DNA甲基转移酶在肝癌中的表达及其临床意义

目的 探讨DNA甲基转移酶(DNMTs)在肝癌中的表达及其临床意义.方法 收集2007年7月至2008年4月中山大学附属第一医院行根治性切除的50例肝癌患者的肝癌组织、癌旁组织、肝硬化组织和慢性肝炎组织.采用RT-PCR和免疫组织化学方法检测肝癌组织及癌旁组织中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA与蛋白表达水平,采用配对t检验和Mann-Whitney U检验比较肝癌组织与癌旁组织,肝硬化组织与慢性肝炎组织DNMTs mRNA表达的差异,x2检验和Fisher确切概率法分析肝癌组织DNMTs蛋白表达与临床病理因素的相关性,Kaplan-Meier法分析患者无瘤生存时间,不同患者无瘤生存时间的比较采用Log-rank检验.结果 肝癌组织中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA的表达水平分别为癌旁组织的2.57、2.29和4.86倍(t=3.94,2.72,4.06,P＜0.05).肝癌组织中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA的表达分别是肝硬化组织和慢性肝炎组织的2.38、2.14、4.66倍和6.12、4.58、12.99倍.DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA在肝癌组织的表达显著高于其在肝硬化组织和慢性肝炎组织中的表达(U=587.5、730.0、562.5,65.5、64.5、71.0,P＜0.05).DNMT1蛋白表达与肿瘤大小、数目、有无血管侵犯、TNM分期有关(x2=5.24,4.08,4.08,14.13,P＜0.05);DNMT3a蛋白表达与肿瘤大小、数目、TNM分期有关(x2=4.08,5.95,4.08,P＜0.05).DNMT1和DNMT3a低表达者平均肿瘤复发时间分别为9.4个月和8.7个月,显著长于高表达者的5.0个月和3.2个月,两者比较,差异有统计学意义(x2=3.89,9.91,P＜0.05).结论 DNMTs在肝癌发生、发展中起重要作用;DNMT1与DNMT3a高表达与肿瘤切除术后复发密切相关,可望成为肝癌预后的重要预测因子.

Abstract：

Objective To investigate the expression of DNA methyltransferases (DNMTs) in liver cancer and its clinical significance. Methods The specimens of liver cancer tissues, adjacent tissues, cirrhotic tissues and chronic hepatitis tissues were collected from 50 patients who received radical resection at the First Affiliated Hospital of Sun Yat-Sen University from July 2007 to April 2008. The mRNA and protein expressions of DNMT1,DNMT3a and DNMT3b in liver cancer tissues, adjacent tissues, cirrhotic tissues and chronic hepatitis tissues were detected by real-time quantitative PCR and immunohistochemical staining. The mRNA expression of DNMTs in the liver cancer tissues was compared with those in the adjacent tissues, cirrhotic tissues and chronic hepatitis tissues by using t test and Mann-Whitney U test. The correlation between the protein expression of DNMTs in the liver cancer tissue and the clinicopathological features was analyzed by chi-square test or Fisher exact test, and the tumor-free survival time was analyzed by using Kaplan-Meier method and the difference in tumor-free survival rate between different patients was analyzed by Log-rank test. Results The mRNA expressions of DNMT1, DNMT3a and DNMT3b in the liver cancer tissue were 2.57, 2.29 and 4.86 times higher than those in the adjacent tissues (t = 3.94, 2. 72, 4. 06, P ＜ 0.05 ). The mRNA expressions of DNMT1, DNMT3a and DNMT3b were 2.38,2.14 and 4.66 times higher than those in the cirrhotic tissues, and 6.12, 4.58 and 12.99 times higher than those in the chronic hepatitis tissues. The mRNA expressions of DNMT1, DNMT3a and DNMT3b in the liver cancer tissue were significantly higher than those in the cirrhotic tissues and chronic hepatitis tissues ( U = 587.5,730. 0,562.5; 65.5, 64.5, 71.0, P ＜ 0.05). The protein expression of DNMT1 was correlated with the size, number,TNM stages and vascular invasion of tumors ( x2 = 4.08, 5.95, 4.08, P ＜ 0.05 ). The protein expression of DNMT3a was correlated with the size, number and TNM stages of tumors (x2 = 4.08, 5.95, 4.08, P ＜ 0.05 ).The mean tumor recurrence time of patients with low expressions of DNMT1 and DNMT3a were 9.4 and 8.7 months, which were significantly longer than 5.0 and 3.2 months of those with high expressions of DNMT1 and DNMT3a (x2 =3.89, 9.91, P＜0.05). Conclusions DNMTs play an important role in hepatocarcinogenesis.High expressions of DNMT1 and DNMT3a are correlated with the postoperative recurrence of liver cancer, which are valuable prognostic factors for liver cancer.     

