慢性粒细胞白血病PKR基因的表达及临床意义

目的检测双链RNA依赖性蛋白激酶(double-stranded RNA-dependent protein kinase,PKR)基因在慢性粒细胞白血病(CML)病人及CML细胞株K562细胞中的表达情况。方法分离CML患者慢性期(CP)15例,加速期(AP)11例,急变期(BC)9例及11例正常供者骨髓或外周血单个核细胞,应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测其PKR基因表达情况,并同时检测PKR基因在K562细胞中的表达。结果正常对照组PKR表达阳性率为90.9%,高于加速期的81.8%(P0.05)及急变期的77.8%(P0.05);正常对照组PKR/GAPDH比值为(0.92±0.40)%,高于慢性期的(0.85±0.32)%(P0.05)及加速期的(0.72±0.54)%(P0.05),明显高于急变期的(0.46±0.31)%(P0.01)。K562细胞PKR/GAPDH比值为(0.55±0.13)%。结论 CML细胞及K562细胞株都有一定丰度的蛋白激酶PKR基因表达,为通过激活PKR而靶向诱导CML细胞凋亡奠定理论基础。     

XIAP基因在慢性髓系白血病中的表达及临床意义

本研究旨在检测慢性髓系白血病(CML)患者XIAP基因mRNA的表达情况,以探讨其在CML病情进展及预后中的意义。应用染色体R显带技术及实时PCR技术对71例CML患者和10名健康者进行染色体核型分析及XIAP mRNA检测。结果表明,XIAP mRNA在CML的加速期和急变期的平均表达水平明显高于慢性期(p<0.01)。XIAP基因在不同核型组的平均表达水平无显著性差异。结论:CML患者加速期和急变期XIAP基因表达明显增高,XIAP基因与CML的病情进展密切相关。     

bcr/ab1 mRNA融合转录本水平与慢性粒细胞白血病演变关系

目的 检测不同病程慢性粒细胞白血病(CML)bcr/ab1 mRNA融合转录本表达水平,评价其在推断CML病情演变价值.方法 利用定量聚合酶链反应(PCR)检测患者不同病期骨髓单个核细胞bcr/ab1 mRNA融合转录本水平.结果 健康对照组0,CML慢性期0.34±0.03,慢性期治疗后0.10±0.03,加速期0.35±0.02,急变期为0.35±0.03,慢性期治疗前后差异无统计学意义,慢性期明显低于加速期和急变期. 结论 bcr/ab1 mRNA表达水平的改变与疾病演变关系密切.     

慢性粒细胞白血病患者血管内皮生长因子水平的研究

目的探讨慢性粒细胞白血病（CML）不同阶段外周血血管内皮生长因子（VEGF）的水平与CML病情、预后及疗效的关系。方法使用CBA技术对55例CML患者及30例正常人外周血VEGF的水平进行检测,同时计数骨髓原始细胞数量。结果慢性期、加速期和急变期VEGF水平均增高,明显高于健康对照组（P〈0．05或P〈0．01）;急变期升高最明显,显著高于慢性期和加速期（P〈0．01）,差异均有统计学意义。CML患者外周血VEGF水平与骨髓原始细胞比例变化基本一致。结论CML外周血VEGF水平与病情相关联,检测CML外周血VEGF水平对观察CML的病情发展、预后及疗效的判断具有重要的临床价值。     

吉西他滨对慢性粒细胞白血病患者骨髓细胞G-CSFR及bcr/abl mRNA的影响

为了观察吉西他滨对慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓粒细胞集落刺激因子受体(G-CSFR)及bcr/ablmRNA的作用,收集CML慢性期、急变期患者的及骨髓象正常的非血液病患者骨髓液,分为吉西他滨组(加入吉西他滨,调整浓度为10μg/ml)和对照组,培养48小时后收集细胞。采用流式细胞术检测各组标本骨髓G-CSFR的表达率;采用RT-PCR技术检测各组标本bcr/abl mRNA的表达。结果表明:吉西他滨组CML慢性期、急变期患者及骨髓象正常者骨髓G-CSFR的表达率分别为(50.72±8.57)%、(36.32±4.25)%和(59.42±7.62)%。对照组CML慢性期、急变期患者及骨髓象正常者骨髓粒系G-CSFR的表达率分别为(45.42±6.52)%、(30.58±5.68)%和(58.56±5.54)%。两组CML患者骨髓G-CSFR的表达率分别与骨髓象正常组比较,差异有显著性(p0.05),CML慢性期患者与急变期比较,差异有显著性(p0.05)。吉西他滨组CML患者G-CSFR的表达率与未加药组相应组别比较,差异有显著性(p0.05)。吉西他滨组CML慢性期、急变期患者bcr/abl mRNA表达水平比较,差异无显著性(p0.05)。吉西他滨组与对照组、CML慢性期、急变期患者G-CSFR表达率与bcr/abl mRNA表达水平呈负相关(p0.05)。结论:在体外培养下,吉西他滨可以提高CML慢性期、急变期患者骨髓G-CSFR的表达率,对bcr/abl mRNA表达的作用不明显,CML慢性期、急变期患者G-CSFR表达率与bcr/abl mRNA表达水平呈负相关。     

