升降散对脓毒症小鼠炎性细胞转录因子的调节作用

目的:探讨中药升降散对脓毒症小鼠相关炎性细胞转录因子的调节作用。方法:72只小鼠随机分为正常组、脓毒症组和升降散组,造模前72 h升降散组灌胃中药升降散(12 ml/kg),其余两组灌胃等量生理盐水,2次/d。灌胃结束后予脓毒症造模,于不同时间段取脾脏标本制备脾细胞悬液,检测各组小鼠T细胞表达的T盒(T-bet)、GATA连接蛋白-3(GATA3)、维A酸相关孤核受体γt(RORγt)和叉头状螺旋转录因子-3(foxp3)浓度的变化。结果:T-bet水平在24 h内脓毒症组呈逐渐上升趋势,升降散组呈逐渐下降趋势,且24 h升降散组显著低于脓毒症组(P0.01);GATA3水平24 h内脓毒症组和升降散组均呈逐渐下降趋势,12 h和24 h升降散组低于脓毒症组和正常组(P0.05或0.01);RORγt水平24 h内升降散组呈逐渐上升趋势,6 h升降散组低于脓毒症组(P0.05);foxp3水平24 h内脓毒症组与升降散组呈逐渐上升趋势,12 h和24 h升降散组低于脓毒症组(P0.05或0.01)。结论:升降散具有调节脓毒症小鼠炎性细胞转录因子T-bet、GATA3、RORγt和foxp3的作用。     

再障小鼠骨髓淋巴细胞Th1/Th2细胞亚群漂移与转录因子T-bet和GATA-3的调控作用

目的:探讨再生障碍生贫血(再障)小鼠骨髓淋巴细胞的Th1/Th2细胞亚群的漂移与转录因子T-bet和GATA-3的调控作用.方法:建立再障小鼠模型,取再障和正常组小鼠骨髓淋巴细胞,在终浓度为15 mg/L植物血凝素(PHA)条件下培养,用双抗体夹心ELISA方法检测小鼠骨髓淋巴细胞培养上清Th1类细胞因子IL-2、IFN-γ和Th2类细胞因子IL-4、IL-10水平;用RT-PCR技术检测小鼠骨髓淋巴细胞转录因子T-bet和GATA-3 mRNA表达强度.结果:再障小鼠IL-2、IFN-γ水平及转录因子T-bet mRNA表达显著高于正常组(P<0.01);而IL-4、IL-10水平及GATA-3 mRNA表达水平明显低于正常组(P<0.01).结论:再障小鼠出现Th细胞向Th1亚群漂移现象,导致机体Th1细胞的优势应答状态,从而诱导细胞毒性T淋巴细胞对造血干细胞的细胞毒作用,而T-bet表达增强与GATA-3低表达可能是再障Th1优势分化的重要原因.     

TNFR2与三氯乙烯致敏小鼠免疫性肝损伤的关系研究

目的 观察三氯乙烯(TCE)致敏小鼠肝脏内TNFR2表达情况,探讨TNFR2与免疫性肝脏损伤之间的关系.方法 选取21只SPF级雌性BALB/c小鼠,6～8周龄,随机将其分为空白对照组(5只),溶剂对照组(5只),TCE处理组(11只),建立TCE致敏小鼠模型,进行小鼠背部皮肤致敏反应评分,评分大于1分为TCE致敏组,反之为未致敏组.模型完成后处死小鼠,摘取眼球取血,测定血清肝功能活性指标ALT和AST;取出小鼠肝脏制成石蜡切片,HE染色观察小鼠肝脏病理表现,免疫组织化学(IHC)法和Western blot法观察小鼠肝脏肿瘤坏死因子(TNF)-α与TNFR2的表达情况.实时荧光定量PCR法检测TNFR2的mRNA水平.结果 TCE组致敏率为45.45％(5/11);致敏组小鼠的肝功能指标较高,与其他组比较差异有统计学意义(P＜0.05).HE染色结果显示TCE致敏组可见细胞发生空泡样变性,细胞呈蜂窝状且胞质疏松,其余组小鼠的肝细胞形态正常,染色均匀.免疫组化实验显示,TCE致敏组TNF-α表达较高,且与其他组相比TCE致敏组可以观察到大量TNFR2阳性表达,评分结果差异有统计学意义(P＜0.05).实时荧光PCR结果显示TCE致敏组TNFR2的mRNA表达也比其他组表达升高(P＜0.05).Western blot实验表明TCE致敏组比其他组TNFR2蛋白表达水平增高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TNFR2在TCE致敏组小鼠肝脏中表达升高,其表达的改变可能参与了 TCE致敏小鼠免疫性肝脏损伤过程.     