RNA干扰技术靶向SMYD3基因治疗肝癌的实验研究

目的 构建针对人SET-和MYND-结构域含有蛋白3（SMYD3）编码基因的短发夹状RNA（shRNA）干扰质粒,并研究其对肝癌细胞的作用。方法 应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测SMYD3mRNA在肝癌细胞系HepG2、Hep3B、SMMC7721的表达。构建重组SMYD3shRNA表达质粒Pgenesil-1-s,并采用介导转染法导入HepG2细胞,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测阻抑效应,噻唑蓝比色法（MTT）检测细胞生长增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率。建立人肝癌细胞HepG2皮下移植瘤裸鼠模型,注射Pgenesil-1-s,动态观察肿瘤体积并于2周后处死裸鼠称取瘤重。结果肝癌细胞株HepG2、Hep3B、SMMC7721的SMYD3mRNA表达水平显著高于正常肝细胞株L-02;Pgenesil-1-s转染HepG2细胞后,SMYD3蛋白表达明显下调,而且细胞凋亡率显著增加,细胞生长明显受抑;经重组质粒治疗14d后,裸鼠皮下移植瘤生长缓慢,相较于对照组瘤体明显缩小、瘤重明显减轻（P〈0．01）。结论 肝癌细胞高表达SMYD3,shRNA干扰特异性抑制SMYD3表达,可以促进肝癌细胞凋亡并抑制裸鼠移植瘤的生长。     

DNA甲基转移酶在肝癌中的表达及其临床意义

Objective To investigate the expression of DNA methyltransferases (DNMTs) in liver cancer and its clinical significance. Methods The specimens of liver cancer tissues, adjacent tissues, cirrhotic tissues and chronic hepatitis tissues were collected from 50 patients who received radical resection at the First Affiliated Hospital of Sun Yat-Sen University from July 2007 to April 2008. The mRNA and protein expressions of DNMT1,DNMT3a and DNMT3b in liver cancer tissues, adjacent tissues, cirrhotic tissues and chronic hepatitis tissues were detected by real-time quantitative PCR and immunohistochemical staining. The mRNA expression of DNMTs in the liver cancer tissues was compared with those in the adjacent tissues, cirrhotic tissues and chronic hepatitis tissues by using t test and Mann-Whitney U test. The correlation between the protein expression of DNMTs in the liver cancer tissue and the clinicopathological features was analyzed by chi-square test or Fisher exact test, and the tumor-free survival time was analyzed by using Kaplan-Meier method and the difference in tumor-free survival rate between different patients was analyzed by Log-rank test. Results The mRNA expressions of DNMT1, DNMT3a and DNMT3b in the liver cancer tissue were 2.57, 2.29 and 4.86 times higher than those in the adjacent tissues (t = 3.94, 2. 72, 4. 06, P ＜ 0.05 ). The mRNA expressions of DNMT1, DNMT3a and DNMT3b were 2.38,2.14 and 4.66 times higher than those in the cirrhotic tissues, and 6.12, 4.58 and 12.99 times higher than those in the chronic hepatitis tissues. The mRNA expressions of DNMT1, DNMT3a and DNMT3b in the liver cancer tissue were significantly higher than those in the cirrhotic tissues and chronic hepatitis tissues ( U = 587.5,730. 0,562.5; 65.5, 64.5, 71.0, P ＜ 0.05). The protein expression of DNMT1 was correlated with the size, number,TNM stages and vascular invasion of tumors ( x2 = 4.08, 5.95, 4.08, P ＜ 0.05 ). The protein expression of DNMT3a was correlated with the size, number and TNM stages of tumors (x2 = 4.08, 5.95, 4.08, P ＜ 0.05 ).The mean tumor recurrence time of patients with low expressions of DNMT1 and DNMT3a were 9.4 and 8.7 months, which were significantly longer than 5.0 and 3.2 months of those with high expressions of DNMT1 and DNMT3a (x2 =3.89, 9.91, P＜0.05). Conclusions DNMTs play an important role in hepatocarcinogenesis.High expressions of DNMT1 and DNMT3a are correlated with the postoperative recurrence of liver cancer, which are valuable prognostic factors for liver cancer.     

