组蛋白去甲基化酶FBXL11抑制牙髓干细胞成骨和成牙本质分化

目的 研究组蛋白去甲基化酶FBXL11对牙髓干细胞定向分化能力的影响.方法 成骨分化诱导培养基诱导牙髓干细胞体外成骨/成牙本质分化.逆转录病毒转染构建过表达FBXL11的牙髓干细胞稳定转染细胞,进行FBXL11获得性功能研究.碱性磷酸酶活性实验及碱性磷酸酶染色检测成骨/成牙本质分化早期分化指标-碱性磷酸酶活性.茜素红染色及钙离子定量分析检测牙髓干细胞体外成骨/成牙本质分化能力.实时定量RT-PCR检测FBXL11及成骨/成牙本质分化相关基因-骨涎蛋白、骨桥蛋白和骨钙素的表达.结果 成骨诱导牙髓干细胞抑制FBXL11的表达.过表达FBXL11明显抑制牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性、牙髓干细胞体外矿化能力以及骨涎蛋白和骨桥蛋白的表达.结论 组蛋白去甲基化酶FBXL11具有抑制牙髓干细胞成骨和成牙本质分化的潜能.     

bFGF、TGF-β对人牙髓干细胞增殖和分化能力的影响

目的：探讨bFGF和TGF-β对体外培养的人牙髓f细胞增殖和分化能力的影响。方法：采用MTT法分别测定了bFGF和TGF-β作用不同浓度、不同时间单独或联合作用对人牙髓干细胞增殖能力的影响。通过碱性磷酸酶活性检测、细胞形态学观察及DSP、DMP-1免疫组化染色来检测这两种因子对人牙髓十细胞分化能力的影响。结果：0～40ng／mL范围内，bFGF单独作用能显著促进人牙髓干细胞的增殖，EL具有浓度和时间依赖性，而TGF～8促增殖作用较弱；两肯联合作用，促增殖作用无显著提高，而促分化作用显著增强，不仪细胞形态明显改变，而且碱性磷酸酶活性显著提高，DSP、DMP-1呈阳性表达，向成牙本质细胞样细胞分化。结论：bFGF和TG-β对体外培养的人牙髓干细胞增殖和分化具有重要作用，为对探讨影响人牙髓干细胞增殖和分化的因素提供参考依据。     

Nell-1蛋白通过Wnt/β-catenin通路调控人上颌窦黏膜来源间充质干细胞成骨分化

目的:研究不同浓度Nell-1(Nel-like type 1 molecule)蛋白对人上颌窦黏膜来源间充质干细胞(maxillary sinus membrane-derived mesenchymal stem cells, MSMSCs)成骨分化的影响。方法:体外分离培养并鉴定人MSMSCs。使用Nell-1蛋白(10、100、1000 ng/mL)诱导MSMSCs,利用CCK-8法和细胞活死染色法检测细胞活性变化;碱性磷酸酶活性检测细胞成骨能力改变;实时定量荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测成骨相关因子mRNA表达情况;免疫荧光染色和Western blot法检测成骨蛋白表达情况。结果:Nell-1蛋白对MSMSCs有一定的促增殖作用;碱性磷酸酶活性检测显示各实验组成骨效果优于对照组;qRT-PCR、免疫荧光染色和Western blot结果显示,100 ng/mL的Nell-1显著促进β-catenin、Runx-2、OCN等mRNA及蛋白的表达(P<0.01)。结论:Nell-1蛋白可通过上调Wnt/β-catenin信号通路的表达提高MSMSCs体外成骨分化能...     

白细胞介素-10对体外培养人牙囊细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的:研究白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)对体外培养人牙囊细胞增殖和牙囊细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法:体外培养人牙囊细胞,取生长状态良好的第5代细胞,用四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)检测IL-10对细胞增殖的作用;用碱性磷酸酶试剂盒检测IL-10及其抑制剂对细胞碱性磷酸酶活性的作用。结果:0、1、10、25、50、100ng/mLIL-10对人牙囊细胞的增殖影响无显著性差异(P>0.05);10ng/mLIL-10作用0、1、3、5、7d对人牙囊细胞的增殖影响无显著性差异(P>0.05)。10ng/mLIL-10作用3～7d降低人牙囊细胞的碱性磷酸酶活性(P<0.05),10ng/mLIL-10抑制剂作用5～7d增加人牙囊细胞的碱性磷酸酶活性(P<0.05)。结论:IL-10对人牙囊细胞的增殖无影响。IL-10降低人牙囊细胞的碱性磷酸酶活性,说明IL-10抑制人牙囊细胞向成骨方向分化。     

