过氧化氢抑制三氧化二砷诱导的伯基特氏淋巴瘤细胞凋亡

目的 探讨过氧化氢(H2O2)对三氧化二砷(As2O3)诱导人类伯基特氏淋巴瘤细胞凋亡的影响及双染法荧光显微技术在检测细胞凋亡中的作用。方法 应用As2O3诱导人类伯基特氏淋巴瘤细胞株BJAB细胞凋亡，采用Hoechst 33342和碘化丙啶(PI)核染料双染法荧光显微镜和透射电镜对细胞死亡进行观察及定量分析．结果 BJAB细胞经As2O3处理后，荧光显微镜下可见大多数细胞出现细胞染色质凝集、核边集、核碎裂等凋亡的特征性改变；在低剂量(200μmol／L)H2O2的影响下，抑制了As2O3诱导的细胞凋亡，降低细胞的死亡率；细胞的死亡方式由凋亡转变为核固缩性坏死，表现为既无凋亡的特征性改变，又非典型的细胞坏死，死亡细胞的细胞核呈固缩状态而非肿胀。结论低浓度(200μmol／L)H2O2可抑制临床治疗浓度的As2O3诱导的人类伯基特氏淋巴瘤BJAB细胞凋亡；双染法荧光显微镜技术不但可明确区分细胞凋亡及坏死．还可判断早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞，并可进行定量分析．是一种良好的细胞凋亡检测方法。     

三氧化二砷诱导喉癌Hep-2细胞凋亡及其对细胞周期的影响

目的 观察三氧化二砷（AS2O3）对喉癌Hep-2细胞株诱导细胞凋亡的作用和对细胞周期的影响。方法 体外培养的Hep-2细胞与不同浓度的AS2O3作用24、48、72h，通过MTT还原法检测细胞的生长抑制率，用倒置相差显微镜、流式细胞仪、荧光显微镜研究细胞凋亡的形态学改变，检测细胞凋亡率并进行细胞周期分析。结果 As2O3可有效抑制Hep-2细胞的生长，呈时间和浓度依赖性特点。形态学观察发现，As2O3诱导Hep-2细胞凋亡。2μmol/L As2O3作用24h，S期细胞比例增高，72h后，S期细胞明显下降，细胞大量凋亡。AS2O3在低浓度时，阻滞细胞通过S期，高浓度时诱导S期细胞凋亡。结论 AS2O3可诱导Hep-2细胞的凋亡，与细胞周期阻滞有关。     

褪黑素对氧化诱导人淋巴细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 研究抗氧化剂褪黑素(MT)对H2O2诱导人淋巴细胞凋亡的作用。方法 用免疫细胞化学的方法检测凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达。结果 H2O2处理细胞后bcl-2基因表达轻度增高，加入MT后明显增高，而bax基因表达明显增加，MT干预后明显下降。结论 H2O2可诱导人淋巴细胞凋亡，MT可使H2O2诱导的细胞bcl-2基因的蛋白表达明显增高，并明显降低bax基因的蛋白表达，从而抑制淋巴细胞凋亡。     

葛根素对过氧化氢诱导平滑肌细胞凋亡的保护作用

目的探讨葛根素对过氧化氢(双氧水)H2O2诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞凋亡保护作用的机制。方法在过氧化氢(双氧水)H2O2诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞凋亡模型的基础上,以噻唑兰(MTT)法测定细胞存活率;用流式细胞术和Hoechst33258荧光染色法观察细胞受损和凋亡;用DNA琼脂糖凝胶电泳法观察细胞凋亡过程中DNA断裂程度;用免疫细胞组织化学染色法检测细胞内Caspase-3的表达。结果过氧化氢(双氧水)H2O2诱导无血清培养的平滑肌细胞凋亡,葛根素可显著降低平滑肌细胞的凋亡,减少凋亡细胞DNA断裂,平滑肌细胞坏死减少,对Caspase-3的表达有明显抑制作用。结论葛根素对过氧化氢(双氧水)H2O2诱导血管平滑肌细胞凋亡有保护作用,其机制可能与抑制Caspase-3有关。     

PI-3K在H2O2诱导的PC12细胞凋亡中的作用

目的 研究磷脂酰肌醇-3激酶(PI-3K)在H2O2诱导PC12细胞凋亡中的作用.方法 采用H2O2诱导PC12细胞制作凋亡模型,通过MTT法、Hoechst/PI荧光双染及流式细胞术分析使用PI-3K特异抑制剂LY294002预处理对H2O2诱导PC12细胞凋亡作用的影响.结果 100 μMH2O2处理PC12细胞24 h,细胞出现明显凋亡;LY294002预处理1 h后凋亡细胞数增多(P＜0.05).结论 PI-3K对H2O2诱导的PC12细胞凋亡具有抑制作用.     

