Notch信号抑制剂(2S)-N-N-(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰-2-苯基甘氨酸叔丁酯对肾正常及肿瘤细胞c-myc的影响

目的 观察Notch信号抑制剂(2S)-N-N-(3,5-氟苯乙酰基)-L-丙氨酰-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT)对肾小管上皮细胞HKC及肾肿瘤细胞786-O中c-myc表达及对细胞增殖的影响.方法 通过实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)及Western blot方法连续3次检测HKC及786-O 中c-myc的表达及DAPT处理后HKC及786-O细胞中c-myc的表达变化,并检测DAPT对细胞增殖及周期的影响.结果 786-O中c-myc表达比HKC高(2.54±0.24)倍(P＜0.01).DAPT处理后,HKC及786-O细胞中c-myc表达分别下调(1.41±0.13)和(2.93±0.26)倍(P均＜0.05);两株细胞的增殖均受到抑制,HKC及786-O G0/G1期细胞比例分别增加9.75％和16.54％(P均＜0.01).结论 Notch信号抑制剂DAPT可能通过抑制c-myc的表达而抑制肾正常及肿瘤细胞的增殖.     

MicroRNA-126在肾透明细胞癌中的表达及对细胞株786-O生物学行为的影响

目的:研究MicroRNA-126(miRNA-126)在肾透明细胞癌(ccRCC)中的表达及其对细胞株786-O生物学行为的机制。方法:通过Real-time PCR的方法检测30例ccRCC及癌旁正常肾组织中miRNA-126-5p的表达情况。运用RT-qPCR的方法检测肾癌细胞株786-O和人肾小管上皮细胞株HK-2中miRNA-126-5p的表达;用Lipofectamine RNAiMAX将hsa-miRNA-126-5p转染786-O细胞株,用MTT、Transwell侵袭实验、Annexin V/PI双染法观察转染后细胞在增殖、侵袭力和凋亡方面的变化。结果:miRNA-126-5p在肾癌组织中的表达明显降低,在不同病理分级的样本中,miRNA-126-5p在高分化组中表达量为36.63±5.38,中、低分化组为19.96±7.28,差异无统计学意义(P0.05)。在不同临床分期的样本中,Ⅰ期miRNA-126-5p表达量为37.05±6.38,Ⅱ~Ⅲ期的表达量为24.03±6.15,不同分期之间差异无统计学意义(P0.05)。786-O细胞株转染后,检测miRNA-126-5p在实验组细胞的表达为42.86±7.01,显著高于阴性对照组27.46±8.43(P0.05)。MTT法检测786-O转染后48h增殖情况,实验组的细胞相对存活率为80.82±0.47,阴性对照组98.87±0.27,差异有统计学意义(P0.01)。Transwell侵袭实验显示,实验组miRNA-126-5p表达明显低于阴性对照组[(33.89±2.80)vs.(53.67±2.23),P0.05]。Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,实验组的细胞凋亡率明显高于阴性对照组[(22.56±1.13)vs.(7.20±0.26),P0.05]。结论:miRNA-126-5p在ccRCC组织中的表达量明显低于癌旁组织中的表达,其表达与肿瘤分级和临床分期无明显相关性。hsa-miRNA-126-5p转染细胞株786-O后,miRNA-126-5p的表达明显上调,并能够使786-O细胞增殖受到抑制,侵袭力降低,凋亡率增加。     

柴胡皂甙-d对人肝癌HepG2细胞周期的阻滞作用及p27表达的影响

目的 观察柴胡皂甙-d(SSd)对人肝癌HepG2细胞周期的阻滞作用及对其p27基因表达的影响.方法 常规培养人肝癌HepG2细胞至对数生长期,随机分为两组,实验组10 mg/L的SSd作用48 h,设空白对照;流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞p27基因mRNA表达;免疫组织化学SP法检测p27蛋白的表达.结果 实验组HepG2细胞G1期百分率为(69.43 ±3.01)％较对照组(62.83±2.72)％明显增加(P＜0.05),S期细胞百分率为(22.30±0.82)％较对照组(27.23±0.59)％明显减少(P＜0.01);p27基因mRNA相对表达量(0.566 ±0.001)较对照组(0.335±0.000)明显增多(P＜0.05);p27蛋白表达阳性率为(33.9±3.1)％较对照组(21.9±1.7)％亦明显增多(P＜0.01).结论 SSd可导致人肝癌HepG2细胞周期阻滞于G1期,其机制可能与上调p27基因表达有关.     

