死后促进细胞凋亡的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9表达的变化规律及白花丹参叶的保护作用。方法:实验于2004-03/06在山东省泰山医学院微循环重点实验室完成。取50只Wistar大鼠,随机分为局灶性脑梗死组和白花丹参叶预处理组两组各25只,每组又按光照后时间分为30min,12,24,48,72h等5个亚组,每亚组5只。造模前,白花丹参叶预处理组大鼠给予20g/kg白花丹参叶水提物灌服,1次/d,连续7d,然后两组同时采用光化学法制作大鼠局灶性脑梗死的模型。利用免疫组化染色技术观察局灶性脑梗死后不同时间点大鼠脑半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9表达的变化,并观察大鼠一般情况。结果:50只大鼠全部进入结果分析。①局灶性脑梗死组大鼠梗死后30min即有半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9阳性细胞出现,呈半球状向四周放射样扩展,随梗死时间的延长逐渐增多,二者均在48h表达至高峰,但半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达更显著(P<0.05)。阳性细胞局限于梗死区周围。②预防性应用白花丹参叶水提物后,大鼠出现明显的嗜睡现象,受损皮质表面积红染区、蓝染区明显减小。各时点半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9的阳性反应均明显减少,较单纯梗死组有显著性差异(P<0.05)。结论:局灶性脑梗死后可诱导半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9的表达,白花丹参对脑梗死具有保护作用,其分子机制可能为抑制了半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9的表达。     

缝隙连接在局灶脑梗死脑缺血损伤中的作用

目的：探讨缝隙连接在急性局灶脑梗死的脑缺血损伤中的作用。方法：使用光化学局灶性脑梗死模型，采用免疫组织化学和尼氏染色技术，观察缝隙连接蛋白Cx43表达及甘珀酸预治疗对脑梗死灶体积的影响。结果：光化学局灶性脑梗死后Cx43-LI表达阳性的细胞呈纤维状、斑点状，分布于梗死灶的周边区。于脑缺血后1h出现，12h最显著，至24h开始减少；生理盐水对照组大鼠局灶性脑梗死体积为(182．54&;#177;6．24)μm^3甘珀酸预治疗组大鼠局灶性脑梗死体积为(128．53&;#177;3．39)Vm^3，两者相比差异有显著性意义(t=17，P(0．01)。结论：本研究提示局灶性脑梗死后缝隙连接活动加强并参与脑缺血损伤过程，缝隙连接阻断剂甘珀酸可减轻脑梗死后神经元的损害。     

光化学法诱导小鼠局灶性脑梗死肿瘤坏死因子α表达及髓过氧化物酶活性的变化

目的：分析光化学法诱导小鼠局灶性脑梗死模型脑组织肿瘤坏死因子α表达和髓过氧化物酶活性的变化规律及其相关性。 方法：实验于2004—07／2005—07在泰山医学院脑微循环实验室完成。选用雄性KM小鼠60只，随机分为3组，正常对照组（n=6）、假手术组（n=6）、局灶性脑梗死组（n=48），局灶性脑梗死组按光照后时间分为30min，1，3，6，12，24，48，72h8个亚组，每亚组6只。采用光化学法制作小鼠局灶性脑梗死模型，假手术组除不作光照外其他操作同局灶性脑梗死组。采用免疫组化、酶联免疫吸附法检测梗死侧皮质肿瘤坏死因子α的表达，比色法检测梗死侧皮质髓过氧化物酶的活性，髓过氧化物酶活性可以反映组织中中性粒细胞的浸润程度，活性越高浸润越严重。 结果：60只小鼠均进入结果分析。①脑梗死后肿瘤坏死因子α阳性细胞主要为神经元及胶质细胞，分布于梗死区及其周围。假手术组皮质肿瘤坏死因子α的表达量为（615．7&;#177;16．1）ng／L，局灶性脑梗死组于光照后3h开始明显升高（792．2&;#177;17．8）ng／L，6h达高峰（921．9&;#177;23．9）ng/L，12h开始下降（848．0&;#177;30．6）．s／L，72h恢复至正常水平（625．3&;#177;14．3）ng／L。②假手术组皮质髓过氧化物酶的活性为（7．151&;#177;0．433）nkat／g，局灶性脑梗死组于光照后3h开始明显升高（10．469&;#177;0．600）nkat／g，12h达高峰（15．486&;#177;0．650）nkat／g，24h开始下降（11．052&;#177;0．617）nkat／g，72h恢复至正常水平（7．418&;#177;0．617）nkat／g。③髓过氧化物酶活性变化稍滞后于肿瘤坏死因子α的表达，相关性分析示二者呈正相关（r=-0．953，P〈0．01）。 结论：在光化学法诱导小鼠局灶性脑梗死急性期，肿瘤坏死因子α表达水平与髓过氧化物酶活性呈正相关，提示肿瘤坏死因子α可诱导炎性细胞侵入缺血脑组织，参与脑缺血早期的炎症反应过程。     