组蛋白甲基转移酶基因G9a在肝外胆管癌组织中转录表达及其临床意义的研究

目的探讨组蛋白甲基转移酶基因G9a在肝外胆管癌中的表达及其临床意义。方法用RT-PCR的方法检测48例肝外胆管癌组织及39例癌旁对照组织中C9a mRNA的表达，并分析其阳性表达率与临床病理因素之间的相关性。结果G9a在肝外胆管癌组织中的转录表达率为56．25％（27／48），明显高于对照组织并与肝外胆管癌的淋巴转移及TNM分期（P〈0．05）相关。结论组蛋白甲基转移酶基因G9a在胆管癌组织中表达上调，提示由G9a引起的组蛋白甲基化紊乱在肝外胆管癌的发生发展中发挥重要作用。     

PI3K/AKt信号通路与肝癌对索拉菲尼耐药机制的研究进展

索拉菲尼是治疗晚期原发性肝细胞癌的分子靶向药物,但肝癌对其耐药性的出现,影响了该药物的治疗效果.目前有明确证据提示肝癌对索拉菲尼耐药的发生与上皮间质转化、肝癌干细胞及肝癌的异质性有重要关系,PI3K/AKt信号通路作为重要的“共同信号通路”参与了上述过程.在索拉菲尼治疗同时,补充性的抑制PI3K/AKt信号通路是目前加强索拉菲尼治疗肝癌效果的方法.     

腹腔镜手术在肝癌治疗中的临床应用

目的:研究腹腔镜手术用于诊断与治疗肝癌的临床意义。方法:回顾分析2003年3月至2007年5月我院应用腹腔镜手术治疗5例肝癌患者的临床资料。结果:5例手术均获成功,患者术后15d复查CT、B超,瘤体明显缩小。结论:腹腔镜诊断与治疗肝癌,具有患者疼痛轻、康复快、并发症少等优点,是安全、有效的诊治方法。     

SET-及MYND-结构域含有蛋白3真核表达载体的构建及对肝门部胆管癌细胞生物学行为的影响

目的 构建SET-及MYND-结构域含有蛋白3(SMYD3)荧光质粒并观察组蛋白甲基转移酶SMYD3对肝门部胆管癌细胞生物学行为的影响.方法 在人源组织中调取并扩增SMYD3基因酶切并连接于pEGFP-C3质粒构建SMYD3荧光质粒pEGFP-C3-SMYD3.利用质粒转染人肝门部胆管癌细胞株FRH0201并检测SMYD3表达改变,利用细胞计数试剂盒(CCK-8)方法及Transwell方法检测过表达SMYD3后细胞生长及迁移能力变化.结果 酶切及测序结果显示SMYD3成功连接入pEGFP-C3载体中,Western blot法结果显示在质粒转染组中SMYD3表达较未转染组升高(73.23±5.60)％,较未转染组及空质粒转染组SMYD3表达水平差异有统计学意义(P＜0.05);CCK-8方法及Transwell方法显示转染组细胞生长速度较未转染组及空白组加快,迁移能力增强,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 SMYD3的过表达促进肝门部胆管癌细胞的增殖及迁移,可能是调控肝门部胆管癌发生发展的因素之一.     