IGFBP3对人肾细胞癌786-O细胞系及裸鼠移植瘤的影响

目的:探讨胰岛素样生长因子结合蛋白3(insulin-like growth factor binding 3,IGFBP3)对人肾细胞癌786-O细胞系及裸鼠移植瘤的影响及分子机制。方法:慢病毒携带阴性对照Scr和shRNA IGFBP3-711分别感染786-O细胞,嘌呤霉素筛选得到稳定转染细胞系,Western Blot检测IGFBP3表达情况。XTT检测抑制IGFBP3表达后786-O细胞体外增殖情况。分别将携带阴性对照Scr和抑制IGFBP3表达的786-O细胞1×10~7个注入裸鼠两侧皮下,成瘤8周后处死裸鼠,取出皮下肿瘤组织并称重,对比对照组及实验组裸鼠移植瘤生长情况。结果:shRNA IGFBP3-711能够有效抑制IGFBP3的表达;抑制IGFBP3的表达对786-O细胞体外增殖没有影响;但抑制IGFBP3表达后裸鼠移植瘤成瘤能力明显大于对照,差异有统计学意义(P0.01)。结论:IGFBP3对于肾细胞癌细胞系786-O体外增殖没有影响,但对裸鼠移植瘤有明显生长抑制作用。     

LRIG3基因过表达对神经胶质瘤细胞株U251与U87增殖及增殖细胞核抗原和Ki-67表达的影响

目的 探讨过表达LRIG3基因对神经胶质瘤细胞株U251与U87增殖及增殖细胞核抗原(PCNA)和Ki-67表达的影响及其机制。方法 用携带LRIG3过表达特异性序列和只含空白载体的质粒用慢病毒法感染胶质瘤细胞株U251与U87,筛选稳定株,分别分成实验组和对照组,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测各组细胞LRIG3表达的变化,应用噻唑蓝(MTT)比色法检测病毒感染后对胶质瘤细胞株U251与U87增殖的影响,用免疫组织化学链霉亲和素生物素复合物(SABC)法分别检测各组细胞中PCNA和Ki-67的表达差异。结果 LRIG3过表达组细胞中LRIG3 mRNA水平与对照组比较分别升高67.6％( U251)和79.9％ (U87),LRIG3蛋白表达水平分别升高62.3％(U87)和91.0％( U251)。MTT法结果显示两实验组细胞增殖率均低于相应对照组。U251细胞对照组PCNA阳性率为(47.81 ±4.67)％,实验组为(27.49±3.17)％,U87细胞对照组PCNA阳性率为(55.50±4.01)％,实验组为(33.60±4.82)％,差异均有统计学意义(P＜0.05)。U251细胞对照组中Ki-67的阳性率为(48.50±6.11)％,实验组为(24.30±3.76)％,U87细胞对照组Ki-67阳性率为(55.20±4.19)％,实验组为(23.50±4.60)％,差异均有统计学意义(P＜0.0l)。结论 LRIG3基因过表达可减少胶质瘤细胞的增殖。     