光化学法诱导小鼠局灶性脑梗死肿瘤坏死因子α表达及髓过氧化物酶活性的变化

目的:分析光化学法诱导小鼠局灶性脑梗死模型脑组织肿瘤坏死因子α表达和髓过氧化物酶活性的变化规律及其相关性。方法:实验于2004-07/2005-07在泰山医学院脑微循环实验室完成。选用雄性KM小鼠60只,随机分为3组,正常对照组(n=6)、假手术组(n=6)、局灶性脑梗死组(n=48),局灶性脑梗死组按光照后时间分为30min,1,3,6,12,24,48,72h8个亚组,每亚组6只。采用光化学法制作小鼠局灶性脑梗死模型,假手术组除不作光照外其他操作同局灶性脑梗死组。采用免疫组化、酶联免疫吸附法检测梗死侧皮质肿瘤坏死因子α的表达,比色法检测梗死侧皮质髓过氧化物酶的活性,髓过氧化物酶活性可以反映组织中中性粒细胞的浸润程度,活性越高浸润越严重。结果:60只小鼠均进入结果分析。①脑梗死后肿瘤坏死因子α阳性细胞主要为神经元及胶质细胞,分布于梗死区及其周围。假手术组皮质肿瘤坏死因子α的表达量为(615.7±16.1)ng/L,局灶性脑梗死组于光照后3h开始明显升高(792.2±17.8)ng/L,6h达高峰(921.9±23.9)ng/L,12h开始下降(848.0±30.6)ng/L,72h恢复至正常水平(625.3±14.3)ng/L。②假手术组皮质髓过氧化物酶的活性为(7.151±0.433)nkat/g,局灶性脑梗死组于光照后3h开始明显升高(10.469±0.600)nkat/g,12h达高峰(15.486±0.650)nkat/g,24h开始下降(11.052±0.617)nkat/g,72h恢复至正常水平(7.418±0.617)nkat/g。③髓过氧化物酶活性变化稍滞后于肿瘤坏死因子α的表达,相关性分析示二者呈正相关(r=0.953,P<0.01)。结论:在光化学法诱导小鼠局灶性脑梗死急性期,肿瘤坏死因子α表达水平与髓过氧化物酶活性呈正相关,提示肿瘤坏死因子α可诱导炎性细胞侵入缺血脑组织,参与脑缺血早期的炎症反应过程。     

缝隙连接在局灶脑梗死脑缺血损伤中的作用

目的:探讨缝隙连接在急性局灶脑梗死的脑缺血损伤中的作用。方法:使用光化学局灶性脑梗死模型,采用免疫组织化学和尼氏染色技术,观察缝隙连接蛋白Cx43表达及甘珀酸预治疗对脑梗死灶体积的影响。结果:光化学局灶性脑梗死后Cx43-LI表达阳性的细胞呈纤维状、斑点状,分布于梗死灶的周边区。于脑缺血后1h出现,12h最显著,至24h开始减少;生理盐水对照组大鼠局灶性脑梗死体积为(182.54±6.24)μm3,甘珀酸预治疗组大鼠局灶性脑梗死体积为(128.53±3.39)μm3,两者相比差异有显著性意义(t=17,P<0.01)。结论:本研究提示局灶性脑梗死后缝隙连接活动加强并参与脑缺血损伤过程,缝隙连接阻断剂甘珀酸可减轻脑梗死后神经元的损害。     

白细胞介素1受体拮抗剂对大鼠局灶性脑缺血再灌注神经细胞凋亡的影响

目的 探讨白细胞介素1受体拮抗剂（IL-1ra）对大鼠局灶性脑缺血再灌注神经细胞凋亡的影响。方法 取成年雄性SD大鼠24只，随机分为三组，每组8只：假手术组(Sham组)、局灶性脑缺血组(MCAO组)和脑缺血+ IL-1ra干预组。术后24 h断头取脑, 应用TUNEL染色法，检测梗死灶周围神经细胞凋亡情况，进行计数并进行统计学处理。结果 与假手术组相比，局灶性脑缺血组神经细胞凋亡显著增多(P<0.01); 与局灶性脑缺血组相比，IL-1ra干预组神经细胞凋亡显著减少(P<0.01)。结论 IL-1ra可抑制大鼠脑缺血梗死灶周围神经细胞凋亡.     

