金属蛋白酶及其组织抑制剂在涎腺腺样囊性癌细胞株表达的 …

为了研究金属蛋白酶（ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ，ＭＭＰ）及其组织抑制剂（ｔｉｓｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ，ＴＩＭＰ）对涎腺腺样囊性癌细胞（ａｄｅｎｏｉｄｃｙｓｔｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＡＣＣ）转移的影响，本研究应用斑点印迹杂交的分子生物学方法检测ＡＣＣ－２细胞系及高转移细胞株ＡＣＣ－Ｍ中ＭＭＰ－２，ＭＭＰ－９和ＴＩＭＰ－２的表达，结果显示，ＭＭＰ－２，Ｍ     

XAGE-1b基因在唾液腺腺样囊性癌转移中的作用

目的：探讨肿瘤睾丸抗原家族中XAGE—1b基因在唾液腺腺样囊性癌高转移细胞ACC—M中的高表达是否与其转移相关。方法：采用RNA干扰方法抑制腺样囊性癌低、高转移细胞ACC-2、ACC—M中XAGE—1b基因的表达，检测该基因表达改变对肿瘤细胞体外迁移能力以及裸鼠体内肿瘤细胞肺转移能力的影响。实验结果采用SPSS11．5软件包进行单因素方差分析。结果：XAGE—1b基因干扰质粒转染腺样囊性癌细胞后，RT—PCR验证干扰效率显示．XAGE—1b基因表达量显著下降；Boyden小室检测肿瘤细胞体外迁移能力明显下降；在裸鼠体内检测基因干扰后的肿瘤细胞肺转移能力与ACC—M相比也显著下降（P〈0．01）。结论：RNA干扰作用抑制了XAGE—1b基因的表达，体外实验和体内检测中显著影响了肿瘤细胞的迁移黏附以及肺转移能力，初步证实了XAGE—1b基因在唾液腺腺样囊性癌转移方面有重要作用。     

白血病抑制因子受体在人涎腺腺样囊性癌细胞系中的表达

目的 :探讨白血病抑制因子受体 (LIFR)与人涎腺腺样囊性癌转移的相关性。方法 :以涎腺腺样囊性癌细胞系ACC 2及其肺高转移株ACC M作为研究肿瘤转移分子机制的模型 ,应用RT PCR技术和免疫组化方法检测LIFR的表达。结果 :RT PCR检测表明LIFRmRNA在肺高转移细胞株ACC M细胞中的表达低于在ACC 2细胞中的表达 ,免疫组化检测表明LIFR蛋白在ACC M细胞中表达降低。结论 :LIFR在涎腺腺样囊性癌转移过程中可能发挥抑制作用。     

Ezrin基因在人涎腺腺样囊性癌中的表达及对转移细胞增殖侵袭性的影响

目的 检测Ezrin基因在人涎腺腺样囊性癌(salivary gland adenoid cystic carcinoma,SACC)中的表达,探讨Ezrin基因对SACC肺高转移细胞(adenoid cystic carcinoma,ACC)-M增殖、凋亡及侵袭活性的影响和作为SACC基因治疗靶点的可行性.方法 采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(streptavidin-perosidase,SP)检测石蜡包埋的43例SACC、40例涎腺多形性腺瘤(pleomorphic adenoma,PA)及15例正常涎腺组织中Ezrin的表达.设计并合成Ezrin特异性经化学修饰的双链siRNA和双链SiRNA阴性对照组,经脂质体介导转染人ACC-M,将细胞分为实验组、阴性对照组、空白对照组.反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫细胞化学分析各组细胞中Ezrin基因的mRNA及蛋白表达变化;甲基噻唑基四唑(MTT)法绘制细胞生长曲线,检测各组细胞体外增殖能力;流式细胞术测定细胞周期及凋亡情况;Transwell实验检测各组细胞侵袭能力差异.结果 15例正常涎腺组织Ezrin表达阳性4例,40例PA中23例、43例SACC中37例,Ezrin表达阳性依次升高,差异有统计学意义(P<0.05).Ezrin特异性siRNA转染ACC-M后,Ezrin基因mRNA及蛋白表达水平均降低,细胞增殖活性受抑制,细胞凋亡增加,细胞侵袭能力下降(P<0.05).结论 Ezrin的高表达可能在SACC的发生、发展及转移中发挥一定作用,Ezfin特异性siRNA能有效沉默ACC-M细胞Ezrin基因,使体外培养的ACC-M细胞在一定程度上增殖受抑制并诱导细胞凋亡及降低侵袭能力.     

