喉癌的基因治疗进展

喉癌约占全身恶性肿瘤的5.7%～7.6%,其主要病理类型鳞状细胞癌约占93%以上〔1〕。典型喉癌的症状包括声音嘶哑、喉痛、呼吸困难或痰中带血,颈部出现肿块也是其常见症状。研究证明,喉癌的发生、发展是一个长时间、多阶段的过程,在细胞癌变的过程中,细胞周期中的多种调节因子参与     

p16基因和蛋白与喉癌关系的研究进展

喉鳞状细胞癌是常见的头颈部恶性肿瘤，与其他恶性肿瘤一样，喉癌的发生也是一个多因素参与的、多阶段的复杂过程，其中抑癌基因的缺失和功能丧失在肿瘤发生、发展中起着十分重要的作用。p16基因是新近发现的一个重要的抑癌基因，其抑癌作用和在恶性肿瘤中的高频率突变，提示其参与了肿瘤的发生过程。本文对p16基因、蛋白与喉癌关系的研究进展进行综述。     

COX-2与Survivin在不同喉腔病变组织中的表达及其与喉癌发生发展过程的病理关系

目的比较环氧化酶-2和生存素在不同喉腔病变组织中的表达活性,分析其与喉癌发生发展过程的病理关系。方法27例喉鳞状细胞癌、22例喉角化症、12例声带息肉病变组织标本,应用免疫组织化学方法检测其中COX-2和Survivin蛋白表达活性,分析不同指标检测结果与喉癌发生发展过程的病理相关性。结果喉癌Ⅲ～Ⅳ期、喉癌Ⅰ～Ⅱ期、喉角化症、声带息肉组织的COX-2表达阳性率分别为63.6%、43.8%、22.7%、0%,P<0.01;Survivin的表达阳性率分别为72.7%、68.8%、68.1%、8.3%,P<0.01。喉癌原发灶组织标本Survivin的总阳性率为76.8%,与COX-2的表达具有相关性(P<0.05)。结论COX-2和Survivin在喉癌的发生发展过程中发挥重要的交互作用,COX-2的凋亡抑制效应可能通过调控Survivin表达途径而实现。     

喉鳞状细胞癌和喉乳头状瘤中Survivin表达的意义

目的：探讨Survivin蛋白在喉鳞状细胞癌和成人喉乳头状瘤中的表达及其意义。方法：应用免疫组化方法对46例喉鳞状细胞癌、24例癌旁组织和20例喉乳头状瘤以及16例正常喉粘膜标本中Survivin的表达进行检测。结果：Survivin蛋白在喉癌组织、癌旁组织和喉乳头状瘤中的阳性表达率分别为71.74%（33/46）、33.33%（8/24）和40.0%（8/20）,在正常黏膜组织中没有表达,喉癌组中的阳性表达率分别显著高于正常组织、癌旁组织及喉乳头状瘤中的表达率（均P〈0.01）。且发生恶变的喉乳头状瘤Survivin蛋白均为阳性表达。但Sur-vivin阳性表达与喉癌的发生部位、分级、分期、淋巴结转移以及病理分级没有关联。结论：Survivin在喉癌组织中过度表达,参与了喉癌的形成,是喉癌形成的一个早期事件,可望成为预测成人喉乳头状瘤恶变的一个诊断方法。     

