糖肾汤对大鼠肾小球系膜细胞表达基质金属蛋白酶的影响

目的：观察糖肾汤对高糖培养下肾小球系膜细胞表达基质金属蛋白酶(MMP2)、3mRNA的作用。方法：用糖肾汤含药血清作用于体外高糖培养的肾小球系膜细胞体系，采用逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)法测定MMP2、MMP3mRNA表达。结果：高糖刺激后MMP2mRNA表达明显下降，经糖肾汤干预后有不同程度的上升，而高糖和糖肾汤均对MMP3mRNA无影响。     

贞清方对2型糖尿病大鼠肾组织基质金属蛋白酶-9和基质金属蛋白酶组织抑制物-1表达的调节作用

目的探讨中药贞清方(含女贞子、地龙等中药)对2型糖尿病大鼠肾脏结构及肾组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)表达的影响。方法采用高糖高脂饲料喂养加小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)注射的方法建立2型糖尿病模型。将成模大鼠随机分成模型组,贞清方高、低剂量组,依那普利组,并设立正常对照组,治疗8周。用免疫组化法检测MMP-9、TIMP-1以及纤维连结蛋白(FN)在肾脏的表达,光镜观察肾小球和肾小管形态。结果糖尿病模型组较对照组TIMP-1、FN表达增强,MMP-9表达减弱；治疗组TIMP-1、FN表达较模型组减弱,MMP-9表达增强。其中贞清方高剂量组作用最明显。形态学观察显示治疗组肾小球和肾小管病变比模型组减轻。结论贞清方可能通过影响糖尿病大鼠肾脏MMP-9、TIMP-1的表达而发挥其对糖尿病大鼠肾脏结构的保护作用。     

通肾络1号对高糖状态下大鼠肾系膜细胞金属蛋白酶2及其抑制物2mRNA影响的研究

目的:探讨通肾络1号对在高糖刺激下大鼠肾系膜细胞MMP-2、TIMP-2mRNA转录水平及其对细胞培养上清产物FN、ColⅣ的影响。方法:大鼠肾小球系膜细胞在高糖、高糖 ET-1、高糖 ANGⅡ培养下,给予通肾络1号、缬沙坦刺激后,运用荧光定量PCR方法及ELISA方法检测MMP-2、TIMP-2mRNA转录水平及细胞培养上清产物FN、ColⅣ的含量。结果:通肾络1号能提高高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞MMP-2mRNA转录水平(P<0.05),降低TIMP-2mRNA水平(P<0.05),以及提高MMP2/TIMP2(P<0.05)比值,降低细胞上清FN(P<0.05)、ColⅣ含量(P<0.05)。结论:通肾络1号降低细胞上清FN、ColⅣ含量是通过提高高糖刺激下系膜细胞MMP-2mRNA转录水平,降低TIMP-2mRNA水平,达到提高MMP2/TIMP2比值实现的。     

红花黄色素注射液对膜性肾病大鼠的肾保护作用及对基质金属蛋白酶抑制物-1、基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的:观察红花黄色素注射液对膜性肾病(MN)大鼠模型血液生化指标及对肾组织基质金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,探讨红花黄色素注射液对MN大鼠的肾保护作用和可能机制。方法:将60只SD大鼠随机选取10只为正常对照组,其余50只进行造模,造模成功后将大鼠随机分为模型对照组、贝那普利组、红花黄色素注射液(6.5mg/kg、13mg/kg、26mg/kg)组,每组各10只,各组按相应剂量给药,在给药的第4周末检测大鼠24小时尿蛋白定量(UTP)、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)水平;采用电镜、免疫荧光观察肾脏病理形态学变化,原位杂交技术检测各组大鼠肾组织TIMP-1、MMP-9的表达情况。结果:治疗结束后,与模型对照组比较,各治疗组UTP、TC、TG均明显降低,各治疗组TP、ALB均明显升高。红花黄色素注射液(6.5mg/kg、13mg/kg、26mg/kg)组与贝那普利组UTP、TC、TG、TP、ALB比较差距无统计学意义。与正常对照组比较,各治疗组及模型对照组BUN、Scr均未见明显变化,差异无统计学意义。治疗结束后,与模型对照组比较,各治疗组TIMP-1 mRNA表达显著下调,MMP-9mRNA表达显著上调(P0.05);各治疗组间TIMP-1、MMP-9mRNA比较差距无统计学意义。结论:红花黄色素注射液对MN大鼠的肾保护作用可能与其能够下调TIMP-1、上调MMP-9的表达有关。     

