白花蛇舌草提取物对结肠癌HT-29细胞bcl-2和bax表达的影响

目的 观察白花蛇舌草提取物在体外对结肠癌HT-29细胞株增殖和bcl-2和bax表达的影响.方法 采用人结肠癌细胞HT-29细胞常规体外培养,随机设空白组和不同浓度白花蛇舌草提取物组,干预24 h,倒置显微镜观察细胞形态变化;MTT法测定不同浓度药物对HT-29细胞增殖的影响;RT-PCR检测药物作用后的bax和bcl-2的表达.结果 白花蛇舌草提取物干预后,HT-29的细胞密度明显减少,细胞变小;抑制HT-29细胞增殖,并呈现出量-效作用;bax的表达随药物剂量增加而增加,bcl-2的表达随药物剂量增加而减少.结论 白花蛇舌草提取物能显著抑制人结肠癌HT-29细胞的增殖,通过上调bax和下调bcl-2的表达来诱导细胞凋亡,起到抗HT-29细胞的作用.     

白花蛇舌草乙醇提取物对人结肠癌细胞HT-29 Pim-1和Pim-2 mRNA表达的影响

目的探讨白花蛇舌草乙醇提取物对人结肠癌细胞HT-29 Pim-1和Pim-2 mRNA表达的影响。方法采用人结肠癌细胞HT-29常规体外培养,随机设定空白组和不同浓度（1、3、5、10 mg.mL-1）白花蛇舌草乙醇提取物组,干预24 h。倒置显微镜观察细胞形态变化;MTT法测定不同浓度药物对HT-29细胞增殖的影响,并用5 mg.mL-1浓度干预1、3、6、12、24、48 h观察对HT-29细胞增殖的影响;RT-PCR检测药物作用后HT-29细胞Pim-1和Pim-2 mRNA的表达。结果白花蛇舌草乙醇提取物干预后,HT-29的细胞密度明显减少,细胞变小,最终悬浮脱落而死亡;HT-29细胞增殖受到抑制,并呈现出量效和时效关系;白花蛇舌草乙醇提取物能明显下调HT-29细胞Pim-1和Pim-2 mRNA表达,并随药物浓度的增加而减少,呈一定的量效作用。结论白花蛇舌草乙醇提取物能显著抑制人结肠癌HT-29细胞的增殖以及下调Pim-1和Pim-2的mRNA表达。     

延龄草总皂苷诱导结肠癌细胞HT-29凋亡的作用及机制研究

目的探讨延龄草总皂苷对人结肠癌HT-29细胞凋亡的影响及其机制。方法采用流式细胞术研究延龄草总皂苷对HT-29细胞线粒体膜电位以及凋亡的作用;Western blotting法检测给予HT-29细胞不同浓度延龄草总皂苷后凋亡相关蛋白Caspase-3,8,9,Bax和Bcl-2表达的变化。结果延龄草总皂苷能诱导HT-29细胞的凋亡;延龄草总皂苷可促进HT-29细胞Caspase-3,9及Bax的表达,降低Bc1-2的表达,且均呈剂量依赖性。结论延龄草总皂苷可以通过线粒体途径诱导HT-29细胞凋亡。     

8-硝基白杨素诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡

目的 观察8-硝基白杨素(NOChR)诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用.方法 MTT比色法测定细胞增殖活性;流式细胞分析术检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带.结果 NOChR抑制人结肠癌(HT-29)细胞增殖,呈浓度依赖性,其IC50值为1.78μM;NOChR具有诱导HT-29细胞凋亡作用;PPAR γ特异性阻断剂(GW9662)能有效拮抗NOChR诱导HT-29细胞凋亡作用.结论 NOChR诱导HT-29细胞凋亡作用与其活化PPAR γ相关.     

