应用液体蛋白芯片-飞行时间质谱技术从血清中筛选胃癌肿瘤标志蛋白

目的:应用液体蛋白芯片-飞行时间质谱技术从胃癌患者血清中筛选潜在的标志蛋白.方法:采用液体蛋白芯片技术和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)对20例胃癌患者和20例正常人的血清蛋白谱进行检测,采用FlexAnalysis3.0和ClinProTools2.1软件进行图谱分析和统计学处理.结果:胃癌患者与正常人血清蛋白质谱比较,胃癌患者血清中有7个差异蛋白高表达,6个差异蛋白低表达,其中,差异最显著的两个蛋白的质荷比(m/z)分别是2863.71Da和4965.08Da.结论:利用液体蛋白芯片-飞行时间质谱技术可从血清中筛选出胃癌潜在的标志蛋白,此技术对于发现和筛选血清中的胃癌标志蛋白是一种很有前途的方法.     

应用液体蛋白心芯片-飞脚质谱技术从血清中筛选胃癌肿瘤标志蛋白

目的：应用液体蛋白芯片-飞行时间质谱技术从胃癌患者血清中筛选潜在的标志蛋白。方法：采用液体蛋白芯片技术和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术（MALDI—TOFMS）对20例胃癌患者和20例正常人的血清蛋白谱进行检测,采用FlexAnalysis3．0和ClinProTools2．1软件进行图谱分析和统计学处理。结果：胃癌患者与正常人血清蛋白质谱比较,胃癌患者血清中有7个差异蛋白高表达,6个差异蛋白低表达,其中,差异最显著的两个蛋白的质荷比（m／z）分别是2863．71Da和4965．08Da。结论：利用液体蛋白芯片-飞行时间质谱技术可从血清中筛选出胃癌潜在的标志蛋白,此技术对于发现和筛选血清中的胃癌标志蛋白是一种很有前途的方法。     

应用SELDI-TOF-MS技术筛选卵巢癌淋巴结定向高转移特性细胞株差异表达蛋白

背景与目的:人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞株SKOV3及其在裸鼠体内建立的淋巴结定向高转移亚克降第二代SKOV3-pm2、第三代SKOV3-pm3细胞株,为卵巢癌转移分子机制的研究提供了细胞模型.本研究应用飞行时间质谱技术结合蛋白芯片分析筛选卵巢癌淋巴结定向高转移与非定向转移细胞株之间的蛋白质表达差异.方法:采用动物实验测定SKOV3、SKOV3-pm2和SKOV3-pm3三种细胞株的淋巴结转移率.应用表面增强激光解吸离子化-飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption and ionization-time of flight-mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术检测各细胞株提取的胞浆总蛋白和分泌蛋白,每种细胞分别采用CM-10型弱阳离子交换芯片和IMAC-3型固定金属亲和芯片检测.应用Ciphergen Protein Software 3.2.0软件和Biomarker Wizard软件对采集3组细胞的蛋白峰进行比较.峰强度相差0.5倍以上者定义为差异蛋白.结果:动物实验显示.细胞株SKOV3及高转移亚克隆SKOV3-pm2、SKOV3-pm3的淋巴结转移率分别为20%、90%和100%,前者与后二者之间的差异有统计学意义(P<0.05).获得CM-10和IMAC3两种蛋白芯片上SKOV3、SKOV3-pm2、SKOV3-pm3细胞株蛋白质谱图谱,对比发现:质荷比(m/z)为6971、7475、9089、9453、10 103、11 655的胞浆蛋白及质荷比(m/z)为4746的分泌蛋白在上述三种细胞株中存在不同程度差异表达.结论:应用SELDI-TOF-MS技术结合固定金属亲和芯片和弱阳离子交换芯片,可有效筛选卵巢癌淋巴结定向高转移特性细胞株中的特异性表达蛋白;寻找到的差异蛋白与淋巴结定向高转移潜能密切相关.     

