深圳市2007年H3N2亚型流感病毒基因特性分析

目的了解深圳市2007年H3N2亚型流感病毒流行情况及血凝素基因特性。方法用狗肾传代细胞（MDCK）和鸡胚进行流感病毒分离。收获病毒后提取病毒RNA，进行逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR），扩增产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定后送大连宝生物公司纯化及测序。测序结果用Simmonic软件和Mega3．1软件进行序列分析。结果H3N2亚型流感毒株为深圳市2007年流感流行的优势株，与2006年的深圳株比较未发生明显变异，但与2007年的疫苗株相比，有多个位点的氨基酸发生了替换，造成了其间的抗原性发生了一定的变化。结论深圳市2007年H3N2亚型流行株，并未形成一个新的变种。推测是由于与疫苗株之间的抗原性的变异导致了2007年深圳市H3N2亚型流感的流行。     

2002年广东省H3N2亚型流感病毒流行的分子基础

目的 了解广东省2002年H3N2亚型流感病毒流行及抗原性变异情况。方法 用狗肾传代细胞(MDCK)和鸡胚进行流感病毒分离，用交叉血凝抑制实验对毒株进行抗原性分析；提取病毒RNA，用一步法RT-PCR扩增血凝素基因(H3A)，产物纯化后，并将其克隆到pMD18—T Vector，进行序列测定和分析。结果 2002年1-10月共获得流感病毒246株，其中H3N2亚型210株，占85．4％，H1N1亚型2株，占0．8％，B型34株，占13．8％；2002年流感流行的高峰是6月；抗原性分析显示，2002年广东省H3N2亚型流感病毒A／粤/236/2002和2001年流行株A／粤／448／2001以及目前国内代表株A／闽／151／2001的抗原比分别是5．6和4．0；其HAl区氨基酸序列和国际代表株A／悉尼／5／97同源性为94．2％，有19个氨基酸差异，其中发生在抗原决定族A、B、E上的有6个，受体结合部有3个。结论 2002年广东省流感病毒以H3N2亚型为主，其流行的分子基础是基因变异导致抗原性发生漂移。     

江门市居民甲型H1N1流感病毒血清抗体的调查分析

目的了解江门市各年龄段人群甲型H1N1流感病毒抗体水平,为完善甲型H1N1流感疫情防控措施提供科学依据。方法采取多阶段分层随机抽样方法抽取研究对象480人,进行血清标本采集和问卷调查,应用红细胞血凝抑制方法检测甲型H1N1流感病毒抗体。结果人群甲型H1N1流感病毒抗体阳性率为19.38%,0～、6～、16～、25～和60岁以上组的甲型H1N1流感病毒抗体阳性率分别为22.09%、27.36%、24.47%、14.58%和8.16%。6～24岁的甲型H1N1流感病毒抗体阳性率较高,为51.83%,无症状抗体阳性率达12.61%。抗体阳性率在不同年龄、性别和职业上差异均有统计学意义(P<0.05)。结论江门市甲型H1N1流感病毒感染状况各年龄段不同,青少年抗体阳性率较高,老年人抗体阳性率相对较低,男性抗体阳性率高于女性。     

2010年广州市越秀区居民新甲型H1N1流感病毒血清抗体调查

目的了解广州市越秀区居民各年龄段人群新甲型H1N1流感病毒抗体水平,为完善新甲型H1N1流感疫情防控措施提供科学依据。方法采取多阶段分层随机抽样方法抽取研究对象309人,进行血清标本采集和问卷调查,应用红细胞血凝抑制(HI)方法检测新甲型H1N1流感病毒抗体。结果人群新甲型H1N1流感病毒抗体阳性率为20.06%,0～岁组、6～岁组、10～岁组、16～岁组、25～岁组和60岁以上组的新甲型H1N1流感病毒抗体阳性率分别为18.84%、33.33%、46.67%、30.00%、6.67%和5.00%。6～24岁组的新甲型H1N1流感病毒抗体阳性率较高,为35.00%,无症状抗体阳性率达10.43%。抗体阳性率在性别上差异无统计学意义(P0.05)。结论广州市越秀区居民新甲型H1N1流感病毒感染状况各年龄段不同,青少年抗体阳性率较高,老年人抗体阳性率相对较低。     