三叶青乙酸乙酯提取物诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡

目的:评价三叶青乙酸乙酯提取物(ethyl-acetate fraction of extracts from Tetrastigma hemsleyanumDiels et.Gilg,EAFT)诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用。方法:体外培养HT-29细胞。FITC标记annexinⅤ/PI染色流式细胞术分析细胞凋亡率。ELISA法测定细胞组蛋白/DNA碎片。Western Blotting分析细胞Bax蛋白和细胞色素C的表达。结果:EAFT以浓度依赖方式诱导annexinⅤ染色阳性细胞百分率和组蛋白/DNA碎片增加(P<0.01)。10.0 mg/L EAFT分别作用HeLa细胞6 h、12 h和24 h,细胞色素C和Bax蛋白表达上调。结论:EAFT具有诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用,其作用机制与激活线粒体途径有关。     

罗格列酮对人结肠癌细胞HT-29生长的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖因子活化受体（PPARγ）配体罗格列酮（ROZ）对人结肠癌细胞HT-29增殖和凋亡的影响。方法体外培养人结肠癌细胞HT-29细胞,MTT比色法测定药物对细胞增殖的抑制作用。用流式细胞术观察细胞凋亡率。结果 50μmol/L及以上浓度的ROZ可抑制体外培养的HT-29细胞生长。50μmol/L以上浓度的ROZ能诱导HT-29细胞凋亡,呈浓度依赖性。结论 ROZ可以抑制人结肠癌细胞HT-29细胞生长,并诱导其凋亡。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在B淋巴瘤细胞株中的敏感性及诱导细胞凋亡机制

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)在B淋巴瘤细胞株中的敏感性及TRAIL通过线粒体信号通路诱导人B淋巴瘤细胞株Ramos凋亡的机制.方法 采用CCK-8法检测肿瘤细胞增殖,流式细胞术分析细胞线粒体膜电位、细胞表面受体DR4/DR5表达及细胞凋亡率变化,并用Western Blot测定Ramos细胞经TRAIL作用24 h后相关凋亡蛋白的表达水平.结果 供试的4株B淋巴瘤细胞中,Ramos细胞为TRAIL敏感株,Ramos细胞表面受体DR4/DR5表达水平明显高于TRAIL耐药株;TRAIL抑制Ramos细胞增殖通过诱导细胞凋亡介导;细胞调亡伴随线粒体膜电位明显变化;Western Blot免疫印迹结果显示,药物作用后,细胞内相关凋亡信号分子包括Caspase-9,Caspase-3,PARP蛋白等均明显活化.结论 4株B淋巴瘤细胞株对TRAIL敏感性不同,并与DR4/DR5表达相关;TRAIL抑制Ramos细胞增殖,诱导细胞凋亡,引起线粒体膜电位明显下降,活化Caspase-9及下游凋亡蛋白;线粒体调亡途径是介导TRAIL诱导Ramos细胞凋亡的途径之一.     

8-硝基白杨素诱导结肠癌HT-29细胞凋亡

目的:观察8-硝基白杨素(NOChR)诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用。方法:MTT比色法测定细胞增殖活性;流式细胞分析术检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带。结果:NOChR抑制HT-29细胞活性,呈浓度依赖性,其IC50值为1.78μM;NOChR具有诱导HT-29细胞凋亡作用;PPARγ特异性阻断剂GW 9662能部分拮抗NOChR诱导HT-29细胞凋亡。结论:NOChR诱导HT-29细胞凋亡作用与其活化PPARγ相关。     

平阳霉素对人脐静脉内皮细胞株EA.hy926的作用及其机制

目的:观察平阳霉素(PYM)对人脐静脉内皮细胞株EA.hy926的作用及可能机制。方法:采用甲基三氯硅烷(MTS)比色法检测PYM对EA.hy926细胞体外生长的作用;流式细胞术测定PYM作用细胞24h后细胞凋亡、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3表达、线粒体膜电位的变化;免疫印迹(Western-blot)法检测PYM对EA.hy926细胞中Caspase-8、Caspase-9蛋白表达水平的影响。结果:PYM可明显抑制EA.hy926细胞的增殖,且生长抑制率具有浓度时间依赖性;流式细胞术检测结果显示PYM各浓度作用24h后,细胞凋亡百分率随药物浓度增加而增高,活化Caspase-3表达在PYM各浓度组均增强,线粒体膜电位在各浓度组均下降;Western-blot法检测结果显示PYM作用EA.hy926细胞后,Caspase-8、Caspase-9蛋白均可出现明显的剪切带。结论:PYM能抑制EA.hy926细胞的增殖,这种抑制作用是可通过诱导细胞凋亡实现的,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9参与了PYM诱导EA.hy926细胞凋亡的过程。     

