聚合酶链反应鉴定丙型肝炎病毒母婴传播的状态及其意义

采用多种方法，动态检测了１１例丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染的孕妇所生的婴儿血抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ。发现用合成肽酶联免疫吸附试验（ｓｐＥＬＩＳＡ）检测婴儿抗－ＨＣＶ阳性率（２３．５２％）显著低于第二代重组抗原ＥＬＩＳＡ（２ｎｄＥＬＩＳＡ）（４１．１８％）（Ｐ＜０．０５）；用２ｎｄＥＬＩＳＡ检测，６例婴儿脐血和静脉血抗－ＨＣＶ阳性，５例持续１～５月阴转，１例阳性持续１３个月。经重组免疫印迹试验（ＲＩＢＡ）鉴定，４例阳性，２例可疑阳性。用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＨＣＶＲＮＡ，５例阳性，３例于生后１～６个月自然阴转，２例持续阳性分别达９个月和１３个月。提示检测抗－ＨＣＶ判断ＨＣＶ母婴传播的状态受到婴儿抗－ＨＣＶ产生水平低下、母体抗－ＨＣＶ的被动输入和不同检测方法的影响，用ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ是判断母婴传播更可靠的指标。     

酶联免疫吸附法检测庚型肝炎病毒抗体

目的 探讨抗庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）ＩｇＧ与各种病毒感染,丙氨到转氨酶（ＡＬＴ）及ＨＧＶ ＲＮＡ的相关性。方法 用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）法检测了３１５例各种肝炎病毒（Ａ￣Ｅ）感染乾和１１７例健康献血员血清的抗－ＨＧＶ ＩｇＧ,并测定其ＡＬＴ,对抗－ＨＧＶ ＩｇＧ阳性的标本用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法检测ＨＧＶ ＲＮＡ。结果 献血员抗－ＨＧＶ ＩｇＧ的阳性率为３．４２％（４／１１７     

慢性丙型肝炎患者病毒血症与抗体型别及肝功能损害的关系

慢性丙型肝炎患者病毒血症与抗体型别及肝功能损害的关系杨忠礼邹林樾马明睿徐恩杰采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），ＥＬＩＳＡ和肝功能试验同步检测按１９９５年全国病毒性肝炎会制订的诊断标准，诊断的８１例慢性丙型肝炎患者血清ＨＣＶＲＮＡ、抗ＨＣＶＩｇＭ...     

血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎的病原学研究

目的对血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎进行病原学研究。方法用ＨＢＶＰＣＲ、ＨＣＶＲＴ－ＰＣＲ和ＨＥＶＲＴ－ＰＣＲ分别检测血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎患者血清，并对其部分阳性产物进行克隆测序。结果８７例非甲～戊型肝炎血清ＨＢＶＤＮＡ均为阴性，９例（１０．３％）为ＨＣＶＲＮＡ阳性，部分经测序证实为ＨＣＶ１ｂ亚型；余７８例为ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ均阴性。该７８例中，１４例因无血清未作ＨＥＶＲＮＡ检测，余６４例中４９例（７６．６％）为ＨＥＶＲＮＡ阴性，１５例（２３．４％）为ＨＥＶＲＮＡ阳性。经序列分析显示，其中９例为典型的中国ＨＥＶ株基因序列，６例变异较大，与典型的中国株基因序列的同源性仅为８０％左右。４９例ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ和ＨＥＶＲＮＡ均阴性的血清中１６例（３２．６％）ＨＧＶＲＮＡ阳性。由此可见，该８７例中至少有９例为ＨＣＶ感染，１５例为ＨＥＶ感染，１６例为ＨＧＶ感染。结论对血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎的病人应该用ＰＣＲ法进行病原学分型，以明确其诊断     

PCR和ELISA检测单纯疱疹病毒的比较

依据ＨＳＶ ＤＮＡ多聚酶基因核苷酸序列设计并合成一对引物，建立了ＰＣＲ方法。用ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ平行检测ＨＳＶ－１，ＨＳＶ－２标准毒株感染的细胞，拟诊ＨＳＶ脑炎患者脑脊液（ＣＳＦ）及多种对照标本。结果表明，两方法特异性完全一致；ＰＣＲ检测阳性率高，比ＥＬＩＳＡ敏感近２０倍，更适用于ＨＳＶ脑炎的早期诊断。     

定量逆转录PCR检测丙肝病毒RNA

在反应体系中加入定量的突变型ＨＣＶ－ＲＮＡ模板进行竞争逆转录ＰＣＲ（ＣＲＴ－ＰＣＲ）可以定量测定标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ基因组拷贝数。ＣＲＴ－ＰＣＲ研究表明，随肝病进展，患者血清ＨＣＶ－ＲＮＡ复制水平持续增高；血清病毒含量高者对干扰素治疗反应差。     

