理中丸对利血平所致脾虚大鼠血清中细胞因子的影响

脾胃为后天之本，“四季脾旺不受邪”，脾胃气虚，百病由生，可见脾虚证在疾病发生过程中占有重要位置。利血平塑造脾虚证模型是较经典的方法之一，它属于外周交感神经阻滞药，可以使体内儿茶酚胺类物质耗竭，使交感神经功能低下，副交感神经功能相对亢进，同时引起腹泻而耗气。模型出现的各种虚弱症状与临床脾虚症状十分相似，且具有条件易控制、模型较稳定之特点。     

四君子汤对利血平所致脾虚大鼠肠道黏膜TGF-β和TNF-α表达的影响

目的:观察四君子汤对利血平所致脾虚大鼠肠道黏膜免疫功能的影响。方法:雄性SD大鼠120只,腹腔注射利血平造成大鼠脾虚模型,四君子汤作为治疗药物,并分高、低剂量组,选用阿托品作为阳性对照药,并设自然恢复组与治疗组相对比。进行小肠PP结计数;并运用流式细胞仪检测PP结中T细胞亚群含量;ABC染色法,并运用图像分析空肠中细胞因子(TNF-α和TGF-β)的表达。结果:各组间在小肠PP结数量及其中的T淋巴细胞亚群无显著差异。模型组大鼠的空肠中TGF-β的表达较正常组降低,四君子汤高剂量组空肠内TGF-β表达较脾虚组显著升高,但与正常组亦有显著差异(P<0.05)。阳性药物和自然恢复组的TGF-β含量较脾虚组无显著差异,显著降低于正常组(P<0.05)。模型组大鼠的空肠中TNF-α的表达较正常组显著升高(P<0.05),而四君子汤低剂量组、高剂量组、阿托品组及自然恢复组的TNF-α表达均较脾虚组显著降低(P<0.05)。结论:四君子汤可以通过增加空肠内TGF-β表达,降低TNF-α表达,对利血平脾虚大鼠黏膜免疫功能有一定的调节作用,对PP结数量及其中的T淋巴细胞亚群无显著影响。     

利血平所致脾虚大鼠脾阳虚证和脾气虚证的证候属性

目的 研究利血平所致脾虚大鼠的脾阳虚证和脾气虚证的证候属性.方法 SD大鼠80只,模型组和治疗组腹腔注射利血平造成脾虚模型,选用分别代表脾气虚证和脾阳虚证的四君子汤和理中丸作为治疗药物,检测各项指标,并将检测结果作为多元统计分析对象,采用聚类分析法,分析样本及指标的区分度,以探讨不同指标与脾气虚证和脾阳虚证的相关性.结果 12项指标在正常组和模型组有较好的区分度;从白细胞介素1(IL-1)及血管活性肠肽含量和动物体重等指标看,二者有相同的变化趋势;从脾T细胞增殖、转化生长因子β(TGF-β)等指标看,理中丸组高于四君子汤组;从胃泌素、外周血中T细胞亚群CD4 /CD8-的比值和白细胞介素6(IL-6)含量等指标看,理中丸组低于四君子汤组.结论 模型组与正常组有很好的区分度,利血平脾虚证模型成功;理中丸和四君子汤对脾虚大鼠的作用既有相同之处,也有不同之处,与中医理论相符.     

四君子汤和理中丸中甘草酸及甘草苷含量测定

目的:测定四君子汤和理中丸中甘草酸及甘草苷含量。方法:HPLC测定甘草酸及甘草苷含量,Zobax SB-C18(4.6mm×150 mm,5μm)色谱柱,甘草酸采用甲醇-0.2 mol.L-1醋酸铵溶液-冰醋酸(58∶41∶1)为流动相;流速1.0 mL.min-1;检测波长250 nm。甘草苷采用乙腈-0.5%冰醋酸(18∶82)为流动相;流速1.0 mL.min-1;检测波长276 nm。结果:四君子汤和理中丸中甘草酸含量分别为1.41%、1.44%,甘草苷分别为0.603%、0.603%。结论:两复方中甘草酸及甘草苷含量无明显差异。     