糖肾Ⅰ号方对早期糖尿病肾病血清MMP-2、TIMP-1指标的影响

目的观察糖肾1号方治疗糖尿病肾病前后血清基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-1(TIMP-1)指标变化。方法60例早期糖尿病患者随机分为治疗组和对照组,治疗组加用糖肾1号方(黄芪、丹参、葛根、当归、麦冬、水蛭、益母草等),治疗一月后观察两组治疗前后指标变化。结果糖肾1号方治疗组血清MMP-2水平升高,TIMP-1水平下降,较对照组均明显,具有统计学意义(P<0.05)。结论糖肾1号方治疗早期糖尿病肾病疗效明显。     

糖肾汤对高糖下肾小球系膜细胞TGF-β1表达影响的实验研究

目的：观察高糖对肾小球系膜细胞TGF-β1蛋白及mRNA表达的影响，以及糖肾汤的干预作用。方法：分别用低糖、高糖以及高糖下糖肾汤不同剂量培养肾小球系膜细胞，采用ELISA法测定TGF-β1蛋白含量，逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)法测定TGF-β1ImRNA表达，并以开博通作为阳性药对照。结果：高糖可刺激肾小球系膜细胞TGF-β1蛋白及mRNA的表达，糖肾汤具有对抗高糖刺激作用，且呈现一定的量效关系。结论：糖肾汤对高糖对肾小球系膜细胞的影响具有干预作用。     

糖肾I号方对早期糖尿病肾病血清MMP-2、TIMP-1指标的影响

目的观察糖肾1号方治疗糖尿病肾病前后血清基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-1（TIMP-1）指标变化。方法60例早期糖尿病患者随机分为治疗组和对照组，治疗组加用糖肾1号方（黄芪、丹参、葛根、当归、麦冬、水蛭、益母草等），治疗一月后观察两组治疗前后指标变化。结果糖肾1号方治疗组血清MMP-2水平升高，TIMP-1水平下降，较对照组均明显，具有统计学意义（P〈0．05）。结论糖肾1号方治疗早期糖尿病肾病疗效明显：     

糖肾康对高糖诱导人肾小管上皮细胞分泌基质金属蛋白酶-9及其抑制剂-1的影响

目的探讨糖肾康防治糖尿病肾病的作用机制。方法将体外培养的人肾小管上皮细胞（HK-2）分为空白组、高糖诱导组（30 mmol/L D-葡萄糖）、对照组（30 mmol/L D-葡萄糖＋10%空白血清）和糖肾康低（30 mmol/L D-葡萄糖＋5%糖肾康药物血清）、中（30 mmol/L D-葡萄糖＋10%糖肾康药物血清）、高剂量组（30 mmol/L D-葡萄糖＋20%糖肾康药物血清）。药物干预24、48 h后,ELISA检测细胞培养上清液中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及其抑制剂-1（TIMP-1）的含量。结果 HK-2经高糖诱导后,MMP-9分泌显著减少,TIMP-1分泌显著增加,与空白组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;经糖肾康干预后,MMP-9含量显著上升,TIMP-1含量显著下降,与高糖诱导组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论糖肾康通过调控高糖诱导人肾HK-2纤维化因子的分泌,达到防治糖尿病肾病的目的。     

糖肾安对高糖环境下人肾系膜细胞HO-1、VEGF表达的影响

目的观察糖肾安含药血清对高糖环境下培养的人肾系膜细胞血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1, HO-1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表达的影响。方法选用SPF级雄性Wistar大鼠制备不同质量浓度的糖肾安含药血清,并在高糖环境下培养人肾系膜细胞。实验随机分6组,正常组在正常糖浓度下培养,其余5组(模型组、糖肾安低、中、高剂量组、厄贝沙坦组)在高糖浓度下培养。培养结束后进行实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real time PCR, qRT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测高糖环境下人肾系膜细胞HO-1的m RNA及蛋白表达变化,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测高糖环境下肾系膜细胞上清液中VEGF的质量浓度。结果各给药组HO-1的m RNA及蛋白表达较模型组显著上调(P 0.01),VEGF的质量浓度显著下降(P 0.01)。结论糖肾安干预糖尿病肾病(diabetic kidney disease, DKD)的作用机制可能与上调HO-1的表达,降低VEGF质量浓度有关。     