过氧化氢对K562细胞凋亡的影响

目的：探讨活性氧对K562细胞凋亡的影响。方法：用过氧化氢(hydrogen peroxide，H2O2)作用于对数生长期的K562细胞。结果：Hoechst 33258染色法观察到K562细胞明显凋亡；caspase活性定量测定及Western Blotting检测显示caspase-3，-8，-9同时被激活。结论：H2O2可诱导K562细胞凋亡，且通过同时激活线粒体途径和死亡受体途径起作用。     

骨髓间充质干细胞对INS-1细胞凋亡的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对过氧化氢(H2O2)诱导胰岛β细胞凋亡的影响。方法以H2O2作用于大鼠胰岛瘤细胞INS-1细胞构建凋亡模型,通过Transwell装置实现INS-1细胞与BMSCs共培养。实验分为4组:单独INS-1细胞培养组(A组);INS-1+H2O2处理组(B组);BMSC+INS-1Transwell共培养组(C组);BMSC+INS-1+H2O2Transwell共培养组(D组)。MTT法检测细胞存活率,Annexin-V/PI染色流式细胞技术检测细胞凋亡水平。结果 H2O2显著降低INS-1细胞存活率,引起INS-1细胞凋亡,且呈剂量依赖性,通过Tran-swell与BMSCs共培养后,由H2O2诱导的INS-1凋亡细胞比例下降,与单独H2O2刺激组相比,细胞凋亡率下降了约26.3%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BMSCs通过Transwell共培养显著抑制H2O2诱导的INS-1细胞凋亡,其作用机制可能与BMSCs旁分泌作用有关,为进一步利用BMSCs防治糖尿病提供了理论依据。     

As2O3注射液体外对人大肠癌细胞抑制作用的观察

目的 明确中药砒霜制剂三氧化二砷(As2O3)注射液对人大肠癌细胞的体外抑制作用，为临床应用As2O3治疗大肠癌提供实验依据。方法 采用活细胞观察法、台盘兰拒染法、四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法和透射电镜观察了As2O3对体外培养的人大肠癌细胞株CoLo-320生长的影响及其形态学变化。结果 As2O3能显著地抑制人大肠癌细胞CoLo-320的生长，用药后诱导其出现了典型的细胞凋亡超微结构改变。结论 As2O3对人大肠癌细胞具有显著抑制生长作用，该抑制作用与诱导细胞凋亡密切相关。     

三氧化二砷诱导白血病多药耐药细胞凋亡的形态学改变

目的 系统观察三氧化二砷（As2O3)诱导白血病多药耐药细胞凋亡时的形态学特征。方法 用As2O3诱导白血病多药耐药细胞K562/ADM细胞凋亡，光镜，激光共聚焦显微镜（Confocal)和电子显微镜观察凋亡细胞的形态学变化。结果 As2O3诱导K562/ADM细胞凋亡，形态学上出现典型的凋亡特征性改变。发生凋亡的细胞可被邻近的未凋亡细胞通过吞噬等方式清除，且正常细胞吞噬凋亡细胞后自身出现某些凋亡的形态学改变。结论 体外诱导凋亡的白血病耐药细胞可被邻近的同类细胞吞噬清除。这种行为可能引发同类“吞噬”细胞自身发生继发性凋亡。     

补肾复方调老年大鼠激活诱导的T细胞凋亡

目的 研究补肾复方延缓衰老的免疫学机制。方法 采用电镜、ＤＮＡ凝胶电泳及ＴＵＮＥＬ标流式细胞仪分析对激活诱导的Ｔ细胞凋亡进行定性、定量分析。结果 老年大鼠对照组细胞凋亡的百分率为４７．０％，年龄大鼠组为２２．２％；补肾组为３７．２％，与老年大鼠对照组相比有显著怀差异。结论老年大鼠激活诱导下Ｔ细胞凋亡的敏感性增高 方能降低激活诱导的老年大鼠Ｔ细胞凋亡，提示下调激活导Ｔ细胞凋亡可能是补肾延缓衰老的免疫     

Caspase-3 and its inhibitor Ac-DEVD-CHO in rat lens epithelial cell apoptosis induced by hydrogen in vitro