四君子汤对利血平致脾虚大鼠唾液淀粉酶分泌的影响

目的观察脾虚证大鼠唾液淀粉酶分泌情况及四君子汤治疗作用。方法雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组,模型组,大鼠皮下注射利血平,空白组大鼠注射等量生理盐水,共8d;造模结束后将模型组分为中药组和模型组,中药组给予灌服四君子汤,模型组和正常组给予灌服等量的双蒸水,灌服4周后进行取材。麻醉动物,取下左侧腮腺,缝合伤口,等大鼠稍清醒时用10%冰乙酸溶液20μL刺激大鼠舌尖,1次/min,共刺激30min;处死,取下右侧腮腺。检测腮腺淀粉酶活性、电镜下观察腮腺内酶原颗粒数量、腮腺组织病理。结果模型组大鼠酸刺激后腮腺内残余的淀粉酶活性和酶原颗粒高于正常组大鼠,经四君子汤治疗后脾虚大鼠的唾液淀粉酶的分泌基本恢复正常,各组腮腺组织没有明显病理改变。结论四君子汤对利血平所致脾虚大鼠唾液淀粉酶分泌障碍有明显治疗作用,机制与腮腺组织病理学无关。     

四君子汤对脾虚模型大鼠胃动素和前列腺素E2含量的影响

用利血平造成脾虚证大鼠模型，用ＲＩＡ测定发现其血浆和近段空肠组织ＭＯＴ的含量明显下降，降结肠和直肠组织ＰＧＥ２的含量明显升高，在四君子汤４ｇ／只鼠·ｄ连续灌胃１４天后，上述改变明显恢复正常。提示四君子汤益气健脾作用与其调正胃肠激素失衡有关。     

加味四君子汤对脾虚泄泻大鼠肠道菌群及sIgA的影响

目的观察加味四君子汤对脾虚泄泻大鼠肠道菌群及sIgA的影响。方法利福平加大黄灌胃建立大鼠肠道菌群失调及免疫功能紊乱的脾虚模型。SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、思密达组、四君子汤组、加味四君子汤低剂量组（8g/kg）和高剂量组（16g/kg）,每组10只,给予相应干预措施。干预15天后分别进行十二指肠形态学分析、肠道菌群检测、回肠和盲肠内容物中sIgA的测定。结果与正常对照组比较,模型组大鼠十二指肠细胞黏膜受损,肠绒毛长度、宽度和隐窝深度都显著减少（P〈0．05）;盲肠和回肠sIgA降低（P〈0．05）,并伴有菌群失调（P〈0．05）;与模型组比较,各治疗组大鼠上述指标均得以明显改善,差异有统计学意义（P〈0．05）;加味四君子汤高剂量组各指标优于四君子汤组和思密达组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论加味四君子汤可能通过保护肠黏膜,调整肠菌群,提高sIgA的含量,发挥对机体整体的调节效应。     

利血平所致大鼠脾虚证代谢组学研究

目的 运用代谢组学方法研究利血平所致脾虚大鼠血清和尿液代谢表型的变化,鉴定与脾虚相关的代谢标志物以探讨脾虚相关代谢途径.方法 利用核磁共振氢谱(1H-NMR)技术建立大鼠血清和尿液的代谢指纹谱.应用正交偏最小二乘判别分析研究对照组和模型组之间的代谢物谱差异,并通过变量重要性投影在血清和尿液中选取生物标志物.结果 利血平所致的脾虚大鼠血清和尿液代谢表型发生明显的变化,在血清和尿液中分别鉴定了与脾虚相关的12种和10种生物标志物.结论 脾虚大鼠机体糖代谢、脂质代谢、氨基酸代谢和氨代谢紊乱,同时,转甲基作用被抑制.该研究为探讨脾虚证的本质、诊断的客观化和脾虚证动物模型的评价提供了一种新方法.     