IL-22和IL-2在四甲基哌啶减轻三氯乙烯致敏小鼠肝损伤中的表达

目的 探讨腹腔注射四甲基哌啶(Tempol)对三氯乙烯(TCE)致敏小鼠肝损伤中的白细胞介素(IL)-22、IL-2及丙二醛(MDA)水平的影响.方法 40只6～8周龄Balb/c雌性小鼠随机抽样分成空白组、溶剂组、TCE组和TCE+Tempol组,建立TCE经皮致敏模型,TCE+Tempol组动物在末次激发前腹腔注射Tempol溶液(100 mg/kg).末次激发24 h后根据皮肤致敏结果评分将动物分成致敏阳性组或致敏阴性组,HE染色法观测肝脏切片病理,分离血清检测谷草转氨酶(AST)与谷丙转氨酶(ALT),TBA法检测肝脏MDA含量,IHC和Western blot法检测IL-22和IL-2在肝组织的表达水平.结果 TCE组和TCE+Tempol组致敏率分别为40.0％和33.3％;病理检测结果显示:空白组、溶剂组与致敏阴性组小鼠肝细胞无明显病理变化,TCE致敏阳性组小鼠肝细胞中存在大量空泡样变性,细胞水肿且细胞质呈现疏松状态,而TCE+Tempol致敏阳性组表现为部分区域可见肝细胞水肿;溶剂组、致敏阴性组与空白组相比,小鼠肝组织中MDA活性、IL-22和IL-2含量均无统计学意义,致敏阳性组小鼠肝组织中MDA、IL-22和IL-2的相对表达量皆高于溶剂组和致敏阴性组(P＜0.05),且TCE致敏阳性组高于同时点的TCE+Tempol致敏阳性组(P＜0.05).结论 Tempol可能通过降低IL-22和IL-2水平对TCE引起的免疫性肝损伤起到保护作用.     

经水摄入三氯乙烯对小鼠调节性T细胞的影响

目的研究经水摄入三氯乙烯(TCE)对小鼠调节性T细胞(Treg)的影响。方法♀BALB/c小鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组以及2.5、5 g/L TCE组,TCE经饮水染毒,分别在2、4、8、12周处死动物,采集外周血并取脾脏。流式细胞仪检测脾脏Treg细胞数量,荧光定量RT-PCR检测Treg细胞特异转录因子Foxp3 mRNA表达水平,ELISA法检测血清中白介素10(IL-10)含量。结果 TCE 2.5、5.0 g/L组小鼠脾脏Treg细胞数量比空白和溶剂对照组明显降低,2、4、8周时差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);脾脏Foxp3 mRNA表达与对照组比较,TCE暴露组明显降低,2、4、8周时差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),4周时最低;血清中IL-10含量与对照组比较,TCE 2.5、5.0 g/L组明显降低,2、4周时差异均有统计学意义(P<0.05),4周时最低;相关分析显示脾脏中Treg细胞数量和血清中细胞因子IL-10含量呈正相关(r=0.768,P<0.01)。结论经水摄入TCE对小鼠Treg细胞有显著影响。     