光化学诱导局灶性脑梗死大鼠小胶质细胞形态变化及环磷酰胺预治疗的作用

目的：探讨大鼠光化学局灶脑梗死后小胶质细胞的形态变化及环磷酰胺预治疗对其变化的影响。方法：实验于2002-01／2003-12在全军神经科学研究所形态实验室完成。选用健康雄性SD大鼠40只，①取其中30只大鼠随机分为实验组25只和对照组5只，实验组按观察时间分为1，3,6，12，24h共5个时间点组，建立大鼠光化学局灶性脑梗死模型；对照组不进行光化学照射，其余同实验组。应用免疫组织化学ABC法观察各组大鼠OX42标记的小胶质细胞的反应。②又随机将其余10只大鼠分为环磷酰胺预治疗组5只和生理盐水对照组5只，环磷酰胺预治疗组于脑缺血前6d腹腔注射环磷酰胺12．6mg／kg，生理盐水对照组给予等体积的生理盐水，于脑梗死后24h观察环磷酰胺预治疗对小胶质细胞反应的影响。结果：40只大鼠均进入结果分析。（亘）光化学局灶性脑梗死后小胶质细胞明显活化，脑梗死半暗带区为高分枝状和杆状为主，梗死灶中心为阿米巴状和圆状；脑梗死的早期以高分枝状和杆状为主，脑梗死的晚期以阿米巴状和圆状小胶质细胞为主。②环磷酰胺预治疗组局灶性脑梗死后24h小胶质细胞活化明显减轻，表现为杆状、圆形。结论：光化学局灶性脑梗死后小胶质细胞明显活化，环磷酰胺预治疗后可明显抑制局灶性脑梗死后小胶质细胞的活化。     

全脑缺血再灌注后神经元凋亡的时相和分布特征

【目的】探讨大鼠全脑缺血再灌注后神经元凋亡的时相和分布特征,为神经元损伤的早期干预和继发性脑损害的防治提供实验依据。【方法】建立大鼠全脑缺血模型,采用TTC染色、原位细胞凋亡检测（原位末端标记法,TUNEL）及AO/EB荧光比色法观察大脑缺血再灌后海马、皮层凋亡发生的数量和分布。【结果】TUNEL显示再灌注3h海马部位即出现散在凋亡细胞,并向皮层区域扩展,24~48 h达高峰;坏死细胞迟于凋亡出现,弥散分布于凋亡细胞周围,再灌注48 h后坏死细胞增多,72 h最多。AO/EB法显示海马、额叶和顶叶凋亡细胞总数分布在再灌注后24 h和72 h达高峰,并显著高于对照组（P〈0.05）。TTC染色证实再灌注后不出现梗死灶,在海马及大脑皮层有弥散性坏死。【结论】全脑缺血再灌后受累神经元经历了由凋亡到死亡的演变过程,对缺血敏感的海马神经元首先受损,并向顶叶和额叶皮层扩展,利用凋亡时间窗进行早期干预可能有益于保护和挽救凋亡前期神经元,减小继发性损害的严重程度。     

