子宫内膜异位症患者在位内膜细胞的异常生物学特性

目的:探讨子宫内膜异位症(EM)患者在位子宫内膜细胞在侵袭、新生血管形成、增殖、凋亡诸多方面是否有别于正常内膜细胞。方法:1.应用ELISA方法对离体培养的人EM在位内膜细胞及正常子宫内膜细胞的培养基中血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的浓度进行测定。2.应用逆转录聚合酶链反应对离体培养的人EM在位内膜细胞及正常子宫内膜细胞VEGF、MMP-9、TIMP-1和Bax的mRNA表达进行观察。3.应用流式细胞技术对离体培养的人EM在位内膜细胞及正常子宫内膜细胞的增殖和凋亡状况进行观察。结果:EM体外培养的在位内膜细胞分泌的VEGF和MMP-3均显著高于对照组(P<0.01,P<0.05);TIMP-1显著低于对照组(P<0.01);VEGF mRNA、MMP-9 mRNA表达显著高于对照组(P<0.01,P<0.05);TIMP-1 mRNA和Bax mRNA的表达均低于对照组(均P<0.05);增殖指数显著高于对照组(P<0.05);凋亡指数显著低于对照组(P<0.05)。结论:EM在位内膜细胞在表达分泌VEGF、MMP-3、MMP-9、TIMP-1、Bax,PI、ApI等诸多方面均有别于正常对照内膜细胞,进一步支持了"在位内膜决定论"。     

人妊娠子宫平滑肌细胞培养消化法与组织块法效果比较

目的寻求简单有效的人妊娠子宫平滑肌细胞原代培养方法,建立稳定、高纯度、高产量的子宫平滑肌细胞原代培养体外模型。方法利用20例妊娠子宫组织,分别使用组织块法和胶原酶消化法分离及纯化人子宫平滑肌细胞,通过免疫荧光方法检测平滑肌细胞的肌动蛋白(α-SMA)及钙调节蛋白(calponin)的表达。结果组织块法和胶原酶消化法培养的平滑肌细胞均呈梭型,峰谷样生长,α-SMA及calponin的免疫荧光化学检测结果为阳性,胶原酶消化法较组织块培养法稳定且缩短原代培养时间。结论胶原酶法简便,快速,稳定,可建立稳定、高纯度的子宫平滑肌细胞体外培养体系。     

GRIM-19在子宫腺肌病中的表达及促进疾病发展的机制研究

目的 研究诱导细胞凋亡相关基因-19(GRIM-19)在子宫腺肌病患者子宫内膜组织中的表达水平,并探讨其在疾病发生发展中的分子机制.方法 取30例子宫腺肌病患者异位和在位内膜组织,采用免疫组织化学和Western blot检测内膜组织中GRIM-19、磷酸化信号转导及转录激活蛋白3(pSTAT3)和内皮生长因子(VEGF)的表达水平.采用TUNEL检测内膜组织凋亡,CD34抗体直接检测内膜组织新生血管形成.构建GRIM-19 siRNA和重组质粒,转染Ishikawa细胞后检测下游信号分子pSTAT3、信号转导和转录激活因子3(STAT3)和VEGF的变化.结果 与对照组相比,子宫腺肌病患者在位内膜和异位内膜组织中GRIM-19表达水平降低.在位内膜和异位内膜组织中细胞凋亡减少,微血管密度、pSTAT3和VEGF表达水平升高.转染Ishikawa细胞,下调GRIM-19表达可显著激活pSTAT3和VEGF.结论 GRIM-19通过抑制细胞凋亡和增加新生血管形成,促进子宫腺肌病的发生发展.     

血管内皮生长因子与微血管密度对子宫内膜癌生物学行为的影响

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)和微血管密度(MVD)对子宫内膜癌生物学行为的影响.方法 采用免疫组化技术对50例子宫内膜癌组织和相应正常组织进行VEGF和MVD检测.结果 VEGF的表达和MVD与子宫内膜癌的肌层浸润深度、淋巴结转移和细胞组织学分级有关(P<0.01);VEGF的表达与MVD呈正相关(γ=0.435,P<0.05).结论 VEGF表达和MVD与子宫内膜癌的生物学行为有关.     

