氟化物对原代培养大鼠肝细胞酶活力及超微结构的影响

目的研究不同剂量的氟化物对原代培养大鼠肝细胞存活率、酶活力及超微结构的影响。方法采用半原位胶原酶消化法分离大鼠肝细胞;MTT法检测细胞存活率;赖氏法检测培养液中谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)活性;透射电镜观察细胞超微结构改变。结果氟化钠染毒24小时后肝细胞存活率下降,且呈现明显的剂量-效应关系;2mmolL和4mmolL染氟组肝细胞培养液中ALT和AST的活性显著升高(P<005);透射电镜下染氟组肝细胞线粒体肿胀,内质网排列紊乱或断裂。结论过量氟化物对原代培养大鼠肝细胞有明显的毒作用,其主要作用方式是引起细胞膜和细胞器质膜损伤。     

福建水华微囊藻粗毒素对原代培养大鼠肝细胞毒性作用的初步研究

[目的]用直接分离法进行大鼠肝细胞体外培养．研究微囊藻毒素的毒性。[方法]以大鼠作为肝细胞供体,用直接分离法制备肝细胞,进行原代培养后加入不同浓度的藻毒素;在培养的不同时期用台盼蓝排斥法计算贴壁的活细胞数及存活率,用倒置显微镜观察肝细胞形态变化。[结果]①不同浓度的藻毒索对大鼠肝细胞具有毒性作用,呈现出剂量一反应关系。②直接分离法可得到大量单个分散的肝细胞,细胞数量能够满足毒理学的实验要求,在41h内细胞生长较好,适于进行细胞毒理学的实验;65h后肝细胞功能和活力欠佳,不适于实验。[结论]微囊藻毒素对体外培养的肝细胞有毒性作用;直接分离法获取肝细胞进行原代培养的方法可用于短期细胞毒理学的实验研究。     

培养基中的化学成分对原代培养肝细胞的影响

利用体外培养的肝细胞作为试验和研究手段，用于药理学、毒理学及生物型人工肝的研究进展较为迅速，其重点在于如何保持体外肝细胞的增殖能力和分化特性，以获得高密度生长的肝细胞。文中对近年来培养基中的化学成分对原代培养肝细胞的影响予以探讨。     

培养基中的化学成分对原代培养肝细胞的影响

利用体外培养的肝细胞作为试验和研究手段,用于药理学、毒理学及生物型人工肝的研究进展较为迅速,其重点在于如何保持体外肝细胞的增殖能力和分化特性,以获得高密度生长的肝细胞。文中对近年来培养基中的化学成分对原代培养肝细胞的影响予以探讨。     

肝细胞原代培养的常用添加物

随着肝细胞在生化研究、药代动力学研究、毒理学研究、人工肝支持系统及肝细胞移植方面越来越广泛的应用,如何获得完好无损的肝细胞及长期、稳定地培养活力和功能均良好的肝细胞,是首先要解决的问题。本文就肝细胞原代培养的常用添加物作了综述。     

氯化铝对原代培养大鼠大脑皮层神经细胞的毒性作用

目的 研究铝对体外培养神经细胞的毒作用,探讨铝的神经毒性和毒作用机制.方法分别应用浓度为10、100、1 000 μmol/L的AlCl3对原代培养大鼠皮层神经细胞染毒24、48 h,检测AlCl3对皮层神经细胞形态的影响,吖啶橙-溴乙锭染色判断皮层神经细胞存活率;Hoechst 33258染色判断皮层神经细胞凋亡.结果 AlCl3可造成皮层神经细胞突起萎缩,细胞胞体增大变圆,细胞数量减少,并且细胞界限不清;同时随着AlCl3浓度增加和染毒时间延长而加重.AlCl3对皮层神经元生长有明显的抑制作用,与对照组相比具有明显时间剂量-反应关系（P＜0.05）;AlCl3可使神经细胞核明显固缩、凝集或断裂,发生典型的凋亡改变,随着染毒时间延长和Al3＋浓度增加,凋亡发生率也明显增加.结论 铝可对原代培养皮层神经细胞产生细胞毒性,可引起细胞结构改变,抑制皮层神经细胞生长,并可诱导细胞凋亡.     