T-bet基因转染对哮喘小鼠脾脏Th1/Th2平衡的影响

【目的】 观察气道内T-bet基因转染对哮喘小鼠脾脏淋巴细胞Th1/Th2平衡&#65380;T-bet及GATA-3 mRNA表达的影响&#65377; 【方法】 将C57BL/6小鼠32只随机分为4组,每组8只,分别为正常对照组(A组)&#65380;哮喘模型组(B组)&#65380;空质粒干预组(C组) 和T-bet质粒干预组(D组)&#65377;卵白蛋白(OVA) 抗原溶液腹腔注射致敏,滴鼻造模&#65377;空质粒组和T-bet质粒干预组OVA激发24 h前,分别经鼻滴入50 μg空质粒&#65380;重组T-bet质粒,对照组用生理盐水代替OVA&#65377;最后一次滴鼻激发48 h后处死小鼠,流式细胞仪检测各组实验小鼠的脾脏淋巴细胞的Th1/Th2, RT-PCR检测小鼠脾脏淋巴细胞的T-bet及GATA-3mRNA表达&#65377; 【结果】 哮喘小鼠气道转染pcDNA3-T-bet质粒后:①流式细胞仪检测发现,脾脏Th1百分率较哮喘模型组显著升高[(2.29 ± 1.55)% vs. (1.93 ± 1.14)%,P﹤0.05],Th2百分率显著降低[(0.93 ± 0.64)% vs. (1.63 ± 0.59)%];②RT-PCR检测发现脾脏淋巴细胞转录因子T-bet mRNA表达水平显著增加(0.53 ± 0.027 vs. 0.28 ± 0.035,P﹤0.05), GATA-3 mRNA表达水平显著降低(0.24 ± 0.022 vs. 0.58 ± 0.038,P﹤0.05)&#65377;而pcDNA3空质粒干预后与哮喘模型组比较无显著差异&#65377;【结论】 气道内转导pcDNA3-T-bet质粒后,可显著上调哮喘小鼠体内T-betmRNA表达,下调GATA-3 mRNA表达,有效改善哮喘小鼠体内Th1/Th2比例失衡,从而抑制哮喘小鼠的气道炎症,为哮喘的T-bet基因治疗提供依据&#65377;     

转录因子T-bet/GATA-3在支气管哮喘小鼠中的表达及地塞米松的干预作用

目的:探讨核因子T-bet/GATA-3在支气管哮喘小鼠发病机制中的作用,观察地塞米松干预后T-bet、GATA-3 mRNA的变化.方法:建立卵清蛋白(OVA)诱导的哮喘小鼠模型;24只BALB/c小鼠随机分为正常组、哮喘组及地塞米松治疗组.地塞米松腹腔注射(2 mg/kg)给药.HE染色观察气道炎症变化;采用RT-PCR方法检测T-bet、GATA-3 mRNA的表达:流式细胞技术检测小鼠脾脏CD4T细胞IFN-γ、IL4水平.结果:与正常组相比,哮喘组小鼠GATA-3 mRNA表达显著增Dn(P<0.05).T-bet mRNA水平明显降低(P<0.05),IFN-γ水平明显降低(P<0.01),IL-4水平明显升高(P<0.05);经地塞米松干预后,肺组织GATA-3、T-bet mRNA均有所降低,以GATA-3 mRNA降低更为明显,IL-4表达明显降低(P<0.05),而IFN-γ水平有减少倾向.结论:支气管哮喘小鼠T-bet/GATA-3表达失衡与气道炎症密切相关,地塞米松通过抑制GATA-3和T-bet的表达,调节IL-4/IFN-γ比率并纠正Th1/Th2平衡失调,可能是其治疗哮喘的机制之一.     

组织蛋白酶L激活PKC信号加重TCE致敏小鼠肾脏损害

目的 探讨组织蛋白酶L(CTSL)介导三氯乙烯(TCE)致敏小鼠肾脏损伤的分子机制。方法 41只雌性BALB/c小鼠随机分为空白组(5只)和溶剂组(5只),TCE处理组(15只)和TCE+CTSLi处理组(16只),建立TCE经皮致敏小鼠模型,对TCE+CTSLi处理组小鼠腹腔注射CTSL抑制剂(10 mg/kg)进行预处理,根据小鼠皮肤致敏评分评估为阳性组和阴性组。通过电镜和HE染色观察小鼠肾脏病理情况,血清尿素氮(BUN)评估小鼠肾功能水平,免疫荧光检测CTSL的表达情况,TUNEL染色评估小鼠肾脏细胞凋亡情况,免疫印迹法检测肾脏蛋白激酶C(PKC)信号分子的活化情况。结果 TCE处理组和TCE+CTSLi处理组的致敏率分别为53.3%(8/15)和50.0%(8/16),致敏率差异无统计学差异(P>0.05)。病理学结果表明TCE致敏阳性小鼠出现肾小管细胞水肿、空泡变性,肾小球基底膜增厚,足细胞足突融合,线粒体空泡样变性等表现。肾功能结果表明TCE致敏阳性小鼠血清BUN水平较其他组升高。免疫荧光结果表明CTSL在TCE致敏阳性小鼠肾脏表达水平升高(P<0.05,F=8...     