釉基质蛋白（EMPs）对大鼠牙髓干细胞体外增殖、分化能力的影响

目的：研究釉基质蛋白（Enamel Matrix Proteins,EMPs）对大鼠牙髓干细胞（rat Dental Pulp Stem Cells,rDPSCs）体外增殖分化能力的影响。方法：酶消化培养法获得大鼠牙髓干细胞,有限稀释法分离纯化大鼠牙髓干细胞,形态学观察,计算细胞克隆形成率。乙酸法制备EMPs,用不同浓度的EMPs进行诱导,利用四唑盐比色法（MTD检测和分析诱导后细胞增殖活性的变化。检测诱导后培养液中的碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase,ALP）。免疫组化染色和RT-PCR方法检测牙本质涎蛋白（dentin sialoprotein,DSP）、牙本质基质蛋白1（dentin matrixprotein 1,DMP—1）和牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphopmtein,DSPP）的mRNA表达。结果：大鼠牙髓干细胞呈集落状生长,在体外具有一定的克隆形成能力。EMPs对大鼠牙髓干细胞的增殖有促进作用,并呈现剂量和时间依赖性。200gg／ml EMPs组可显著促进大鼠牙髓干细胞的增殖。EMPs作用组能显著提高大鼠牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性。经细胞因子刺激后细胞表达DSP、DMP-1蛋白和DSPP mRNA。结论：EMPs在大鼠牙髓干细胞增殖和向成牙本质细胞分化方面具有积极的作用。     

脂多糖对人牙髓细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的:了解脂多糖(LPS)对人牙髓细胞的增殖和碱性磷酸酶活性的影响。方法:Ⅰ型胶原酶消化组织块法体外培养牙髓细胞,检测细胞表面LPS受体CD14(mCD14);流式细胞术观察不同浓度LPS(0.1μg/ml、1μg/ml和10μg/ml)对牙髓细胞细胞周期的影响,测定不同浓度LPS对牙髓细胞碱性磷酸酶活性的影响,采用χ2检验以及单因素方差分析对实验数据分别进行统计学分析。结果:人牙髓细胞不表达mCD14,LPS在浓度为0.1μg/ml、1μg/ml和10μg/ml时可以抑制牙髓细胞增殖(P<0.01)及碱性磷酸酶活性(P<0.05)。结论:LPS具有抑制牙髓细胞增殖及牙髓细胞分化的作用。     

血管内皮细胞生长因子基因转染大鼠骨髓间充质干细胞生物学效应的研究

目的:体外研究腺病毒AdCMV转染VEGF基因对大鼠骨髓间充质干细胞的增殖及功能分化的影响.方法:体外培养扩增大鼠BMSCs,AdCMV-EGFP转染BMSCs,确定重组腺病毒的最适MOI,应用MTT法检测转染AdCMV-VEGF对大鼠BMSCs增殖的影响.采用RT-PCR方法检测转染后细胞VEGF的表达,通过检测成骨条件培养液诱导培养后细胞的碱性磷酸酶活性评价BMSCs向成骨细胞分化的能力.结果:AdCMV-EGFP在400particle/cell时转染效率最高,且对细胞无毒副作用,未转染细胞、AdCMV-EGFP转染细胞与AdCMV-VEGF转染细胞光吸收(A)值在转染后第3天存在明显差异(P<0.05).RT-PCR检测AdCMV-VEGF转染细胞有VEGF基因的表达,未转染AdCMV-VEGF细胞组未见VEGF基因mRNA的表达.通过成骨诱导后AdCMV-VEGF转染细胞碱性磷酸酶活性明显高于未转染AdCMV-VEGF细胞(P＜0.05).结论:在体外AdCMV-VEGF能够成功转染大鼠BMSCs,能够促进BMSCs的增殖和向成骨细胞的分化.     