肾母细胞瘤过表达基因对肾癌细胞的作用

目的 探讨肾母细胞瘤过表达( nephroblastoma overexpressed,NOV)基因对肾癌细胞增殖、黏附、侵袭和迁移能力的影响. 方法 构建NOV蛋白表达真核细胞重组表达质粒pEGFP-C1-NOV,转染人肾癌细胞株786-O.通过计数细胞绘制生长曲线、水溶性四氮唑法(WST-1)检测细胞生长抑制率,通过细胞黏附实验、侵袭实验和细胞迁移实验,比较转染pEGFP-C1 -NOV组(实验组)与转染空载体组(空载组)及未转染组(空白组)的细胞增殖、黏附、侵袭和迁移能力的差异. 结果 与空白组比较,实验组48、72 h抑制率分别为29.14％、32.46％,空载组分别为9.25％和- 8.16％,实验组与空白组比较差异有统计学意义(P＜0.05),空载组与空白组相比差异无统计学意义(P＞0.05).与层粘连蛋白黏附,实验组A值为0.26±0.03,高于空白组(0.15±0.01)和空载组(0.14 ±0.02),差异有统计学意义(P＜0.05);与人纤维连接蛋白黏附,实验组A值为0.28±0.04,高于空白组(0.124±0.095)和空载组(0.128±0.082),差异有统计学意义(P＜0.05).实验组穿越Matrigel基质胶的细胞数为240.25±23.12,显著高于空白组(56.16 ±6.25)和空载组(50.28 ±7.13),差异有统计学意义(P＜0.05);实验组迁移通过聚碳酸酯微孔滤膜的细胞数为267.25±20.94,显著高于空白组(66.10 ±5.68)和空载组(56.28 ±4.11),差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 NOV可抑制肾癌细胞的增殖,促进肾癌细胞786-O的黏附、侵袭和迁移.     

秦皮乙素对肾透明细胞癌增殖、周期和凋亡的影响

目的:探讨秦皮乙素对肾透明细胞癌增殖、周期和凋亡的作用。方法:选取肾透明细胞癌786-O和SN12-PM6细胞,分别给予秦皮乙素(0、12.5、25、50、100、200、400、800μg/mL),培养24 h或48 h后,通过MTS和平板克隆形成实验检测秦皮乙素对786-O和SN12-PM6细胞增殖能力的影响,通过流式细胞技术检测秦皮乙素对786-O和SN12-PM6细胞周期、凋亡的影响,通过Western Blot检测周期、凋亡相关蛋白表达情况。结果:秦皮乙素能够抑制肾透明细胞癌786-O和SN12-PM6细胞的增殖(P0.05),且呈浓度和时间依赖性,与空白组(0μg/mL)相比,秦皮乙素处理组(100、200μg/mL)S期比例明显减少,G_0/G_1期和G_2/M期比例明显增加,凋亡率也明显增加(P0.05,P0.01),与空白组(0μg/mL)相比,秦皮乙素处理组(100、200μg/mL)Cyclin D1、CDK4、CDK6、c-Myc表达明显减少,Caspase 3表达无明显差异,Cleaved Caspase 3表达明显增多(P0.05,P0.01)。结论:秦皮乙素可有效抑制肾透明细胞癌786-O和SN12-PM6细胞增殖,并抑制细胞周期及诱导凋亡。     

类固醇生成因子-1基因沉默对人肾上腺皮质腺癌H295R细胞的作用及其临床意义

目的 研究类固醇生成因子-1(SF-1)基因下调对人肾上腺皮质腺癌H295R细胞的影响,并探讨SF-1在肾上腺肿瘤发病中的作用. 方法 用含SF-1特异性短发夹(shRNA)序列的质粒载体pGenesil1-SF-1-shRNA及含非特异性序列的阴性对照质粒pGenesil1-negative-shRNA分别转染H295R细胞.48 h后用蛋白质印迹法和荧光定量PCR检测SF-1表达水平.WST-1法及细胞计数法检测转染后细胞增殖情况,免疫组化SABC法检测转染后各细胞组中Ki-67表达,TUNEL法检测细胞凋亡情况. 结果 SF-1-shRNA有效地抑制了SF-1的表达,在蛋白水平和mRNA水平的抑制率分别为69.07%和71.02%(P＜0.01).WST-1及细胞计数法均显示SF-1基因沉默组细胞增殖缓慢,增殖明显受到抑制(P＜0.01);而TUNEL结果 恰好相反,荧光镜下SF-1基因沉默组凋亡细胞的数目及形态均比较明显,凋亡细胞数约为阴性对照组的3.7倍(P＜0.01);SF-1基因干扰后,其Ki-67阳性细胞率要低于阴性对照组细胞,分别为(16.90±2.17)%和(33.48±3.16)%(P＜0.01). 结论 SF-1基因沉默可抑制肾上腺皮质腺癌细胞增殖,有望成为研究肾上腺肿瘤发病机制及其治疗的重要分子.     

