采用生色底物测定尿激酶效价的方法探讨

本文报道了以生色底物Ｌ－焦谷氨酰甘氨酰－Ｌ－精氨酸－对硝基苯胺盐酸盐为底物测定尿激酶效价的方法，实验结果表明，酶反应的最适条件为，在３７℃时用ｐＨ８．８的ｔｒｉｓ－明胶缓冲液配制的尿激酶溶液与０．６ｍｍｏｌ／Ｌ的底物溶液反应３０ｍｉｎ，加醋酸溶液终止反应，采用分光光度法在４０５ｎｍ波长处测定吸收度，尿激酶浓度在１０～５０ＩＵ／ｍｌ范围内与吸收度呈线性关系。     

生色底物法测定肝素钠的效价

目的 ：基于生色底物法采用紫外可见光法和酶标仪法测定肝素钠的效价,以建立适当的检测方法。方法 ：采用两种方法对3批肝素钠注射液和3批肝素钠原料药进行效价测定,对获得的数据进行分析。结果 ：紫外可见光法有更优的重现性和准确性,其平均相对标准偏差和可信限率均小于酶标仪法;酶标仪法的检测用时明显少于紫外可见光法法,实验操作也更加便捷。结论 ：两种测定方法均可获得符合生物统计学要求的可靠、有效的数据。     

生色底物法测定尿激酶原料与制剂效价的可行性分析

目的:建立生色底物法测定尿激酶和注射用尿激酶效价的新方法,对生色底物法的反应条件进行优化后,进行方法学验证,并在统计学意义上与现行的气泡上升法进行方法一致性评价.方法:对反应温度、pH、反应时间、底物浓度及酶反应浓度进行考察,确立0.3 mmol·L-1L-焦谷氨酰甘氨酰-L-精氨酸-对硝基苯胺盐酸盐溶液作为底物,水浴...     

微量生色底物法测定复方肝素钠乳膏抗Ⅱα因子活性

摘 要 目的：建立复方肝素钠乳膏抗Ⅱα因子活性的测定方法。方法: 采用微量生色底物法,按生物检定统计法中量反应平行线原理4×4法完全随机实验设计,测定复方肝素钠乳膏抗Ⅱα因子活性。结果: 肝素钠抗Ⅱα因子活性在0.005 04～0.021 IU·mL^-1范围内线性关系良好(r=0.992),平均回收率为101.6%(RSD=2.76%,n=9）。结论:本法准确、可靠、重复性好,可有效控制复方肝素钠乳膏质量。     

生色底物连续速率法测定圆斑蝰蛇凝血因子X激活剂的活性

目的:采用生色底物连续速率法测定凝血因子X激活剂的酶学活性。方法:将凝血因子X激活剂与凝血因子X及生色底物同时加入反应体系,以1 min为间隔时间,连续监测凝血因子Xa的生色底物Suc-Ile-Gly(γP ip)G ly-Arg-pNA在405 nm波长下的吸收值变化。通过吸收值对时间平方作图所得直线的斜率,对凝血因子X激活剂的浓度进行线性回归从而测得供试品的活性。结果:该方法的线性范围为0.45~1.20 u.mL-1,凝血因子X激活剂制剂与溶液的板间精密度(n=4)分别为6.2%及6.8%,板内精密度(n=3)分别为1.5%和1.8%。结论:本方法进行凝血因子X激活剂的活性测定,快速、准确、重现性良好。     

