用原位核酸杂交法探讨慢型克山病与柯萨奇B组病毒的关系

为探讨山东慢型克山病与柯萨奇Ｂ组病毒的关系，用缺口平移法制备生物素标记ＣｏｘＢ３病毒的ｃＤＮＡ探针与慢型克山病１４例尸检心肌组织及１０例脑外伤，ＣＯ中毒等意外死亡的正常成人心肌组织及１０例非病区７￣８个月引产胎儿的心肌组织切片进行原位杂交，１４例慢克中有９例检测到柯萨奇Ｂ组病毒的ＫＮＡ，阳性率达６４％，而对照组均为阴性。提示柯萨奇Ｂ组病毒感染可能是山东慢型克山病发病因素之一。     

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与云南慢型克山病的关系

为了探讨柯萨奇Ｂ组病毒感染与云南慢型克山病的关系，本文用缺口平移法制备生物素标记的柯萨奇Ｂ３病毒的ｃＤＮＡ探针与云南慢型克山病尸检心肌组织１５例及脑外伤等非正常死亡的尸检心肌组织１０例石腊切片及引产胎儿心肌组织１０例的石腊切片进行原位杂交。结果云南慢克１６例中有１１例出现阳性杂交信号，即有柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＶＢ）ＲＮＡ存在，阳性率达７３．３％。脑外伤等非正常死亡的心肌及胎心均为阴性。提示云南慢型克     

原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与云南亚急型克山病的关系

用光敏生物素标记的柯萨奇 B_3病毒 cDNA 探针,与云南病区20例经临床和病理检查确诊为亚急型克山病的心肌组织切片进行原位核酸杂交,以检测柯萨奇 B 组病毒 RNA。结果有18例出现阳性杂交信号,阳性率达90%。说明云南亚急型克山病心肌组织中有柯萨奇 B 组病毒 RNA 的存在。提示云南亚急型克山病的发生与柯萨奇 B 组病毒的持续感染密切相关。     

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与黑龙江慢型克山病的关系

克山病是原因未明的地方性心肌病，慢型克山病有关病毒病因的研究未见有关报道，作者用生物素标记的柯萨奇Ｂ３病毒的ｃＤＮＡ探针与黑龙江病区慢型克山病尸检心肌组织及非正常死亡成人心肌组织和非病区７￣８个月引产胎儿心肌组织进行了原位杂交，以检测柯萨奇Ｂ组病毒ＲＮＡ。结果１３例慢型克山病中有９例呈现阳性杂交信号，阳性率达６９．２％，两对照组均为阴性。表明黑龙江慢型克山病心肌组织中有柯萨奇Ｂ组病毒ＲＮＡ的存在，     

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与克山病的关系──（黑龙江省急型克山病）

为探讨柯萨奇Ｂ组病毒感染与黑龙江省急型克山病的关系。本文用缺口平移法制备生物标记的柯萨奇Ｂ３病毒的ｃＤＮＡ探针与１３例急型克山病尸检心肌组织及脑外伤、ＣＯ中毒等意外死亡的正常成人心肌组织１０例，非病区７～８个月引产胎儿心肌组织１０例的石腊切片进行原位杂交。结果１３例急型克山病中有８例出现阳性杂交信号，即有柯萨奇Ｂ组病毒的ＲＮＡ存在，阳性率达６１．５％。对照组均为阴性，提示黑龙江省急型克山病有柯萨奇Ｂ组病毒感染，可能是急型克山病发病因素之一。     