靶向干扰骨架蛋白Transgelin抑制胰腺癌裸鼠移植瘤的生长

目的 探讨靶向干扰骨架蛋白Transgelin对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长的影响.方法 设计并体外合成靶向Transgelin的短发夹RNA(shRNA)真核表达质粒,将其转染人胰腺癌细胞BxPC3,采用RT-PCR、Western印迹法检测转染前后Transgelin表达的变化.成功造模胰腺癌裸鼠24只,按皮下注入细胞不同均分为3组:实验组(接种BxPC3/shRNA)、阴性对照组(接种空质粒转染细胞BxPC3/Neo)和空白对照组(接种未转染细胞BxPC3).每周测量肿瘤大小,术后第28天处死所有裸鼠,计算瘤体体积,治疗前、后裸鼠体重的变化以及抑瘤率.免疫组织化学法检测移植瘤组织切片中Transgelin和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达.结果 实验组、阴性对照组和空白对照组在各时间段的肿瘤体积增长差异有统计学意义(均P ＜0.05).实验组在第21,28天肿瘤体积显著小于阴性对照组和空白对照组(均P＜ 0.05).实验组第28天瘤重为(0.74±0.21)g,阴性对照组为(1.42±0.28)g,空白组为(1.59±0.24)g.实验组瘤重与阴性、空白对照组相比差异均有统计学意义(均P ＜0.05),抑瘤率达53.5％.实验组PCNA指数显著低于阴性对照组和空白对照组(均P＜0.05).结论 靶向封闭Transgelin基因能明显抑制胰腺癌细胞BxPC3在裸鼠体内的增殖及肿瘤生长.     

线粒体融合素-2对裸鼠成瘤性及增殖、转移的影响

目的 观察线粒体融合素(mfn)-2对裸鼠成瘸性及增殖瘤的增殖、转移的影响.方法 裸鼠共分为3组:实验组、空载体对照组、空白对照组,分别将3组MCF-7细胞异种移植到无胸腺小鼠体内.建立裸鼠人乳腺癌移植瘤模型,比较3组裸鼠之间肿瘤的大小和重量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测3组肿瘤组织mfn2的表达,免疫组织化学半定量检测核增殖抗原(Ki-67)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果 实验组、空载体对照组、空白对照组3组肿瘤瘤体质量(单位:g)分别为1.78±0.13、2.84±0.16、2.77±0.12,实验组裸鼠肿瘤重量明显低于对照组(P<0.05),实验组瘤体的体积与两对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),实验组mfn2基因高表达(P<0.05),两对照组低表达,两对照组之间差异无统计学意义(P>0.05),实验组与两对照组比较,实验组Ki-67的表达升高,而VEGF的表达明显降低(P<0.05).结论 mfn2基因可明显抑制人乳腺癌成瘤,对人乳腺癌裸鼠移植成瘤后的增殖和转移能力有影响.     

小干扰RNA沉默血管内皮生长因子对ACHN肾癌细胞黏附、侵袭及迁移的影响

目的 观察小干扰RNA (siRNA)沉默血管内皮生长因子(VEGF)对ACHN肾细胞癌细胞生物学行为的影响.方法 化学合成针对VEGF的小干扰RNA,实验分4组,转染后收集细胞,通过蛋白印迹方法检测VEGF的表达,噻唑蓝(MTT)比色法、细胞黏附实验、划痕实验及Transwell法测定细胞的增殖、黏附、迁移及侵袭能力.结果 siRNA 1～2组VEGF表达水平明显低于空白对照组及阴性对照组;在24、48、72 h,siRNA 1～2的增殖抑制率均高于空白对照组及阴性对照组(P＜0.05),其中以siRNA2组最为显著;与空白对照组比较,siRNA 1～2组的细胞黏附数量明显下降[(81.5±3.1)％比(40.5±2.6)％、P＜0.05,(81.5±3.1)％比(22.5±2.4)％、P＜0.05],其中以siRNA2组最为明显;siRNA1～2组的细胞迁移数量明显下降(162±9比81±5,P＜0.05;162±9比38±4,P＜0.05);siRNA1～2组细胞侵袭能力明显下降(P＜0.05),且siRNA 2组的细胞侵袭能力明显低于siRNA 1组(P＜0.05).结论 VEGF基因在肾细胞癌细胞黏附、迁移和侵袭中发挥着重要作用;以靶向VEGF的siRNA转染肾细胞癌细胞,可抑制肾细胞癌细胞黏附、迁移和侵袭能力.     