喉癌的远处转移和相关因素分析

目的　分析与喉癌远处转移显著相关的因素。方法　回顾 1 990～ 1 995年于中山大学肿瘤防治中心住院治疗的 2 77例喉癌患者 ,对随访中 1 8例出现远处转移的患者进行总结 ,明确喉癌远处转移的发生率、发生部位、时间以及预后情况。同时应用单因素Kaplan Meier和多因素Cox模型分析 2 77例喉癌远处转移的相关因素。结果　喉癌远处转移的发生率为 6 5 % (1 8/ 2 77) ,肺转移占83 3 % (1 5/ 1 8) ,肝转移 1 6 7% (3/ 1 8) ,3例肺转移合并骨转移 (其中椎骨 1例 ,肋骨 1例 ,以及多发性骨转移者 1例 )。 2例初诊入院时即发现远处转移 ,其余患者从初诊入院治疗到发现远处转移的时间间隔为 1～ 1 0 3个月 ,间隔中位时间为 7个月。喉癌远处转移患者的 3年和 5年累计生存率分别为2 3 8%和 1 1 9%。出现远处转移距死亡的间隔时间介于 2～ 77个月 ,间隔中位时间为 4 6个月。喉癌出现肝转移的预后最差 ,最长仅为 4 6个月。对 2 77例喉癌进行单因素Kaplan Meier分析显示病理诊断、鳞状细胞癌病理分化程度、N分期以及临床分期是影响喉癌远处转移的显著因素。多因素Cox模型分析仅有N分期是喉癌远处转移的显著因素 (Wald=7 889,P =0 0 0 5)。结论　喉癌存在一定比率的远处转移 ,主要发生在肺 ,而且预后很差。非鳞状细胞癌     

骨桥蛋白在喉癌组织中的表达

目的探讨骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在喉鳞状细胞癌(简称喉癌)中的表达,并分析其与临床病理学特征以及抗原(CD44v6)的关系.方法采用RT-PCR半定量法及免疫组化SP法检测40例喉癌及癌旁相对正常组织标本中OPN的表达,结合喉癌患者的临床病理学特征及CD44v6的表达进行分析.结果①喉癌组织及癌旁相对正常组织中OPN mRNA的表达率分别为90.0%(36例),17.5%(7例),OPN蛋白的表达率分别为77.5%(31例)、10%(4例);②OPN的表达与淋巴结转移情况、临床分期、病理组织学分级有关,与性别、年龄、原发部位无相关性;③OPN和CD44v6的表达呈显著相关.结论 OPN在喉癌组织中的表达高于癌旁相对正常组织,可能参与了喉癌的发生、发展和转移,并与CD44v6有协同作用.     

喉鳞状细胞癌中表皮生长因子受体基因过表达的研究

目的：研究喉鳞状细胞癌中表皮生长因子受体（EGFR）基因的异常表达与喉鳞状细胞癌发生的相关性.方法：应用RT-PCR方法检测50例喉鳞状细胞癌患者组织标本和喉癌Hep-2细胞系中EGFR基因mRNA表达水平.结果：在60%（30/50）喉鳞状细胞癌及喉癌Hep-2细胞系中检测到EGFR基因的过表达.结论：EGFR基因的过表达与喉癌发生及发展有关.     

bcl-2基因家族在喉鳞癌组织中的表达及意义

目的探讨与细胞凋亡相关基因bcl-2,bcl-xl,bcl-xr与bax在喉鳞癌组织中的表达及其临床意义.方法应用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)、琼脂糖凝胶电泳技术检测48例喉鳞癌组织和30例声带息肉组织.结果 30例声带息肉组织中bcl-xl,bcl-xr,bax分别扩增6.67%(2/30),13.33%(4/30)与29.16%(14/30).喉癌组织中64.58%(31/48)有bcl-2扩增,83.33%(40/48)有bcl-xl扩增,75.00%(36/48)有bcl-xr扩增,33.33%(16/48)有bax扩增.bcl-2,bcl-xl,bax,bcl-xr扩增与喉癌的部位、病理分级、TNM分期无关(P>0.05),但bcl-xl,bax扩增与喉癌的淋巴结转移有关(P<0.05).bax与bcl-2,bcl-xl,bcl-xr在喉癌的表达两者比较,有统计学意义.结论与细胞凋亡相关基因bcl-2,bcl-xl,bcl-xr与bax在喉癌中的异常表达是喉癌发生的原因之一.抑制凋亡基因bcl-2,bcl-xl,bcl-xr在喉癌中高表达,促进凋亡基因bax在喉癌中低表达对喉癌的发生起着重要作用.bcl-xl,bax表达与喉癌淋巴结转移有比较密切的联系,且二者相比有统计学意义.Bcl-xl高表达,bax低表达可能预示着肿瘤具有较强的转移和增殖能力.     

