促凋亡蛋白Omi/HtrA2与细胞凋亡相关疾病

Omi／HtrA2是一种丝氨酸蛋白酶，定位于线粒体，具有调节凋亡的功能。Omi／HtrA2最早是因与凋亡抑制蛋白（IAPs）有结合能力并拮抗IAPs而被分离确定的，与细菌内蛋白酶HtrA2（high—temperature requirement）同源。近年来研究发现，Omi／HtrA2具有多种生物学功能，与多种细胞凋亡相关疾病的发生、发展有关。     

Omi/HtrA2基因表达对食管癌细胞EC9706凋亡及对耐药影响的实验研究

目的：研究凋亡促进因子Omi/HtrA2基因过表达对食管癌细胞EC9706凋亡及对耐药性的影响。方法用脂质体包裹转染人食管癌EC9706细胞,实验分为对照组、空载体组、Omi载体组、顺铂组、Omi+顺铂联合组,采用RT-PCR检测不同干预组Omi/HtrA2基因mRNA表达的变化,MTT法检测不同干预组细胞生长抑制率,流式细胞术检测不同干预组细胞的凋亡率,分析Omi/HtrA2基因蛋白表达对细胞耐药性的影响。结果①Omi/HtrA2基因mRNA在EC9706细胞中的表达：对照组为（0.113±0.009）,空载体组为（0.106±0.006）,Omi载体组为（0.436±0.021）,顺铂组为（0.196±0.013）,Omi+顺铂联合组为（0.639±0.032）,顺铂组、Omi+顺铂联合组较对照组、空载体组明显增强,差异有统计学意义（P<0.01,P=0.011,P=0.000）,对照组与空载体组比较无显著性差异（P>0.05,P=0.725）。②MTT法检测Omi/HtrA2的表达对细胞生长的抑制率：对照组为0,空载体组为2.89%,Omi载体组为27.61%,顺铂组为30.02%,Omi+顺铂联合组为48.47%,与对照组相比,Omi载体组、顺铂组、Omi+顺铂联合组均显著抑制EC9706细胞的生长,差异具有显著性（P=0.000）。③流式细胞术检测Omi/HtrA2的表达对凋亡的影响：对照组细胞凋亡率为10.76%,空载体组为13.26%,Omi载体组为38.14%,顺铂组为45.86%,Omi载体+顺铂联合组为56.64%,与对照组、空载体组比较,Omi载体组、顺铂组、Omi载体+顺铂联合干预组细胞凋亡率明显提高,差异具有显著性意义（P=0.000）。结论 Omi/HtrA2基因过表达可以明显抑制癌细胞的生长,提高癌细胞的凋亡率及癌细胞对化疗药物的敏感性,且Omi/HtrA2基因的表达与化疗药物具有协同抗癌作用。     

Omi/HtrA2在大鼠肾缺血-再灌注损伤诱导的细胞凋亡中的作用

目的探讨促凋亡因子Omi/HtrA2在大鼠肾缺血-再灌注损伤诱导的细胞凋亡中的作用。方法雄性Wistar大鼠随机分为假手术组[给空溶剂二甲基亚砜(DMSO)]、模型1组和模型2组(分别于再灌注1h时及再灌注前10min给予空溶剂DMSO)、阻断剂1组和阻断剂2组(分别于再灌注1h时和再灌注前10min给予Omi/HtrA2特异性阻断剂Ucf-101)。双侧肾动脉夹闭45min再灌注24h制作动物模型。原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡;Western印迹法检测肾组织匀浆中Omi/HtrA2蛋白质表达;比色法检测肾组织匀浆中caspase-3活性。结果肾缺血45min再灌注24h后,肾小管上皮细胞凋亡数目明显增加,同时肾组织中Omi/HtrA2表达及caspase-3活性显著增高。再灌注前10min给予Ucf-101,抑制Omi/HtrA2的表达,caspase-3活性显著降低,细胞凋亡明显减轻。再灌注1h时给予Ucf-101阻断Omi/HtrA2的表达,caspase-3活性及细胞凋亡的变化不明显。结论促凋亡因子Omi/HtrA2在肾缺血-再灌注损伤诱导的细胞凋亡中发挥重要作用,在再灌注前10min阻断Omi/HtrA2的表达,可减轻肾缺血-再灌注损伤引起的细胞凋亡。     

Omi／HtrA2及其在恶性肿瘤中的研究进展

在肿瘤组织中,通常存在着坏死性细胞死亡和细胞凋亡两种死亡形式,而就目前研究认为肿瘤细胞的增殖率与死亡速率决定肿瘤的生长速率,因此,有效地调控细胞凋亡的速率以期达到治疗肿瘤的目的成为了肿瘤治疗研究的重要方向。2001年人们发现了一种存在于线粒体膜间隙的促凋亡蛋白--Omi／HtrA2,并开始对这一凋亡分子的进行研究扩展,发现其对多种肿瘤细胞可显示促凋亡效应以及预测肿瘤预后的作用。     