Objective To investigate the role of caspase-3 and its inhibitor Ac-DEVD-CHO in rat lens epitheli alcell apoptosis induced by hydrogen peroxide (H2O2 ) in vitro.Methods Rat lenses were incubated in modified Eagle‘s medium containing 2 mmol/L H2O2 to induce apoptosis in vitro. Apoptosis in lens epithelial cells was assessed by transmission electron microscopy and annexin V-propidium iodide (PI) double staining flow cytometry after 12, 24 and 48 h of incubation. The activity of caspase-3 was analyzed by western blotting.Results Observations under transmission electron microscopy revealed that 2 mmol/L H2O2 could effectively induce lens epithelial cell apoptosis in vitro. Caspase-3 activity increased during cell apoptosis and the peak measurement occurred at 24 h after treatment with H2O2. Cell apoptosis was blocked by caspase-3 inhibitor Ac-DEVD-CHO.Conclusions The activation of caspase-3 plays an important role in executing apoptosis in H2O2-treated lens epithelial cells and in the formation of cataract. The caspase-3 inhibitor Ac-DEVD-CHO may effectively prevent lens epithelial cell apoptosis caused by oxidative injury.     

脑源性神经营养因子对H2O2诱导人动脉平滑肌细胞凋亡的作用

目的 研究脑源性神经营养因子（BDNF）对过氧化氢（H2O2）诱导人动脉平滑肌细胞（SMC）凋亡的作用。方法 BDNF基因经脂质介导转染SMC,I型胶原基因调节元件（COLIAI）驱动该基因在SMC中异位表达,用MTT法检测细胞增殖,吖啶橙（AO）荧光染色观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,琼脂糖电泳检测DNA图谱。结果 100－800μmol/L浓度的H2O2明显抑制SMC增殖,200μmol/L H2O2作用24h后,可见典型的细胞凋亡形态学及生物化学改变胞浆固缩,核染色质断裂,DNA电泳呈梯形条带,经BDNF基因修饰的SMC则未显示上述改变。结论 H2O2能有效诱导SMC凋亡,转BDNF基因的SMC对H2O2诱导凋亡具有明显的拮抗作用。     

H_2O_2通过上调P38的活性而诱导PC12细胞凋亡

目的:探讨H2O2是否通过调节P38MAPK的活性而诱导PC12细胞凋亡。方法:碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡;Western-Blot测定磷酸化ERK1/2蛋白和磷酸化p38蛋白的表达。结果:作用PC12细胞24h后,20～80μmol/L的H2O2可呈浓度依赖性地诱导PC12细胞凋亡并增加PC12细胞P38磷酸化的水平;P38特异性抑制剂SB203580(10或20μmol/L)预处理30min可显著减轻40μmol/LH2O2对PC12细胞凋亡的诱导作用。结论:H2O2通过上调P38的活性而诱导PC12细胞凋亡。     

二苯乙烯苷上调Bcl-2抑制内皮细胞凋亡

目的研究二苯乙烯苷（TSG）对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的作用,以及对抗凋亡基因Bcl-2表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,筛选造模内皮细胞凋亡的H2O2浓度,以不同浓度二苯乙烯苷作用24 h。采用MTT法检测细胞生长活力,Hoechst33258染色观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western-blot检测Bcl-2蛋白的含量。结果过氧化氢能引起内皮细胞损伤,抑制细胞增殖,并且随着浓度增加,细胞生存率逐渐降低。其中300μmol/L H2O2作用后细胞增殖明显受到抑制,Hoechst33258染色可见大量凋亡细胞,流式细胞仪检测出明显的凋亡峰,Bcl-2蛋白的表达量显著减少;加入二苯乙烯苷作用后,随着TSG浓度增加,细胞生存率增加,凋亡率逐渐降低;与H2O2造模组比较,10μmol/L的二苯乙烯苷预处理能够显著提高细胞生存率,抑制细胞的凋亡,并且使Bcl-2表达增加（P〈0.05）。结论二苯乙烯苷能抑制过氧化氢诱导的内皮细胞凋亡,该作用与上调Bcl-2表达有关。     

PROTECTIVE EFFECT OF MELATONIN ON NEURAL CELLS AGAINST THE CYTOTOXICITY OF OXYRADICALS

Objective. To investigate the exact mechanism of melatonin to prohibit the apoptosis of neural cells induced by various kinds of cytotoxic agents. Methods. We used the methods of phase contrast microscopy, MTT assay and hoechst dye staining to check this mechanism in SKNSH and U251 cell lines. Results. Both 2mmol/L H2O2 and 0. 5 μmol/L amyloid β- protein (Aβ) induce these two cell lines die via apoptosis. Either melatonin or glutathione can significantly protect both cell lines. The protective effect of 10 μmol/L melatonin is as same as that of 60μmol/L glutathione. Conclusion. Melatonin can partly inhibit the cytotoxicity of H2O2 and Aβ through its role as a free radical scavenger.     