利用SYBR Green Ⅰ实时定量RT-PCR方法检测白血病患者RbAp46基因的表达

目的探讨白血病患者骨髓细胞RbAp46基因的表达水平.方法建立实时定量RT-PCR方法,利用SYBR Green Ⅰ染料检测140例急性白血病(AL)、13例慢性粒细胞白血病(CML)慢性期和7例CML急变期患者以及32例非白血病患者骨髓细胞RbAp46基因的表达水平.结果初诊与复发AL患者骨髓中RbAp46基因表达水平的M估计值分别为178.23和213.65,明显高于完全缓解组和对照组(分别为85.89和88.08);CML慢性期组M估计值为58.27,与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),而CML急变期组M估计值为173.24,明显高于CML慢性期组和对照组.98例初诊AL中除M2、M4亚型M估计值(62.63,130.67)与对照组相比差异无统计学意义外,余均明显高于对照组.初诊AL中RbAp46基因表达水平与bcr/abl、PML-RARα、mdrl基因的表达无相关性,但与WT1基因的表达水平呈正相关,与AML1/ETO融合基因表达呈负相关.结论RbAp46在AL初诊、复发及CML急变期患者骨髓细胞中高表达,可能参与白血病的发生.     

慢性粒细胞白血病病人Mcl-1和Bcr/Abl基因表达

目的探讨慢性粒细胞白血病（CML）病人Mcl-1基因和Bcr/Abl融合基因的表达水平及临床意义。方法应用实时荧光定量PCR技术检测了41例CML病人（包括慢性期15例、加速期6例、急变期6例、伊马替尼治疗后遗传学完全缓解8例及非伊马替尼治疗的未缓解的CML病人6例）骨髓标本Mcl-1基因、Bcr/Abl融合基因的表达水平,以10例正常人作为对照。结果 CML各组Mcl-1和Bcr/Abl mRNA的表达水平差异均有显著性（χ2=19.12～36.08,P〈0.05）。伊马替尼治疗组与正常对照组Mcl-1 mRNA的表达明显低于其他各组（Z=2.547～3.254,P〈0.05）;加速期、急变期及非伊马替尼治疗组之间Mcl-1 mRNA的表达水平差异无显著性（Z=0.481～1.922,P〉0.05）,但均明显高于慢性期（Z=2.650～3.465,P〈0.05）。Bcr/Abl mRNA在慢性期、加速期、急变期及非伊马替尼治疗组之间表达差异无显著性（Z=0.480～1.196,P〉0.05）。CML病人Mcl-1与Bcr/AblmRNA的表达水平呈正相关（r=0.68,P〈0.05）。结论 Mcl-1和Bcr/Abl与CML的病情密切相关,参与CML的发生和发展,是判断病情进展及预后的分子标记物。     

Treg、FoxP3和TGF-β在慢性髓系白血病中的表达及意义

目的：分析调节性T细胞(Treg)、叉头状转录因子P3(FoxP3)和转化生长因子-β(TGF-β)在慢性髓系白血病(CML)不同时期中的表达及意义。方法：收集2018年3月-2021年3月在菏泽市立医院血液内科就诊的73例CML患者的外周血，根据患者所处的CML不同时期，将患者分为初诊组、慢性期组和急变期组，应用流式细胞术检测患者Treg水平，RT-q PCR检测FoxP3 mRNA表达水平，酶联免疫吸附试验检测血浆中TGF-β的表达水平，分析上述指标在患者临床发病过程中的作用。结果：初诊组患者Treg比例较慢性期组升高，但差异无显著统计学意义(P=0.695)，而急变期组较初诊组和慢性期组均显著升高(P=0.008,P<0.001)。初诊组、慢性期组和急变期组FoxP3mRNA表达水平分别为11.61±2.21、6.46±1.35和8.54±2.13,FoxP3 mRNA表达水平在CML不同时期的差异具有统计学意义(F=55.199,P<0.001)。初诊组和急变期组FoxP3 mRNA表达水平均高于慢性期组(P<0.001)，且初诊组最高(P<0.001)...     