Omi/HtrA2在大鼠肾小管上皮细胞缺氧/复氧模型凋亡中的作用

目的研究在大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)凋亡模型中Omi/HtrA2的表达,并观察抑制Omi/HtrA2表达后细胞凋亡的变化。方法用脂质体介导的基因转染方法将Omi/HtrA2的特异性shRNA表达载体251(Pgenesil-1/Omi/HtrA1 shRNA1)和252(Pgenesil-1/Omi/HtrA2 shRNA2)及阴性质粒HK(Pgenesil-1/HK)分别转入NRK-52E。应用Western印迹方法检测Omi/HtrA2及caspase3的表达,用DNA ladder检测各组细胞发生凋亡的情况。结果带有绿色荧光的NRK-52E即为成功转染细胞;在Western blot结果显示:对照组在缺氧复氧后Omi/HtrA2表达较正常组明显增强,而在转251和252组Omi/HtrA2表达较对照组减弱(P<0.05),但251和252两组间差异无统计学意义。对照组caspase3的表达明显较正常组增强(P<0.05)。且在Omi/HtrA2被抑制的两组caspase3的明显较对照组(P<0.05)。DNA ladder也显示:在对照组出现典型的DNA条带。251和252组条带减弱。结论通过RNA干扰技术成功抑制了Omi/HtrA2缺氧/复氧模型中Omi/HtrA2的表达,从而抑制了凋亡的发生。     

Omi/HtrA2短发夹RNA在大鼠肾小管上皮细胞凋亡中的作用及机制

目的探讨Omi/HtrA2短发夹RNA(shRNA)对缺氧/复氧诱导大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)凋亡的作用及机制。方法细胞分为5组:正常组(常规培养),模型组(缺氧/复氧组)、HK组(转染重组质粒Pgenesil-1/HK)、shRNA1组(转染Pgenesil-1/Omi/HtrA2shRNA1)、shRNA2组(转染Pgenesil-1/Omi/HtrA2shRNA2)。用荧光显微镜观察荧光蛋白的表达,Westernblot检测各组Omi/HtrA2、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(caspase)-3/-9蛋白表达,比色法测定caspase-3/-9的活性。结果在荧光显微镜下,转染组细胞均可见绿色荧光,未转染组未见绿色荧光。与模型组相比,shRNA1组和shRNA2组Omi/HtrA2、caspase-3/-9蛋白表达明显减少(P<0.01)。模型组和HK组、shRNA1组和shRNA2组之间Omi/HtrA2、caspase-3/-9蛋白表达差异无统计学意义。与正常组相比,模型组Omi/HtrA2、caspase-3/-9蛋白表达明显增强(P<0.01)。结论Pgenesil-1/Omi/HtrA2shRNA1和Pgenesil-1/Omi/HtrA2shRNA2能明显减少缺氧/复氧诱导的NRK-52E中Omi/HtrA2蛋白的表达。通过抑制procaspase-9的活化,进而减少了下游procaspase-3的激活,最终减轻了缺氧/复氧诱导的NRK-52E的凋亡程度。     

hnRNP A2/B1在乳腺癌组织中表达水平及其凋亡调控的研究

目的 检测乳腺癌组织标本中hnRNP A2/B1的表达水平;探讨hnRNP A2/B1基因对乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的影响.方法 选取乳腺癌患者40例、乳腺纤维瘤患者20例(对照),采用免疫组化方法检测组织中hnRNP A2/B1的表达水平;体外培养乳腺癌细胞株MCF-7,并将hnRNP A2/B1 siRNA转染至MCF-7中,TUNEL法检测转染前后MCF-7细胞的凋亡情况.结果 40例乳腺癌组织标本中36例有hnRNP A2/B1阳性表达,而作为对照的乳腺纤维瘤组织中只有3例有hnRNP A2/B1阳性表达,乳腺纤维瘤组与乳腺癌组hnRNP A2/B1表达水平差异有统计学意义(P＜0.01).体外培养乳腺癌细胞MCF-7在转染hnRNP A2/B1 siRNA后,MCF-7细胞凋亡明显增加.结论 hnRNP A2/B1在乳腺癌组织中的表达较乳腺纤维瘤组织高,推测hnRNP A2/B1与乳腺癌的发生有关.通过siRNA干预、降低hnRNP A2/B1的表达水平可以促进乳腺癌细胞凋亡,提示hnRNP A2/B1可能通过抗肿瘤细胞失巢凋亡实现肿瘤的发生.     