反义肽核酸抑制人肾癌细胞系Ki-67基因的研究

目的探讨Ki-67基因翻译起始区反义肽核酸对人肾癌细胞Ki-67基因表达及生长的影响。方法人工合成反义肽核酸,脂质体转染肾癌细胞系786-0,采用免疫印迹法（Western blot）、3H-TdR掺入试验和原位末端标记（TUNEL）法检测肾癌细胞Ki-67抗原的表达、细胞增殖和凋亡情况。结果在反义肽核酸浓度大于1.0μmol/L情况下,western blot实验发现Ki-67抗原表达下降,3H-TdR掺入试验表明掺入率减低,TUNEL法显示细胞凋亡增加。结论Ki-67基因翻译起始区反义肽核酸能阻遏人肾癌786-0细胞系Ki-67抗原的表达,抑制肿瘤细胞增殖和生长,加快其凋亡,并且有明显的剂量依赖性。     

Survivin和PDCD5表达与肾透明细胞癌分期、分级及预后相关性研究

目的 考察survivin和PDCD5表达与肾透明细胞癌分期、分级和预后的相关性.方法 采用免疫组化法检测56例肾透明细胞癌患者癌组织和10例健康肾对照组织中survivin 和PDCD5蛋白的表达.比较不同分期、分级组织中两蛋白表达水平,并比较阴性和阳性患者生存期差异.结果 分期越高癌组织的survivin表达量越高,PDCD5表达量越低(P＜0.01).Survivin阴性患者生存时间显著高于阳性患者(P＜0.05),PDCD5阳性患者生存时间显著高于阴性患者(P＜0.05).不同分级细胞中survivin表达水平存在统计学差异(P＜0.01),分化程度越低的细胞阳性率越高.但不同分级细胞中PDCD5表达无统计学差异(P＞0.05).Survivin蛋白和PDCD5蛋白表达不具有相关性(r=-0.57,P＞0.05).结论 Survivin表达水平与肾透明细胞癌分期、分级和预后均相关,PDCD5表达水平与肾透明细胞癌分期和预后均相关.Survivin的高表达和PDCD5的低表达可能参与了肾透明细胞癌的发生和发展.     

mRNA DC疫苗对肝癌细胞增殖周期影响的实验研究

目的 探讨mRNA DC疫苗对肝癌细胞增殖周期的影响,为mRNA疫苗免疫治疗肝癌提供新的实验依据和理论基础.方法 采用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素-4(IL-4)联合培养、扩增鼠骨髓来源DC,以阳离子脂质体转染Hepal-6mRNA入DC,制备mRNA DC疫苗,流式细胞术检测疫苗对体外培养的肝癌细胞周期以及体内种植瘤组织细胞周期的影响;免疫组织化学检测肿瘤细胞增殖核抗原(PCNA).结果 mRNA DC疫苗处理后的肝癌细胞周期比例为G0/G1间期(75.09±3.41)%,S间期(16.93±1.57)%,GO/M间期(7.98±1.83)%,与对照组比较,差别有显著性意义(P＜0.05);荷瘤鼠疫苗组肿瘤细胞增殖指数为(24.91±3.41),与对照组比较,差别有统计学意义(P＜0.05);PCNA实验组阳性表达率为(27.7±10.3)%,与对照组比较,差异有显著性意义(P＜0.05).结论 mRNA DC疫苗可影响肿瘤细胞的分裂周期,减缓细胞的生长,显著抑制肿瘤细胞增殖.     