内毒素预处理对大鼠急性局灶脑缺血的影响

目的：观察经内毒素预处理后急性局灶脑缺血大鼠脑梗死体积、凋亡细胞数和凋亡抑制基因Bel-2蛋白表达的变化。探讨内毒素预处理对急性局灶脑缺血损伤大鼠脑功能的保护作用。方法：实验于2004-11／2005-02在沈阳市第五人民医院动物室完成。采用Haruo Nagasawa法制作大鼠局灶脑缺血模型。将48只健康成年Wistar大鼠随机分为3组：生理盐水对照组、内毒素预处理组、缺血预处理组，每组16只。内毒素预处理组大鼠在局灶脑缺血模型制备前3d，皮下注射内毒素0．05mg／kg；缺血预处理组大鼠在第一次缺血预处理再灌注3d后再次麻醉大鼠，把插线再次推进到第一次插线深度，停留60min后，将线退出；生理盐水对照组大鼠在局灶脑缺血模型制备前3d，皮下注射生理盐水0．2mL。各组大鼠在局灶脑缺血1h再灌注23h后断头取脑，红四氯氮唑染色观察大鼠脑梗死的体积；多聚甲醛固定，石蜡包埋，连续切片，原位细胞凋亡检测法观察神经细胞凋亡情况，免疫组化染色观察Bel-2蛋白表达的变化。结果：各组大鼠在实验过程中无死亡，均进入结果分析。①红四氯氮唑染色显示缺血预处理组和内毒素预处理组的梗死体积较生理盐水对照组明显减小，差异有显著性意义[（64&;#177;14．74），（71．3&;#177;10．35），（159&;#177;9．79）mm^3,P〈0．01]。②缺血预处理组和内毒素预处理组仅可见散在的凋亡细胞出现于皮质、胼胝体及基底节区。生理盐水对照组梗死灶周围的半暗带内可见大量神经元胶质细胞及部分血管内皮细胞发生凋亡。缺血预处理组和内毒素预处理组梗死灶周围的凋亡细胞数较生理盐水对照组明显减少[（33．5&;#177;7．45），（35．6&;#177;4．18），（57．88&;#177;0．96）个／切片，P〈0．01]。③缺血预处理组和内毒素预处理组缺血侧大脑半球Bel-2阳性细胞数明显增加，生理盐水对照组在缺血侧梗死周边区Bel-2蛋白表达也增加。但缺血预处理组和内毒素预处理组缺血侧大脑半球Bel-2阳性细胞数比生理盐水对照组增加明显[（111．38&;#177;13．59），（105．88&;#177;9．99）（47．5&;#177;11．43），P〈0．01]。结论：小剂量内毒素预处理可以通过调节细胞内凋亡抑制基因Bel-2蛋白的表达诱导抗凋亡，启动内源性保护机制，产生缺血耐受，从而减少梗死面积。     

肌苷对脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和细胞色素C基因表达的影响

背景：细胞色素C(chromosome C，CytC)的释放是细胞凋亡的重要环节之一。肌苷对脑缺血损伤神经细胞凋亡可能具有一定的抑制作用，但其机制尚不十分清楚。目的：研究肌苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和CytC基因表达的影响。设计：随机对照的实验研究。地点和材料：本实验在青岛大学医学院脑血管病研究所和山东省脑血管病防治重点实验室完成。成年健康雌性SD大鼠68只，体质量230～280g，清洁级，由中国科学院上海实验动物中心提供。干预：应用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型。随机分为治疗组(腹腔注射肌苷，100mg／kg)32只和对照组(腹腔注射生理盐水)32只，每组再随机分为缺血1．5h再灌注2，6，12，24h，2，3，7，14d组(n=4)。另外4只作假手术组。原位末端标记和原位杂交技术分别观察神经细胞凋亡和CytC mRNA表达。主要观察指标：脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和CytC mRNA表达。结果：脑缺血再灌注后2h皮质区与纹状体区即出现凋亡细胞并逐渐增加，分别于1d和2d达高峰，之后逐渐减少，至14d接近于假手术组水平；经肌苷治疗后凋亡神经细胞减少，其中再灌注12h～7d较对照组有显著性差异。CytC mRNA于脑缺血再灌注2h开始表达，皮质区12h达高峰，纹状体区1d达高峰，以后逐渐下降；肌苷治疗组CytC mRNA表达于再灌注12h～7d在皮质区、12h～14d在纹状体区较对照组显著降低。结论：肌苷可能通过抑制细胞凋亡及相关基因表达而发挥其神经保护作用，对治疗脑血管病有潜在的应用价值。     

葛根素对局灶性脑缺血/再灌流大鼠神经细胞凋亡的作用

目的：研究葛根素在局灶性脑缺血／再灌流过程中对神经细胞凋亡的作用。方法：测定葛根素干预后局灶性脑缺血鼠脑组织中神经细胞凋亡和突触体钙浓度。结果：葛根素有减少突触体钙超载和神经元阳性凋亡细胞出现率的作用。结论：葛根素有一定的抗神经细胞凋亡的作用，此效应与抑制突触体钙超载有关。     