哮喘患儿转录因子T-bet/GATA-3 mRNA比值及其与Th1/Th2平衡间的关系

【目的】研究转录因子T-bet/GATA-3在小儿哮喘发病以及Th1/Th2失衡中的作用。【方法】本实验拟通过半定量RT-PCR检测部分哮喘患儿外周血单个核细胞（PBMC）中T-bet、GATA-3 mRNA表达情况,同时采用三色荧光流式细胞仪检测哮喘患儿的Th1、Th2细胞数量,并对T-bet、GATA-3 mRNA表达水平与Th1、Th2细胞比率进行相关分析,了解T-bet/GATA-3对哮喘患儿的Th细胞分化的调节作用。【结果】哮喘患儿外周血淋巴细胞转录因子T-bet mRNA表达水平显著低于正常对照组,其中哮喘发作组显著低于缓解组（P〈0.05）;转录因子GATA-3 mRNA表达水平显著高于正常对照组,哮喘发作组又显著高于缓解组（P〈0.05）。哮喘患儿外周血淋巴细胞亚群Th1百分率显著低于正常对照组,其中哮喘发作组又显著低于缓解组（P〈0.05）;Th2细胞百分率显著高于正常对照组,哮喘发作组又显著高于缓解组（P〈0.05）。哮喘患儿T-bet mRNA表达量与Th1细胞比率呈正相关（r=0.731）,与Th2细胞比率呈负相关（r=-0.685）;GATA-3 mRNA表达量与Th1细胞比率呈负相关（r=-0.692）,与Th2细胞比率呈正相关（r=0.717）;T-bet/GATA-3 mRNA比值与Th1细胞比率呈正相关（r=0.793）,与Th2细胞比率呈负相关（r=-0.639）,与Th1/Th2比值呈正相关（r=0.801）。【结论】哮喘患儿T-bet/GATA-3 mRNA表达水平失调,与哮喘患儿Th1/Th2失衡密切相关,可作为衡量Th1/Th2平衡的新指标。     

IL-11对ITP患者Th1、Th2细胞及T-bet、GATA-3 mRNA的影响

目的：研究白细胞介素-11 （IL-11）对免疫性血小板减少症（ITP）患者Th1、Th2细胞亚群及其调控因子T-bet mRNA和GATA-3 mRNA表达的影响.方法：从10例ITP患者静脉中抽取外周血提取单个核细胞,加入不同浓度IL-11（0、25、50、100、200 ng/mL）培养4d后,应用流式细胞术和实时荧光定量反转录-多聚酶链反应法检测Th1、Th2细胞亚群比例及T-bet mRNA、GATA-3 mRNA表达水平.结果：当IL-11浓度为100 ng/mL时,与浓度为0的对照组差异最明显,表现为Th1比例及Th1/Th2比值下降,Th2比例升高,差异有统计学意义（P＜0.01）,同时T-bet mRNA表达下降,GATA-3 mRNA表达增加,T-bet/GATA-3比值显著下降,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论：一定浓度的IL-11在体外培养中能促使ITP患者Th1细胞向Th2细胞转化,同时GATA-3 mRNA表达增加、T-bet mRNA表达下降.     