长链非编码RNA MALAT-1通过EZH2-β-catenin信号通路调控肾癌细胞的增殖、凋亡及侵袭

目的探究长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录因子1(LncRNA MALAT-1)在肾癌组织及肾细胞癌(RCC)细胞株中的表达情况及其在调控RCC细胞增殖、凋亡及侵袭过程中的作用机制。方法利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)实验检测正常和RCC组织以及HK-2、786-O、ACHN及Caki-1细胞中MALAT-1的表达情况;将786-O细胞随机分为3组,分别转染MALAT-1-siRNA沉默载体(si-MALAT-1组)及MALAT-1-siRNA阴性表达载体(si-NC组),空白对照组加入PBS(Blank组)。采用CCK-8法、流式细胞术法、Transwell法检测细胞增殖、凋亡及侵袭能力;利用Western blot法检测Zeste基因同源物增强子2(EZH2)及β-catenin的蛋白表达水平。结果与正常组织及细胞株HK-2相比,肾癌组织及细胞株786-O、ACHN及Caki-1中MALAT-1的表达水平明显增加(P<0.05);与Blank组和si-NC组相比,si-MALAT-1组RCC细胞活性和侵袭能力明显降低、细胞凋亡率明显增加、EZH2及β-catenin的蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论LncRNA MALAT-1在肾癌组织及RCC细胞中表达上调;抑制MALAT-1的表达能够抑制RCC细胞的增殖和侵袭,促进凋亡,其机制可能与下调EZH2-β-catenin信号通路的表达有关。     

SiRNA联合介导Livin和Survivin基因沉默诱导人肾癌细胞786-O化疗敏感性的实验研究

目的:观察siRNA联合介导Livin和Survivin基因的沉默诱导人肾癌细胞786-O化疗敏感性的作用。方法:构建Livin和Suvivin联合靶向的小干扰RNA(siRNA)重组表达载体shRNA,然后将目的载体转染于人肾癌细胞株786-O。应用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot方法分别检测转染前细胞经顺铂、5-FU和丝裂霉素处理后的Livin和Survivin基因的mRNA与蛋白水平的变化。应用CCK-8试验检测转染前后细胞对顺铂、5-氟尿嘧啶(5-FU)和丝裂霉素的半数致死量(IC50)、细胞增殖的变化。结果:CCK-8结果显示,联合介导Livin和Survivin基因沉默组细胞较分别单独介导细胞组化疗的敏感性明显增强(P0.05),且转染前后细胞对顺铂、5-FU和丝裂霉素的IC50发生显著变化(P0.05)。结论:SiRNA联合介导Livin和Survivin基因表达下调,发挥协同增强的siRNA作用。     

Ki-67基因siRNA表达质粒的构建、鉴定及功能研究

目的构建肿瘤增殖基因Ki-67小干扰RNA(siRNA)表达质粒，研究其对人肾癌细胞Ki-67基因表达的阻抑作用，探索肾癌基因治疗新的途径。方法设计有小发夹机构的2条Ki-67 siRNA对应模板DNA序列，煺火处理后克隆至pSliencer 3．1质粒，构建重组质粒pSliencer-Ki-67。将pSliencer-Ki-67转染人肾癌786—0细胞，采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测Ki-67表达。结果酶切及测序证实质粒pSliencer-Ki-67构建成功。其可显著抑制786-0细胞Ki-67 mRNA、Ki-67蛋白表达。结论成功构建的Ki-67 siRNA表达质粒pSliencer-Ki-67能抑制人肾癌786-0细胞Ki-67基因表达。     