喉鳞状细胞癌血管抑素和内皮抑素mRNA的表达

目的探讨血管抑素和内皮抑素基因在喉,鳞状细胞癌发展过程中的作用及意义。方法运用RT-PCR方法检测45例喉鳞状细胞癌组织及21例声带息肉中血管抑素和内皮抑素基因的表达,并观察它们的表达水平与喉鳞状细胞癌临床病理特征的关系。结果血管抑素和内皮抑素在喉癌组织中表达阳性率分别为71.1%和88.9%,高于声带息肉中的4.8%和14.3%。血管抑素的mRNA表达与喉癌的淋巴结转移及临床分期正相关(P<0.05),与原发部位、组织学分级和T分级无明显相关(P>0.05)。内皮抑素的mRNA表达与喉癌T分级、淋巴结转移及临床分期有关(P<0.05),与原发部位和组织学分级无明显相关(P>0.05)。结论血管抑素和内皮抑素在喉癌发展过程中具有重要意义,人工上调它们的表达将可能成为喉癌生物学治疗的有效方法。     

喉癌组织中热休克蛋白和人乳头状瘤病毒的相关性

目的 探讨喉鳞状细胞癌（简称喉癌）组织中热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70）和人乳头状瘤病毒1 6E7（human papiloma-virus 1 6E7,HPV16E7）蛋白的表达及其在喉癌发生和发展过程中的相互关系.方法 用免疫组织化学方法检测78例喉癌、24例声带息肉和10例癌周喉组织标本中HSP70和HPV16E7蛋白的表达.结果 在喉癌组织、声带息肉和癌周喉组织中HSP70的阳性表达率分别为69.2%,8.3%和0%,HPV16E7蛋白的阳性表达率分别为43.6%,4.2%和0%,HSP70和HPV16E7蛋白的阳性表达在喉癌组织与声带息肉、癌周喉组织之间均有显著性差异（P＜0.05）;HPV16E7阳性的喉癌组织中HSP70的阳性表达率为85.3%,HPV16E7阴性的喉癌组织中HSP70的阳性表达率为56.8%,二者之间有显著性差异（P＜0.05）.结论 HPV16E7可以诱导喉癌组织中HSP70的高表达,二者在喉癌的发生和发展过程中发挥重要作用;检测HSP70和HPV16E7蛋白的表达可用于喉癌恶性程度的评定.     

喉鳞状细胞癌组织中p63表达的临床意义

目的：探讨p63基因在喉鳞状细胞癌中的表达及其临床意义。方法：用免疫组织化学法检测63例喉鳞状细胞癌（喉癌组）及其45例癌旁组织（癌旁组）、24例转移淋巴结（转移淋巴结组）、40例未转移淋巴结（未转移淋巴结组）及25例喉非癌组织（非喉癌组）中p63基因的表达。结果：p63基因在喉鳞状细胞癌组织中均为细胞核阳性表达,喉癌组及转移淋巴结组的中、强阳性率为95．2％（60／63）和83．3％（20／24）;癌旁组及未转移淋巴结组中无中、强阳性表达;非喉癌组中1例乳头状瘤为弱阳性表达,其余均为上皮细胞或基底细胞核弱阳性表达。结论：p63可作为喉鳞状细胞癌有特异性的标记物,对喉鳞状细胞癌的早期诊断和鉴别诊断有重要意义。p63可能主动参与了调控喉鳞状细胞癌的发生过程,但在喉鳞状细胞癌的发展过程中处于被激活状态,可能在发展过程中发挥负反馈的作用。     

喉癌树突状细胞的免疫组化研究及其临床意义

树突状细胞(dendritic cells,DC)是一种具有免疫活性的特殊的组织细胞,它在抗肿瘤免疫中的作用越来越受到人们的重视。本文采用免疫组化方法用抗 S-100蛋白抗体对68例喉癌组织,21例非喉癌组织中的树突状细胞的分布进行观察,以了解它与肿瘤生物学行为及预后的关系。结果表明喉癌组织中树突状细胞检出率为63.24%,主要散在于肿瘤细胞间和间质中,非喉癌组织中很少见到DC,DC 的分布情况与喉癌预后有关系(P<0.05),DC 阳性者术后生存率(68.73%)明显高于阴性者(39.32%)。因此,喉癌组织中出现树突状细胞阳性者,预后好。在临床树突状细胞的检测,对判断喉癌预后有一定参考价值。     