肌苷对脑缺血再灌注后脑组织细胞周期蛋白D1基因表达的影响

目的：观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)mRNA的表达与神经细胞凋亡的关系以及肌苷的干预作用，从细胞增殖角度探讨肌苷的神经保护作用机制。方法：应用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型，腹腔注射肌苷注射液，应用原位末端标记(TUNEL)和原位杂交技术分别检测大鼠脑缺血再灌流不同时间点皮质区和纹状体区神经细胞Cvclin D1 mRNA的表达与凋亡的变化。结果：脑缺血再灌注2h后皮质区与纹状体区即出现少量凋亡神经细胞，皮质区1d达高峰[(72．8&;#177;2．66)个／视野]，纹状体区2d达高峰[(96．75&;#177;4．37)个／视野]，之后逐渐减少，至再灌注14d[(5．50&;#177;0．65)个／视野]接近假手术组水平[(3．75&;#177;0．85)个／视野]；肌苷治疗组凋亡神经细胞较对照组显著减少；脑缺血再灌流后皮质区与纹状体区的缺血周围区神经细胞Cyclin D1 mRNA的表达于2h逐渐增强，皮质区和纹状体区分别于12h和ld达高峰，以后逐渐下降；肌苷治疗组Cvclin D1 mRNA表达较对照组显著减弱。结论：脑缺血再灌流Cyclin D1 mRNA的表达时序先于凋亡细胞的出现．其异常表达可能诱导了神经元的凋亡。肌苷可在脑缺血再灌注后抑制Cyclin Dl mRNA的表达，从而减少神经细胞凋亡，起到神经保护作用。     

光化学诱导局灶性脑梗死大鼠小胶质细胞形态变化及环磷酰胺预治疗的作用

目的:探讨大鼠光化学局灶脑梗死后小胶质细胞的形态变化及环磷酰胺预治疗对其变化的影响。方法:实验于2002-01/2003-12在全军神经科学研究所形态实验室完成。选用健康雄性SD大鼠40只,①取其中30只大鼠随机分为实验组25只和对照组5只,实验组按观察时间分为1,3,6,12,24h共5个时间点组,建立大鼠光化学局灶性脑梗死模型;对照组不进行光化学照射,其余同实验组。应用免疫组织化学ABC法观察各组大鼠OX42标记的小胶质细胞的反应。②又随机将其余10只大鼠分为环磷酰胺预治疗组5只和生理盐水对照组5只,环磷酰胺预治疗组于脑缺血前6d腹腔注射环磷酰胺12.6mg/kg,生理盐水对照组给予等体积的生理盐水,于脑梗死后24h观察环磷酰胺预治疗对小胶质细胞反应的影响。结果:40只大鼠均进入结果分析。①光化学局灶性脑梗死后小胶质细胞明显活化,脑梗死半暗带区为高分枝状和杆状为主,梗死灶中心为阿米巴状和圆状;脑梗死的早期以高分枝状和杆状为主,脑梗死的晚期以阿米巴状和圆状小胶质细胞为主。②环磷酰胺预治疗组局灶性脑梗死后24h小胶质细胞活化明显减轻,表现为杆状、圆形。结论:光化学局灶性脑梗死后小胶质细胞明显活化,环磷酰胺预治疗后可明显抑制局灶性脑梗死后小胶质细胞的活化。     