NADPH氧化酶在人真皮成纤维细胞氧化应激损伤中的作用

目的探讨NADPH氧化酶在人真皮成纤维细胞氧化应激损伤中的作用。方法H2O2 构建氧化应激模型,将实验分为正常 组、氧化损伤组和NADPH氧化酶抑制剂（DPI）组,MTT检测细胞活力,DCFH-DA 荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）改变, Western blot分析NADPH氧化酶胞膜亚基gp91phox表达变化。结果H2O2 对成纤维细胞的氧化损伤呈时间和浓度依赖,H2O2 700 μmol/L处理24 h后细胞活力下降约40%（P<0.05）,ROS升高2倍（P<0.05）。而抑制剂组细胞活力较氧化损伤组增加20% （P<0.05）,ROS下降至正常水平（P<0.05）。Western blotting结果显示氧化损伤组gp91phox表达随H2O2 浓度逐渐升高,而抑制 剂组表达接近正常水平。结论H2O2 可通过影响NADPH氧化酶特别是胞膜亚基gp91phox引发成纤维细胞氧化损伤。     

过氧化氢诱导血管内皮细胞凋亡与Caspase-3表达的实验研究

目的:探讨过氧化氢对血管内皮细胞促凋亡作用及发生机制。方法:用0.1mmol/L、0.5mmol/L与1.0mmol/L等不同浓度的过氧化氢分别作用于对数生长期的内皮细胞,采用PI染色与Annexin V/PI染色后,进行流式细胞术检测内皮细胞的死亡率与凋亡率,并一步检测采用流式细胞术Caspase-3的水平表达。结果:过氧化氢0.1mmol/L、0.5mmol/L与1.0mmol/L组内皮细胞,凋亡率分别为18.6%±5.8%、32.8%±6.2%与42.1%±10.1%,而PI阳性率则为10.9%±4.1%、26.6%±5.3%与28.3%±4.6%,而Caspase-3的阳性表达率则为10.2%±2.1%、16.3%±3.2%和16.9%±3.9%。结论:过氧化氢可引起细胞凋亡,其中0.5mmol/L是诱导适宜浓度,且凋亡发生机制与Caspase-3激活相关。     

补阳还五汤对氧化应激诱导心肌细胞凋亡及5-LOX表达的影响

目的探讨补阳还五汤对氧化应激诱导乳鼠心肌细胞凋亡及5脂氧合酶(5-LOX)表达的影响。方法 SD乳鼠心肌细胞原代培养,不同剂量补阳还五汤预处理24 h后过氧化氢(H2O2)诱导心肌细胞氧化损伤。采用MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况,Western-blot检测5脂氧合酶(5-LOX)、Bax和Bcl-2的表达。结果 MTT结果显示,与对照组及补阳还五汤组比较,H2O2组心肌细胞活力显著降低(P0.01);与H2O2组相比,补阳还五汤组心肌细胞活力显著提高(P0.01)。流式细胞仪分析显示,H2O2组心肌细胞凋亡率为(19.47±1.31)%,明显高于对照组的(1.36±2.30)%,差异有统计学意义(P0.01);补阳还五汤低、中、高剂量组的细胞凋亡百分率分别为(13.25±2.84)%、(11.50±3.43)%、(9.94±4.01)%,明显低于H2O2组(19.47±1.31)%,差异有统计学意义(P0.01)。Western-blot结果显示,H2O2组心肌细胞Bcl-2蛋白表达比对照组及补阳还五汤组减少,5-LOX及Bax蛋白表达比对照组及补阳还五汤组高,差异均有统计学意义(P0.01)。不同剂量的补阳还五汤组Bcl-2蛋白表达高于H2O2组,5-LOX及Bax蛋白表达比H2O2组少(P0.01)。结论补阳还五汤能显著抑制氧化应激诱导的乳鼠心肌细胞凋亡,并且呈剂量依赖性,补阳还五汤抑制心肌细胞凋亡的作用可能与抑制5-LOX表达有关。     

过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞凋亡时核仁素的表达及细胞定位变化

目的:探讨核仁素C23在过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)致人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)凋亡中的表达及定位情况.方法:采用H2O2 (0.5 mmol/L)作用于人HUVEC,采用流式细胞术以及caspase-3活性检测观察细胞凋亡的发生情况,并通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western 印迹分别检测核仁素mRNA和蛋白质水平;间接免疫荧光检测核仁素的细胞内分布情况.结果:流式细胞术以及caspase-3活性检测均表明H2O2能明显地诱导HUVEC凋亡,并且Western 印迹分析显示H2O2能够使核仁素发生断裂,RT-PCR分析显示H2O2诱导核仁素mRNA表达下调;间接免疫荧光检测显示核仁素从胞核移位至胞浆.结论:H2O2可诱导HUVEC凋亡,同时伴有核仁素表达下调及从胞核移位至胞浆.