bFGF对人根尖牙乳头干细胞成脂分化影响的研究

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在体外对人根尖牙乳头干细胞(stem cellsfrom apical papilla,SCAP)成脂分化的影响。方法:采用酶消化法获得原代SCAP,用含有5 ng/mL bFGF的成脂诱导液对其诱导培养不同时间,显微镜观察细胞形态变化、油红0染色观察SCAP成脂分化能力、RT-PCR检测PPAR-γ2 mRNA表达情况。结果:SCAP在含有5 ng/mL bFGF成脂诱导液中培养3周,细胞中脂滴形成数量多于对照组,而且细胞密度也相对较大,细胞体积小,未见拉长、变大等现象。RT-PCR检测显示,诱导培养1周时,实验组与对照组PPAR-γ2 mRNA表达无显著性差异(P>0.05);培养3周时,实验组PPAR-γ2 mRNA表达量明显高于对照组(P<0.05)。结论:bFGF具有促进SCAP成脂分化的潜能。     

IGF-1通过PI3K/AKT信号通路促进牙髓细胞增殖及碱性磷酸酶活性的研究

目的:研究IGF-1对牙髓细胞增殖和碱性磷酸酶(ALP)活性及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:采用酶消化法分离培养原代人牙髓细胞。Western blot检测牙髓组织中IGF-1蛋白表达,不同浓度的IGF-1处理牙髓细胞7d,CCK8法检测细胞增殖。用IGF-1(100 μg/L)及LY294002(10 μmol/L)分别单独或同时处理牙髓细胞,培养7 d后MTT实验检测细胞增殖;在培养第3、5、7、14天时检测细胞ALP 活性;在培养第7天时用Western blot检测AKT和p-AKT蛋白表达情况。结果:IGF-1在牙髓炎组织中低表达, IGF-1在20~100 μg/L浓度范围内从作用第3天开始能够显著促进牙髓细胞增殖(P<0.05或P<0.01),且具有剂量和时间依赖效应。LY294002能够抑制牙髓细胞的增殖和碱性磷酸酶活性,具有时间依赖性。IGF-1能促进p-AKT蛋白表达,而 LY294002能减低IGF-1对p-AKT蛋白表达的促进作用。结论:IGF-1可以促进牙髓细胞增殖和碱性磷酸酶活性,且具有浓度和时间依赖性,作用机制可能与PI3K/AKT信号通路相关。[关键词] 牙髓细胞 细胞增殖 碱性磷酸酶     

成体干细胞及牙源性干细胞的研究进展

人体干细胞是在人体生长和发育过程中起主干作用的细胞,干细胞研究是目前生物医学研究的前沿领域,本文着重对成体干细胞和牙源性干细胞的研究现状及进展作一介绍。     

Influence of bisphosphonates on endothelial cells, fibroblasts, and osteogenic cells

Bisphosphonate-associated osteonecrosis of the jaws (BP-ONJ) is a side effect primarily in patients receiving highly potent nitrogen-containing bisphosphonates. The exact etiopathology is unknown. In addition to reduced bone remodeling, there may also be an impact on soft tissues. The impact of nitrogen- (ibandronate, pamidronate, zoledronate) and non-nitrogen-containing bisphosphonates (clodronate) on human umbilicord vein endothelial cells (HUVEC), fibroblasts and osteogenic cells was analyzed employing cell viability testing and a scratch wound assay. The impact on the cell morphology of vital-stained osteogenic cells was investigated by cell visualization (confocal laser scanning microscopy). Pamidronate and zoledronate had the greatest negative impact on all cell lines, whereas the impact of ibandronate and clodronate was less distinct. The effect of clodronate on HUVEC and fibroblasts was particularly marginal. BP-ONJ could be a multifactorial event with multicellular impairments. This might result in altered wound healing. The increased impact of the highly potent bisphosphonates, particularly on non-bone cells, may explain the higher occurrence of BP-ONJ.     