喉鳞状细胞癌中Snail mRNA表达及临床意义

目的 探讨Snail mRNA在人喉鳞状细胞癌(简称喉癌)组织中的表达及与临床病理特征的关系,并探讨它在喉癌发生、发展中的作用及其临床应用价值.方法 应用原位分子杂交方法检测Snail mRNA在60例喉癌、30例喉不典型增生和20例喉慢性炎症组织中的表达.结果 60例喉癌组织中Snail mRNA的阳性表达率为70%...     

凋亡抑制蛋白Livin在喉癌中的表达和意义

目的研究凋亡抑制蛋白Livin在喉癌周黏膜、喉不典型增生和喉鳞状细胞癌(简称喉癌)组织中的表达以及与喉癌各临床因素的相关性。方法采用免疫组织化学SP法检测10例喉癌周黏膜,12例喉不典型增生和61例喉癌中Livin蛋白的表达,分析其与喉癌发生、发展及预后的关系。结果Livin在喉癌中阳性表达率为67.21%(41/61);在喉不典型增生中为25% (3/12);在喉癌周黏膜中表达阴性。在喉癌组中Livin高表达与临床分期、T分期、病理分化程度呈显著相关(P<0.05);与年龄、部位、淋巴转移无显著相关(P>0.05),随访发现该蛋白的表达与患者5年生存率无显著相关(P>0.05)。结论凋亡抑制蛋白Livin在喉癌的发生、发展中起着重要作用,尚不能作为判断患者预后的一项指标,该基因有望成为喉癌基因治疗的一个新的有效的靶点。     

凋亡抑制因子Survivin在喉癌中的表达及其意义

检测凋亡抑制因子Survivin在喉癌组织中的表达及其与喉癌的临床、病理特性之间的关系。方法：取石蜡包埋喉鳞状细胞癌标本33例，声带息肉21例，应用免疫组化SABC法检测Survivin在喉癌和声带息肉组织中的表达。结果：Survivin在喉癌组织中的表达率为63.6%,在声带息肉组织中的表达率为28.6%,二者有统计学差异（P<0.05）。而Survivin的表达与喉癌的临床分期、组织学分级、淋巴结转移和患者年龄、性别等无关。结论：凋亡抑制因子Survivin在喉癌组织中高表达，在声带息肉中低表达，与喉癌的发生、发展密切相关。     

环氧化酶-2和S-100~+树突状细胞在喉癌中的表达及意义

目的:探讨环氧化酶-2(COX-2)和S-100+树突状细胞在喉癌组织中的表达及临床意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测65例喉癌组织及34例癌旁阴性喉黏膜组织COX-2和S-100+树突状细胞表达,并分析它们与临床病理参数及预后的关系。结果:COX-2在喉癌的表达率为63.08%(41/65),对照组为14.70%(5/34),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。COX-2表达与T分期、临床分期有关(均P<0.05)。S-100+树突状细胞在喉癌中表达率为61.54%(40/65),对照组为0,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。S-100+树突状细胞表达与喉癌临床分期、淋巴结转移比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示COX-2、S-100+树突状细胞表达与患者无瘤生存率、总生存率有密切关系(P<0.05)。Cox回归分析显示,S-100+树突状细胞是影响预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:喉鳞状细胞癌组织中存在COX-2和S-100+树突状细胞高表达,两者与喉癌的发生发展有关,可作为判断喉癌预后的重要指标。     