Survivin和Bcl-2在结肠癌组织中的表达及相互关系

目的探讨Survivin、Bcl-2在结肠癌组织中的表达及其与结肠癌临床病理学特征关系。方法利用免疫组织化学染色方法检测55例结肠癌组织及15例正常结肠癌组织中Survivin、Bcl-2蛋白的表达情况,结合临床病理特征对其进行分析。结果 Survivin、Bcl-2在结肠癌组织中的表达率显著高于癌旁组织和正常结肠组织中的表达率（P〈0.05）;有淋巴转移的癌组织中Survivin、Bcl-2表达率显著高于无淋巴转移的癌组织中的表达率（P〈0.05）;Survivin、Bcl-2的表达呈高度一致性（P〈0.05）。结论 Sur-vivin、Bcl-2与结肠癌的生物学行为密切相关。     

乙肝相关性肝癌组织中细胞凋亡蛋白抑制因子 2蛋白的表达变化及其意义

目的 探讨乙肝相关性肝癌组织中细胞凋亡蛋白抑制因子2(inhibitor of apoptosis protein 2,IAP2)蛋白的表达变化及其意义.方法 选取2015年1月至2017年6月河南省传染病医院乙肝相关性肝癌术后组织标本80例(A组)、非乙肝相关性肝癌术后组织标本40例(B组)、乙肝相关性肝癌癌旁组织(C组)40例,采用免疫组织化学、蛋白质印迹法(Western blotting)检测三组标本中IAP2蛋白表达,分析乙肝相关性肝癌组织中IAP2蛋白表达与其病理特征的关系.结果 A组的IAP2蛋白阳性表达率为76.25％,高于B组的35.00％和C组的30.00％,差异有统计学意义(P<0.05);A组的IAP2蛋白积分光密度累积值高于B组和C组,差异有统计学意义(P<0.05);IAP2蛋白阳性表达与乙肝相关性肝癌病人的临床分期、包膜侵犯、门脉侵袭、发生淋巴结转移显著相关(P<0.05).结论 IAP2蛋白在乙肝相关性肝癌组织中表达显著提高,并且与病人的临床分期、包膜侵犯、门脉侵袭、发生淋巴结转移有相关关系.     

肺癌组织中凋亡相关基因bcl-2、fasmRNA表达研究

为探讨 bcl-2、fas凋亡相关基因在肺癌组织中表达及与肿瘤临床病理学的关系 ,采用逆转录聚合酶链式反应检测 43例肺癌中 bcl-2及 fas m RNA的表达。结果显示 ,肺癌组织中 bcl-2 m RNA的阳性率为 48.8% ,癌旁组织中 bcl-2 m RNA的阳性表达率为85 .7% ,显著性高于正常组织和癌组织 (P<0 .0 5 ) ;在鳞癌和腺癌中 ,bcl-2 m RNA的阳性表达与肺癌的分化程度呈正相关 ,与肺癌临床分期呈负相关。fas m RNA在鳞癌、腺癌、小细胞癌及大细胞癌中的阳性率分别为 93.3%、88.9%、6 2 .5 %和 0 % ,肺癌组织中 fas m RNA的阳性率极为显著高于正常肺组织及癌旁组织 (P<0 .0 1) ;鳞癌和腺癌中 ,fas m RNA的阳性率显著性高于小细胞癌 (P<0 .0 5 ) ,且与分化程度呈负相关。fas m RNA阳性率有随临床分期增加而上升的趋势 ,但无显著性差异 (P>0 .0 5 )。     

小檗碱对结肠癌的体外作用研究

目的:研究小檗碱对结肠癌lovo细胞的抑制作用。方法:培养人结肠癌lovo细胞,给予不同浓度小檗碱、美洛昔康(10-6、10-5、10-4、10-3mol·L-1),作用细胞6、12、24h后,通过MTT实验观察lovo细胞的增殖情况;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞环氧化酶-2(COX-2)的表达水平;采用蛋白质免疫印迹(Westernblot)法检测细胞COX-2蛋白的表达水平。结果:小檗碱在浓度>10-5mol·L-1,美洛昔康在浓度>10-4mol·L-1时可明显抑制lovo细胞增殖,诱导其凋亡,且呈浓度和时间依赖性(P<0.01或P<0.05)。小檗碱能浓度依赖性地降低lovo细胞中COX-2mNRA表达,对COX-2蛋白表达也呈浓度依赖性抑制。结论:小檗碱能抑制人结肠癌lovo细胞增殖,诱导其凋亡,作用途径与抑制COX-2表达有关。     