力学刺激对人腺样囊性癌高低转移细胞株中E-cad/cat复合体的影响

目的观察周期性双轴力学应变对人腺样囊性癌高转移细胞株ACC-M、低转移细胞株ACC- 2中E- cad和α、β、γ- cat的表达以及ACC细胞与细胞外基质（ECM）粘附的影响。方法采用成组设计,分别选取频率为每分钟3次的1 000、4 000 μ应变对ACC- 2、ACC-M细胞分别加载,每天定点加载1次,每组加载时间分别为每次1 h、3 h和6 h,共加载2次。第3天上午8点收获细胞;将未受力学刺激的细胞作为对照组,受力学刺激的细胞作为实验组。细胞在力学刺激后行E- cad和α、β、γ- cat及细胞核双重免疫荧光染色,用激光共聚焦显微镜和图像分析软件进行定量和定位观察。用MTT法测定ACC细胞和ECM的粘附率。结果对照组除ACC- 2细胞E- cad低于ACC-M细胞外,ACC- 2细胞α、β、γ- cat表达均高于ACC-M细胞;在力学刺激下,E- cad和α、β、γ- cat的表达随时间而变化。对照组ACC- 2细胞和ECM的粘附率高于ACC-M细胞,但在力学刺激后,与对照组比较,ACC细胞和ECM的粘附率随时间而变化。结论在力学刺激后,ACC- 2、ACC-M细胞出现E- cad/cat复合体表达的改变,同时其和ECM的粘附率也发生了改变,显示力学刺激后细胞粘附发生变化在肿瘤转移中发挥重要作用。     

腺病毒介导HSV-TK/GCV与IL-2基因对人涎腺腺样囊性癌的抑制作用

目的探讨腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶（Herpes simplex virus thymidine kinase/ganciclovir,HSV-TK/GCV）与白细胞介素-2（interleukin-2,IL-2）基因联合应用对涎腺腺样囊性癌的抑制和杀伤作用。方法将0.2 ml细胞浓度为2×107/ml的涎腺腺样囊性癌高转移细胞株（salivary adenoid cystic carcinoma cell line withhigh tendency of lung metastasis,ACC-M）的细胞悬液接种于20只裸鼠皮下,建立涎腺腺样囊性癌裸鼠移植瘤模型。随机将20只荷瘤裸鼠分为A组：HSV-TK/GCV和IL-2联合基因治疗组（TK（IL-2组）;B组：HSV-TK/GCV组（TK组）;C组：空病毒组（EGFP组）;D组：ACC-M组;每组5只。分别于瘤体内注射TK（IL-2;TK;EGFP和无菌生理盐水。注射48小时后,对A、B、C组裸鼠每日腹腔注射GCV,D组每日腹腔注射生理盐水,连续10天。最后一次给药后第二天处死裸鼠,观察各组裸鼠的肿瘤体积和瘤重的变化,计算肿瘤生长抑制率;对移植瘤进行组织病理学观察;应用流式细胞仪检测移植瘤的细胞凋亡情况。结果在A组和B组中,ACC-M的生长均受到显著抑制。治疗后体积数减少,与ACC-M组比较差别有极显著性（P〈0.01）。A组和B组抑瘤率分别为91%和76%;光镜下观察A组和B组均出现了明显的细胞凋亡;流式细胞仪检测A组和B组有明显的凋亡峰出现,凋亡率分别为30.55±0.23和13.53±0.32;C组凋亡率为10.07±0.31,D组凋亡率为8.34±0.41%。除C、D组之间差别无明显性外,其余各组之间差别均有极显著性（P〈0.01）。A组和B组的细胞S期比例明显增加,G2/M期比例明显降低。结论 HSV-TK/GCV联合IL-2基因对ACC-M移植瘤有明显抑制作用,抑瘤效果优于单独应用HSV-TK/GCV系统。     

腺样囊性癌肺转移模型的动态观察

目的通过增强型绿色荧光蛋白（pEGFP-1）的转化和导入ACC—M细胞株，筛选出ACC-M-GFP细胞，并在模拟的肺环境下，建立腺样囊性癌肺转移灶的动态观察模型。方法利用基因转化技术制备高纯度的pEGFP-1真核表达质粒。利用阳离子脂质体介导的基因转染技术培养ACC—M-GFP细胞。体内接种4周后建立模拟肺环境，并用激光共聚焦显微镜观察。结果从接种的第2周开始，随接种时间延长，荧光细胞集落的数量和荧光强度逐渐增加，到第4周时荧光表达强烈，多数成片分布。观察结果同时显示仅有极少数的转移细胞有能力形成集落。结论成功建立了腺样囊性癌肺转移灶的动态观察模型，这一模型为早期转移肿瘤细胞的捕获和分析提供了较好的平台。     