加味四君子汤对利血平所致脾虚大鼠小肠移行性肌电复合波（MMC）的影响

正常大鼠小肠的消化问期综合肌电(MMC)由四个时相组成：Ⅰ时相指重速在快波上的慢波数在0～5％(发生率)，Ⅱ、Ⅳ时相指重迭快波的慢波数在5．1～95％，Ⅱ时相指重连快波的慢波数在95．1～100％。四个时相持续时间分别为3．0～4．0、3．O～6．0、2．5～4.0、0．5～1．0min，MMC周期为10～15min。脾虚大鼠小肠MMC的Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ时相特续时间缩短或消失．Ⅱ时相及周期明显延长，表明小肠运动功能发生紊乱。加味四君子汤能使脾虚犬鼠的MMC各时相及周期恢复正常，具有调节小肠运动功能紊乱的作用。     

四君子汤对脾虚大鼠空肠黏膜的修复及对葡萄糖吸收的影响

目的:研究四君子汤对脾虚大鼠空肠黏膜损伤的修复作用及对葡萄糖吸收的影响,以探究四君子汤对脾虚证益气健脾的作用机制。方法:将SD大鼠分为正常组、模型组、精眯组(7.5 mg·kg^-1)和四君子汤高、中、低剂量组(22.0,11.0,5.5 g·kg^-1);除正常组外,ih利血平建立脾虚大鼠模型;通过大鼠在体单向肠灌流模型,运用紫外分光光度法测定不同组别大鼠肠道对葡萄糖的吸收,并使用光学显微镜对大鼠空肠组织的病理切片进行观察,比较其黏膜损伤修复情况。结果:通过对不同组别的葡萄糖吸收速率常数(K_a)和有效渗透系数(P_app)的比较显示,与正常组比较,模型组大鼠对葡萄糖的吸收显著降低,且空肠黏膜损伤明显(P<0.05);与模型组比较,精眯组和给药组大鼠对葡萄糖的吸收明显增加,空肠黏膜损伤明显得到修复(P<0.05)。结论:四君子汤能促进脾虚大鼠小肠吸收葡萄糖功能的恢复,其作用机制之一可能是通过修复脾虚大鼠的肠黏膜来增加小肠对葡萄糖的吸收,从而发挥益气健脾作用。     

附子理中汤合四神丸加减治疗脾肾阳虚型腹泻型肠易激综合征

目的:探讨附子理中汤合四神丸加减治疗腹泻型肠易激综合征(IBS-D)脾肾阳虚型的疗效以及对直肠黏膜蛋白酶激活受体(PAR)2和PAR4的影响。方法:收集就诊于IBS-D患者共120例,采用数字表法随机分为治疗组和对照组各60例;基础治疗参照《肠易激综合征中西医结合诊治方案(草案)》制定标准给予非药物治疗;对照组口服枯草杆菌二联活菌肠溶胶囊,2粒/次,2次/d;治疗组采用附子理中汤合四神丸加减治疗,1剂/d,常规水煎煮2次,分早晚2次内服。两组患者均连续治疗6周。比较两组临床症状评分、大便性状评分和排便情况;检测两组直肠黏膜中PAR2和PAR4水平。结果:治疗组治疗后患者临床症状评分明显低于对照组(P0.01);治疗组临床总有效率为96.67%,对照组为83.33%,比较差异有统计学意义(P0.05);治疗组治疗后患者大便性状评分和10 d中排便急迫天数均明显减少(P0.01);治疗后治疗组PAR2和PAR4水平均明显低于对照组,比较差异有统计学意义(P0.01)。结论:附子理中汤合四神丸加减治疗IBS-D脾肾阳虚证可减少临床症状,改善排便情况,提高临床疗效,下调直肠黏膜PAR2和PAR4水平。     