KLF4蛋白在结肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨转录因子KLF4对结肠癌生物学行为影响的分子机制。方法收集58例手术切除的结肠癌组织标本,同时取58例相应癌旁组织作为对照。运用免疫组织化学检测结肠癌组织、癌旁组织中KLF4蛋白的表达情况。结果 58例结肠癌组织中KLF4的阳性表达率为20.7%,癌旁阳性率为75.9%。KLF4蛋白表达与患者性别、年龄、大体类型之间无显著相关(P>0.05),与结肠癌有无淋巴转移及临床分期之间呈显著相关(P<0.05)。随着不同临床分期的增加,KLF4表达逐渐下调,且有淋巴结转移的KLF4表达明显低于无淋巴结转移组。结论 KLF4与结肠癌的发生、临床进展、转移密切相关,其可能成为结肠癌治疗、预后判断的潜在生物学指标。     

宫颈鳞癌患者Th1/Th2平衡状态的研究

目的 观察宫颈鳞癌患者T细胞亚群的漂移状态.方法 采用ELISA法,对65例宫颈鳞癌患者和40例正常人群的血清中的IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10进行测定.结果 宫颈鳞癌患者血清中IL-2、IFN-γ水平较正常对照组明显降低(P＜0.01),宫颈鳞癌患者血清中IL-4、IL-10高于对照组,统计处理有显著性差异(P＜0.05).结论 宫颈鳞癌患者存在典型的Th2漂移现象,机体免疫抑制,导致肿瘤发生,同时为宫颈鳞癌的生物治疗提供靶点.     

米非司酮诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及对OMI/HTRA2蛋白的影响

目的观察米非司酮、Omi/HtrA2对人宫颈癌Hela细胞凋亡的作用,探讨在宫颈癌HeLa细胞中米非司酮对Omi/HtrA2的影响。方法①对Omi/HtrA2重组质粒DNA的提取;②通过细胞转染,利用共聚焦显微镜观察Omi/HtrA2在细胞内的表达和定位;③应用流式细胞仪方法研究米非司酮、Omi/HtrA2对宫颈癌Hela细胞凋亡的作用。结果①融合蛋白EGFP-Omi/HtrA2、DsRed2-Omi/HtrA2在HeLa细胞中的定位为弥漫分布在细胞核和细胞浆;②米非司酮（40umol.L-1）促进Hela细胞凋亡,凋亡率为（46.16%）,转染pDsRed2-Omi/HtrA2凋亡率为32.69%,米非司酮＋转染质粒pDsRed2-Omi/HtrA2的凋亡率为78.85%。结论米非司酮能够促进HeLa细胞凋亡,DsRed2-Omi/HtrA2融合蛋白能够促进HeLa细胞凋亡,米非司酮能增加Omi/HtrA2促凋亡作用,Omi/HtrA2与米非司酮在HeLa细胞凋亡中存在协同作用。Omi/HtrA2可能是治疗宫颈癌的一个新靶点,米非司酮可能成为治疗宫颈癌的新方法。     

结肠癌致肠梗阻外科治疗体会

目的 探讨结肠癌致肠梗阻的外科处理方法.方法 分析我院1998-2006年间66例结肠癌致肠梗阻的外科治疗资料.结果 本组死亡4例,其中死于中毒性体克1例,术后死于多脏器功能衰竭2例,1例左半结肠切除术后吻合口瘘合并糖尿病、肺部感染抢救无效死于呼吸衰竭.其余62例痊愈出院.结论 重视围手术期的处理和选择合适手术方式是减少并发症、提高疗效的关键.     

复方苦参注射液联合化疗治疗晚期结肠癌临床观察

目的：评价复方苦参注射液联合化疗治疗晚期结肠癌的临床疗效、生活质量及其不良作用。方法：对56例晚期大肠癌患者分为治疗组和对照组,每组28例。治疗组静脉滴注复方苦参注射液15mL,d1～14,加用化疗,即用OXA130mg·（m2）-1静脉滴注2h,d1,CF300mg·（m2）-1静脉滴注2h,d1,5-FU400mg·（m2）-1静脉滴,d1,5-FU2400mg·（m2）-1静脉滴注46h,3周为1个周期;对照组单用化疗,3周为1个周期。均连用2周期后评定疗效。结果：治疗组部分缓解17例,有效率为60.7%,对照组部分缓解12例,有效率为42.8%,差异有显著性（P〈0.05）;治疗组生活质量Karnofsky评分高于对照组,差异有显著性（P〈0.05）;治疗组血液不良反应、胃肠道反应明显低于对照组,差异有显著性。结论：复方苦参注射液联合化疗治疗晚期结肠癌,可提高疗效,改善患者生活质量,降低化疗不良反应。