基质金属蛋白酶-1在人涎腺腺样囊性癌细胞中的表达

目的:测定基质金属蛋白酶-1(MMP-1)在人涎腺腺样囊性癌不同转移力细胞系中的表达。方法:以人涎腺腺样囊性癌ACC-2细胞系及其高转移株ACC-M作为研究肿瘤转移分子机制的模型,采用免疫组化法和蛋白印迹(Western blot)法检测MMP-1的蛋白表达水平。结果:MMP-1在ACC-M细胞中的表达水平高于ACC-2细胞。结论:MMP-1在人涎腺腺样囊性癌的侵袭转移过程中可能发挥作用。     

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子表达与唾液腺肿瘤侵袭性的关系

目的:检测唾液腺肿瘤组织中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)的表达和定位,探讨其与唾液腺肿瘤侵袭性生物学行为的关系。方法:采用免疫组织化学方法,检测9例唾液腺正常组织、28例多形性腺瘤(PA)、25例黏液表皮样癌(MC)、33例腺样囊性癌(ACC)中EMMPRIN的表达和定位。采用SPSS10.0软件包进行多个样本率间的χ2检验或确切概率分析。结果:EMMPRIN在正常唾液腺组织、多形性腺瘤、黏液表皮样癌、腺样囊性癌的表达阳性率分别为11.11%、53.71%、84.00%和90.91%(P<0.05)。在正常唾液腺组织的表达主要见于导管上皮细胞的细胞膜;EMMPRIN蛋白在多形性腺瘤、黏液表皮样癌、腺样囊性癌的表达见于肿瘤细胞的胞膜或胞质。腺样囊性癌嗜神经现象组中,EMMPRIN表达的阳性率高于无嗜神经现象组,但差异无统计学意义。结论:EMMPRIN的表达与唾液腺肿瘤侵袭性生物学行为密切相关。     

金属蛋白酶抑制剂BB-94抑制腺样囊性癌侵袭转移的实验

目的观察金属蛋白酶抑制剂BB-94对涎腺腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)细胞侵袭、转移能力的抑制作用.方法癌细胞体外侵袭能力用重组基底膜侵袭实验测定,聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel     

Tip30基因修饰的ACC-M细胞裸鼠体内致瘤性观察

目的:观察肿瘤抑制基因Tip30修饰后的人涎腺腺样囊性癌高转移细胞(ACC鄄M)所致裸鼠移植瘤体内生长的变化。方法:BALB/Cnu/nu鼠30只(4周龄,体重18￣20g),随机分3组,各10只;Tip30基因修饰的ACC鄄M细胞(AdTIP30/ACC鄄M)、野生型ACC鄄M细胞(wt/ACC鄄M)及对照基因LacZ修饰的ACC鄄M细胞(AdLacZ/ACC鄄M)分别注射小鼠颌下区皮下,观察肿瘤生长情况及小鼠存活时间。结果:(1)经TIP30基因修饰组肿瘤出现的时间比野生型对照组及基因对照组晚3d,且肿瘤生长缓慢(P<0.01);(2)存活时间显示,基因修饰组(53.0±3.3)d,有2只长期存活;野生型对照组(26±2.2)d;对照基因组(29±2.4)d。结论:抑癌基因Tip30能够显著抑制人涎腺腺样囊性癌细胞在裸鼠体内的生长,延长荷瘤小鼠存活期。     