慢性髓系白血病患者中基因SCIN表达及启动子甲基化的临床研究

目的:探讨基因SCIN表达及启动子甲基化在慢性髓系白血病(CML)患者中的临床意义。方法:应用实时定量PCR检测64例CML患者和37例对照骨髓单个核细胞SCIN的表达水平。应用实时定量甲基化特异性PCR结合亚硫酸盐测序PCR检测65例CML患者和29例对照SCIN启动子甲基化水平。结果:CML患者与对照组相比细胞SCIN表达水平明显下调(P=0.010);慢性期、加速期与急变期患者中SCIN表达下调率分别为61%、67%和75%,有增加趋势。Spearman相关性分析显示,基因SCIN表达与BCR-ABL1转录水平呈负相关(r=-0.315,P0.05)。然而,SCIN低表达组与高表达组相比较,在性别、年龄、外周血白细胞数、血红蛋白水平、血小板数量、染色体特征、CML分期及BCR-ABL1转录水平等临床参数中未见差异(P0.05)。CML患者SCIN启动子甲基化水平与对照组比较无统计学差异,且SCIN表达与启动子甲基化水平无相关性(P0.05)。结论:基因SCIN在CML患者中非甲基化依赖性表达下调,可能与BCR-ABL1融合基因致病CML有关;SCIN表达下调可能与CML进展有关。     

慢性粒细胞白血病血管内皮生长因子表达及其临床意义

目的:探讨慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者血清血管内皮生长因子(vascular en-dothelial growth factor,VEGF)表达水平与病情进展和近期疗效的关系。方法:采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)定量检测了9例CML患者初诊时、治疗前后以及其中4例患者从慢性期向急变期转变过程中的血清VEGF水平。结果:在9例初诊的CML患者中,慢性期组、加速/急变期组VEGF水平明显高于正常人对照组,而加速/急变期组又高于慢性期组;对其中4患者动态观察发现,随着病情从慢性期向加速期、急变期进展,其VEGF水平也逐渐升高;CML患者经治疗并取得近期疗效后,其VEGF水平明显下降,而无效组却无变化。结论:CML患者血清VEGF水平与病情进展、近期疗效密切相关,可作为判断预后和疗效的参考指标。     

节律基因在慢性粒细胞白血病中表达水平及意义

目的探讨节律基因在慢性粒细胞白血病(CML)中的表达情况,及其与bcr/abl融合基因的相关性,为临床治疗提供新的分子靶点。方法收集106例CML患者慢性期、加速期、急变期的骨髓标本和50例健康体检人员的外周血为对照,采用RT-PCR法检测per1、per2、bcr/abl基因表达情况。结果 per1、per2、bcr/abl基因在慢性期、加速期和急变期存在不同水平的变化,并且per1、per2表达水平与bcr/abl基因存在负相关。结论节律基因作为肿瘤抑制因子在CML中是低表达的,在信号转导通路中是否与bcr/abl基因相互作用还需深入研究。     

RQ-PCR在慢性粒细胞白血病细胞BCR-ABL融合基因检测中的应用

目的探讨采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RQ-PCR)技术检测慢性粒细胞白血病(CML)细胞的BCRABLp210融合基因的临床价值。方法应用RQ-PCR技术对60例CML患者骨髓细胞BCR-ABLp210融合基因进行定量检测分析。结果 60例BCR-ABLp210融合基因阳性的CML患者中,慢性期33例,加速期13例,急变期14例,且CML急变期患者BCR-ABLp210转录本水平明显高于慢性期和加速期患者。经异基因造血干细胞移植治疗或经伊马替尼治疗6个月后,BCRABLp210转录本水平均较6个月前明显降低。但这两种方法治疗CML患者12个月后的效果比较差异无统计学意义(P0.05),而采用其他酪氨酸激酶抑制剂治疗CML 12个月后也可达到相似的治疗效果。结论 RQ-PCR技术监测CML患者细胞BCR-ABLp210融合基因表达有助于CML的诊断、治疗效果评价及微小残留的监测。     