围手术期肺癌患者血浆特异蛋白质的筛选

肺癌作为威胁全世界人类健康的重大疾病,其死亡率高达13%,且呈逐渐上升趋势[1]。虽然在常见肿瘤标志物中肺癌标志物最多,其中包括蛋白质、内分泌物质、酶、肽类和各种抗原物质,但总的来说均缺乏特异性,只能作为观察病情变化的参考指标[2]。我们应用表面加强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测肺癌及对照组血浆标本,以期寻找高表达的差异蛋白质。1资料与方法1.1资料肺癌患者32例,男28例,女4例;年龄31~75岁,均经手术证实为非小细胞肺癌。临床分期:Ⅰ期14例,Ⅱ期8例,Ⅲ期9例,Ⅳ期1例。病理类型:腺癌14例,鳞癌11例,腺鳞癌7例。…     

应用SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术筛选正常和肝癌小鼠血清差异蛋白

[目的]应用蛋白质芯片及表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术筛选正常和肝癌小鼠血清差异蛋白。[方法]采用小鼠肝癌细胞株Hepa1-6建立小鼠肝癌模型．分别于接种肝癌细胞后5d、10d、20d处死小鼠,测量肿瘤体积,分离血清,采用弱阳离子蛋白质芯片CM10及SELDI-TOF—MS技术．对正常和肝癌小鼠血清进行蛋白质谱分析。采用BioMarkerWizard软件分析差异蛋白．并经数据库搜索分子量接近的蛋白。[结果]质谱分析共检测出181个蛋白峰．获得13个差异蛋白．其中6个蛋白在肝癌模型小鼠血清中高表达,随肿瘤体积的增大而逐渐升高．7个蛋白在肝癌模型小鼠血清中低表达。随肿瘤体积的增大而逐渐降低。经蛋白质数据库搜索．有14个蛋白的分子量与这些差异蛋白的分子量最为接近。[结论]检测到的13个差异蛋白质可能是肝癌血清特异性生物标志物。     

血清多肽谱对高级别浆液性卵巢癌诊断价值分析

目的寻找高级别浆液性卵巢癌相关的血清标志,并评价其诊断价值。方法收集2006-07-17-2011-03-30浙江省肿瘤医院卵巢癌血清样本165例,均经病理确诊。采用纳米磁珠结合基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）技术,检测95例高级别浆液性卵巢癌患者、34例其他上皮性卵巢癌患者、36例卵巢良性肿瘤患者和70名健康志愿者血清样本,并获得血清多肽谱。采用Biomarker Wizard软件分析所获得的多肽谱找出差异蛋白,进一步采用SPSS 12.0中ROC曲线分析差异蛋白,评价其诊断灵敏度和特异性。结果通过34例高级别浆液性卵巢癌患者和34名年龄匹配的健康人群血清多肽谱比较筛选出8个差异峰,P〈0.0001。进一步扩大样本量,经分析ROC曲线面积〉0.9的有2 742、8 568和8 692m/z 3个差异峰;当差异峰2 742m/z取临界值24.31时,其诊断敏感性和特异性分别为90%和84.2%,其中早期卵巢癌诊断敏感性为82.35%。早期（Ⅰ、Ⅱ）与晚期（Ⅲ、Ⅳ）高级别浆液性卵巢癌比较有3 163、4 180和4 288m/z 3个差异峰,P〈0.01,其ROC曲线面积均〉0.7;其中3 163m/z鉴别早晚期高级别浆液性卵巢癌敏感性和特异性分别为52.9%和88.5%。高级别浆液性卵巢癌患者与其他上皮性卵巢癌患者比较无明显差异峰。高级别浆液性卵巢癌患者和卵巢良性肿瘤患者比较有13745、15930和28111m/z 3个差异峰,P〈0.01,ROC曲线面积〉0.7的差异峰有15930和28 111m/z;其中15930 m/z的鉴别诊断敏感性和特异性分别达到52.6%和80.6%。结论 2 742m/z差异蛋白对于早期高级别卵巢癌具有较高的诊断价值,3163m/z在早期和晚期高级别浆液性卵巢癌患者的鉴别诊断中有一定价值,15930m/z对于高级别浆液性卵巢癌和良性卵巢肿瘤鉴别诊断有一定的价值。     