血管内皮生长因子在子宫内膜异位症组织中的表达

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)在子宫内膜异位症发生发展中的作用.方法:采用免疫组织化学技术(LSAB法),分别检测VEGF在子宫内膜异位症(25例)和非异位症(25例)患者子宫内膜组织中的表达.结果:异位子宫内膜组织中VEGF的阳性表达率为72%,而非异位症的子宫内膜组织中无VEGF表达.结论:VEGF可能在子宫内膜异位症的发生、发展中起着重要作用.     

iNOS和VEGF在子宫内膜异位症的表达

目的:研究诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)在子宫内膜异位症(EMs)的异位内膜的表达.方法:采用免疫组织化学方法分别检测30例EMs异位内膜与35例正常对照组子宫内膜组织中iNOS、VEGF的表达,了解异位内膜组织中iNOS、VEGF表达的相关性.结果:在EMs的异位内膜组织中,iNOS和VEGF蛋白的表达明显高于正常子宫内膜组织的表达;在EMs异位子宫内膜组织中,iNOS和VEGF的表达成正相关(r=0.895,P＜0.05).结论:EMs中,异位内膜组织的侵袭力增强及血管生成可能与iNOS、VEGF高表达有关.     

子宫内膜癌组织中COX-2、VEGF和MVD测定

目的:检测子宫内膜癌组织中COX-2、VEGF的表达及MVD,并分析其临床意义.方法:应用免疫组织化学技术检测45例子宫内膜癌组织和9例正常子宫内膜组织中COX-2、VEGF和MVD的表达.结果:与正常子宫内膜组织比较,子宫内膜癌组织中COX-2(1/9 vs 28/45)、VEGF(1/9 vs 23/45)和CD34(2/9 vs 40/45)阳性表达率均增高(P均＜0.05).子宫内膜癌组织中COX-2与VEGF表达呈正相关(rs=0.585,P＜0.01),且COX-2和VEGF均阳性表达的子宫内膜癌组织MVD(64.0±25.4)高于2者均阴性者(30.7±11.5)(P＜0.01).结论:子宫内膜癌组织中COX-2呈高表达,并通过增加VEGF表达而促进肿瘤血管形成.     

子宫内膜息肉干细胞的提取及内皮抑素对其血管生成的影响

目的 探讨子宫内膜息肉(EP)组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平和重组人血管内皮抑素对EP血管生成作用的影响.方法 免疫组化法观察EP组织与正常内膜组织中VEGF的表达.胶原酶进行体外分离培养子宫内膜息肉干细胞(EPMSCs),运用RT-PCR和流式细胞术检测干细胞相关标志物,并进行多向分化能力鉴定.ELISA法检测EPMSCs与正常子宫内膜干细胞(EMSCs)VEGF的表达. ELISA法检测内皮抑素对EMSCs VEGF表达的影响.结果 EP组织中VEGF表达明显增强(P<0. 001).成功分离出 EPMSCs和EMSCs,VEGF的表达前者较后者明显增多(P<0. 001).内皮抑素能够使EPMSCs分泌的VEGF显著降低(P<0. 01).结论 VEGF与EP的发生有关.EP可能成为成体干细胞的组织来源.内皮抑素能够通过抑制血管生成发挥治疗EP的作用.     

P53和VEGF在子宫内膜样腺癌组织中表达的意义

目的探讨子宫内膜样腺癌组织中P53和血管内皮生长因子(VEGF)表达的意义.方法应用免疫组化S-P法对40例子宫内膜样腺癌和20例正常子宫内膜组织进行P53,VEGF和微血管密度(MVD)检测,研究子宫内膜样腺癌组织P53和VEGF的表达与肿瘤组织中MVD和淋巴结转移的关系.结果①正常子宫内膜组织中P53和VEGF表达全部阴性,子宫内膜样腺癌组织中P53,VEGF阳性率分别为52.5%,62.5%.②P53,VEGF的阳性表达强度与MVD及淋巴结转移呈显著正相关(P＜0.05).③P53表达强度与VEGF表达强度亦呈显著正相关(P＜0.05).结论突变的P53可以通过增加VEGF的产生引起瘤内MVD增多,促进肿瘤的生长和转移,P53,VEGF的表达强度可以作为判定子宫内膜样腺癌转移潜能及评估预后的有效指标.     