膀胱癌DNA甲基转移酶1、3a、3b基因的表达

目的探讨DNA甲基转移酶(DNMT)1、3a、3b mRNA在膀胱癌组织中的表达及其意义.方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测DNMT1、3a、3b mRNA在40例人膀胱癌组织及31例人正常膀胱粘膜组织中的表达.结果膀胱癌组织中DNMT1、3b表达的阳性率、表达值均高于正常对照组(P＜0.05);DNMT3a的表达与对照组相比,差异无显著性(P＞0.05);3种基因的表达率与表达值在不同肿瘤分级、分期、生长方式及原发肿瘤与复发肿瘤之间差异无显著性(P＞0.05);DNMT1与DNMT3b表达值明显相关(P＜0.01).结论DNMT1、3b表达升高是膀胱癌形成、发展中的早期、普遍事件,可作为早期诊断和复发监测的有效指标,DNMT1与DNMT3b的表达可能存在共同调节机制.     

肝动脉灌注化疗在肝癌转化治疗中的研究进展

原发性肝癌是目前我国第4位常见恶性肿瘤及第2位肿瘤致死病因,严重威胁我国人民的生命和健康。原发性肝癌中>90%病人是肝细胞癌(以下简称肝癌),其中66%的病人初诊时已处于中晚期,失去手术机会。因此,中晚期肝癌的防治及转化治疗尤为重要。肝动脉灌注化疗(HAIC)是中晚期肝癌的重要治疗手段,以其为核心的转化治疗展现出较好的肿瘤反应率及手术转化率。笔者深入分析国内外HAIC相关研究进展,系统阐述其发展历史及以HAIC为核心的转化治疗。     

肝中央叶段肝癌的治疗体会

目的探讨肝中央叶段肝癌的外科治疗方法。方法回顾性分析我们于2004年1月～2006年1月收治的肝中央叶段肝癌21例的临床资料。结果本组21例肝中央叶段肝癌均成功切除,无围手术期死亡病例,术后未发生严重并发症。结论肝中央叶段肝癌手术难度大,只要重视术前评估、严格掌握手术适应证和加强围手术期处理,仍可取得较好的治疗效果。     

腹腔镜下左半肝切除术治疗原发性肝癌的临床疗效及安全性

目的:探讨腹腔镜下左半肝切除术治疗原发性肝癌的临床疗效及安全性。方法:选择64例手术治疗的原发性肝癌患者,分为研究组(n=28,行腹腔镜下左半肝切除术)与对照组(n=36,行常规开腹肝癌切除术)。比较两组手术时间、术中出血量、术后ICU时间、术后胃肠功能恢复时间、术后住院时间等临床指标,以及肝功能衰竭、胆漏、腹水、气体栓塞等术后并发症。观察术后生存时间及术后1年肿瘤复发率。结果:研究组手术时间、术中出血量、术后ICU时间、术后胃肠功能恢复时间、术后住院时间等指标均显著低于对照组(P0.05);两组术后并发症发生率差异无统计学意义(P0.05)。随访1年,术后生存时间及术后肿瘤复发率差异亦无统计学意义(P0.05)。结论:腹腔镜下左半肝切除术治疗原发性肝癌临床疗效显著,手术安全性高,且预后结局较理想,具有良好的临床治疗价值。     