凋亡信号调节激酶1在紫花牡荆素诱导结肠癌细胞凋亡中的作用

目的:研究紫花牡荆素诱导人结肠癌细胞凋亡作用及其作用机制。方法:体外培养人结肠癌HT-29细胞。碘化丙啶(P)I染色流式细胞术(FCM)和细胞凋亡ELISA试剂盒检测细胞凋亡。荧光探针二氯荧光素(DCFH-DA)标记FCM测定细胞内活性氧的含量。Western blot和小干扰RNA转染用于探索其分子机制。结果:紫花牡荆素以浓度依赖性的方式诱导结肠癌HT-29细胞系细胞凋亡。紫花牡荆素引起活性氧(ROS)的产生,并激活HT-29细胞的凋亡信号调节激酶1(ASK1)。N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理HT-29细胞有效地抑制ASK1活性,减弱紫花牡荆素处理引起的细胞凋亡。ASK1特异小干扰RNA能显著减弱紫花牡荆素诱导HT-29细胞凋亡作用。结论:紫花牡荆素通过刺激活性氧形成活化ASK1诱导结肠癌HT-29细胞凋亡。     

RhoC-shRNA对结肠癌细胞HT-29细胞生物学行为的影响

目的探讨RhoC-shRNA对结肠癌细胞生物学行为的影响。方法构建RhoC-shRNA表达载体,以脂质体转染法将之稳定转染入HT-29结肠癌细胞株,Western blot检测转染细胞中RhoC蛋白表达的抑制情况,观察转染前后结肠癌细胞周期、凋亡和侵袭能力的变化。结果成功构建RhoC-shRNA真核表达载体,并且转染入结肠癌细胞后,细胞中RhoC蛋白表达水平明显受到抑制,并且抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,降低肿瘤细胞侵袭能力。结论下调RhoC蛋白的表达可抑制结肠癌细胞HT-29的体外增殖和侵袭能力。     

骨形态发生蛋白2对体外培养结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨骨形态发生蛋白2对体外培养的结肠癌细胞增殖、凋亡的影响。方法重组人骨形态发生蛋白（rhBMP-2）不同浓度（分别为1 ng/ml、10 ng/ml、100 ng/ml）、不同时间干预细胞,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法（MTT法）检测rhBMP-2对细胞增殖的影响;Hoechest 33342染色观察细胞形态变化;An-nexinV/PI染色流式细胞仪分析细胞凋亡。结果BMP-2对HT-29细胞有抑制增殖,诱导凋亡的作用,呈剂量依赖性,100 ng/ml浓度24 h内抑制作用最强。随时间延长抑制作用无显著性差异。BMP-2作用24 h后Hoe-chest 33342染色可见核固缩、核碎裂等细胞凋亡表现增加明显。AnnexinV/PI染色流式细胞仪分析显示作用24 h后细胞凋亡较对照组有显著性差异。结论BMP-2在一定作用时间、浓度条件下对结肠癌HT-29细胞有明确的抗增殖促凋亡作用。     