Tc1/Tc2 Imbalance in the Peripheral Blood of Patients with Recurrent Genital Herpes

In order to investigate the IFN-γ and IL-4 expression of CD8^＋T lymphoeytes in the peripheral blood from patients with recurrent genital herpes （RGH） at different clinical periods and their relationship with the pathogenesis of RGH, flow cytometry was used to detect the intracellular cytokines （IFN-γ and IL-4） of CD8^＋ T lymphocytes in the peripheral blood of 30 patients with RGH at acute period, 20 patients with RGH at recovery period and 15 healthy volunteers. The results showed that RGH patients at acute period had a lower percentage of Tcl subsets in peripheral blood than that of healthy controls （P〈0. 001）, especially a remarkable decreased percentage of Tc1 subsets （P〈0. 001） among those RGH patients with recurrent number more than 3 in the recent half a year. Tc1/Tc2 ratio in the RGH patients at acute period was significantly decreased as conapared with normal control group （P〈0.05）. The recurrent number of acute patients in the recent half a year was significantly correlated with the percentage of Tc1 subsets and the ratio of Tc1/Tc2 （P〈 0.05）. A decreased percentage of Tc1 subsets was found among the RGH patients with recurrent number more than 3 in the recent half a year at recovery period in comparison with healthy volunteers （P〈0.05）, and it was significantly correlated with the recurrent number in the recent half a year （P〈0.05）. It is concluded that there are Tc1/Tc2 imbalance and a low level of Tc1 subsets in RGH patients who are relapsing repeatedly in the near period. The low level of Tc1 subsets may be an important factor for the recurrence of RGH and the reactivation of latent herpesvirus infection.     

类风湿性关节炎患者Th1/Th2、Tc1/Tc2细胞的检测及意义

目的:探讨类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis,RA)患者外周血Th1/Th2、Tc1/Tc2细胞亚群极化状态,分析RA的免疫学发病机制,为RA的临床治疗提供理论依据。方法:收集RA患者及健康者外周抗凝静脉血,分离纯化淋巴细胞。FITC标记的抗CD3单抗,Cy5标记的抗CD4、CD8单抗,PE标记的抗CD30单抗,以CD3/CD4、CD3/CD8设门作三色流式细胞术(Tris-colorflowcytometry),分析RA患者T细胞亚群极化状态。结果:与正常对照相比,RA患者外周血CD4+细胞百分率显著升高(P<0.01),CD8+细胞百分率则无明显变化(P>0.05),CD4+/CD8+比例明显升高(P<0.05);CD3+CD4+CD30-细胞百分率、CD4+CD30-/CD4+CD30+和CD8+CD30-/CD8+CD30+比例均明显升高(P<0.01),而CD3+CD4+CD30+、CD3+CD8+CD30-及CD3+CD8+CD30+细胞百分率无明显变化(P>0.05)。结论:RA患者外周血存在细胞免疫功能失调,T细胞亚群极化状态发生改变,呈明显的Th1类细胞优势;Th1/Tc1型细胞介导的细胞免疫可能与RA的发病机制有关。     

乙型肝炎外周血Th1/Th2及Tc1/Tc2细胞失衡的临床意义研究

目的 探讨外周血Th1/Th2、Tc1/Tc2细胞失衡在乙型肝炎中的临床意义.方法 采用流式细胞术分析乙型肝炎患者外周血不同T淋巴细胞亚群中细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)和白介素4(IL-4)表达率的变化,分别比较急慢性乙型肝炎以及慢性轻、中、重度肝炎Th1/Th2、Tc1/Tc2的变化.结果 慢性乙型肝炎Th2、Tc2细胞均高于急性乙型肝炎(t=-3.54,P=0.001;t=-2.27,P=0.026);相对于轻度组,中度以及重度组Th1、Tc1均有升高(P＜0.01);相对于中度组,重度组Th1、Tc1亦有增高(P＜0.05).结论 乙型肝炎外周血Th2、Tc2细胞与炎症慢性化有关;随着慢性乙型肝炎活动程度的加剧,Th1、Tc1细胞逐渐增多.     