人凝血因子Ⅷ效价测定方法(生色底物法)的建立及应用

摘要：目的:建立适用于人凝血因子Ⅷ效价测定的生色底物法。方法:用生色底物法（包括动力学法和终点法）进行人凝血因子Ⅷ的效价测定,采用量反应平行线法进行效价计算,并对该方法进行方法学验证。采用经验证的方法对来自7家企业的21批人凝血因子Ⅷ样品进行效价测定,并与现行标准的一期法结果进行比较。结果:效价测定范围为标示量的64%～156%;以效价测定值的对数对理论值的对数作线性回归,动力学法的相关系数r为0.998;相对偏倚为-0.2%～1.0%,其90%置信区间为（-2.3%,2.2%）;中间精密度为1.8%～2.1%,其95%置信上限范围在3.2%～3.9%;终点法的相关系数r为0.998;相对偏倚为-0.6%～1.2%,其90%置信区间为（-1.7%,2.6%）;中间精密度为1.5%～2.4%,其95%置信上限范围在2.7%～4.4%;不同批次的试剂盒和不同分析人员对测定结果的影响无统计学意义,方法耐用性良好。21批样品生色底物法量反应平行线测定法测得结果与现行标准结果一致性良好。结论:建立的生色底物法可用于人凝血因子Ⅷ效价的测定,引入的量反应平行线模型可增加试验数据可靠性判断,并有效控制测定方法的误差,从而更好地控制人凝血因子Ⅷ质量。     

微量生色底物法测定肝素钠抗Ⅹa因子和抗Ⅱa因子活性

目的英国药典中收载了半微量生色底物法测定低分子肝素抗Ⅹa因子和抗Ⅱa因子活性,在此基础上,我们考虑是否可以将实验方法进行改进,用微量生色底物法测定肝素类药物活性。方法调整样品与试剂浓度,降低总反应体积,在96孔酶标板中进行反应,用酶标仪测定样品吸光度。结果对6个肝素样品进行抗Ⅹa因子和抗Ⅱa因子活性测定,实验结果误差小,重复性良好。结论微量生色底物法可以用于肝素类药物抗Ⅹa因子和抗Ⅱa因子活性测定,该法提高了实验效率,降低了检验成本,可以考虑用本法取代传统的凝血法测定肝素效价。     

建立用生色底物法研究重组水蛭素在大鼠血浆中的药动学

目的:建立用生色底物法(chromogenic substrate assay,CSA)测定大鼠血浆中重组水蛭素(re-combinant hirudin,rH)含量的方法,并用该法研究rH在大鼠血浆中的药动学。方法:以TGPApNA(tosyl-gly-cyl-polyl-arginine-para-nitraniline)为底物,凝血酶(thrombin,Th)能水解TGPApNA释放出对-硝基苯胺(para-nitraniline,pNA),pNA在405nm处有特异性吸收,通过测定反应体系中未被rH中和的Th量,间接测定rH的活性。结果:CSA法能有效地测定大鼠血浆中rH的含量;rH的浓度在3.125~40 ng.mL-1范围内呈线性关系;日间和日内精密度相对标准偏差均符合要求。应用上述方法测定大鼠iv 2.0 mg.kg-1的rH后不同时间的血药浓度,结果表明该药符合二室模型一级动力学过程。结论:用生色底物法测定大鼠血浆中rH具有准确、可靠、重现性好的特点,可用于rH药动学的研究。     

以TAME为底物测定蚓激酶效价

以ＴＡＭＥ为底物测定蚓激酶效价中国药品生物制品检定所１０００５０郝苏丽，张林可，徐康森蚓激酶是由蚯蚓体内提取的、大量存在于蚯蚓体液内的蛋白水解酶类［１］，它含有多种氨基酸，不仅能直接作用于纤维蛋白，还能使残留在纤维蛋白原中的纤维蛋白溶酶原激活成纤维蛋...     

低分子肝素分子量的测定

用高效液相色谱法，以低分子肝素的标准对照品为标准，测定了低分子肝素的平均分子量。其重均分子量范围在3500～5000，分子县在8000以下者占85％以上。对该法的实验条件进行了探讨。     

肝素效价测定统计分析的微机程序

采用FOXPRO语言编制了3．3法测定肝素效价统计分析的微机程序，用实例说明了该程序的使用方法。本程序可在IBM－PC／XT、286、386、486、586及其兼容机上运行。     