糖肾宁对早期糖尿病肾病大鼠肾组织非酶糖基化终产物的影响

目的:探讨糖肾宁对早期糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织非酶糖基化终产物(AGEs)的影响。方法:雄性SD大鼠32只,随机取8只为正常对照组(A组),给予普通饲料喂养,4周后,腹腔注射枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液(30mg/Kg);其余24只为糖尿病(DM)造模组,采用高脂饲料喂养,4周后,按30mg/Kg腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立DM大鼠模型,2周后,测定24h尿微量白蛋白排泄量(24hU-A1b),按24hU-A1b排泄量随机分为模型组(B组)、糖肾宁组(C组)、氨基胍组(D组)。8周后,检测各组大鼠血糖、24hU-Alb以及肾组织AGEs的水平。结果:B组大鼠血糖、24hU-Alb、AGEs水平明显高于A组(均P<0.01)。经糖肾宁、氨基胍治疗后,24hU-Alb、AGEs水平均有所下降,与B组大鼠差别有统计学意义(均P<0.01),但仍高于A组(均P<0.05);同时,经糖肾宁治疗后大鼠血糖明显下降,而D组大鼠血糖无明显变化。结论:糖肾宁具有氨基胍类似作用,可抑制蛋白质非酶糖基化反应,并具有降低血糖、24hU-Alb的作用。     

补虚消癥汤对大鼠肾小球系膜细胞MMPs及TIMPs表达的影响

目的：观察补虚消癥汤对大鼠肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinase,MMPs）及基质金属蛋白酶组织抑制剂（Tissue Inhibitor of metalloproteinase,TIMPs）表达的影响,探讨补虚消癥汤对肾小球硬化的防治作用。方法：（1）应用血清药理学方法,制取中药的药理血清。（2）采用肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor,TNF-α）作为刺激因子,诱导大鼠肾小球系膜细胞,使其发生增殖。（3）应用实时荧光定量PCR法、酶联免疫吸附ELISA法观察各组间MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2mRNA表达的情况。结果：1）补虚消癥汤能有效提升MMP-2/TIMP-2的比值,与对照组比较差异,高、中浓度组有统计学意义（P〈0.05）;2）补虚消癥汤能有效提升MMP-9/TIMP-1的比值,与对照组比较差异,均有统计学意义（P〈0.05）。结论：补虚消癥汤能通过影响MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2等的表达,改善MMP-2/TIMP-2、MMP-9/TIMP-1平衡,从而使细胞外基膜降解增加,缓解肾小球损伤。     

黄芪建中汤对脾气虚证肺癌转移小鼠T_IMP_1基因转录的影响

目的:观察黄芪建中汤对脾气虚证肺癌转移小鼠TIMP1基因转录的影响。方法:用苦寒泻下法建立脾气虚证Lewis肺癌转移小鼠模型,药物治疗组小鼠分别给予不同的药物处理,用药15天后,眼球取血,脱颈椎处死小鼠,无菌剥取瘤块,取肺及肿瘤组织。检测血清木糖及胃泌素水平,计算抗转移率,采用RT-PCR方法检测TIMP1-mRNA转录水平。结果:黄芪建中汤低、中、高剂量组均可抑制转移灶,上调TIMP1-mRNA的转录水平,以高剂量组明显,与模型组比较有统计学意义。结论:黄芪建中汤上调TIMP1-mRNA的转录,可能是其抑制肿瘤转移的机理之一。     

加减抵挡汤对肾小球硬化大鼠TIMP-1及PAI-1mRNA表达的影响

目的:探讨加减抵挡汤治疗肾小球硬化的机制。方法:采用单侧肾切除重复阿霉素注射造成肾小球硬化大鼠模型,以加减抵挡汤治疗并用西药科素亚为阳性对照,观察模型组和各治疗组的肾功能及24h尿蛋白定量,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)测定各组大鼠肾组织TIMP-1及其PAI-1的mRNA的表达。结果:加减抵挡汤各组均能降低肾小球硬化大鼠增高的24h尿蛋白,改善肾功能,且加减抵挡汤能下调大鼠肾组织TIMP-1和PAI-1mRNA的表达。结论:加减抵挡汤通过下调肾小球硬化大鼠肾组织TIMP-1和PAI-1 mRNA的表达,延缓肾功能衰竭。     