牙源性间充质干细胞诱导iPS细胞的效率与时间的研究

目的研究比较不同种牙源性间充质干细胞诱导iPS细胞的效率与时间。方法分离牙髓干细胞（DPSCs）、脱落乳牙干细胞（SHED）、牙乳头干细胞（SCAP）。应用慢病毒介导Lin28、Nanog、Oct4和Sox2因子重编程获得iPS细胞。比较在同等条件下三种细胞获得iPS细胞的克隆数与平均诱导时间。结果DPSC诱导iPS细胞的效率是0.167%,高于SHED细胞和SCAP细胞的诱导效率（0.125%,0.033%）;DPSC诱导iPS细胞的平均重编程时间是20.1d,均少于SHED细胞和SCAP细胞（23.73d,25.25d）,差异均有统计学意义。结论三种不同牙源性细胞有不同的iPS细胞诱导效率与重编程时间,牙髓干细胞有较好的诱导iPS细胞的应用潜能。     

成釉细胞瘤肿瘤细胞巢周边及中心区细胞增殖和分化的研究

目的　研究成釉细胞瘤肿瘤细胞巢周边及中心区细胞增殖和分化的特点。方法　选取43例成釉细胞瘤 ,包括滤泡型 15例、丛状型 2 0例和棘皮瘤型 8例。应用免疫组化SP方法检测标本组织中增殖细胞核抗原 (proliferatingcellnuclearantigen ,PCNA)、Ki 6 7、CK10&13和CK19蛋白的表达。结果　PCNA在肿瘤细胞巢周边区的增殖指数 (5 12± 2 76 ) %显著高于中心区 (1 36± 1 0 2 ) % ,P <0 0 0 1;Ki 6 7在肿瘤细胞巢周边区的增殖指数 (3 6 3± 1 80 ) %显著高于中心区 (1 2 6± 0 96 ) % ,P <0 0 0 1;PCNA和Ki 6 7的增殖指数有显著相关关系 (P <0 0 1) ;CK10&13和CK19在成釉细胞瘤中心区细胞表达显著高于周边区 (P <0 0 1)。结论　成釉细胞瘤肿瘤细胞巢周边区为增殖细胞区 ,周边区和中心区细胞的分化程度不同。     

B-1a cells and plasma cells in periodontitis lesions

Background and Objective:  Host response mechanisms in periodontal tissues are complex and involve numerous systems of interactions between cells. The B-cell lineage seems to predominate in chronic periodontitis lesions. The aim of the present investigation was to study the correlation between inflammatory cells and some functional markers in gingival lesions obtained from subjects with severe chronic periodontitis.
Material and Methods:  Thirty-eight Caucasian subjects volunteered to take part in the study. A gingival biopsy from one randomly selected diseased proximal site (probing pocket depth > 6 mm and bleeding on probing positive) was obtained from each patient. Immunohistochemical preparation was used to identify inflammatory cells and functional markers. Correlations between the different percentages of cell markers were analyzed by pairwise correlation.
Results:  B cells (B-1a and B-2 cells) occurred in larger proportions than T cells and plasma cells. A statistically significant correlation was found between the percentage of B-1a cells and plasma cells and between all B lymphocytes and plasma cells. About 60% of B lymphocytes exhibited autoreactive features.
Conclusion:  It is suggested that B-1a cells constitute a significant part of the host response in periodontitis lesions and that plasma cells may develop from both B-2 and B-1a cells.     

人牙髓细胞与牙周韧带细胞多向分化能力的比较

目的 比较人牙髓细胞(dental pulp cells,DPC)和牙周韧带细胞(periodontal ligamentcells,PDLC)的多向分化能力,揭示其干细胞成分特征,为开展干细胞介导的生物牙根再生奠定实验基础.方法 酶消化法分离培养人DPC和PDLC,流式细胞术检测STRO-1的表达.诱导细胞成牙本质及成骨分化、成脂分化和成软骨分化,von Kossa染色、抗骨钙素(osteocalcin,OCN)和牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)免疫组化染色、油红O染色、阿新蓝染色、抗Ⅱ型胶原免疫组化染色以及实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)等检测DPC和PDLC的多向分化.结果 DPC和PDLC体外呈克隆样生长,STRO-1阳性率分别是(16.5%±4.2%)和(11.6%±1.1%).100%的DPC和83.3%的PDLC样本可多向分化.细胞诱导分化后,OCN、牙本质涎磷蛋白(dentinsialophosphoprotein,DSPP)、过氧化物酶体激活物增生受体2(peroxisomal proliferator activated receptorgamma 2,PPARγ2)、脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)和Ⅱ型胶原mRNA表达上调,与诱导前相比差异均有统计学意义(P<0.001),DPC和PDLC间OCN和PPARγ2基因上调倍数的差异有统计学意义(P<0.001).结论 人DPC和PDLC的间充质干细胞比例和多向分化能力相似.