MTT法观察微囊藻毒素-LR对原代大鼠肝细胞的双向毒性作用

[目的]系统性探讨微囊藻毒素-LR(MC-LR)引起肝细胞毒性效应的量效和时效关系特点. [方法]采用胶原酶灌注法建立原代大鼠肝细胞模型,并通过抗大鼠细胞角蛋白 (CK18)的特异性抗体来进行免疫荧光染色观察细胞纯度.对分离培养得到的原代肝细胞分别给予10-5～10-12mol/l的MC-LR,在给药后的24、48、72和96h后分别采用MTT法观察细胞存货率的改变情况. [结果]分离培养所得细胞均为肝实质细胞,细胞纯度为100%;高剂量MC-LR(μM水平)能引起细胞死亡或凋亡,而低剂量MC-LR(nM～pM水平)则具有促进细胞增殖的效应,双效性作用的分界浓度10-7mol/L左右. [结论]MC-LR对原代培养肝细胞的毒性效应上表现为双向性.     

肝细胞原代培养的常用添加物

随着肝细胞在生化研究、药代动力学研究、毒理学研究、人工肝支持系统及肝细胞移植方面越来越广泛的应用，如何获得完好无损的肝细胞及长期、稳定地培养活力和功能均良好的肝细胞，是首先要解决的问题。本文就肝细胞原代培养的常用添加物作了综述。     

蓝藻提取物对原代培养大鼠肝细胞的毒性作用研究

用蓝藻提取物处理大鼠肝细胞,通过测定乳酸脱氢酶渗出率、显微镜直接观察细胞形态改变及吖啶橙／溴乙啶联合染色后观察细胞核的改变来评价其毒性作用及方式。结果：乳酸脱氢酶渗出率呈明显的剂量和时间效应式增加;细胞形态改变包括收缩、变圆、变小、出现胞膜包;细胞核的改变有碎裂、浓缩、染色质收缩等,发生这类改变的细胞占总细胞数的比例随剂量和时间的增加而增加。结论：蓝藻提取物对原代培养大鼠肝细胞有明显的毒作用,其主要作用方式是引起凋亡     

槲皮素对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的防护作用

目的:观察槲皮素(quercetin)对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的防护作用。方法:经二步胶原酶技术分离培养大鼠原代肝细胞,用100mmol/L无水乙醇染毒细胞8h,作为酒精损伤模型。乙醇染毒前经不同剂量槲皮素(25～200μmol/L)预作用不同时间(0～8h),观察槲皮素干预对细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)活性,丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性的影响。结果:大鼠原代肝细胞经100mmol/L酒精暴露8h后,LDH、AST活性,MDA、GSH含量和SOD、CAT活性与对照组相比,均有非常显著性差异;酒精暴露前1～4h经50～75μmol/L槲皮素干预效果最明显,LDH、AST、MDA和GSH、SOD、CAT水平分别较酒精组非常显著性降低和升高。结论:槲皮素可能通过减少GSH耗竭,提高抗氧化酶活性,抑制脂质过氧化来保护大鼠原代肝细胞抗酒精性氧化损伤,保护作用呈剂量与时间效应关系。     

氟对人胚肝细胞DNA损伤及凋亡的影响

目的探讨氟对人胚肝细胞(L-02细胞)DNA损伤及诱导凋亡的作用.方法采用40,80,160μg/ml氟化钠对培养的人胚肝细胞进行染毒,24 h后用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)和流式细胞术(FCM)检测氟化物对人胚肝细胞DNA损伤和细胞凋亡情况.结果氟组人胚肝细胞DNA损伤率明显高于对照组,Ridit值分别为0.582,0.815,0.892;中、高剂量氟组人胚肝细胞凋亡百分率(9.293±1.171),(11.727±1.196)均明显高于对照组(5.343±1.620).同时,高剂量氟组与低剂量氟组之间细胞DNA损伤率和凋亡率的差异也存在显著性差异(P＜0.05).结论氟化物具有引起人胚肝细胞DNA损伤和细胞凋亡的作用,并呈现一定的剂量-效应关系.     