卵巢癌相关基因的筛选与鉴定

背景与目的:卵巢癌在妇科肿瘤中死亡率最高,但是目前对于在卵巢癌发生中的敏感和特异癌基因或抑癌基因的改变还知之甚少。因此,筛选新的卵巢癌相关基因并对其作用进行研究可能有助于探讨卵巢癌发生的机理,并可为卵巢癌的早期诊治提供有意义的生物学指标。本研究旨在获得新的卵巢癌相关基因。方法:在改良mRNA差异显示方法的基础上,结合反向Northern点杂交等鉴定方法,筛选卵巢癌组织和对侧正常卵巢组织之间的差异表达基因,进一步利用生物信息学资源对所获得的差异表达基因片段进行分析。并以差异表达片段作为探针,原位杂交方法检测基因在其它卵巢正常组织和卵巢癌组织中的表达。结果:筛选后得到12个差异表达基因,其中3个为基因组重复序列,5个未知基因序列,4个已知基因序列。原位杂交结果表明锌指蛋白361(Zincfingerprotein361,ZNF361)基因、蛋白酶体PSMA2(proteasomesubunit,alphatype2,PSMA2)基因、位于人1号染色体的未知基因OCRC13和位于9号染色体的未知基因OCRC4在36例卵巢癌组织中的表达均高于其在16例正常卵巢组织中的表达(P<0.05)。尤其是与鼠配子形成期特异表达家族成员-纺锤体蛋白(spindlin)基因高度同源的OCRC4基因,在16例正常卵巢癌组织中未见其表达,而在卵巢癌组织中的表达可达53%(17/36)。结     

蛋白芯片表面增强激光解吸电离-飞行时间-质谱技术在肿瘤早期诊断中的

 蛋白质芯片表面增强激光解吸电离-飞行时间-质谱（surface enhanced laser desorp-tion/ionization time of flight mass spectrometry, SELDI-TOF-MS）技术是近年发展起来的蛋白质组学研究的新技术，在各种肿瘤的早期诊断和研究中，具有广阔的发展前景及临床意义。就其技术原理、组成、在肿瘤早期诊断中的运用及发展前景作一综述。     

应用液体蛋白芯片飞行时间质谱系统研究胃癌的血清蛋白差异表达谱*

目的:应用液体蛋白芯片飞行时间质谱系统分析胃癌患者血清蛋白质表达谱,寻找具有潜在诊断意义的血清标志物。方法:收集血清样本62 例,其中正常对照组（N 组）16 例,胃癌组（T 组）28 例,验证组18 例。经WCX磁珠纯化、MALDI-TOF-MS 及ClinproTools生物信息学方法研究其血清蛋白表达谱,并筛选出差异蛋白质峰,运用数据挖掘算法,构建胃癌的血清蛋白诊断模型,并在验证组中验证其准确性。结果:1）通过对比胃癌组和正常组的血清蛋白质谱图,分析得到 25 个具有显著差异的蛋白质峰,其中差异最显著的前两位质核比分别为 5 248.49 m/z和5 754.25 m/z,其灵敏度分别为 84 .61 %和73 .07 %,特异性分别为 100%和93 .75 %,能很好地区分胃癌组和正常组。2）通过 ANN 的数据挖掘的方法,在具有显著差别的 25 个蛋白质峰中,筛选了组合能力最强的6 个蛋白峰（分别为4 268.05 m/z、5 636.53 m/z、5 248.49 m/z、2 933.15 m/z、1 450.13 m/z和1 349.4m/z）,建立了胃恶性肿瘤的诊断模型,其识别率为100%,预测能力为 90 .59 %,准确性为 100%。将已知信息的验证组 18 例分别代入已建立的模型,特异性和灵敏性分别为75 %和100%。结论:液体蛋白芯片飞行时间质谱系统作为研究蛋白表达谱的工具,能够用于筛选潜在的胃恶性肿瘤的血清标志物,利用其优点并结合统计学的方法,建立血清学胃癌的诊断模型,能为胃恶性肿瘤的筛查提供帮助。      

血清肿瘤标志物人附睾蛋白4在卵巢癌诊断中的研究进展

卵巢癌发病隐匿,且缺少有效的早期诊断方法, 是世界性的健康难题.目前,卵巢癌早期诊断的血清标志物最常用的是糖类抗原125(carbohydrate antigen 125,CA125),但其对卵巢癌的诊断并不特异,有时还会导致不必要的手术.因此,迫切需要寻找一种敏感度和特异度均较高的标志物来提高卵巢癌的诊断水平.新型肿瘤标志物人附睾蛋白4(human epididymis protein 4,HE 4)被认为是一个对卵巢癌早期诊断和卵巢良、恶性肿瘤鉴别诊断具有重要价值的血清标志物.本文就HE4在卵巢恶性肿瘤中的诊断和评估等方面的研究进展进行综述.     