肝病患者庚型肝炎病毒感染的研究

目的 研究肝病患者庚型肝炎病毒感染状况。方法 用酶链免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测１５４例门诊和住院肝病患者（均无输血史）的抗－ＨＧＶ,１５４例中有５４例同时采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＨＧＶ ＲＮＡ,分别计算抗－ＨＧＶ和ＨＧＶ ＲＮＡ的阳性率。以ＨＧＶ ＲＮＡ阳性为ＨＧＶ感染的判断标准,来分析各类肝病患者ＨＧＶ感染状况。结果 １５４例肝病患者抗－ＨＧＶ阳性者３１例,阳性率２０．１３     

丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶基因的克隆和表达

目的 从感染ＨＣＶ的中国患者血清中扩增编码ＨＣＶ丝氨酸蛋白酶的ｃＤＮＡ,在大肠杆菌中进行表达。方法 从血清中提取ＨＣＶ ＲＮＡ,应用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增ＨＣＶ丝氨酸蛋白酶ｃＤＮＡ,Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终引法测定其序列,与ｐＢＶ２２０载体构建重组粒,在大肠杆菌中表达,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔ分析重组蛋白。结果 用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增得到了ＨＣＶ丝氨酸蛋白酶基因,序列分析表明其读码框架     

庚型肝炎病毒感染对慢性丙型肝炎的临床与病理学影响

目的 探讨庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染对慢性丙型肝炎（ＣＨ－Ｃ）的临床与病理学影响。方法 应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法对５３例经肝穿活检确诊的ＣＨ－Ｃ患者血清标本进行了ＨＣＶ－ＲＮＡ检测,并将合并与未合并ＨＧＶ感染者进行了临床与病理学对比。结果 ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性１５例（２８．３０％）。合并与未合并ＨＧＶ感染者在临床表现、肝功能等生化指标水平、ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性率及肝脏病理损害等方面差     

用聚合酶链反应检测人肝细胞癌乙型肝炎病毒DNA和丙型肝炎病毒RNA

为研究乙型肝炎病毒ＤＮＡ（ＨＢＶＤＮＡ）和丙型肝炎病毒ＲＮＡ（ＨＣＶＤＮＡ）与肝细胞癌的关系，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和巢式ＰＣＲ（ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）分别检测４２例肝肿瘤组织中ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ。结果：１例胆管细胞癌组织ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ均阳性，１例胆管囊腺瘤ＨＢＶＤＮＡ阳性。４０例肝细胞癌组织中，单纯ＨＢＶＤＮＡ阳性１９例，单纯ＨＣＶＲＮＡ阳性３例，二者均阳性１０例。ＨＢＶＤＮＡ阳性率７２．５％，ＨＣＶＲＮＡ阳性率３２．５％。ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ感染与肝癌组织学分型无关；且肝细胞癌中ＨＣＶ感染与ＨＢＶ未见相关。结果提示，我国ＨＢＶ感染仍是引起肝细胞癌的主要原因。但由于肝细胞癌患者中ＨＣＶ的感染率也较高，且有上升趋势，因此ＨＣＶ可能也是肝细胞癌发生的重要原因之一。     

H2-Calponin蛋白在4种癌组织的表达及临床意义

 目的 探索肿瘤相关抗原H2-Calponin mRNA及其蛋白在肺癌、胃癌、鼻咽癌和肝癌中表达及其临床意义。方法 用免疫组织化学和原位RT-PCR检测癌组织中H2-Calponin蛋白及其mRNA的表达分布和定位情况。结果 H2-Calponin蛋白主要分布在胞质;在肺癌、胃癌、鼻咽癌和肝癌中阳性率分别为30.0%、27.5%、45.0%和51.8%,肝癌组织阳性率最高。H2-Calponin mRNA 定位主要在细胞核周;H2-Calponin mRNA在肺癌、胃癌、鼻咽癌和肝癌中表达阳性率分别为17.5%、10.0%、20.0%和50.0%,在肝癌组织阳性率最高(P<0.05)。H2-Calponin在伴有转移的肝癌组织中的阳性表达率高于无转移的肝癌组织中的阳性表达率(P<0. 05),但该蛋白在4种不同癌组织中的表达与患者的性别、年龄、及癌组织的病理分级等因素无关。结论 肝癌组织高表达H2-Calponin蛋白和mRNA,可能具有肝癌特异性且与肝癌是否伴有转移相关。     

酶联法抗-HCV和HCV-cAg联检对丙型肝炎实验室诊断的应用价值

目的 探讨联合丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)及抗-HCV抗体酶联免疫检测对丙型肝炎实验室诊断的应用价值.方法 289份血清标本按抗-HCV阳性、弱阳性、阴性及HCV-cAg阳性、弱阳性及阴性分组,用PCR扩增法检测其HCV RNA含量.结果 单项抗-HCV阳性及弱阳性标本其HCV RNA检测阳性符合率分别为87...     