羊膜载体对人子宫内膜细胞HGF、MMP-9、VEGF表达的影响

目的:观察羊膜对在其基质面生长的人子宫内膜细胞肝细胞生长因子(HGF)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:将原代培养正常人子宫内膜细胞接种于羊膜的基质面作为羊膜载体组,以无羊膜载体培养的子宫内膜细胞为对照组。培养8 d后,实时荧光定量PCR法检测2组细胞HGF、MMP-9、VEGF mRNA表达的变化,ELISA法检测2组细胞上清液MMP-9蛋白含量。结果:羊膜载体组子宫内膜细胞HGF mRNA相对表达量为(2.033±0.922),MMP-9 mRNA相对表达量为(1.356±0.399),VEGF mRNA相对表达量为(0.976±0.597);对照组分别为(1.299±1.003)、(0.871±0.529)、(0.426±0.193)(t=3.061、2.613、3.313,P均<0.05)。ELISA法检测细胞上清液MMP-9蛋白含量,羊膜载体组为(0.762±0.085)μg/L,对照组为(0.089±0.008)μg/L(t=29.370,P<0.001)。结论:羊膜载体可以增强人子宫内膜细胞HGF、VEGF、MMP-9的表达。     

VEGF-165/ANG-1双基因共转染血管内皮祖细胞复合多孔生物活性玻璃的生物相容性研究

目的  制备一种具有诱导血管再生活性的新型复合骨组织工程材料,并评价其生物相容性。方法  将血管内皮生长因子-165（VEGF-165）/血管生成素-1（ANG-1）双基因共转染的血管内皮祖细胞（EPCs）复合多孔生物活性玻璃,制成复合人工骨材料。采用Western blot、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测已转染EPCs中VEGF-165及ANG-1的表达。噻唑蓝（MTT）细胞毒性试验、骨植入试验及扫描电镜观察细胞在材料表面黏附情况等综合评价材料的生物相容性;CD31免疫组织化学法染色观察材料中血管再生的情况。结果  Western blot检测、RT-PCR反应显示,实验组VEGF-165、ANG-1的表达较对照组升高。MTT细胞毒性试验、骨植入试验均显示,材料无毒性反应。扫描电镜显示,材料表面有较多血管内皮祖细胞黏附,并有较多伪足伸出。苏木精-伊红染色法（HE）染色显示,材料周围组织生长良好,未见明显的炎症细胞浸润,材料与周围组织交界处有大量的新骨生成。CD31免疫组织化学法染色显示,材料中有较多新生的毛细血管。结论  VEGF- 165/ANG-1双基因共转染EPCs复合多孔生物活性玻璃的骨组织工程材料生物相容性良好,具备一定的诱导血管再生活性。

     

Expression of Vascular Endothelial Growth Factor （VEGF） in Human Osteosarcoma Cells Transfected with Adeno-associated Virus-antisense VEGF

Ithasbecomeacommonmethodforcancertreatmentthroughantivascularizationinthepresent.Somestudieshaverevealedthatlivercancer ,lungcancerandcervicalcancercanbetreatedsuccessfullythroughholdingbackvascularendothelialgrowthfac tor (VEGF) proteinbecauseofitsimport…     

低氧抑制人脐静脉血管内皮细胞miR-26a的表达

目的 观察低氧对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）miR-26a及PTEN/AKT/VEGF通路相关因子表达的影响。方法 分常氧组和低氧组培养48h。荧光定量RT-PCR和Western blot法检测miR-26a及PTEN/AKT/VEGF通路相关因子的表达。结果 RT-PCR结果显示低氧组HUVEC中miR-26a和PTEN的相对表达量为0.42±0.02和0.62±0.03,显著低于常氧组的1.00±0.34和1.00±0.35（P<0.05）。Western blot法检测结果显示,与常氧组相比,乏氧组HIF-1、VEGF和AKT蛋白表达明显升高,PTEN 蛋白明显降低（P<0.05）。结论 低氧抑制HUVEC miR-26a的表达并继发下游PTEN/AKT/VEGF因子的序贯反应,可作为创面改善缺血状态治疗的新靶点。     

低氧诱导因子-1α对毛囊细胞的作用

目的探讨外源性人低氧诱导因子-1α（HIF-1α）在成纤维细胞中表达的可行性及其对毛囊周围细胞活性的影响。方法通过脂质体将含有HIF-1αcDNA的真核表达载体pcDNA3.0稳定转染成纤维细胞,应用RT-PCR及Westernblot方法检测HIF-1α在成纤维细胞中的表达,ELISA法检测转染细胞上清液中血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达,RT-PCR方法检测转染后细胞中成纤维细胞生长因子（bFGF）的表达。将该上清加入成纤维细胞及真皮鞘细胞中,MTT法检测加入上清后成纤维细胞及真皮鞘细胞活性。结果RT-PCR及Westernblot可检测出转染后细胞中HIF-1α的表达,MTT检测加入转染上清后成纤维细胞及真皮鞘细胞活性增强（P〈0.05）,并且该上清液VEGF的表达显著高于未转染组（P〈0.01）。转染后成纤维细胞的bFGF的mRNA表达显著高于未转染组（P〈0.01）。结论应用脂质体能够成功地将外源性人HIF-1α基因转染成纤维细胞,并进行有效表达,其表达的HIF-1α可增强细胞活性且可诱导转染细胞上清液中VEGF的表达,并增加bFGF的mRNA表达,且转染细胞上清可增强成纤维细胞及真皮鞘细胞活性。推测HIF-1α通过其下游因子VEGF及bFGF促进毛囊相关细胞的活性,为HIF-1α对毛囊作用的进一步研究打下了基础。     