上皮性卵巢癌组织β亚单位绒毛膜促性腺激素基因和蛋白表达

目的：探讨上皮性卵巢癌组织异位β－HCG基因和蛋白表达及其临床意义。方法：分别用逆转寻聚合酶链反应（RT－PCR）、免疫组化（IHC）和放射免疫测定（RIA）方法检测上皮性卵巢癌细胞β－HCG基因和蛋白表达及癌组织培养上清和腹水中的β－HCG的浓度。结果：12例上皮性卵巢癌β－HCG基因表达全部阳性（100％）。7例免疫组化β－HCG蛋白阳性（58．3％）。培养上清和腹水中β-HCG平均浓度分别为0．586U／L和1．638U／L。结论：上皮性卵巢癌组织异位β－HCG的表达频率很高，β－HCG可以作为该肿瘤的标记物，RT－PCR方法的特异性，敏感性较高。     

血浆miR相关指标及Th1Th2类细胞因子与卵巢癌的关系研究

目的 探讨血浆miR相关指标及Th1Th2类细胞因子与卵巢癌的关系.方法 选取58例卵巢癌患者为观察组,同时选取同时体检健康的58例同龄者为对照组,应用定量PCR方法和ELISA法分别检测血浆miR相关指标及Th1Th2类细胞因子水平并进行比较.结果 观察组的血浆miR相关指标及Th1Th2类细胞因子水平均高于对照组,不同TNM分期及组织学分型卵巢癌患者其检测水平也存在明显差异,经Logistic分析显示上述检测指标均与卵巢癌有密切的关系.结论 血浆miR相关指标及Th1Th2类细胞因子均与卵巢癌有密切的关系,上述指标对于疾病的分期及组织学分型也有较高的的检测意义.     

Breast and Ovarian Cancer Screening Practices in Healthy Women with a Strong Family History of Breast or Ovarian Cancer

Studies in women with a family history of cancer demonstrate a wide variability in the uptake of cancer screening measures. Little data exist regarding the breast and ovarian cancer screening practices of women who are members of hereditary breast cancer families. In order to address this issue, we examined the screening behaviors and the determinants of screening in a clinic based group of 216 women with a strong family history of breast or ovarian cancer who were participating in a free genetic counseling and testing research program. At baseline, prior to obtaining genetic counseling or testing, 50% of women ages 30–39, 83% of those age 40–49, 69% of those 50–64, and 53% of those 65 reported having a mammogram in the prior year. Adherence to mammography recommendations was correlated with age, number of relatives with breast cancer, and income. Twenty percent of participants had at least one CA-125 performed and 31% had ever obtained a screening ultrasound. Having at least one relative with ovarian cancer was very strongly associated with ovarian cancer screening [OR=12.3, 95% CI=4.6–33 for CA-125; OR=4.9, 95% CI=2.4,10.1 for ultrasound]. No association between cancer worries/distress and either breast or ovarian cancer screening was found. In conclusion, the breast and ovarian screening uptake in healthy women from hereditary breast cancer families is suboptimal, even for women over age 50, for whom annual mammography is clearly indicated. These findings indicate a need for better education about screening guidelines for high-risk women.     

卵巢癌多药耐药相关基因的生物信息学分析

目的 筛选与挖掘卵巢癌多药耐药相关基因及其生物信息。方法 基于GSE41499、GSE33482、GSE15372和GSE28739等4套来源不同的卵巢癌化疗耐药与敏感基因芯片表达谱数据集, 综合运用差异基因表达分析、基因通路富集分析和文本挖掘等生物信息学方法预测卵巢癌多药耐药相关基因及通路。结果 MAPK信号通路、泛素介导的蛋白质水解、轴突导向、焦点粘连、神经营养素信号通路、癌症通路、肾细胞癌、柠檬酸循环、类萜骨干生物合成、错配修复和亨廷顿氏舞蹈病等11条基因通路是出现频率相对较高的显著性上调通路（P<0.05）,甘油脂、戊醣酸途径、果糖和甘露糖代谢、谷胱甘肽代谢、蛋白酶体、p53信号通路和溶酶体等7条基因通路是出现频率相对较高的显著性下调通路（P<0.05）;进一步的文本挖掘发现,ACO1、BDNF、CXCR4、HMGCR和NRP1等5个上调表达基因（P<0.05）和CDKN2C、FAS和SKP2等3个下调表达基因（P<0.05）可能与卵巢癌多药耐药形成相关。结论 卵巢癌多药耐药机制的形成可能涉及到多种不同的通路和基因,其中ACO1、BDNF、CXCR4、HMGCR、NRP1、CDKN2C、FAS和SKP2等基因可能在其中发挥着关键作用,后续研究将对其进行实验和临床双重验证。     