减毒沙门菌体内介导基因转移对ACC-M抑制的实验研究

目的:观察构建含有Tip30与人IFN-γ基因的真核表达及共表达质粒的重组减毒伤寒沙门菌对腺样囊性癌肺转移抑制作用。方法:4周龄BALB/Cnunu雄鼠25只,随机分成5组,每组5只,其中对照组5只(PBS)、单纯减毒沙门菌组5只(SL7207)、携带人IFN-γ基因减毒沙门菌治疗组5只(SL7207/pCI-IFN)、携带Tip30基因减毒沙门菌治疗组5只(SL7207/pCI-Tip30)、携带Tip30与人IFN-γ基因的真核共表达质粒的重组减毒沙门菌治疗组5只(SL7207/pCI-Tip30/IFN),均于尾静脉接种高转移腺样囊性癌(ACC-M)细胞。10d后对照组裸鼠口服PBS,其余各治疗组口服相应的减毒沙门菌,隔周1次,共3次。检测:裸鼠肺转移肿瘤细胞内IFN-γ、Tip30的表达、肿瘤生长体积、瘤体重量、带瘤存活期。结果:在治疗组裸鼠肺转移肿瘤细胞胞浆内有对应表达IFN-γ、Tip30;各治疗组均较对照组肿瘤生长慢,肿瘤体积小,重量轻,抑瘤率高,带瘤存活期长;携带基因治疗组较SL7207治疗组肿瘤生长慢,肿瘤体积小,重量轻,抑瘤率高,带瘤存活期长;联合基因治疗组较单基因治疗组肿瘤生长慢,肿瘤体积小,重量轻,抑瘤率高,带瘤存活期长。结论:减毒伤寒沙门菌不仅能作为载体介导基因对腺样囊性癌肺转移有抑制作用,而且自身对腺样囊性癌肺转移也有抑制作用。联合基因较单基因抑制效果好,有协同作用。     

肝素抗涎腺腺样囊性癌细胞裸鼠肺血管粘附研究

目的　通过观察肝素对人涎腺腺样囊性癌肺高转移细胞株 (ACC -M )细胞在裸鼠肺、肝组织的粘附影响 ,证实其对腺样囊性癌肺高转移细胞肺粘附的抑制作用。方法　裸鼠腹腔注射肝素后 ,经尾静脉注入氚标胸腺嘧啶核苷 (3 HTdR)标记的ACC -M细胞 (3 H -ACC -M ) ;分别检测细胞注射后 2h、6h、18h肺、肝组织单位重量的每分钟同位素脉冲数 (CPM )。结果　单位重量肺组织每分钟放射性计数CPM值 :空白对照组 2h、6h、18h分别为 1875 .75± 11.5 3、164 4.5 0± 2 7.2 0和 14 66.5 0± 12 5 .95 ;2 0 0单位肝素组 2h、6h、18h分别为 912 .0 0± 118.5 5、918.0 0± 44 .0 6和 766.60± 77.66。同一时间肝素组肺组织CPM值明显低于对照组 ,有显著性差异 (P <0 .0 0 1)。单位重量肝组织CPM值在空白对照组和肝素组的相同时间点无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　肝素腹腔注射后可明显降低肺组织内ACC -M细胞对血管内皮细胞粘附数量 ,但对相同时间肝组织内ACC -M细胞粘附数量无显著影响 ,提示肝素具有抑制腺样囊性癌肺转移的作用     

nm23-h1抑制腺样囊性癌高转移细胞株肺转移的实验研究

目的:研究nm23-h1对腺样囊性癌细胞株(adnoid cystic carcinoma cell line-M,ACC-M)的肺转移是否具有抑制作用。方法:20只裸鼠,随机分为两组,实验组每只裸鼠经尾静脉注入5×106个用阳离子脂质体介导nm23-h1质粒体外转染所得阳性表达的ACC-M细胞,对照组注入等量的未转染ACC-M细胞,1周及4周时处死动物获取肺标本,常规组织学观察。结果:1周时实验组未见转移,而对照组有少量小转移灶;4周时实验组肺内仍未见转移灶,对照组可见大量灰白色转移结节。结论:nm23-h1对ACC-M的肺转移具有抑制作用。     

P-选择素单抗抗唾液腺腺样囊性癌细胞裸鼠肺粘附的研究

目的观察P-选择素单克隆抗体(MonoantibodytoP-selectin,PS1)对腺样囊性癌肺高转移细胞肺粘附的抑制作用。方法裸鼠尾静脉注射P-选择素单抗后,经尾静脉注射氚标胸腺嘧啶核苷(3HTdR)标记的ACC-M细胞,分别检测细胞注射后2h、6h、18h的单位重量肺、肝组织每分钟核素脉冲数(CPM)。结果空白对照组单位重量肺组织在2h、6h、18h的CPM值分别是1875.75±11.53、1644.50±27.20和1466.50±125.95;P-选择素单抗组肺组织2h、6h、18h的CPM值分别是941.50±68.47、875.00±47.06和787.25±65.38。相同时间P-选择素单抗组肺组织CPM值明显低于对照组,两组间有显著性差异(P<0.001)。空白对照组单位重量肝组织的CPM值与P-选择素单抗组相比,2h、6h、18h各相同时间两组间无显著性差异(P>0.05)。结论P-选择素单抗静脉应用后,可减少肺组织内ACC-M细胞的粘附数量,但对相同时间肝组织内ACC-M细胞数量无显著影响。P-选择素单抗可能在抑制腺样囊性癌肺转移中发挥作用     