Sema6D与受体PlexinA1在胃癌中的表达及其临床病理意义

目的 探讨Sema6D及其受体PlexinA1在胃癌中的表达及它们与肿瘤细胞增殖和血管生成的关系.方法 应用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测20例胃癌患者的癌组织及相应胃切缘正常胃黏膜Sema6D及其受体PlexinA1的mRNA和蛋白表达;免疫组织化学方法检测50例胃癌组织和20例胃正常黏膜中Sema6D、PlexinA1、肿瘤细胞增殖指数(Ki-67)和第Ⅷ因子(微血管密度MVD)的表达.结果 PT-PCR和Western blot示胃癌组织中的Sema6D mRNA和蛋白的表达明显高于胃正常黏膜[(0.24±0.06)比(0.19±0.07),P＜0.05,和(0.45±0.16)比(0.29±0.08),P＜0.01];同时PlexinA1 mRNA和蛋白的表达亦明显高于胃正常黏膜[(0.71±0.37)比(0.60±0.25),P＜0.05,和(0.47±0.16)比(0.21±0.08),P＜0.01].肿瘤细胞增殖指数(Ki-67)随着Sema6D和PlexinA1表达的增高而增高(r=0.5996,P＜0.01和r=0.5024,P＜0.05);胃癌组织中MVD与Sema6D和PlexinA1存在明显正相关(r=0.5759,P＜0.01和r=0.7286,P＜0.01).结论 Sema6D及其受体PlexinA1在胃癌发生发展中发挥重要作用,与促进肿瘤细胞增殖和调节血管生成有关.     

长链非编码RNA RP11-363G15.2通过抑制锌指蛋白8基因的表达对肾癌细胞迁移和增殖的影响

目的探讨长链非编码RNA-RP11-363G15.2在肾癌中的表达及对肾癌细胞PHF8基因表达的抑制作用。方法实时定量荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测12对肾癌组织及癌旁组织、肾癌细胞株(ACHN、OS-RC-2、786-O、A498)及人近端肾小管细胞HK-2中RP11-363G15.2的表达。选取表达水平最低的肾癌细胞,分别转染RP11-363G15.2质粒(实验组)和阴性对照质粒(对照组)。qRT-PCR检测两组细胞中RP11-363G15.2和锌指蛋白8(PHF8)mRNA的表达。Western blot检测两组细胞中PHF8、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期依赖性激酶6(CDK6)、波形蛋白(Vimentin)和神经-钙粘素(N-cadherin)蛋白的表达。Transwell迁移实验和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分别检测两组细胞的迁移能力和增殖能力。结果qRT-PCR结果提示,肾癌组织中RP11-363G15.2的表达明显低于癌旁组织(P<0.01),肾癌细胞株中RP11-363G15.2的表达均明显低于人近端肾小管细胞(P<0.01),OS-RC-2细胞中RP11-363G15.2的表达最低(P<0.01)。与对照组相比,实验组OS-RC-2细胞中RP11-363G15.2表达明显增加[(1.06±0.19)vs.(11.09±1.48),t=6.75,P<0.01],PHF8 mRNA表达明显降低[(1.01±0.09)vs.(0.31±0.05),t=6.66,P<0.01]。Western blot结果提示PHF8蛋白表达减少,CDK6、Cyclin D1、Vimentin和N-cadherin蛋白表达减少。与对照组相比,转染RP11-363G15.2后的OS-RC-2细胞迁移能力降低(P<0.01),从第3天开始细胞增殖能力明显降低(P<0.01)。结论RP11-363G15.2在肾癌中低表达,RP11-363G15.2可通过下调肾癌细胞OS-RC-2中PHF8基因的表达,抑制细胞的迁移能力和增殖能力,可能为肾癌的治疗提供了一个新的分子靶点。     

小干扰RNA对肾癌786-O细胞Survivin表达及其增殖的抑制作用

目的 观察小分子干扰RNA(siRNA)对人肾癌细胞Survivin基因表达及其增殖、凋亡的影响.方法 设计、合成1对Survivin编码基因序列特异的siRNA,用脂质体包裹转染人肾癌786-O细胞,分不同浓度组(10、50、100 nmol/L),采用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot技术检测Survivin mRNA及蛋白表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,免疫组织化学TUNEL法榆测细胞凋亡.结果 Survivin siRNA能有效下调Survivin基因表达水平,抑制了细胞生长,促进其凋亡.并呈剂量依赖性(3组的mRNA 88.3%、62.4%、43.8%,蛋白87.7%、62.4%、46.5%,增殖抑制率11.6%、41.2%、57.5%,凋亡率14.2%、29.4%、38.1%),差异有统计学意义(P<0.05).结论 Survivin基因siRNA能抑制人肾癌786-O细胞Survivin基因表达,进而抑制其增殖,促进其凋亡.