丙型肝炎病毒核心抗原检测用于献血者筛查价值的探讨

目的应用酶联免疫吸附技术筛查献血员中丙型肝炎病毒核心抗原（HCV—cAg）和抗体（HCV—Ab），了解丙型肝炎病毒核心抗原筛查献血员应用价值。方法对我站2004年8-12月间的3972份献血者血清标本进行抗-HCV初、复检和HCV—cAg ELISA检测，将ELISA法阳性的25份血清标本，再做RT-PCR检测证实。结果3972份血清标本检测中，有10份仅初检抗-HCV阳性样本，经HCVRNA检测阳性有l份，12份仅复检抗-HCV阳性样本，经HCVRNA检测阳性有1份，HCV—cAg检测阳性有3份，经HCVRNA检测阳性有2份。结论HCV—cAg ELISA检测技术的敏感性与HCVRNA技术类似，但成本明显降低，可与HCV抗体联合检测应用献血员筛查。     

Immunohistochemical detection of hcv in cirrhosis, dysplastic nodules, and hepatocellular carcinomas with parallel-tissue quantitative RT-PCR.

Hepatitis C virus is a major risk factor for hepatocarcinogenesis in humans. In situ detection of the virus in early sequential lesions of hepatocarcinogenesis could provide information about the role of the virus in the transformation and promotion process. Parallel in situ detection of HCV proteins and RNA in human tissues were performed in 55 posthepatitis C cirrhosis, 17 dysplastic nodules (DN), and 25 hepatocellular carcinomas (HCC), using immunohistochemistry and tissue quantitative RT-PCR. A consistent cytoplasmic hepatocellular staining was obtained in 73% of cirrhosis cases (with or without HCC) and in 55% DN cases. A few tumoral hepatocytes were unambiguously stained in 28% HCC. The percentage of positive cells and the intensity of immunostaining significantly decreased from cirrhosis to HCC through DN, whereas there was no difference in the prevalence of positivity or the number of viral copies between cirrhosis and HCC using tissue-quantitative RT-PCR. Finally, RT-PCR levels were found parallel with the immunostaining in cirrhosis but not in HCC. These results suggest that HCV protein synthesis may persist but be down-regulated during sequential hepatocarcinogenesis. A putative role of HCV proteins on cell proliferation and differentiation during the early steps of carcinogenesis cannot therefore be excluded.     

EZH2在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的 探讨EZH2在肝细胞癌中的表达及临床意义方法采用RT-PCR、免疫组织化学和Western blotting方法分析肝癌及癌旁组织EZH2mRNA转录和蛋白表达水平及其与临床病理因素的关系.结果 在42例肝癌组织中检出26例EZH2mRNA,而在相应的42例癌旁组织中只检出12例,癌组织EZH2mRNA阳性率高于...     

RT-PCR检测肝炎和肝癌组织中的HCV复制中间体

应用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)检测11例血清抗HCV阳性的药瘾患者尸检肝组织和10例原发性肝细胞癌(PHC)患者手术切除肝癌组织中HCV基因(正链HCV RNA)和HCV复制中间体(负链HCV RNA)。结果8/11例肝组织和7/10例肝癌组织中正链HCV RNA阳性,其中各有6例负链HCV RNA亦阳性。HCV各基因区的检出率差别较大,5′NC区检出率最高、C区次之、NS区检出率较低。在同例肝(癌)组织中,若负链HCV RNA阳性,则其信号强度与正链基因无明显差别;但未发现肝癌组织中癌细胞分化程度与HCV的检出率有关。上述结果提示HCV感染与肝癌发生有密切关系,HCV的持续复制可能在癌肿形成中起作用。     

原发性肝癌端粒酶活性的检测及临床意义

为探讨端粒酶活性化在原发性肝癌发生发展中的作用，本文采用ＴＲＡＰ技术，对４２例手术切除的原发性肝细胞癌及癌旁组织的端粒酶活性进行检测。结果发现：４２例肝癌组织有３４例检出端粒酶活性，阳性率为８１．０％，４２例癌旁组织有１２例检出端粒酶活性，阳性率为２８．８％，端粒酶活性与肿瘤大小，组织学分级及肿瘤转移无显著相关，以上结果提示，检测原发性肝癌组织端粒酶活性对阐明原发性肝癌的发病机理，癌变危险性的预测