二甲双胍对子宫内膜异位症大鼠异位灶内VEGF和MMP9的影响研究

目的 探讨盐酸二甲双胍（metformin）对子宫内膜异位症（EM）大鼠模型内异灶体积、内异灶内VEGF和MMP9的表达的影响,探讨二甲双胍治疗EM的可行性。方法 50只SD大鼠自体移植方法建立EM大鼠模型,在造模成功后,给予EM大鼠亮丙瑞林每21天1mg/kg皮下注射和二甲双胍灌胃治疗,二甲双胍治疗分为高剂量[200mg/（kg·d）]、中剂量[100mg/（kg·d）]和低剂量组[50mg/（kg·d）]。二甲双胍连续用药42天后处死内异症大鼠,取内异灶,测量内异灶体积,免疫组化、蛋白印迹法检测内异灶内的VEGF和MMP-9的表达。结果 内异灶体积∶3种二甲双胍剂量组与亮丙瑞林组内异症大鼠内异灶体积显著小于对照组（P<0.05）。免疫组化评分的结果提示∶用药42天后,中剂量、低剂量二甲双胍组和亮丙瑞林组（P<0.05）显著降低内异灶内VEGF的表达,与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）;二甲双胍的3种剂量组和亮丙瑞林组均显著降低内异灶内MMP9的表达,与对照组相比差异均有统计学意义（P<0.05）。蛋白印迹实验结果提示∶中剂量二甲双胍组显著抑制内异灶内VEGF的表达（P<0.05）,而低剂量、高剂量二甲双胍和亮丙瑞林组并未抑制内异灶内的VEGF的表达（P>0.05）;中、高剂量二甲双胍组均能显著抑制内异灶内MMP9的表达（P<0.05）,低剂量二甲双胍和亮丙瑞林组并未抑制内异灶内的MMP9表达。结论 盐酸二甲双胍可以显著抑制子宫内膜异位症大鼠内异病灶,降低内异灶内VEGF和MMP9的表达,有望成为治疗子宫内膜异位症的新方法。     

Study on the Expression Levels of CXCR4, CXCL12, CD44, and CD147 and Their Potential Correlation with Invasive Behaviors of Pituitary Adenomas

Objective To evaluate the factors of CXCR4, CXCL12, CD44, and CD147 as early potential diagnostic biomarkers by determining their expression levels in invasive and non-invasive pituitary adenomas. Methods Fresh pituitary adenoma specimens were collected from 35 pituitary adenoma (21 invasive and 14 non-invasive) patients who underwent surgical treatment in our Neurosurgery Department between January and April of 2009. The expression levels of CXCR4, CXCL12, CD44, and CD147 were evaluated firstly by flow cytometry, fluorescence microscopy in single cell suspensions, and then by immunohistochemical staining of paraffin tissue sections. Results Flow cytometric analyses showed that the percentage of CXCR4-and CXCL12-positive cells from invasive pituitary adenomas (IPA) was significantly higher in the single cell suspensions than that from non-invasive pituitary adenomas (nIPA) (P<0.05). Immunohistochemical staining revealed that CXCR4 and CXCL12 staining index scores of the invasive pituitary adenomas were significantly higher than those of the non-invasive pituitary adenomas (P<0.05). In contrast, neither flow cytometry nor immunohistochemical staining demonstrated significant difference between CD44 and CD147 expression levels, respectively. Conclusion Expression levels of CXCR4 and CXCL12 are correlated with the invasiveness of pituitary adenomas. Therefore, rather than CD44 and CD147, CXCR4 and CXCL12 may potentially serve as biomarkers for early detection of pituitary adenomas.     