血府逐瘀汤对大鼠血管平滑肌细胞MMP-2、TIMP-1表达的影响

目的 观察血府逐瘀汤含药血清对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)迁移、侵袭的影响,以及其生成MMP -2、TIMP -1情况,探讨其作用机制.方法 通过划痕损伤实验、Boyden - chamber细胞侵袭实验观察VSMCs的迁移、侵袭,RT - PCR检测血府逐瘀汤含药血清对基质金属蛋白酶-2(MMP -2)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的mRNA表达.结果 与空白对照组比较,血府逐瘀汤高剂量组和中剂量组能显著抑制VSMCs的增殖和迁移(P＜0.05);与空白对照组比较,血府逐瘀汤组均能明显下调MMP-2 mRNA的表达同时上调TIMP-1 mRNA的表达(P＜0.01).结论 血府逐瘀汤含药血清有抑制VASMCs迁移和侵袭的作用,MMP -2表达降低、TIMP -1的表达升高可能是其机制之一.     

猪血清肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶-9/13和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1/2表达的动态变化及下瘀血汤对其影响

目的:研究免疫性肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶9/13和基质金属蛋白酶组织抑制因子1/2表达的动态变化及下瘀血汤对其影响,探讨下瘀血汤抗肝纤维化的机制。方法:猪血清腹腔复制大鼠肝纤维化模型,造模8周后ig下瘀血汤的流浸膏,用药4周后和在造模过程中的1、24、、8周动态处死大鼠,获取标本,检测指标。结果:MMP-2/9的高活性和TIMP-1的高表达贯穿于本模型的始终。MMP-9/13蛋白表达在肝纤维化发生发展过程中有先抑制后升高,再次抑制而后升高的反复过程,并受TIMP-1/2表达影响;下瘀血汤可以提高MMP-9活性,促进MMP-9/13而抑制TIMP-1,2表达。结论:该模型有MMP-9/13和TIMP-1/2表达的失衡;下瘀血汤可通过调控MMp-9/13和TIMP-1/2的表达,降解过度沉积的细胞外基质而发挥抗肝纤维化的作用。     

糖肾颗粒对2型糖尿病大鼠肾脏的保护作用及对炎症的影响

目的：进一步探讨糖肾颗粒对2型糖尿病大鼠肾脏的保护作用及从炎症角度探讨其机制。方法：SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组和糖肾颗粒治疗组（含生药21g/kg）。以高脂高糖饮食加低剂量注射链脲佐菌素（STZ,30mg/kg）复制2型糖尿病大鼠模型。观察各组生化指标,光镜（HE和PAS染色）观察肾脏病理,免疫组化技术检测转化生长因子β1（TGFβ1）蛋白表达,荧光定量PCR技术检测肾脏组织中TGFβ1mRNA表达,ELISA技术检测血清巨噬细胞趋化因子1（MCP-1）、细胞间黏附分子1（ICAM-1）和肿瘤坏死因子α（TNFα）的浓度。结果：实验8周末,模型组血糖、胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、24h尿微量蛋白（U-alb）均升高,肾脏TGFβ1蛋白和mRNA表达增加,血液中MCP-1、ICAM-1和TNFα水平均增高,与正常对照组比较,均P〈0.01;肾间质炎症细胞浸润。与模型组比较,糖肾颗粒治疗可改善生化指标P〈0.05;减轻肾脏病变及炎症细胞浸润;抑制TGFβ1基因和蛋白的表达,P〈0.05;降低血液中炎症因子的含量,ICAM-1和TNFα,P〈0.05。结论：糖肾颗粒对糖尿病肾脏具有保护作用,其部分机制可能通过抑制炎症因子的释放,减少炎症细胞浸润实现的。     

阿魏酸对血管内皮细胞生长因子诱导的血管平滑肌细胞迁移的影响

目的研究单体阿魏酸对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)迁移的影响,并探讨相关机制。方法体外培养VSMCs,在血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)诱导条件下,用单体阿魏酸进行干预,划痕实验、侵袭实验检测对VSMCs迁移的影响;PT-PCR检测对基质金属蛋白酶(matrix metal loproleinase,MMP)-2、MMP-9mRNA表达的影响;Western blot法检测对金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP)-1、TIMP-2蛋白表达的影响。结果 (1)在VEGF诱导条件下,阿魏酸102、103ng/mL可抑制VSMCs的迁移;(2)阿魏酸102、103ng/mL可下调VEGF诱导的VSMCs MMP-9mRNA的表达;(3)阿魏酸102、103ng/mL均可上调VEGF诱导的VSMCs TIMP-2蛋白的表达。结论阿魏酸102、103ng/mL均可抑制VEGF诱导的VSMCs迁移,阿魏酸可通过抑制VEGF诱导的VSMCs MMP-9的表达,促进VEGF诱导的VSMCs TIMP-2的表达起到抑制VEGF诱导的VSMCs迁移的作用。     