腹腔镜下微波消融术治疗肝癌的临床疗效观察

目的:探讨腹腔镜下微波消融术治疗肝癌的临床疗效。方法:自2011年6月共为14例(19个病灶)肝癌患者行腹腔镜下微波消融术。术前行腹部增强CT或B超检查,观察术后并发症、肝功能、AFP等指标,以评估其临床疗效。结果:14例手术均顺利完成。术后发热8例,疼痛10例,无术后出血、胆漏、消化道穿孔等严重并发症发生。1例残留病灶,术后在B超引导下行经皮微波消融治疗;2例新发病灶,均行选择性肝动脉化疗栓塞术治疗,1例死于肝功能衰竭。结论:腹腔镜下微波消融结合了腹腔镜及微波消融的微创特点,患者创伤小,疗效确切,手术安全可行,尤其适于突出肝脏表面及病灶邻近胆囊的患者。     

不同肝血流阻断方案对大肝癌手术治疗效果的影响

目的探讨不同肝血流阻断方案对大肝癌患者外科治疗效果的影响,为临床疗效提供参考。方法回顾性分析2011年1月至2014年12月100例大肝癌行外科手术治疗患者的临床资料,术中41例患者采用Pringle法间断阻断全肝血流(肝门阻断组),23例患者行选择性的半肝血流阻断(半肝阻断组),36例患者行肝下下腔静脉阻断联合Pringle法阻断入肝血流(联合阻断组),比较三组患者的术中与术后的相关指标。数据采用spss16.00统计软件进行统计,术中手术阻断时间、肝切除量大小、术中出血量及输血量等用x珋±s表示,采用t检验;并发症发生率采用χ~2检验,以P0.05差异具有统计学的意义。结果三组患者的术前情况、肝切除大小比较无统计学差异意义(P0.05);半肝阻断组与联合阻断组的术中出血量、输血量、输血率均低于肝门阻断组患者,联合阻断组在输血量、输血率指标上明显低于肝门阻断组和半肝阻断组,差异有统计学意义(F=4.014、6.124,P=0.041、0.009);半肝阻断组与联合阻断组患者术后第7天的转氨酶、总胆红素水平均低于肝门阻断组,差异有统计学意义(F=4.213、3.940、4.327,P0.05);三组术后并发症发生率无统计学差异(P0.05)。结论采用肝下下腔静脉阻断联合Pringle法阻断入肝血流不仅能够有效减少大肝癌患者手术时术中失血量,且能促进术后肝功能的恢复。     

解剖性与非解剖性肝切除术治疗晚期肝癌的安全性及临床疗效对比观察

目的探讨晚期肝癌患者行解剖性肝切除术与非解剖性肝切除术后,安全性与疗效方面的优劣。方法回顾性分析2011年1月至2013年1月间98例确诊为原发性肝癌患者资料,所有患者均自愿选择手术方法,解剖性肝切除术组59例患者,非解剖性肝切除术组39例患者。采用SPSS19.0分析软件,手术时间、术中出血及输血量、术后3 d血清ALT值以x珋±s的形式表示,行t检验;切缘有效率、术后1年复发率、生存率,以n(%)的形式表示,行卡方检验,以P0.05为差异有统计学意义。结果 1解剖性肝切除术组手术时间平均为(271.5±97.4)min,切缘有效率为89.8%,明显大于非解剖性肝切除术组的(188.5±70.7)min和53.8%,差异有统计学意义(t=4.580,χ2=16.410,均P0.05);但两组术中出血量、术中输血量的差异则不显著,(均P0.05)。2解剖性肝切除术组预后效果要明显优于非解剖性肝切除术组,术后3 d血清ALT均值为(270.5±94.1)U/L,非解剖性肝切除术组则高达(501.6±115.6)U/L;解剖性肝切除术组术后1年复发率、生存率为22.0%、91.5%,也明显优于非解剖性肝切除术组的41.0%、76.9%,上述各项差异均有统计学意义(χ2=4.064,4.088,均P0.05)。结论解剖性肝切除术具有更高的安全性与临床疗效,对于必须切除肝脏的晚期肝癌患者而言,更值得采用。     