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇病毒与克山病的关系

为进一步探讨柯萨奇病毒与克山病的关系，采用柯萨奇Ｂ３病毒（ＣＶＢ３）制备的ｃＤＮＡ探针与黑龙江、山东、云南三省病区克山病尸检心肌组织及胎儿克山病心肌组织的石蜡切片进行了原位核酸杂交，并用脑外伤、ＣＯ中毒等意外死亡健康成人及冠心病、风心病尸检心肌组织和病区、非病区７～８个月引产胎儿心肌组织的石蜡包埋切片作为对照。结果急型克山病８／１３、慢型克山病３４／５０、亚急型克山病２２／２９呈现阳性杂交信号，提示有柯萨奇病毒ＲＮＡ的存在，冠心病２／１５、风心病１／１５、显著低于克山病，而健康成人对照组均为阴性，胎儿克山病一例呈阳性反应，病区引产胎儿心肌组织１０例中有２例也检出柯萨奇病毒ＲＮＡ，而非病区胎心则为阴性。结果提示在一些克山病的发生和发展过程与柯萨奇Ｂ组病毒的感染高度相关。     

山东省亚急型克山病患儿与柯萨奇B组病毒的关系

为探讨山东省亚急型克山病患儿与柯萨奇Ｂ组病毒的关系，用缺口平移法制备生物素标记的ＣＯＸＢ３病毒的ｃＤＮＡ探针，与亚包型克山病病例尸检心肌组织９例及１５例脑外务，ＣＯ中毒等意外死亡的正常民人心肌组织和１０例非病区７～８个月胎儿心组织切片进行原位杂交，结果９例山东亚急型克山病的５例检测到ＣＯＸＢ组病毒的ＲＮＡ，阳性率为５５．５％（５／９），而对照组均为阴性，结果提示ＣＯＸＢ组病毒感染是山东省亚急性型克     

用原位核酸杂交技术探讨肠道病毒与急型克山病的关系

目的 探讨肠道病毒(柯萨奇病毒)与吉林省急型克山病的关系。方法 用柯萨奇病毒B3、B4、B5、A9共同序列作寡核苷酸探针对吉林省急型克山病尸捡心肌组织12例及病区与非病区尸捡正常心肌组织各7例进行原位核酸杂交。结果 吉林省急型克山病12例中有11例出现阳性杂交信号，即有肠道病毒RNA存在，阳性率为91．66％，对照组均为阴性。结论 吉林省急型克山病病人心肌组织中有肠道病毒感染，提示急型克山病的发病可能与肠道病毒感染有关。     

柯萨奇病毒RNA阳性信号在克山病心肌中形态特征及其与发病的关系

目的：探讨柯萨奇病毒RNA阳性信号在克山病心肌细胞中的特征及病毒感染与发病的关系。方法：以65例不同型别克山病尸检心肌组织蜡块为研究对象，用寡核苷酸探针与组织切片进行原位核酸杂交，以检测柯萨奇B组和A组病毒RNA。结果：急型、亚急型及慢我山病的阳性杂交信号检出率分别为83．0％、87．9％及80．0％。阳性信号在急型、亚急型克山病心肌中颗粒粗大，境界较清晰，但分布比较局限；在慢型克山病中阳性信号多散在分布于各部位心肌细胞内，但颗粒较细小，境界不清。结论：心肌组织蜡块长期保存不影响杂交结果；吉林省各型克山病均与柯萨奇病毒感染密切相关，提示病毒感染是克山病复合病因的重要组成部分。     

克山病尸检心肌标本柯萨奇B组病毒RNA片段的序列分析

目的通过原位核酸杂交技术和RT-PCR技术探讨柯萨奇B组病毒感染与吉林亚急型克山病的关系.方法以柯萨奇B组病毒基因组的一段共同序列做寡核苷酸探针,于5′端行生物素标记,检测亚急型克山病患者尸检心肌组织标本中柯萨奇病毒的感染率;选取阳性标本做RT-PCR,并对PCR产物进行核苷酸序列分析,比较其与柯萨奇B组病毒各血清型之间的差异.结果 9例亚急型克山病患者尸检心肌组织标本中有7例原位核酸杂交结果阳性,阳性率为77.78%;所选3例原位核酸杂交结果阳性标本RT-PCR均有长541 bp的DNA条带出现,测序结果表明该片段与柯萨奇病毒B3同区域序列一致,与B1、B4、B5的同源性较大.结论亚急型克山病患者体内有柯萨奇B组病毒RNA存在,柯萨奇病毒可能在克山病的发生发展中扮演重要的角色.     