参芪泄浊饮对腺嘌呤肾间质纤维化模型大鼠肾组织MMP-9、TIMP-1基因表达的影响

目的:观察参芪泄浊饮对慢性肾衰大鼠肾组织基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)基因表达的影响。方法:采用Yokozawa法复制慢性肾衰大鼠模型,随机分为参芪泄浊饮高剂量组、常规剂量组、氯沙坦组、模型组及空白组,高剂量组、常规剂量组、氯沙坦组分别予参芪泄浊饮水煎液20 m L/(kg·d)、参芪泄浊饮10 m L/(kg·d)、氯沙坦9 mg/(kg·d),模型组与空白组大鼠均予纯净水10 m L/(kg·d),连续给药8周,全部大鼠麻醉后腹腔采血,取左肾,ELLISA法测量血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、丙氨酸转氨酶(ALT)并采用荧光定量PCR检测肾脏MMP-9、TIMP-1 mRNA的表达。结果:1高剂量组Scr水平明显低于常规剂量组、氯沙坦组及模型组;常规剂量组与氯沙坦组无明显差别,且均低于模型组;2高剂量组MMP-9 mRNA表达水平明显高于常规剂量组、氯沙坦组及模型组;常规剂量组与氯沙坦组无明显差别,且均高于模型组;高剂量组TIMP-1 mRNA表达水平明显低于常规剂量组、氯沙坦组及模型组;常规剂量组与氯沙坦组无明显差别,且均低于模型组;3各组ALT水平较空白组比较均无显著差别。结论:参芪泄浊饮可通过调节MMP-9及TIMP-1表达来缓解慢性肾衰肾脏功能的恶化。     

补阳还五汤对脑出血大鼠模型相关蛋白表达的作用

目的:研究补阳还五汤对脑出血大鼠模型基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、谷氨酸(Glu)及PI3K、AKT表达的作用。方法:选取90只SD大鼠,以随机抽签法分成模型组、正常对照组及补阳还五汤组。模型组与补阳还五汤组建立脑出血模型,造模后第2 d。补阳还五汤组行补阳还五汤灌胃,模型组行生理盐水灌胃,给药14 d。比较3组MMP-9、TIMP-1、Glu,脑组织PI3K、AKT以及Bcl-2、BAX蛋白表达。结果:补阳还五汤组、模型组的MMP-9、TIMP-1、Glu均高于正常对照组,且补阳还五汤组MMP-9、Glu低于模型组,而TIMP-1高于模型组(均P<0.05);补阳还五汤组、模型组脑组织PI3K、AKT蛋白表达较正常对照组更高,补阳还五汤组脑组织PI3K、AKT蛋白表达较模型组更高(均P<0.05);补阳还五汤组、模型组脑组织Bcl-2、BAX蛋白表达均高于模型组,补阳还五汤组脑组织Bcl-2、BAX蛋白表达较模型组更高(均P<0.05)。结论:补阳还五汤可改善脑出血大鼠MMP-9、TIMP-1、Glu,可由激活PI3K/AKT信号转导通路,调控Bcl-2、BAX表达,继而发挥保护脑组织作用。     

愈肾颗粒不同药对配伍对肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶-2及其抑制剂-2的影响

目的:考察黄芪、太子参(益气摄血组),牡丹皮、丹参(凉血化瘀组),紫草、益母草(解毒化瘀组)3组药对对大鼠肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)m-RNA表达的影响.方法:应用血清药理学方法,制取中药药对的含药血清.以血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作为刺激因子,培养大鼠肾小球系膜细胞,使其发生增殖.应用反转录多聚酶链反应技术(RT-PCR)观察各组间MMP-2,TIMP-2的基因表达情况.结果:益气摄血组对TIMP-2抑制作用显著,与模型组比较有显著性差异;其他2组虽有抑制趋势,但无统计学意义.3组药对对MMP-2的影响均无统计学意义.结论:黄芪、太子参可通过抑制TIMP-2的基因表达,发挥防治肾小球硬化的作用.