肾脾阳虚大鼠模型及桂附理中丸对大鼠海马衰老变化的影响

目的:本实验首次采用im氢化可的松和ig大黄水煎液复合方法复制肾脾阳虚模型,观察桂附理中丸对肾脾阳虚大鼠大脑海马组织的影响以及温补脾肾方药的调节作用.方法:8周龄SD大鼠40只,雄性,随机分为正常对照组、模型组、维生素E组和桂附理中丸组4组.正常对照组大鼠每天上午8:00 im生理盐水5 mL·kg-1,同时ig生理盐水10 mL·kg-1,下午14:00 ig生理盐水10 mL·kg-1;其余组大鼠上午8:00 im氢化可的松25 mg· kg-1,同时ig大黄水煎液4 g·kg-1,下午14:00模型组ig生理盐水10mL·kg-1,维生素E组ig维生素E混悬液18×10-3g·kg-1,桂附理中丸组ig桂附理中丸混悬液1.62 g·kg-1,共30 d.电镜下观察海马组织超微结构改变;流式细胞仪检测细胞周期.结果:肾脾阳虚模型可使大脑海马CA1区细胞器及神经元出现衰老表现,细胞老化率明显升高(P＜0.05),与模型组比较,维生素E组及桂附理中丸组大脑海马细胞器增多,脂褐素沉积减少,细胞老化率明显下降(P＜0.05),桂附理中丸组大鼠海马CA1区细胞轮廓清晰,无细胞器及神经元细胞衰老征象.结论:实验大鼠海马组织的衰老变化是肾脾阳虚模型的明显病理改变,桂附理中丸具有调节海马神经细胞、恢复细胞周期的功效.     

四君子汤及其单味药水煎液对脾虚大鼠肠道菌群的调节作用

目的:探讨四君子汤及其单味药(人参、白术、茯苓、炙甘草)水煎液对脾虚大鼠肠道菌群的调节作用。方法:正常大鼠随机分为空白组、模型组、整肠生颗粒组、四君子汤组及各单味药组,连续10 d灌胃给予番泻叶水煎液塑造脾虚模型(空白组给予蒸馏水),再连续7 d分别给予相应药物治疗(空白组、模型组给予蒸馏水)。收集造模前(第0天),造模结束(第11天)和治疗结束(第18天)的粪便样品,经硫酸酸化、乙醚萃取处理后采用气相色谱法分析样品中短链脂肪酸含量的变化,利用16S rDNA-聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术分析粪便样品中肠道菌群结构的变化。结果:造模结束时,与空白组比较,各给药组大鼠粪便短链脂肪酸含量、肠道菌群多样性指数和相似性系数均显著下降(P 0. 05,P 0. 01),表明脾虚模型造模成功。治疗结束时,与模型组比较,白术组大鼠粪便短链脂肪酸含量、肠道菌群多样性指数和相似性系数均极显著升高(P 0. 01),四君子汤组、人参组和茯苓组部分指标极显著升高、部分指标显著升高(P 0. 05,P 0. 01);而炙甘草组仅多样性指数有所升高(P 0. 05),粪便短链脂肪酸含量和相似性系数则均无显著性差异。结论:四君子汤对脾虚大鼠肠道菌群的恢复调节时,白术可能发挥主要作用,人参、茯苓也发挥了一定作用。     

附子理中汤对脾阳虚证大鼠免疫细胞因子的影响

目的: 观察附子理中汤对免疫细胞因子白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,探讨其对脾阳虚证免疫功能影响的可能机制。 方法: Wistar大鼠100只随机分为对照组、模型组、附子理中汤低、中、高剂量组5组,每组20只。在模型组基础上,附子理中汤低、中、高剂量组按5,10,20 g·kg^-1 ig,每天1次,连续4周。检测胸腺指数、脾脏指数、IL-2,IL-6,IL-10,TNF-α含量。 结果: 与对照组比较,模型组胸腺指数,脾指数,IL-2,IL-6,TNF-α均降低(P<0.05或P<0.01),IL-10显著升高(P<0.01)。与模型组比较,附子理中汤中、高剂量组胸腺指数,脾指数,IL-2,IL-6,TNF-α均升高(P<0.05或P<0.01),IL-10降低(P<0.05或P<0.01)。 结论: 附子理中汤对细胞免疫因子产生影响,通过细胞免疫因子之间的效应可能是其改善脾阳虚大鼠免疫功能的机制之一。     