^99mTc—MIBI诊断肝硬化门静脉高压的临床研究

目的：旨在了解门脉分流程度。方法：对３５肝硬化和１２例非肝硬化患者，用＾９９ｍＴｃ－ＭＩＢＩ经直肠注入，测定心肝核素显影比值（Ｈ／Ｌ）。结果：按Ｃｈｉｌｄ－Ｐｕｇｈ分类的肝硬化各级Ｈ／Ｌ值，分别与对照组比较，差异均有显著性（Ｐ〈０．０１）；７例肝硬化和４例非肝硬化患者，术中所测的门脉压力与Ｈ／Ｌ值叶正相关。胃镜下食管静脉曲张度不同的Ｈ／Ｌ值亦不同，重工曲张者１３例，Ｈ／Ｌ值均〉１．００，其中，出血     

血栓示踪剂D-dimer在定位诊断血栓方面的研究

为探讨放射性核素标记单克隆抗体示踪剂在血栓定位中的作用 ,将99m锝标记的抗D 二聚体单克隆抗体注入实验性血栓家兔血管内 ,以放射免疫显像技术观察放射性核素在血流和血栓部位的分布。结果显示 ,静脉血栓形成术后 2～ 4d ,血栓处放射性99m锝的分布较健侧明显增多。而单纯钳夹血管造成的血液淤滞未能引起99m锝标记率升高。注射99m锝标记单抗后 ,动物未见不良反应和病理学改变。结果提示 ,99m锝标记抗D 二聚体单抗可作为血栓示踪剂用于实验性血栓的定位诊断。     

哮喘患儿的外周血淋巴细胞CD40/CD40L的表达及其与Tc1和Tc2的关系

 【目的】研究发作期哮喘患儿的外周血CD40、CD40L的表达率及其与Tc1和Tc2的关系。【方法】应用流式细胞术检测30例哮喘患儿和20例正常对照儿童的外周血淋巴细胞CD40、CD40L的表达率和Tc1、Tc2的细胞数。【结果】哮喘患儿和正常对照组的外周血淋巴细胞CD40表达率分别为21.59±7.61和15.82±4.44(t=3.376,P<0.001);CD40L表达率分别为0.20±0.11和0.33±0.12(t=-2.747,P<0.05);Tc1细胞数分别为9.06±3.80和7.28±3.01(t=0.582,P>0.05);Tc2细胞数分别为7.64±3.67和3.02±1.38(t=3.981,P<0.001)。CD40和CD40L表达率与Tc1、Tc2数量无显著的相关性(r分别为-0.004和0.231、-0.280和0.186,P>0.05)。【结论】发作期哮喘患儿存在明显的CD40/CD40L、Tc1/Tc2的异常,这可能与哮喘的发生有重要的关联。     

^99mTc—柠檬酸在细菌性脓肿中的积聚和显像研究

在股部细菌性脓肿小鼠体内应用９９ｍＴｃ标记的柠檬酸进行显像和生物分布研究。在给药后短期内即可获得显示脓肿灶的满意图像。脓肿内放射性各时间均明显高于对侧未致炎肌肉，脓肿／肌肉放射性比值在１ｈ即达４．５５±０．５３。脓肿／血液比值逐渐升高，２４ｈ达１．５０±０．２４。而同期肌肉内放射性均明显低于血液水平。９９ｍＴｃ柠檬酸经肾排泄迅速。结果表明，９９ｍＴｃ－柠檬酸是一种简单有效的炎症显像剂。     

^99Tc^m标记白细胞在家兔脓肿和炎症患者显像中的初步应用

目的：改良＾９９Ｔｃ＾ｍ－ＷＢＣ制备条件并评价其特性。方法：取１０ｍｌ家兔及人全血分离ＷＢＣ，用＾９９Ｔｃ＾ｍ－ＨＭＰＡＯ介导标记，评价ＷＢＣ分离率、＾９９Ｔｃ＾ｍ－ＷＢＣ的标记率、稳定性、活性及其在家兔脓肿模型和炎性肠病患者体内的炎症定位特性。结果：ＷＢＣ分离率达７０％，＾９９Ｔｃ＾ｍ－ＷＢＣ标记率和活性率分别高达６０％和９０％。放射性不断自ＷＢＣ中逸脱。注射＾９９Ｔｃ＾ｍ－ＷＢＣ后１０ｍｉｎ家     

肾小管功能显像剂~(99m)Tc-EC的人体内辐射吸收剂量研究

采用动物实验和人体测定两种方法评价(99)mTC－EC的人体内辐射吸收剂量,结果显示此两种方法测得数据相近（P＞005）,(99)mTc－EC各脏器内照射吸收剂量均比131I—OIH低。