上皮性卵巢癌术后复发的相关影响因素分析

目的 分析上皮性卵巢癌(EOC)术后复发的相关影响因素.方法 选择124例EOC患者作为研究对象,入选患者均行手术及化疗治疗,并进行长期随访.根据5年随访结果将患者分为复发组(51例)和未复发组(73例).采用单因素和多因素Logistic回归分析EOC术后复发的相关影响因素.结果 两组年龄、分娩次数、组组织学类型、有...     

大肠癌发生与归巢性转移机制及干预的研究

整合素(Integrins)是细胞外基质ECM的主要受体,包括24个成员组成,其α和B亚基都由N-末端的胞外结构域,跨膜结构域和C-末端的胞内结构域等三部分组成,其中B亚基有比α亚基较长的胞内结构域,在50-60个氨基酸左右(β4整合素除外).     

应用基因芯片技术筛选卵巢癌紫杉醇耐药差异表达基因

目的应用基因芯片技术研究人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株OC3/Tax300与其亲本细胞OC3(敏感株)之间的基因表达谱差异,筛选耐药相关基因,探讨基因表达谱差异与卵巢癌肿瘤耐药之间相关性。方法分别提取C3/Tax300与OC3细胞的总RNA并纯化mRNA;将等量的mRNA逆转录,以Cy5和Cy3标记的cDNA做探针,在Biostar H140S基因表达谱芯片上进行杂交。扫描芯片荧光信号图像,用基因图像分析软件对扫描图像进行数字化处理和分析。结果共筛选出显著表达差异基因134条,其中117种基因表达水平下调,17种基因表达上调,主要涉及细胞信号蛋白和传递蛋白,蛋白翻译合成类以及细胞骨架和运动、离子通道和运输蛋白、代谢、发育等14大类相关基因。下调基因主要为EBNA-3、COP9、StIP1,上调的基因主要是JAK2、HSPS、NADH等。结论这些基因表达差异与卵巢癌化疗耐药有关。     

卵巢癌与相关分子转移机制的研究进展

卵巢癌是死亡率最高的妇科肿瘤.由于早期症状不明显,多数患者发现时已是晚期,而晚期患者缺乏有效的治疗方案,其5年生存率不到40％.约70％卵巢癌患者伴有广泛的腹膜转移,一旦发生了转移,卵巢癌患者的预后将大大下降.所以卵巢癌转移的发病机制研究成为亟待解决的问题,该文就目前国内外关于卵巢癌转移的研究进展作一综述.     

FOXC1、FAT4及YAP1蛋白在上皮性卵巢癌组织表达水平及意义研究

目的 探讨FOXC1、FAT4及YAP1蛋白在上皮性卵巢癌组织表达水平及意义.方法 收集了72例上皮性卵巢癌组织标本进行研究,同时选取正常卵巢组织标本60例,采用免疫组化染色法检测FOXC1、FAT4及YAP1蛋白表达.结果 上皮性卵巢癌组织FOXC1蛋白阳性表达率为41.67％,明显低于正常卵巢组织(P<0.05),...     

nm23及NDRG1 蛋白在卵巢癌肿瘤抑郁模型中的表达*

目的:探讨不良心理应激影响肿瘤发生发展的分子学机制。方法:采用蛋白组学方法筛选、鉴定荷卵巢癌裸鼠不良心理应激模型移植瘤中的差异表达蛋白,并用Western Blot验证;用免疫组化SP法检测25例应激组和20例对照组移植瘤中的nm23及NDRG 1 蛋白的表达特点。结果:两组在pI 7.1、Mr=21ku和pI 5.5、Mr=43ku处有两个显著差异点,前一个在应激组表达上调而后一个表达下调,通过质谱分别鉴定为nm23及NDRG 1 蛋白;Western Blot验证结果同蛋白组学的一致;免疫组化显示nm23蛋白在应激组和对照组中阳性表达率分别为100% 和70% ,NDRG 1 蛋白为56% 和85% ,差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论:不良心理应激可能通过激活癌基因和失活抑癌基因来影响肿瘤的发生发展,nm23及NDRG 1 可作为基因研究和基因治疗的靶点。