Twist基因转染胃癌细胞对VEGF表达的影响

①目的研究Twist基因转染人胃癌细胞株MKN28对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。②方法利用DNA的限制性内切酶双酶切技术鉴定重组质粒PCDNA3.1-Twist、脂质体介导转染技术和G418筛选得到稳定表达Twist蛋白的Twist-MKN28(PCD-NA3.1-Twist转染的MKN28胃癌细胞株)细胞模型;采用Western blot检测细胞中Twist的表达;采用ElISA法检测细胞上清液中VEGF的蛋白表达量;采用半定量逆转录多聚酶链反应RT-PCR技术检测细胞中VEGF的mRNA表达量。③结果阳性质粒组Twist-MKN28细胞的Twist蛋白表达强于空白质粒组PCDNA3.1-MKN28和未转染组MKN28;Twist-MKN28组细胞上清液VEGF蛋白分泌明显增加,与PCDNA3.1-MKN28组和MKN28组比较差异有显著性(P<0.05),Twist-MKN28组细胞VEGF mRNA半定量结果和MKN28组、PCD-NA3.1-MKN28组比较,其表达量分别增加28.3%和26.5%,而PCDNA3.1-MKN28组和MKN28组比较无明显改变。④结论 Twist可促进人胃癌...     

氯沙坦通过AT1R/VEGF 信号通路对 肝癌血管生成的影响

目的 探讨氯沙坦是否通过下调血管紧张素Ⅱ 1 型受体（AT1R）/ 血管内皮生长因子（VEGF） 信号通路，抑制肝癌细胞的血管生成。方法 采用免疫荧光染色和Western blot 检测AT1R 在肝癌细胞系 HepG2、HuH-7 和PLC/PRF/5，以及正常肝细胞LO2 中的表达。采用Western blot 检测氯沙坦对肝癌细胞 系HepG2 中AT1R 表达的影响，酶联免疫吸附法（ELISA）检测氯沙坦对肝癌细胞系HepG2 中VEGF 的影响。 采用免疫组织化学法检测氯沙坦对大鼠肝癌组织中AT1R、VEGF 和CD34 表达的影响。结果 AT1R 在正 常肝细胞LO2 中低表达（P <0.05），在肝癌细胞系HepG2、HuH-7 和PLC/PRF/5 中高表达（P <0.05），在 HepG2 细胞中表达最高（P <0.05）。在肝癌细胞系HepG2 中加入氯沙坦后，AT1R 蛋白水平和VEGF 浓度降 低（P <0.05）。大鼠肝癌组织中AT1R、VEGF 和CD34 高表达，而加入氯沙坦后，AT1R、VEGF 和CD34 表 达降低（P <0.05）。结论 氯沙坦通过抑制AT1R/VEGF 信号通路，可以阻碍肝癌血管的生成。     

心脑宁胶囊通过调节NF-κB介导的抑炎通路保护脑缺血再灌注损伤的作用及机制研究

[目的]研究心脑宁胶囊对脑缺血再灌注损伤的保护作用。[方法]雄性ICR小鼠随机分为假手术组、模型组、心脑宁胶囊组和依达拉奉组。给药7 d后,制备小鼠中动脉闭塞模型,缺血30 min,再灌注24 h。进行神经功能损伤、组织水肿、梗死面积和组织病理损伤的评价;利用网络药理学分析心脑宁胶囊作用于脑缺血再灌注损伤的核心靶点;采用蛋白免疫印迹法和免疫组化法测定核转录因子-κB(NF-κB)p65蛋白的表达。[结果]心脑宁胶囊组神经行为学评分、中线偏移距离、梗死面积均显著低于模型组(P0.01);苏木精-伊红染色结果显示,心脑宁胶囊组较模型组病理损伤有所改善;网络药理学分析显示,心脑宁胶囊作用机制与RelA(p65)密切相关;蛋白免疫印迹结果显示,心脑宁胶囊组NF-κB p65总蛋白的表达较模型组明显降低(P0.01);免疫组化染色结果显示,心脑宁胶囊组阳性细胞数较模型组明显减少(P0.01),采用积分光密度测量法,与模型组之间的差异更为显著(P0.001)。[结论]心脑宁胶囊在大脑中动脉阻塞模型小鼠中通过下调NF-κB的表达及活化降低炎症反应,改善脑缺血再灌注损伤。     

Autophagy,not apoptosis,plays a role in lumen formation of eccrine gland organoids

Background: Sweat secreted by eccrine sweat glands is transported to the skin surface through the lumen. The eccrine sweat gland develops from the initial solid bud to the final gland structure with a lumen, but how the lumen is formed and the mechanism of lumen formation have not yet been fully elucidated. This study aimed to investigate the mechanism of lumen formation of eccrine gland organoids (EGOs).Methods: Human eccrine sweat glands were isolated from the skin for tissue culture, and the ...