喉鳞状细胞癌组织中骨桥蛋白和p53的表达及其临床意义

目的 研究人喉鳞状细胞癌（LSCC）及其癌旁相对正常组织中骨桥蛋白 (OPN)和p53表达水平,并探讨两者的相互关系及其临床病理学意义。方法 采用免疫组织化学SP法,对44例LSCC及癌旁组织手术切除标本常规制作石蜡包埋切片,检测OPN和p53的表达,结合喉癌患者的临床病理学特征进行分析。结果 ①44例喉癌组织中OPN和p53表达阳性率分别为75.0%（33例）和65.9%（29例）,癌旁相对正常组织中分别为13.6%（6例）和2.3%（1例）;②OPN的表达与颈部淋巴结转移、临床分期、病理组织学分级有关,与性别、年龄、原发部位无相关性;③OPN和p53的表达呈显著正相关（r＝0. 360,P＝0.016）。结论 OPN在喉癌组织中的表达高于癌旁相对正常组织,可能参与了喉癌的发生、发展和转移,有可能成为判断预后的重要生物学标记物。     

喉癌病变过程中细胞周期调控因子的流式检测及意义

目的：探讨细胞周期调控基因cyclin E、cyclin D1、p21、p16在喉癌发生、发展中的作用。方法：选取23例声带息肉、69例喉癌前病变、33例喉癌石蜡包埋组织为研究对象,切片脱蜡后制备成细胞悬液,采用流式细胞术检测cyclin E、cyclin D1、p21、p16基因的荧光表达情况。结果：在声带息肉、喉癌前病变、喉癌组织中,cyclin E的阳性表达率分别为13.04%、20.29%和42.42%;cyclin D1的阳性表达率分别为26.09%、43.48%和93.94%;p16的阳性表达率分别为61.90%、40.98%和14.28%;p21的阳性表达率分别为47.62%、23.81%和26.23%。提示cyclin D1、cyclin E的阳性率表达形成声带息肉→喉癌前病变→喉癌组织阳性强度逐渐增强的梯度现象,而p21、p16的阳性表达强度则呈逐渐减弱的现象。结论：①细胞周期调控因子的异常表达是喉癌发生的分子事件;②正性调控因子cyclin D1、cyclin E高表达,负性调控因子p16、p21低表达,即多个与细胞周期相关的正负调控因子失衡在喉癌的发生中可能起着重要作用。     

表皮生长因子受体3和4在喉鳞状细胞癌中的表达及意义

目的：探讨表皮生长因子受体3（ErbB3）与ErbB4基因在喉鳞状细胞癌中的表达及其与喉癌生物学、临床病理特征的关系。方法：采用RT-PCR法,分别对36例喉鳞状细胞癌患者的癌组织、14例切缘正常黏膜及11例良性增生性病变中ErbB3与ErbB4基因的表达进行检测。结果：在喉癌与良性增生性病变中,ErbB3 mRNA过度表达阳性率分别为66.7%和18.2%（P〈0.01）;ErbB4 mRNA过度表达阳性率分别为25.0%和9.1%（P〉0.05）。ErbB3和ErbB4在喉癌组织与切缘正常黏膜中的表达差异均无统计学意义（均P〉0.05）。ErbB3与ErbB4的表达与喉癌的临床病理特征无显著相关。结论：ErbB3与ErbB4在喉癌的发生、发展中具有不同的作用,在切缘正常黏膜中的过度表达对肿瘤复发可能起着一定的作用。     

喉癌组织中FHIT基因蛋白表达的研究

目的:以喉鳞状细胞癌为研究对象,探讨FHIT基因蛋白表达在喉癌发生、发展中的作用及临床意义.方法:用免疫组织化学SP法检测52例喉癌组织、23例癌旁组织及10例正常组织中FHIT基因蛋白的表达,分析在不同临床病理指标下FHIT蛋白表达的情况.结果:FHIT蛋白在正常组织中的阳性表达率(90.0%)及癌旁组织中的阳性率(78.3%)均高于癌组织中的阳性率(46.2%),差异有统计学意义(均P＜0.01).癌组织FHIT蛋白阳性表达率与临床分期和颈淋巴结转移有关,与病理分级无关.结论:喉癌的发生、发展与FHIT抑癌基因的失活有密切关系,FHIT基因很可能是喉癌重要的侯选抑癌基因.