附子理中汤对脾阳虚证大鼠血糖、甘油三酯及总胆固醇的影响

目的:分析附子理中汤对脾阳虚证大鼠血糖、甘油三酯(TG)以及总胆固醇(TC)水平的影响和内在联系.方法:大鼠共4组,每组16只.①对照组:普通饲料喂养,自由饮水;②阳虚组:手术切除肩胛骨间棕色脂肪组织( brown adipose tissue,BAT),余同①组;③脾阳虚组:高脂饲料(83％普通饲料,15％ TG(TG),2％(TC)在19℃环境喂养,余同②组;④中药组:附子理中汤每天按4 g·kg-1ig;余同③组.全部4组动物4周后第1天左颈总动脉插管取血检测血糖、血清甘油三酯(TG),血清总胆固醇(TC)含量.结果:①各组血糖含量(mmol·L -)的比较:阳虚组(1.40±0.071)与对照组(5.41±0.08)相比血糖降低(P＜0.01);脾阳虚组(5.81±0.08)与阳虚组相比血糖升高(P＜0.01);附子理中汤组(5.01±0.08)与阳虚组相比,血糖升高(P＜0.01);附子理中汤组与脾阳虚组相比,血糖有下降趋势.②各组血清TG含量(mmol·L-1)的比较:阳虚组(0.284±0.110)与对照组(0.487±0.076)相比血清TG降低(P＜0.01);脾阳虚组(0.620±0.184)与阳虚组相比血清TG增加(P＜0.01);附子理中汤组(0.462±0.111)与阳虚组相比,血清TG升高(P＜0.01),附子理中汤组与脾阳虚组相比,血清TG有下降趋势.③各组血清TC含量(mmol·L -)的比较:脾阳虚组(0.183±0.025)、附子理中汤组(0.211±0.026)与对照组(0.081±0.020)相比血清总TC均升高(P＜0.01).结论:附子理中汤使血清TG降低;增加对葡萄糖的利用及加强其代谢,使血糖水平降低.附子理中汤“健脾”功效表现为促使糖和脂类代谢趋向正常,从而使血糖和血脂向恢复正常水平的方向转化.     

附子理中汤对脾阳虚大鼠AQP4的影响及其止泻机制

目的:观察附子理中汤对脾阳虚大鼠水通道蛋白4(AQP4)的影响,探讨附子理中汤止泻作用的机制.方法:Wistar大鼠100只随机分为对照组、模型组、附子理中汤低、中、高剂量组5组,每组20只.在模型组基础上,低剂量组按10g·kg-1ig,中剂量组按20 g·kg-1 ig,高剂量组按40 g·kg-1 ig,每天1次,连续4周.取结肠标本,酶联免疫法(ELISA)法检测AQP4含量,RT-PCR法检测AQP4 mRNA表达.结果:和对照组比较,模型组的AQP4含量(13.25 ±4.22) ng·L-1.AQP4mRNA相对表达量(0.38±0.11)均降低(P＜0.01或P＜0.05).和模型组比较,附子理中汤中剂量组的AQP4含量(23.84±5.68) ng·L-1,AQP4 mRNA相对表达量(0.54±0.26)均升高(P＜0.05).和模型组比较,高剂量组的AQP4含量(28.98±6.12) ng·L-1,AQP4 mRNA相对表达量(0.62±0.32)均显著升高(P＜0.01).结论:附子理中汤能恢复脾阳虚大鼠AQP4含量和AQP4 mRNA正常表达,以高剂量的恢复作用较明显,附子理中汤可能通过上调AQP4表达,促进胃肠道黏膜对水液的重吸收而起到止泻的作用.     