DNA甲基转移酶在慢性髓系白血病患者的表达及临床意义

目的:探讨慢性髓系白血病(CML)患者骨髓或外周血单个核细胞DNA甲基转移酶(DNMT)的表达水平及临床意义。方法:应用SYBR Green荧光定量PCR的方法检测94例3个不同时期CML患者及10例正常对照者骨髓或外周血单个核细胞中DNMT mRNA的表达水平。结果:正常对照(NC)组、CML慢性期(CML-CP)、加速期(CML-AP)、急变期(CML-BP)组DNMT1 mRNA的相对表达水平分别为1.45±0.22、1.83±0.63、2.95±0.87、3.24±1.39,CML-CP组患者与NC组比较表达水平差异统计学意义(P=0.28);CML疾病进展期包括(CML-AP和CML-BP)较NC和CML-CP组表达水平显著增高(P0.01);CML-AP与CML-BP相比表达水平无统计学差异(P=0.336)。NC、CML-CP、CML-AP、CML-BP组DNMT3a mRNA的相对表达水平分别为1.29±0.34、1.34±0.46、2.33±1.05、3.18±1.23。CML-CP组患者与NC组比较表达水平无统计学差异(P=0.844);CML疾病进展期较NC组和CML-CP组表达水平显著增高(P0.05);CML-AP与CML-BP相比表达水平无统计学差异(P=0.304)。NC、CML-CP、CML-AP、CML-BP组DNMT3b mRNA的相对表达水平分别为1.37±0.31、16.41±22.50、9.36±5.50、12.17±13.44,在CML患者较在NC组表达水平显著增高(P0.05)。CML患者各期之间比较无统计学差异(P0.05)。结论:疾病进展期CML患者中DNMT mRNA表达增高,DNMT mRNA表达水平与CML疾病进展相关。     

bcr／abl mRNA融合转录本水平与慢性粒细胞白血病演变关系

目的检测不同病程慢性粒细胞白血病（CML）bcr／abl mRNA融合转录本表达水平．评价其在推断CML病情演变价值。方法利用定量聚合酶链反应（PCR）检测患者不同病期骨髓单个核细胞bcr／abl mRNA融合转录本水平。结果健康对照组0，CML慢性期0．34±0．03．慢性期治疗后0．10±0．（33，加速期0．35±0．02，急变期为0．35±0．03，慢性期治疗前后差异无统计学意义，慢性期明显低于加速期和急变期。结论bcr／abl mRNA表达水平的改变与疾病演变关系密切。     

肿瘤抑制基因P16和UBAP1在慢性粒细胞白血病的表达研究

目的探讨肿瘤抑制基因P16和UBAP1表达水平与慢性粒细胞白血病(CML)病程进展的关系。方法纳入93例CML初诊患者,其中慢性期(CP)76例、加速期(AP)及急变期(BC)17例(急髓变12例、急淋变5例),以22例非恶性血液病患者作为对照组,分别提取外周血单个核细胞总RNA,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测UBAP1和P16的表达情况。结果 PCR产物电泳图及熔解曲线均显示实时荧光定量PCR法扩增P16和UBAP1基因具有较好的特异性。CML-CP组、急髓变组P16mRNA表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);急淋变组,P16基因mRNA表达水平低于对照组(P<0.05)。CML-CP组UBAP1mRNA表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),CML-AP与CML-BC组表达水平降低(P<0.05);急髓变和急淋变组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论不同CML病程患者具有不同的UBAP1和P16基因表达水平;UBAP1与P16基因表达水平与CML疾病进展存在一定的关系。     

慢性粒细胞白血病患者血管新生及相关因素研究

目的 观察慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓血管新生情况,探讨骨髓微血管密度(MVD)、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在CML患者的表达及意义.方法 采用免疫组化染色(S-P)法检测32例CML患者和10例对照组骨髓活检组织中MVD及VEGF,bFGF的表达率.结果 24例CML慢性期患者骨髓MVD与对照组比较,差异有非常显著性意义(t=14.03,P<0.01);5例CML加速期患者骨髓MVD与对照组比较差异均有非常显著性意义(t=9.76,P<0.01);CML慢性期、加速期、急变期骨髓中VEGF,bFGF的阳性表达率均明显高于对照组,而CML加速期与急变期比较VEGF的阳性表达率差异无统计学意义(t=1.12,P>0.05),bFGF的阳性表达率差异无统计学意义(t=1.15,P>0.05).结论 CML患者存在骨髓血管新生,血管新生及其调控因素的异常在CML患者的发生、发展中有着重要作用.     