红霉素对钾离子通道HERG高表达癌细胞的增殖抑制及其与化疗药物的协同作用

目的研究红霉素对钾离子通道HERG高表达癌细胞的增殖抑制及其与化疗药物的协同作用。方法采用Western印迹、四甲基偶氮唑蓝（MTT）法、流式细胞术、细胞黏附实验以及明胶酶谱法观察红霉素对肿瘤细胞的作用。结果HERG钾通道在人结肠癌HT-29细胞和小鼠结肠癌C26细胞中均有表达,和HERG钾通道高表达对照神经母细胞瘤SH-SY5Y相比,在HT-29细胞中表达量较高。红霉素对HT-29细胞和C26细胞的增殖具有不同程度的抑制作用,呈浓度依赖性。红霉素能将HT-29细胞阻滞于G2／M期,并引起明显的Sub G1峰。红霉素对HT-29细胞黏附于Ⅰ型胶原具有明显的抑制作用,存在明显的剂量-效应关系。红霉素能抑制肿瘤细胞释放明胶酶MMP-2。红霉素与长春新碱协同抑制小鼠C26细胞的增殖。长春新碱单用以及长春新碱与红霉素（50μmol／L）联用的IC50分别为62．65nmol／L和4．68nmol／L。红霉素与紫杉醇、羟基喜树碱联用亦显示协同作用。结论红霉素在能抑制钾离子通道HERG高表达癌细胞HT-29的增殖,并能诱导肿瘤细胞凋亡。红霉素与长春新碱等化疗药物显示协同作用。     

蟾蜍毒素诱导结肠腺癌细胞HT-29凋亡中对相关蛋白的影响

目的 探讨蟾蜍毒素诱导结肠癌细胞株HT-29凋亡及其机制.方法 MTI检测蟾蜍毒素对结肠腺癌细胞HT-29增殖抑制;瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态学变化;流式细胞术分析细胞凋亡;Western-Blot检测livin、Bcl-2、Bax及Capase-3蛋白的表达.结果 蟾蜍毒素抑制HT-29细胞增殖,呈时间、剂量依赖关系;蟾蜍毒素诱导HT-29细胞凋亡,形态学观察到典型的凋亡小体;流式细胞仪检测到明显亚二倍体凋亡峰;蟾蜍毒素诱导细胞凋亡过程中下调livin、Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,并活化Caspase-3蛋白.结论 蟾蜍毒素诱导HT-29细胞凋亡可能与下调livin、Bcl-2蛋白、上调Bax蛋白表达并活化Caspase-3有关.     

IP_6对人结肠癌细胞HT-29凋亡Caspase3基因作用

目的 研究肌醇六磷酸(IP6)对人结肠癌细胞HT-29的诱导凋亡作用,检测Caspase3基因在IP6处理细胞前后表达的变化,并对IP6诱导人结肠癌细胞HT-29的凋亡机制进行初步探讨.方法 不同浓度的IP6以不同时间作用于体外培养的HT-29细胞,用MTT法检测IP6持续作用对癌细胞增殖的影响;透射电镜观察癌细胞超微结构的变化;用RT-PCR方法对IP6作用前后以及作用不同浓度和时间的癌细胞内Caspase3活性进行检测.结果 IP6能显著抑制人结肠癌细胞HT-29生长,呈剂量与时间依赖性;IP6作用后,HT-29细胞出现凋亡的形态学改变;与对照组相比,不同浓度的IP6作用不同时间后,Caspase3 mRNA表达均升高(F=8.173～91.755,q=3.960～17.095,P<0.05), IP6作用6个月组Caspase3 mRNA表达升高较其他时间组显著(q=12.858～14.890,P<0.01).结论 IP6具有抑制人结肠癌细胞HT-29增殖和诱导凋亡的作用;IP6长期作用诱导细胞凋亡更加显著;Caspase3基因参与细胞的凋亡调节机制,发挥重要作用.     

人类新血小板反应素R-spondin 3的细胞定位及其对肿瘤细胞功能的影响

目的观察人类新血小板反应素R-spondin 3(Rspo 3)的细胞定位,并探讨其在肿瘤发生发展中的可能作用。方法利用荧光显微成像法观察EGFP-Rspo 3在HEK293细胞中的分布。将重组质粒pcDNA-Rspo 3转染结肠癌细胞HT-29、LoVo,采用流式细胞术观察Rspo 3基因过表达对肿瘤细胞周期与凋亡的影响;采用Matrigel、Transwell实验分别检测Rspo 3基因过表达对肿瘤细胞黏附及侵袭能力的影响。结果荧光显微成像法观察发现,EGFP-Rspo 3融合蛋白在细胞核表达,呈弥散点状分布。流式细胞术观察发现,Rspo 3基因过表达对肿瘤细胞生长周期没有明显影响;Rspo 3基因过表达不影响低恶性的HT-29细胞凋亡,但诱导高恶性的LoVo细胞凋亡(P<0.01)。Rspo 3基因过表达增强肿瘤细胞黏附性(P<0.01),降低肿瘤细胞的侵袭力(P<0.01),对肿瘤细胞移行有一定抑制作用。结论 Rspo 3有核定位功能,能诱导部分肿瘤细胞凋亡并抑制其转移扩散。     