附子理中汤对脾阳虚大鼠ANP含量、pGCmRNA表达及胃肠动力学的影响

目的： 观察附子理中汤对脾阳虚大鼠心房利尿钠肽（ANP）含量和非可溶性鸟苷酸环化酶（pGC）mRNA表达及胃肠动力学的影响。方法： 清洁级Wistar大鼠100只随机分为对照组、模型组、附子理中汤低、中、高剂量组5组,每组20只。对照组常态饲养。模型组采用“肩胛骨间棕色脂肪组织（BAT）切除术+高脂饲料喂养+隔日寒冷环境刺激”方法造模。术后第1天喂高脂饲料共3周。在模型组基础上,附子理中汤低、中、高剂量组术后第1天按10,20, 40 g·kg^-1 ig给药,对照组及模型组则给予等容量的生理盐水,每天1次,连续3周。3周后第1天测空肠肌活动,然后取结肠标本,ELISA法检测ANP含量,RT-PCR法检测pGC mRNA表达。结果： 和对照组比较模型组的ANP含量、pGC mRNA相对表达量降低（P<0.05或P<0.01）,慢波频率显著下降（P<0.01）,快波出现频率、最大振幅、每丛快波数均增高（P<0.05或P<0.01）;纵肌收缩力振幅和环肌收缩力振幅均显著增大（P<0.01）。和模型组比较,附子理中汤高剂量组的ANP含量、pGC mRNA相对表达量升高（P<0.05或P<0.01）;附子理中汤中剂量组慢波频率上升（P<0.05）,快波出现频率、最大振幅、每丛快波数均减小（P<0.05或P<0.01）;附子理中汤高剂量组慢波频率显著上升（P<0.01）,快波出现频率、最大振幅、每丛快波数均显著减小（P均<0.01）;中剂量组纵肌收缩力振幅减小（P<0.05）,高剂量组纵肌收缩力振幅和环肌收缩力振幅均显著减小（P<0.01）。结论： 附子理中汤"止泻"的一种可能机制在于一方面上调ANP的含量及pGC mRNA表达量,进而恢复正常胃肠动力学,另一方面通过对水盐重吸收的调节作用而起效。     

四君子汤复方多糖对脾虚小鼠血清代谢组学的影响

目的 :探讨四君子汤复方多糖对脾虚小鼠血清代谢组学的影响。方法 :运用液-质联用(LC-MS)技术采集血清中内源性物质数据,用偏最小二乘判别分析(PLS-DA)方法对试验数据进行分析,寻找四君子汤复方多糖干预的脾虚小鼠血清内源性标记物,阐述其作用机制。结果:PLS-DA得分图中四君子汤复方多糖治疗组与脾虚模型组分离良好,多糖组内源性标记物含量有向正常组靠近的趋势,表明四君子汤复方多糖对脾虚小鼠有一定的改善作用。结论:通过代谢组学技术,确定了四君子汤多糖干预脾虚小鼠的内源性标记物,这些潜在的标记物代谢通路有待于进一步研究。     

附子理中汤对脾阳虚大鼠骨骼肌能荷及CNTF mRNA的影响

目的:观察附子理中汤对脾阳虚大鼠骨骼肌能荷及睫状神经营养因子(CNTF)mRNA表达的影响。方法:大鼠分为对照组、模型组和附子理中汤组,模型组施行肩胛骨间棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)切除术,饲以高脂饲料,19℃环境喂养3周。附子理中汤组在模型组基础上以附子理中汤按5 mL·kg-1体重ig,每日1次,连续ig4周。测定大鼠骨骼肌能荷值,RT-PCR法检测CNTF mRNA表达。结果:与对照组大鼠骨骼肌能荷(0.042±0.018)比较,模型组(0.032±0.014)与附子理中汤组(0.024±0.012)的能荷值均降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,附子理中汤组的能荷值降低明显(P<0.05)。对照组CNTF mRNA相对表达量为(0.862±0.072),模型组CNTF mRNA相对表达量(0.426±0.056)较对照组降低(P<0.01)。与模型组比较,附子理中汤组CNTF mRNA相对表达量(0.838±0.068)升高(P<0.01)。结论:附子理中汤对CNTF mRNA表达有调节作用,通过上调CNTF mRNA表达,增加CNTF含量,发挥CNTF对骨骼肌营养作用和能量代谢调节作用。