染料木黄酮抗涎腺腺样囊性癌远处转移的实验研究

目的　研究染料木黄酮抗涎腺腺样囊性癌 (ACC)实验性肺转移的作用。方法　分别用ACC M细胞及经染料木黄酮处理的ACC M细胞对 2 0只裸鼠尾静脉接种形成肺转移模型 ,6周后处死动物 ,比较治疗组与对照组裸鼠ACC肺转移率、瘤结节数目 ;观察肺转移灶血管内皮生长因子 (VEGF)、基质金属蛋白酶 (MMP 9)的表达及凋亡情况。结果　染料木黄酮治疗组瘤结节数目明显少于对照组(分别为 9 2 9± 1 80和 2 7 4 4± 13 5 5 ,P <0 0 5 ) ;治疗组转移灶凋亡指数 (AI)明显高于对照组 ( 15 37±3 96及 6 0 3± 3 36 ,P <0 0 5 ) ;治疗组VEGF及MMP 9表达明显弱于对照组 (P <0 0 5 )。结论　染料木黄酮有一定的抗ACC M远处转移的作用 ,这可能是多种机制作用的结果     

腹膜腔注射肝素对ACC-M细胞在裸鼠肺、肝组织分布的影响

目的　通过观察腹膜腔注射肝素对ACC-M细胞在裸鼠肺、肝组织的分布特点,研究其对腺样囊性癌肺高转移细胞肺粘附的抑制作用。方法　实验裸鼠腹腔注射肝素后,经尾静脉注入氚标胸腺嘧啶核苷(3HTdR)标记 ACC-M细胞,分别检测注射后2 h、6 h、18 h肺、肝组织单位重量的每分钟同位素脉冲数(CPM)。结果　裸鼠单位重量肺组织3H-ACC-M在不同时间由高到低依次是空白对照组2 h、6 h、18 h,肝素组6 h、2 h、18 h。相同时段肝素组明显低于对照组,两组间有显著性差异(P<0·001)。单位重量肝组织3H-ACC-M在不同时间由高到低依次是空白对照组为2 h、6 h、18 h,肝素组为2 h、6 h、18 h,相同时段两组间无显著性差异(P>0·05)。结论　肝素腹腔注射后可减少肺组织内ACC-M细胞数量,但对相同时段肝组织内ACC-M细胞数量无显著影响,肝素可能在抑制腺样囊性癌肺转移中发挥作用。     

涎腺腺样囊性癌细胞系中DNA甲基化研究

目的探讨涎腺腺样囊性癌（adenoidcysticcarcinoma，ACC）细胞系中抑癌基因甲基化状况及其与mRNA、蛋白表达之间的关系。方法甲基化特异性PCR法检测ACC细胞系ACC-2、ACC-3、ACC-M中E-钙黏着蛋白（E-cadherin，E-cad）、p16、RASSFlA、DAPK、MGMT基因启动子区的甲基化状况。应用RT-PCR方法和免疫组织化学方法检测E-cad、p16在mRNA和蛋白水平的表达。结果3个ACC细胞系中均检测到E-cad、p16基因的甲基化，而没有RASSFlA、DAPK、MGMT基因的甲基化；mRNA和蛋白水平均未检测到E-cad的表达，均检测到p16的表达。结论ACC细胞系中，E-cad、p16基因启动子区的甲基化是常见事件，甲基化可能是E-cad基因失活的主要机制之一。     

腺样囊性癌肺转移相关蛋白质的筛选鉴定

目的　初步筛选和鉴定人涎腺腺样囊性癌肺转移相关蛋白质。方法　利用腺样囊性癌细胞株 (ACC 2 )及其肺高转移细胞株 (ACC M) ,通过蛋白质组学方法 ,差减处理 ,发现两细胞株间蛋白质表达的差异 ,并对差异蛋白质点进行分析鉴定。结果　发现ACC 2和ACC M细胞系之间有 12个蛋白质点表达水平明显不同。其中转酮醇酶、v Ha ras蛋白等在ACC 2中低表达 ,在ACC M中高表达 ;肿瘤坏死因子超家族成员 4 (配合基 )在ACC 2中高表达 ,在ACC M中低表达 ,Pirin仅在ACC 2中表达。结论　 12个差异蛋白质可能通过不同途径参与腺样囊性癌肺高转移 ,为研究腺样囊性癌肺转移提供新的线索