慢性粒细胞白血病慢性期与急变期基因表达差异的研究

目的　研究慢性粒细胞白血病 (CML)不同临床阶段的基因表达差异 ,为阐明CML演变的可能机制提供依据。方法　应用DNA芯片技术 ,对CML慢性期与急变期骨髓单个核细胞的基因表达差异进行了检测。结果　在检测的 1176个基因中 ,有 6 8个基因显示急变期较慢性期明显上调 ,其中转录因子 16个 (2 3.5 % ) ,细胞表面抗原 15个 (2 2 .1% ) ,细胞调节蛋白 13个 (19.1% ) ,其它 2 4个(35 3% )。在差异表达的基因中 ,有 17个基因仅在急变期表达 ,而在慢性期不表达 ,11个 (16 .2 % )与G蛋白基因有关。结论　CML慢性期与急变期骨髓单个核细胞基因表达谱存在显著差异 ,基因高表达是CML急变期的特征之一。G蛋白相关基因在CML急变过程中可能起着重要作用。     

慢性髓系白血病患者各期id4基因甲基化状态研究

本研究探讨id4基因在慢性髓系白血病（CML）不同时期甲基化状态及其与疾病进展的关系。采用甲基化特异的PCR（MS-PCR）方法对48例CML患者和10例正常人的骨髓标本进行id4基因启动子区甲基化状态检测。结果表明：id4基因在正常人及CML慢性期患者骨髓中呈现完全非甲基化状态,而在CML急变期（包括加速期）骨髓中id4甲基化率为66%,较正常人和CML慢性期明显增加,二者差异具有统计学意义（p〈0.05）。系列研究结果也显示,同一CML患者的id4基因甲基化状态在慢性期时是非甲基化的,而在加速期或急变期却为甲基化状态。结论：id4基因在CML慢性期呈非甲基化,在加速期或急变期则呈甲基化状态,因而检测id4基因甲基化程度有助于监测CML患者的病情演变,可作为CML疾病进展的标志。     

慢性粒细胞白血病病人Mcl一1基因和Bcr／Abl基因的表达及临床意义

目的探讨慢性粒细胞白血病（CML）病人Mcl—l基因和Bcr／Abl融合基因的表达水平及临床意义。方法应用实时荧光定量PCR技术检测了4l例cML病人（包括慢性期15倒、加速期6例、急变期6例、伊马替尼治疗后遗传学完全缓解8例及非伊马替尼治疗的未缓解的CML病人6例）骨髓标本Mel—l基因、Ber／Abl融合基因的表达水平,以10例正常人作为对照。结果CML各组Mcl—I和Bcr／AblmRNA的表达水平差异均有显著性（X2=19．12—36．08,P〈0．05）。伊马替尼治疗组与正常对照组Mel—lmRNA的表达明显低于其他各组（z=2．547—3．254,P〈0．05）;加速期、急变期及非伊马替尼治疗组之间Mcl—lmRNA的表达水平差异无显著性（z=0．481一1．922,P〉0．05）,但均明显高于慢性期（z=2．65—3．465,P〈0．05）。Ber／AblmRNA在慢性期、加速期、急变期及非伊马替尼治疗组之间表达差异无显著性（z=0．48—1．196,P〉0．05）。CML患者Mel—l与Bcr／AblmRNA的表达水平呈正相关（r=0．68,P〈0．05）。结论Mcl—l和Ber／Abl与CML的病情密切相关,参与cML的发生和发展,是判断病情进展及预后的分子标记物。     

伊马替尼治疗的慢性髓系白血病患者JARID1B、Hes1和MMP-9基因表达水平差异的研究

目的:探讨JARID1B、Hes1和MMP-9基因表达水平与慢性髓系白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)疾病的病程阶段及伊马替尼(imatinib mesylate,IM)疗效的关系。方法:收集湖北医药学院附属太和医院血液科CML患者25例(慢性期15例、进展期10例)和体检中心正常人15例的外周血标本。按初次确诊为CML患者的病期和服用IM后的疗效分组(有效组和无效组),采用实时定量RT-PCR方法检测JARID1B、Hes1和MMP-9基因mRNA表达水平,分析JARID1B、Hes1和MMP-9基因表达水平差异与疾病阶段及IM疗效的相关性。结果:初次确诊未服用IM慢性期和进展期CML患者Hes1和MMP-9基因的表达水平明显高于正常人(P 0. 05); CML患者慢性期JARID1B基因的表达水平与正常人相比无明显差异(P=0. 20),进展期患者JARID1B的表达水平明显高于正常人(P 0. 05); IM治疗有效组JARID1B和Hes1基因的表达水平与无效组相比无明显差异(P=0. 85、P=0. 82),MMP-9的表达水平有效组明显低于无效组(P 0. 05)。结论:JARID1B、Hes1和MMP-9基因的表达水平与CML的不同病程分期有关; JARID1B、Hes1基因表达水平与IM疗效无关,MMP-9基因表达水平与IM疗效有关。