南宁市2007～2009年H3N2亚型流感病毒NA基因变异分析

目的 对2007～2009年度南宁市流行性感冒病毒NA序列分析,阐明NA基因变异和进化特征.方法 提取2007 ～ 2009年30株(每年10株)H3N2亚型病毒RNA,采用RT-PCR扩增病毒NA基因后进行序列测定,利用VectorNTI 9.0对测序结果分析处理,并与WHO推荐疫苗株进行比对,用Mage 4.1构建系统进化树.结果 南宁市2007 ～ 2009年H3N2亚型流感病毒被分为3个分枝,其中疫苗株A/Wisconsin/67/2005独立形成一个分支(类群Ⅰ),A/Brisbane/59/2007与2007年毒株(除339外)形成类群Ⅱ,2008和2009年毒株聚集成类群Ⅲ.NA基因在质尾区域、极性跨膜区、柄部区域有个别毒株个别位点发生了替换.抗原区域328～ 336替换频率较高,2008年毒株抗原位点更活跃.A/nanning/242/2007在酶活性位点发生了D151E替换,可能导致NA对扎纳米韦和奥斯他韦的轻微耐药性;A/nanning/242/2007、A/nanning/561/2008分别在非活性位点N234D,在G286D的替换则可能影响NA介导的病毒粒子的释放从而影响NA蛋白的活性.结论 南宁市2007～2009年毒株NA均发生了较大变异,当年疫苗株均滞后南宁流行株.     

海南省2019—2020年H3N2亚型流感病毒血凝素基因特性

目的 了解海南省2019—2020年H3N2亚型流感病毒血凝素基因遗传进化规律与氨基酸变异情况。方法 选取2019—2020监测年度海南省5家流感监测网络实验室分离的16株H3N2亚型流感毒株进行一代全基因组测序,利用MEGA 10.1.8构建血凝素基因系统进化树,并分析氨基酸位点替换情况,应用DNA Star 7.0.1软件进行血凝素基因同源性分析。结果 系统进化树显示,相比于疫苗株A/Kansas/14/2017 (2019—2020）,16株H3N2亚型流感病毒分离株血凝素基因在进化树上与疫苗株A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016（2018—2019）亲缘关系更近,属于3C.2a1分支,核苷酸与氨基酸同源性范围分别为98.5%~98.9%、97.9%~98.4%。16株分离株在抗原性位点发生8处氨基酸位点替换,涉及5个抗原决定簇;15株分离株在糖基化位点发生2处缺失。结论 2019—2020年监测年度海南省H3N2亚型流感病毒与2018—2019年疫苗株亲缘关系较近,血凝素蛋白抗原性位点在5个决定簇均有变异,易造成较大流行,WHO 推荐的2019—2020年疫苗株保护效果可能不理想。应密切关注H3N2亚型流感病毒的流行与基因变异情况,为流感病毒疫苗株推荐及防控提供科学依据。     

海南省2019—2020年H3N2亚型流感病毒神经氨酸酶基因特性

目的 分析海南省2019—2020年H3N2亚型流感病毒神经氨酸酶基因遗传进化特征与关键氨基酸位点变异情况。 方法 从海南省流感监测网络实验室分离的流感毒株中按照不同时间选取16株H3N2亚型分离株进行一代全基因序列测定,应用DNA Star 7.0.1软件进行神经氨酸酶基因同源性分析,应用MEGA 10.8.1软件构建神经氨酸酶基因系统进化树,并分析耐药性位点与抗原决定位点氨基酸替换情况。 结果 神经氨酸酶基因同源性分析与系统进化分析显示,16株分离株与疫苗株A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016（2018—2019）核苷酸与氨基酸相似性分别为98.5%~99.1%、98.3%~98.7%,进化上属于3c.2a1分支。14株分离株发生神经氨酸酶抗原性位点N329S变异,11株分离株发生E344K变异,未发生耐药性位点氨基酸替换。 结论 2019—2020年海南省流行的H3N2亚型流感病毒属于3c.2a1分支,与2018—2019年疫苗株亲缘关系较近;大部分分离株在神经氨酸酶抗原决定位点发生了一定的改变,但变异程度不大,未发生耐药位点变异。今后应持续加强流感病毒病原学监测,密切关注H3N2亚型流感病毒耐药性基因变异,及时跟踪关键氨基酸位点替换情况,为科学防控提供理论依据。     

2017—2020年深圳市盐田区H3N2亚型流感病毒血凝素基因特征分析

目的 分析2017—2020年深圳市盐田区H3N2亚型流感病毒血凝素(hemagglutinin, HA)基因变异情况。方法 对盐田区2017—2020年分离的34株流感分离株HA基因进行扩增及序列测定,从GISAID流感数据库下载推荐疫苗株序列信息并利用MEGA X和NetNGlyc 1.0 Server在线分析软件对HA基因进行分析。结果 2017—2020年盐田区H3N2分离株位于3c.2a分支,2017年上半年分离株位于3C.2a2分支,7月份之后位于3C.2a1分支;2018—2020年位于3C.2a1b分支。2019—2020年流感分离株与当年疫苗株的核苷酸一致性与氨基酸同源性均低于其他年份。与同年疫苗株相比,2017—2018年分离株A区存在T135N(2/13)和R142K/G(13/13)变异;2018—2019年分离株A区存在T135K(10/10)和S137F(10/10)变异、B区存在F193S(8/10)和S198P(1/10)变异;2019—2020年分离株A区存在T135K(11/11)和S137F(11/11)变异、B区存在N158S(4/11)、N17...     