肝素效价测定统计分析的微机程序

<正> 肝素的效价测定法是根据对数剂量与血 凝时间的对数呈线性关系而设计的,中国药 典规定的有兔全血法和兔、猪血浆法,实验设 计一般采用3.3法,检定结果须按量反应平 行线测定法计算效价及实验误差,数据处理 十分繁琐,如用微机处理则比较方便。笔者用 FOXPRO语言编制了该算法的微机程序,现 介绍如下:     

用异烟肼为底物测定正常人乙酰化速率的分型

<正> 机体内乙酰化反应常为机体内源性物质,如5-羟色胺、组胶等某些氨基酸以及外源性物质羧酸、氨基水杨酸、对氨基苯甲酸、磺胺和普鲁卡因酰胺等药物的代谢途径。60年代以来,逐步发现药物在体内的乙酰化有两种表型,一类以异烟肼为代表,包括异烟肼、肼苯哒嗪、磺胺二甲嘧啶、氨苯砜等,其乙酰化速率在个体间差别较大,在人群中     

肝素钙中的钙含量测定

目的：对肝素钙中的钙含量测定方法进行研究。方法：采用原子吸收分先光度法,加入EDTA－2Na以消除SO对钙测定的干扰,将所测结果与英国药典规定的容量法进行比较。结果：肝素钙中钙浓度为3～7μg／ml时与吸收度成良好的线性关系,平均回收率为100．3％,RSD为0．91％。此法与容量法测定结果一致。结论：该法可作为监控肝素钙含量的一种方法。     

血浆纤溶酶测定的底物制备和正常值调查

纤溶酶(简称PL)是纤维蛋白溶解(纤溶)系统中的重要蛋白水解酶(原)。本文研究了用猪血浆和人血浆为底物,以刚果红显色法,测定血浆PL活性并依此法测定了225例正常人血浆PL活性的参考值。其结果如下: 材料与方法检查对象:经门诊严格体验,排除血栓性、出血性疾病、肝、肾疾病史。近期未服药物(口服避孕药史),并检测肝功、血脂、血尿常规、血小板计数等“正常”人,共225例。其中男性122例,女性103例。纤溶酶测定方法:基本原理为纤维蛋白(Fb)与刚果红结合形成不溶于水的复合物。在PL的作用下,水解出纤维蛋白降解产物(fdp),并释放出刚红果。后者在酸性条件下呈蓝色,其颜色的深浅与PL的活性呈正比。     

快速分析测定大豆甾醇侧链降解底物的方法

建立了快速分析测定大豆甾醇侧链降解过程中底物大豆甾醇和产物雄甾-4-烯-3，17-二酮(AD)及雄甾-1，4-二烯-3，17-二酮(ADD)的方法。采用薄板层析(TLC)，在板层为硅胶60GF254，流动相为石油醚-乙酸乙酯(6：4)的条件下，成功的分离了底物与产物，从而能快速简便的监测底物的消耗与产物的生成情况。另外根据底物与产物AD与ADD在紫外区的吸收情况，利用254nm与298nm双波长测定ADD与AD的生成量。上述两种方法便于工厂对生产情况的同步检测。     

测定肝素初注速率的改进方法

本文对静脉血栓患者预测肝素输注速率的两种方法进行了比较。一种方法是根据单室药物动力学模型,另一种方法是根据病人的体重。将68例受试者分成二组,组1病人的初注速率是根据病人的体重(77单位/kg/4小时)确定,组2的初注速率是根据单室肝素模型的动力学方程式来确定:     

肝素效价测定所用猪血浆的制备

<正> 目前肝素效价测定方法有兔全血法(中国药典),羊血浆法(美国药典)。其中羊血浆法操作简便、结果也比较准确。我国各药厂测定肝素效价均采用羊血浆法,但羊血浆来源紧张,鉴于此,曾有人按美国药典方法用猪血浆代替羊血浆进行测定,由于目前对猪血浆的制备和使用尚不尽完善,因此我们对此进行了一些实验。一、实验材料与实验方法 1.实验材料