内毒素预处理对大鼠急性局灶脑缺血的影响

目的:观察经内毒素预处理后急性局灶脑缺血大鼠脑梗死体积、凋亡细胞数和凋亡抑制基因Bcl-2蛋白表达的变化。探讨内毒素预处理对急性局灶脑缺血损伤大鼠脑功能的保护作用。方法:实验于2004-11/2005-02在沈阳市第五人民医院动物室完成。采用HaruoNagasawa法制作大鼠局灶脑缺血模型。将48只健康成年Wistar大鼠随机分为3组:生理盐水对照组、内毒素预处理组、缺血预处理组,每组16只。内毒素预处理组大鼠在局灶脑缺血模型制备前3d,皮下注射内毒素0.05mg/kg;缺血预处理组大鼠在第一次缺血预处理再灌注3d后再次麻醉大鼠,把插线再次推进到第一次插线深度,停留60min后,将线退出;生理盐水对照组大鼠在局灶脑缺血模型制备前3d,皮下注射生理盐水0.2mL。各组大鼠在局灶脑缺血1h再灌注23h后断头取脑,红四氯氮唑染色观察大鼠脑梗死的体积;多聚甲醛固定,石蜡包埋,连续切片,原位细胞凋亡检测法观察神经细胞凋亡情况,免疫组化染色观察Bcl-2蛋白表达的变化。结果:各组大鼠在实验过程中无死亡,均进入结果分析。①红四氯氮唑染色显示缺血预处理组和内毒素预处理组的梗死体积较生理盐水对照组明显减小,差异有显著性意义[(64±14.74),(71.3±10.35),(159±9.79)mm3,P<0.01]。②缺血预处理组和内毒素预处理组仅可见散在的凋亡细胞出现于皮质、胼胝体及基底节区。生理盐水对照组梗死灶周围的半暗带内可见大量神经元胶质细胞及部分血管内皮细胞发生凋亡。缺血预处理组和内毒素预处理组梗死灶周围的凋亡细胞数较生理盐水对照组明显减少[(33.5±7.45),(35.6±4.18),(57.88±0.96)个/切片,P<0.01]。③缺血预处理组和内毒素预处理组缺血侧大脑半球Bcl-2阳性细胞数明显增加,生理盐水对照组在缺血侧梗死周边区Bcl-2蛋白表达也增加。但缺血预处理组和内毒素预处理组缺血侧大脑半球Bcl-2阳性细胞数比生理盐水对照组增加明显[(111.38±13.59),(105.88±9.99)(47.5±11.43),P<0.01]。结论:小剂量内毒素预处理可以通过调节细胞内凋亡抑制基因Bcl-2蛋白的表达诱导抗凋亡,启动内源性保护机制,产生缺血耐受,从而减少梗死面积。     

大鼠中等程度创伤性脑损伤后神经细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达与活性的时效关系

目的：观察大鼠中等程度创伤性颅脑损伤后神经细胞凋亡及凋亡执行因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达和活性的时间动态演变，并探讨三者之间的时效关系。方法：实验于2004-04／10在解放军第三军医大学创伤、烧伤、复合伤国家重点实验室完成。选择健康SD大鼠48只，随机分为假致伤组8只和损伤组40只，损伤组根据处死时间分为2，12，24，48，72h共5个时相点，每个时相点8只大鼠。损伤组制备中等程度创伤性脑损伤模型，假致伤组仅作颅骨钻孔而不致伤，术后24h处死。观察中度脑损伤后2h-3d伤侧大脑皮质、海马神经细胞凋亡情况采用原位末端标记技术；观察半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达和活性的变化采用免疫组织化学及免疫荧光技术。结果：48只大鼠全部进入结果分析。①各组大鼠中度脑损伤后不同时间点大脑皮质、海马神经细胞凋亡情况：创伤性脑损伤后2h在伤侧皮质和海马区即可见有少量凋亡细胞，并呈逐渐增多趋势，主要分布在伤侧皮质、皮质下白质、海马等区域，12-24h凋亡细胞增多，48-72h达到凋亡高峰，明显高于假致伤组。②各组大鼠中度脑损伤后不同时间点半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达：脑损伤后2h在损伤灶及其周围皮质即有少量的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞，脑损伤后24-48h阳性细胞数量明显增加。脑挫伤后72h半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞数有所下降。假致伤组脑组织偶见半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞。③各组大鼠中度脑损伤后不同时间点半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性变化：脑损伤后损伤灶及附近皮质神经细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性2h开始升高，伤后48h达高峰，损伤侧海马区域神经细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性2h开始升高，24h达高峰，而后开始下降。结论：大鼠创伤性脑损伤后损伤区周围皮质和损伤侧海马神经细胞凋亡数量的变化与伤后时程有关。伤后细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性增加可能是导致细胞凋亡的因素。     

老龄大鼠脑缺血-再灌注神经细胞凋亡变化规律研究

目的　比较研究青年与老龄大鼠脑缺血再灌注 (I/R)后超微结构与神经细胞凋亡特征。方法　采用线栓法建立急性局灶性脑缺血再灌注损伤模型 ,观察缺血 3h及再灌注 3、6、12、2 4和 72 h脑组织超微结构变化及细胞凋亡。结果　老龄大鼠脑缺血 3h和 I/R12 h脑梗死面积较青年大鼠增大。随着 I/R时间延长 ,脑组织细胞损伤逐步加重 ,老龄大鼠较青年大鼠严重。细胞凋亡随着 I/R时间延长而明显增加 ,老龄大鼠出现的早、持续时间长。结论　老年脑缺血再灌注脑梗死面积增大、超微结构损伤和细胞凋亡出现得早且严重。