经胸腔内镜下肝癌切除三例

目的 探讨经胸腔内镜下肝脏肿瘤切除的可行性、安全性和疗效.方法 2007-2011年,北京大学第三医院完成3例经胸腔内镜下肝脏单发肿瘤切除术.其中1例为原发性肝癌,2例为肝脏转移癌.术前通过影像检查对肿物进行三维定位,以确定术中套管的位置.患者置于左侧卧位,在肿瘤周围的胸壁放置3个套管.内镜超声确认肿物位置后打开膈肌,在肝脏表面内镜超声再次明确肿物边界并标记切除线.依照标记逐步切开肝脏组织,切除过程中反复行内镜超声确认肿瘤位置和切除深度,以保证肿瘤的完整切除.创面止血满意后关闭膈肌,放置胸腔引流.结果 3例患者均顺利完成手术,手术时间110～210min,平均150 min,术中出血量130～600 ml,平均297 ml.术后患者恢复顺利,无并发症.术后分别随访9～42个月,1例死于其他疾病,所有患者均无肿瘤复发.结论 对于特定的病例,经胸腔内镜下肝脏肿瘤切除术安全、可行,在术后并发症、住院时间等方面有明显的优势.     

肝动脉化疗栓塞术联合射频消融治疗肝癌的现状

肝动脉化疗栓塞是治疗肝癌的常用方法。随着射频消融技术的发展,经动脉化疗栓塞联合射频消融治疗肝癌在临床上的应用越来越广泛。本文就肝动脉栓塞联合射频消融治疗肝癌的的发展现状进行综述。     

肝癌肝移植术后辅助化疗的临床意义及应用

肝移植是治疗原发性肝癌的有效手段,但肿瘤复发和转移是影响患者预后的关键因素.肝癌肝移植术后辅助化疗能起到降低肿瘤复发率、提高患者长期生存率的作用.虽然化疗的具体方案及疗效存在争议,但仍作为一种安全町行的方法广泛应用于临床治疗.随着化疗方案的探索及新型药物的开发,肝癌肝移植术后辅助化疗的疗效得到明显提高.     

12例胆管细胞癌患者肝移植的预后分析

目的分析影响胆管细胞癌患者肝移植预后的肿瘤相关因素，为肝移植受者的选择提供依据。方法12例胆管细胞癌患者接受肝移植治疗，肿瘤Edmondson分级为Ⅲ-Ⅳ级者5例；肿瘤TNM分期超过Ⅱ期者9例；肿瘤累及两叶者5例，无包膜者9例，肝门淋巴结肿大者5例，肝外膈肌浸润1例，门静脉分支有癌栓者1例；个体最大肿瘤直径平均为6．1cm。均行经典原位肝移植。采用Kaplan-Meier生存率分析肝移植术后患者存活率及无瘤存活率，Log-Rank检验各影响因素的组间差异。结果12例术后均得到随访，随访时间7-31．2个月，中位数为18．5个月，受者的存活时间为178-905d，中位数为370d，其0．5、1和2年存活率分别为90．9％、61．4％及24．6％，0．5、1和2年无瘤存活率分别为46．9％、37．5％和0。8例（66．7％，8／12）于肝移植后100．6d肿瘤复发。死亡6例，其中5例死于肿瘤复发。以肝细胞癌施行肝移植的标准（Milan标准、加州大学旧金山分校标准、上海复旦标准者、Pittsburgh标准和超过Pittsburgh标准）来评价，结果符合各标准患者肝移植后的存活率及无瘤存活率的差异均无统计学意义。淋巴结转移或门静脉癌栓、TNM分期为Ⅲ期、Edmondson分级为Ⅲ级、肿瘤累及两叶、肿瘤无包膜及术前糖链抗原19-9≥37kU／L等，可能对预后有一定影响。结论胆管细胞癌患者施行肝移植的预后不佳，应慎重选择，尽量以小肝癌为主，对肿瘤过大、TNM分期为Ⅲ期、肿瘤分布于两叶、无法排除淋巴结转移或门静脉癌栓者，应列为肝移植禁忌证。