Cytotoxicity of heavy metals on primary cultured alveolar type II cells

The lung is the primary target organ of airborne heavy metal-induced toxicity. The aims of this study were to investigate differential acute lung cytotoxicity caused by heavy metals using a primary culture of alveolar type II cells and to establish an in vitro assessment model of lung toxicity. The cytotoxicity of heavy metals was determined by measuring the lactate dehydrogenase release and (51)chromium release from lyzed cells. With respect to the LC(50) values, drug concentrations causing a 50% loss in cell viability, the mean value of Hg was 110 microM and that of Cd was 220 to 250 microM. Cytotoxicity was graded high for Hg and Cd, moderate for Pb and Ni, and negligible for Mn. Additional morphological observations of cell membrane integrity by scanning electron microscopy were compatible with the results of biochemical measurements. In conclusion, we have presented an in vitro assessment model of lung toxicity, which can be used effectively to assess the differential effects of heavy metals on alveolar type II cells. The findings suggests that the potential mechanisms of cytotoxicity are dependent on both the nature and the concentration of the metals.     

氟化物对大鼠颅骨成骨细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响

目的 :研究氟化物对大鼠颅骨成骨细胞生长、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法 :应用酶消化法分离培养大鼠颅骨的成骨细胞 ;AlamarBlue摄入法检测细胞活性 ;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果 :氟化钠 (NaF)浓度为 0～ 2mmol L、2 4h对细胞活性无影响 ;浓度为 2mmol L时 ,S期细胞数增多 ,G0 G1 期和G2 M期细胞无明显改变。NaF浓度为 4mmol L时 ,细胞活性受抑制 ,S期细胞数明显增多 ,G2 M期细胞明显减少。NaF浓度为 2mmol L和 4mmol L时 ,凋亡百分率明显增加。结论 :过量氟化物可影响大鼠颅骨成骨细胞活性及细胞周期的分布 ,使细胞停滞于S期 ,并可诱导细胞凋亡     

氟化钠致大鼠肾脏脂质过氧化损伤及亚硒酸钠的保护作用

目的研究氟化钠（ＮａＦ）对大鼠肾脏脂质过氧化作用的影响及亚硒酸钠（Ｎａ２ＳｅＯ３）对氟肾脏毒性的保护作用。方法大鼠经饮水加入ＮａＦ（１５ｍｍｏｌ／Ｌ）或／和Ｎａ２ＳｅＯ３（１５μｍｏｌ／Ｌ）染毒１２０天,观察氟在机体的蓄积、排泄,尿酶活性及肾脏脂质过氧化水平的变化。结果氟染毒后,大鼠血氟水平、尿氟水平、骨氟含量,尿谷氨酰转肽酶（γＧＴ）、Ｎ乙酰βＤ氨基葡萄糖苷酶（ＮＡＧ）、琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）活性及肾脏活性氧自由基（ＯＦＲＳ）相对浓度、脂质过氧化降解产物丙二醛（ＭＤＡ）含量均显著升高,谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨＰｘ）活性及ＧＳＨ含量显著下降。同时补加亚硒酸钠,可促进尿氟排泄,降低血氟水平及骨氟含量,降低尿酶γＧＴ、ＮＡＧ、ＳＤＨ活性和肾脏ＯＦＲＳ、ＭＤＡ含量,同时提高肾脏ＧＳＨＰｘ活性,但对ＧＳＨ含量影响不显著。结论氟化钠引起肾脏损伤与其诱导脂质过氧化作用增强有关,亚硒酸钠对氟化钠致肾脏毒性具有拮抗作用。     

急性乙醇暴露对人原代肝细胞血红素氧化酶的影响

目的　研究急性乙醇暴露对人原代肝细胞血红素氧化酶活力及蛋白水平的影响。方法　经体外灌流、分离培养人原代肝细胞 ,观察乙醇对人原代肝细胞上清液中天冬氨酸氨基转移酶 (AST)的释放及谷胱甘肽 (GSH)含量的变化 ,用westernblot方法检测乙醇对人原代肝细胞血红素氧化酶活力及蛋白水平的影响。结果　急性乙醇暴露导致人原代肝细胞上清液中释放的AST增加 ,并呈明显的剂量效应和时间效应关系 ;此外 ,在 10 0mmol L乙醇 2 4h暴露下 ,肝细胞中的GSH明显降低 ,而HO 1酶活力在 0 5～ 12h之间明显升高 ,随后开始降低 ,且HO 1蛋白水平变化趋势与此一致。结论　HO 1酶活力的升高可能与乙醇暴露下人原代肝细胞氧化损伤的保护有关     