2008年深圳市甲3亚型流感病毒基因特异性分析

目的了解2008年深圳市H3N2亚型流感流行及病毒变异情况。方法用狗肾传代细胞(MDCK)和鸡胚进行流感病毒分离,收获病毒后提取病毒RNA,进行逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),扩增产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定后送大连宝生物公司纯化及测序,测序结果用SIMMONIC软件和MEGA3.1软件进行序列分析。结果深圳2008年流行的H3N2亚型流感病毒血凝素与深圳2007年流行的差异不大,而与同期疫苗毒株A/Wisconsin/67/2005比较有一定的差异,B抗原决定簇上有1个位点发生替换,158位R替换了K;1个糖基化位点增加,在122位氨基酸由D变成了N;与世界卫生组织推荐的2009年流感疫苗毒株比较差异不大。结论深圳市2008年流行的H3N2亚型流感病毒并未形成新的变种,其漂移趋势与世界H3N2亚型流感漂移趋势一致。     

2010年青海省流感病毒病原学监测及H3亚型HA1基因序列分析

目的监测青海省2010年季节性流感病毒型与亚型分布,并了解2010年部分A/H3N2分离株血凝素(HA)基因变异情况。方法采集全省各监测哨点医院鼻咽双拭子标本,接种MDCK细胞,采用标准抗血清鉴定阳性分离株型与亚型,并对2010年部分H3亚型流感病毒进行HA基因测序,分析HA基因变异情况。结果2010年全省哨点医院送检标本中共分离63株流感病毒,其中42株为A/H3N2,B型15株,AH1N1流感病毒6株,型与亚型有明显分布强弱特征。选取10株H3N2亚型分离株进行HA序列分析,发现与同期南京分离株接近,与WHO2010年度疫苗推荐株相距甚远,不在同一分支。结论 2010年青海省流行的H3N2亚型流感病毒的抗原性和基因特性发生了改变。     

山西省健康人群与养殖人群甲型流感病毒H1、H3、H5、H9、抗体血清学调查分析

目的了解山西省健康人群与养殖职业人群对甲3型、甲1型流感病毒的流行趋势和禽流感病毒H9、H5的抗体的存在情况。方法应用常规血凝抑制试验微量半加敏法对山西省不同地区人群进行甲型流感抗体血清学监测。结果健康人群和职业人群中的A／SX／I／99（｜13N2）毒株的抗体阳性率分别为92％和94％；A／SX／7／02（H1N1）毒株的抗体阳性率分别为70％和72％；H9毒株的抗体在健康人群和职业人群中的阳性率分别为2．5％和3．6％；H5毒株的抗体在健康人群和职业人群中的阳性率仅为0．35％和0．5％。结论A／SX／1／99（H3N2）类毒株不可能在山西省引起流行；A／SX／7／02（H1N1）类毒株今后在人群中可能存在散在性发生；本省部分人群曾受到禽流感H9病毒的感染，不能排除由本省禽类中的H9病毒感染及人的可能；受禽流感H5毒株感染只是个别现象。禽流感病毒在本省禽类中的感染状况及对人的影响需进一步研究。。     

2009年成都市流感活动情况及H3N2亚型流感病毒HA1基因特性分析

目的 分析2009年成都市流感流行情况,探讨甲3流感病毒(H3N2)亚型分离毒株的流行及HA1基因变异和进化.方法 MDCK细胞对咽拭子样品进行病毒分离鉴定,提取病毒核酸,用RT-PCR法扩增HA1基因,对H3N2分离株核酸及氨基酸序列进行亲缘关系分析.结果 甲型流感H1N1、H3N2、甲1、B型流感病毒分离率分别为2...     

深圳南山区2009年人群流感病毒抗体水平分析

目的了解南山区2009年一般人群血清流感病毒甲型H1N1、H3N2、乙型Victoria系（BV）、Yamagata系（By）和新甲型H1N1流感抗体水平。方法采用微量血清红细胞凝集抑制试验检测人群血清抗体。结果 2009年一般人群流感病毒各亚型抗体阳性率分别为H1N1 75.3%、H3N2 82.7%、Bv 78.0%、By 81.3%和新甲型H1N151.3%;平均抗体滴度（GMT）分别为H1N1 34.8、H3N2 34.7、Bv 36.3、By 37.7和新甲型H1N116.6。结论 H3N2、Bv、By亚型流感抗体阳性率在0～组与其它年龄组之间有显著性差异（P〈0.05）;新甲型H1N1流感和其它4个亚型流感抗体阳性率在15岁以上年龄组有显著性差异（P〈0.05）;人群Bv、By流感亚型GMT均达到抗体保护水平,而新甲型H1N1流感GMT明显偏低,与各亚型比较有显著性差异（P〈0.05）。     