二烯丙基二硫诱导HT-29细胞差异表达cDNA文库的构建

目的:构建二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人结肠癌HT-29细胞差异表达cDNA文库,以期寻找、克隆DADS特异性作用靶点基因。方法:用120μmol/L的DADS处理人结肠癌HT-29细胞,从DADS处理组及对照组HT-29细胞中提取poly A+RNA,应用高效、灵敏的抑制性消减杂交(SSH)技术构建DADS诱导人结肠癌细胞差异表达cDNA消减文库,再转染大肠杆菌进行文库扩增。结果:成功构建具有高消减效率的DADS诱导人结肠癌细胞差异表达cDNA文库,文库扩增得到了500个克隆,随机挑取100个制备质粒,酶切分析均得到150~1 300 bp大小插入片段,这些片段可能就是载有高度特异性的目的片段。结论:建立了DADS诱导人结肠癌细胞差异表达cDNA文库,为进一步寻找、克隆DADS特异性作用靶点基因奠定了基础。     

选择性及非选择性COX-2抑制剂对结肠癌细胞生长的影响

目的探讨选择性及非选择性环氧合酶-2（cylooxygenase-2,COX-2）抑制剂对体外培养的结肠癌细胞生长的影响及凋亡的诱导作用。方法体外培养HT-29、SW480及LS174-T三种结肠癌细胞,分别加入不同浓度的非选择性COX-2抑制剂阿司匹林（aspirin）、选择性COX-2抑制剂塞来昔布（celecoxib）及美洛昔康（meloxicam）作用于HT-29及SW480细胞。采用MTT法检测结肠癌细胞增殖;用免疫细胞化学法及免疫印迹技术分别检测结肠癌细胞增殖细胞核抗原（PCNA）及细胞COX-2的表达;流式细胞技术分析对结肠癌细胞周期的影响;用Annexin V／PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果aspirin、celecoxib及meloxicam均能有效抑制体外培养的HT-29、SW480结肠癌细胞生长,并具有良好的量-效关系。Western blot表明,HT-29细胞表达COX-2,而SW480细胞不表达COX-2。Aspirin及celecoxib处理组细胞PCNA表达较对照组明显下调。10mmol／L的aspirin及50μmol／L的celecoxib能诱导HT-29及SW480细胞凋亡,凋亡率分别为4．8％,17．7％;5．1％,20．4％。结论选择性及非选择性COX-2抑制剂均能有效抑制结肠癌细胞生长,这种作用亦存在于COX-2阴性表达的结肠癌细胞。     

罗格列酮体外抗结肠癌作用的实验研究

目的探讨罗格列酮（Rosiglitazone,ROZ）体外抑制结肠癌生长的作用。方法体外培养人结肠癌细胞HT-29,不同浓度ROZ（10、20、40、80μmol／L）干预。MTT法测定细胞增殖,透射电镜、TUNEL法及流式细胞术观察细胞凋亡情况,免疫组织化学法检测各组细胞中Bax及Bcl-2的表达。结果MTT法显示ROZ抑制HT-29细胞生长,且具有时间和浓度依赖性,透射电镜、TUNEL法及流式细胞术可观察到ROZ具有诱导结肠癌细胞凋亡的作用,免疫组化法显示经ROZ处理后的结肠癌细胞Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减弱。结论ROZ体外具有抑制结肠癌细胞生长的作用,与其诱导细胞凋亡有关,可能通过增强Bax的表达及减弱Bcl-2的表达实现。