双酚A对原代培养胎鼠脑多巴胺神经元的氧化损伤作用研究

目的探讨双酚A对原代培养的胎鼠脑多巴胺神经元的毒性作用及损伤机制。方法孕14~15天SD胎鼠中脑多巴胺神经元在无血清条件下分别培养4或7天后,分别加入1、10、25、50、100μmol/L双酚A,于24h和48h后检测细胞内活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA);流式细胞术检测细胞凋亡;酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化用于鉴定和计数多巴胺神经元比例的变化。结果与对照组相比,各处理组均可导致细胞内活性氧升高,双酚A≥50μmol/L时,可无选择地使细胞内活性1氧明显升高,同时使SOD、GSH水平明显降低,MDA水平明显升高;双酚A浓度≥50μmol/L时可使凋亡细胞数显著增加。酪氨酸羟化酶阳性细胞数在25μmol/L以上时随双酚A浓度增加其比例显著降低。结论双酚A可通过氧化损伤导致体外培养的多巴胺神经元凋亡。     

氟化泡沫与氟保护漆对离体乳牙釉质保护效果的比较

目的 比较局部使用氟化泡沫和氟保护漆对乳牙釉质脱矿的保护作用。方法 60颗牙冠完整的下颌乳切牙,在牙冠唇侧选定釉质处理区域,按照不同试剂处理分为A、B、C三组,A:氟化泡沫组,B:氟保护漆组,C:去离子水组。处理后的离体牙在脱矿液中浸泡72 h后用扫描电镜观察釉质表面形态结构差异;利用原子吸收分光光度计检测各组脱矿液中钙离子的溶出量。结果 A、B两组析出的Ca²⁺浓度均显著低于C组(P<0.05);B组析出的Ca²⁺浓度显著低于A组(P<0.05)。扫描电镜观察釉质表面显示C组较A、B两组脱矿明显,A、B两组的釉质表面可见再矿化物。结论 离体下颌乳切牙应用氟化泡沫及氟保护漆都可以增强其釉质的抗酸能力并促进再矿化,氟保护漆较氟化泡沫具有更强的保护作用。     

氟对大鼠脑细胞DNA的损伤及诱导凋亡的作用

目的　探讨氟对大鼠脑细胞DNA的损伤作用及诱导凋亡的作用。方法　体内试验中 ,对照组大鼠腹腔注射蒸馏水 ,氟组大鼠注射氟化钠 ,染毒剂量为 2 0mg·kg- 1 ·d- 1 ;体外试验中 ,采用 5mmol/L氟化钠对急性分离的大脑神经细胞染毒 2h后用单细胞凝胶电泳技术 (SCGE)研究氟对细胞DNA的损伤 (单链断裂 )。采用TUNEL法和流式细胞术 (FCM)检测细胞凋亡。结果　体内试验氟组大鼠大脑皮层神经细胞DNA损伤情况明显比对照组严重 ,Ridit值分别为 0 351和 0 639,体外试验对照组与氟组Ridit值分别为 0 650 1和 0 3844。TUNEL阳性细胞在氟组大鼠大脑皮层、海马及小脑颗粒细胞层均可见到 ,在对照组大鼠则很罕见。流式细胞术检测结果表明大脑皮层及海马神经细胞凋亡百分率氟组 (2 7 1 2± 3 0 8,34 97± 5 46)均高于对照组 (4 63± 0 98,5 35± 0 79) ,差异有极显著性意义。结论　氟化钠可引起大鼠脑细胞DNA损伤和细胞凋亡发生     

氟致人胎肝细胞DNA损伤及其对细胞凋亡和p53蛋白表达的影响

目的　研究氟对L 0 2细胞DNA的损伤作用及其对细胞凋亡和p5 3表达的影响 ,并探讨p5 3表达与细胞凋亡之间的关系。方法　体外培养的L 0 2细胞分别接触 0、4 0、80、1 6 0 μg ml氟化钠 (对照组、A、B、C组 ) 2 4h后 ,检测L 0 2细胞DNA损伤率、细胞凋亡百分率和p5 3蛋白表达水平。结果　染氟各组细胞DNA损伤率均明显高于对照组 (P <0 0 5 )。与对照组相比 ,B组和C组细胞凋亡百分率明显升高 (P <0 0 5 )。B组和C组细胞p5 3蛋白表达量均显著高于对照组 (P <0 0 1 )。结论　氟可导致L 0 2细胞DNA损伤率上升 ,诱导细胞凋亡和p5 3表达 ,并且随着氟浓度的升高 ,细胞凋亡率和p5 3蛋白的表达量均随之升高