鸡流感病毒H9N2亚型毒株RNA4节段基因序列测定及分析

目的 弄清新分离到的鸡H9N2亚型流感病毒毒株RNA4节段核苷酸全序列及它与禽代表株威斯康星火鸡流感病毒(tywis66ha)之间的内在关系。方法 病毒RNA经逆转录合成cDNA,经聚合酶链反应(PCR)扩增,产物纯化,采用双脱氧链末端终止法进行核苷酸序列测定。结果 香港鸡流感病毒(ckHK997)禽代表株威斯康星火鸡流感病毒(tywis66ha)的H9N2亚型RNA4节段长度分别是1951和1683个核苷酸,编码血凝素(HA)蛋白。与禽H9N2代表株的同源性在89.0％。结论 新分离到的鸡H9N2亚型毒株与代表株的同源性差异较大。     

双重荧光定量RT-PCR快速检测流感病毒H1、H3亚型的研究

目的 利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测流感病毒H1、H3亚型的方法.方法 根据H1、H3亚型流感病毒HA基因的相对保守序列,设计两对引物及其相应的Taqman探针,利用一步法RT-PCR试剂盒建立优化反应体系后,将荧光定量RT-PCR的产物采用10倍稀释法,即107～100 copies/μl,再次用荧光定量PCR方法检验建立体系的灵敏度和重复性,并建立相对定量标准曲线;利用多种流感病毒和具有相似临床症状的呼吸道病毒检验建立体系的特异性.结果 H1和H3亚型流感病毒的检测灵敏度为102 copies/μl,扩增效率分别为101.35％和113.28％,标准曲线相关系数大于99％,重复性良好,特异度实验未发现有非特异性扩增.结论 本研究建立的双重荧光定量RT-PCR技术可以快速、准确地检测H1、H3亚型流感病毒.     

1999-2007年佛山市流感病毒活动情况及甲3亚型病毒HA1基因分析

目的 总结1999-2007年佛山市流感病毒流行情况,分析甲3亚型(H3N2)毒株流行与其HA1基因进化的关系.方法 用MDCK细胞分离流感病毒,培养后血凝阳性者进行型别鉴定.随机抽取每年2～3株甲3亚型毒株的细胞培养物提取RNA后进行HA1基因的逆转录.对其核苷酸和氨基酸序列及亲缘关系进行分析.结果 甲型和乙型流感病毒在佛山市人群中同时流行.甲型流感毒株是人群感染流感的主要型别.HA1区氨基酸序列与历年的流感疫苗推荐株相比,点突变率为0.3%～6.08%.发生替换的重要位点包括了抗原决定簇的17个位点、抗体结合部位的10个位点和1个糖基化位点.结论 佛山市的甲1和甲3亚型流感毒株活动呈此起彼伏的优势株转换现象.甲3亚型新旧毒株交替迅速,大致按照毒株分离的年代聚类成进化树的不同小侧枝,表明新的流行株出现后可能迅速突破地域局限.提示地区实验室及时监测和研究流感毒株的发生和发展是流感监测网络建设的基础.     

广西健康青年H9、H6亚型禽流感病毒血清抗体调查

目的调查广西医科大学2007年新生中H9、H6亚型流感病毒的抗体水平，以了解广西健康青年是否已受到H9、H6亚型禽流感病毒感染。方法广西医科大学2007级新生血清168份，通过HI实验进行抗体检测。结果以HI抗体滴度≥1：10为流感病毒抗体阳性，H9亚型抗体阳性率13．69％；有两份H6亚型抗体阳性。结论广西健康青年人群已受到禽流感H9亚型病毒株的感染，H6亚型也可能感染了人群。     

深圳市2002和2003年人群血清流感抗体检测

目的 了解深圳市部分人群的流感病毒抗体水平，为预防和控制疫情提供依据。方法 2002年10月-2003年10月共两次采集人群血清308份，应用近几年国际、国内及广东省流感病毒代表株，以微量半致敏血凝抑制方法进行抗体检测。结果 人群对各型及亚型毒株的抗体阳性率均有上升，其中对A／New Caledonia／20／99（H1N1）的抗体阳性率由40．6％上升至62．1％；对B／HongKong／2001的抗体阳性率由23．8％上升至76.5％；对B／Victoria／504／2000的抗体阳性率由21.3％上升至79．7％；对A／Panama／2007／99（H3N2）的抗体阳性率分别由77．4％升至80．4％。结论 应加强流感病毒抗原变异株和人群流感病毒抗体水平的监测。