柯萨奇B4病毒感染与克山病及其病区病毒性心肌炎

目的 探讨柯萨奇B4病毒与克山病及其病区病毒性心肌炎的关系。方法 采用寡核苷酸探针的原位核酸杂交方法,结合病理学观察,对比研究克山病与病毒性心肌炎的异同。结果 克山病与病毒性心肌炎各自具有特征性的病理学改变;发病区88．89％的病毒性心肌炎出现阳性杂交信号,而且几乎每例的所有心肌细胞均见阳性杂交信号;95．24％的亚急型克山病出现阳性杂交信号,且半数以上的标本几乎所有的心肌细胞内出现阳性杂交信号;阳性信号在病毒性心肌炎和亚急型克山病的心肌细胞内的分布及阳性信号颗粒的形态并无明显区别。结论 柯萨奇B4病毒与克山病及其病区病毒性心肌炎密切相关,其不同的病变特征可能是由于组成病因网的诸因素发生变动所致。     

原位PCR法对围生期心肌病柯萨奇B组病毒的检测

目的 :探讨围生期心肌病的病因。方法 :应用原位 PCR法对 2例 1 4、1 5年前临床诊断为围生期心肌病患者的心肌活检的石蜡切片进行柯萨奇 B组病毒 ( CVB)的检测。结果 :2例患者的心肌活检组织中 CVB- RNA均显示阳性信号。结论 :CVB感染可能是围生期心肌病的病因之一。     

原位RT-PCR法检测柯萨奇B病毒RNA的实验研究

目的建立定位检测细胞或组织中柯萨奇Ｂ病毒ＲＮＡ的原位ＲＴ－ＰＣＲ方法（直接法）。方法对柯萨奇Ｂ病毒（１～６型）感染ＨｅＬａ细胞,经核酸酶（ＤＮａｓｅ和ＲＮａｓｅ）处理后的病毒感染ＨｅＬａ细胞以及非感染的ＨｅＬａ细胞进行原位ＲＴ－ＰＣＲ检测。结果经扩增后,病毒感染的ＨｅＬａ细胞呈蓝黑阳性信号;并且这种阳性信号经ＲＮａｓｅＡ作用而消失,却不受ＤＮａｓｅ作用的影响;而非感染的ＨｅＬａ细胞则不着色。结论原位ＲＴ－ＰＣＲ法可特异地检测柯萨奇Ｂ病毒感染ＨｅＬａ细胞中的病毒ＲＮＡ,是一种特异和敏感的定位检测方法,可应用于研究该病毒的持续性感染及其与克山病等相关疾病的关系     

潜慢型克山病患者柯萨奇B组病毒特异性IgM的检测

目的研究柯萨奇Ｂ组病毒（ＣｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓＢ,ＣＶＢ）感染与克山病发病的关系。方法采用间接酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）对陕西省黄陵县克山病病区潜、慢型克山病患者血清ＣＶＢ１－６ＩｇＭ和ＣＶＢ１－６ＩｇＧ进行检测。结果①潜在型、慢型克山病组血清ＣＶＢ１－６ＩｇＭ抗体阳性率明显高于非病区健康对照组（２８．５７％ｖｓ７．５％,Ｐ＜０．０５）,但明显低于心肌炎组（６０．００％,Ｐ＜０．０５）。②潜、慢型克山病组血清ＣＶＢ１－６ＩｇＧ抗体阳性率明显高于非病区健康对照组（３８．１０％ｖｓ７．５％,Ｐ＜０．０５）,但与心肌炎组比较无明显差异。结论病区潜、慢型克山病患者有ＣＶＢ感染存在     

柯萨奇B组病毒所致神经系统病变临床探讨

目的柯萨奇B组病毒（CoxsackieBvirusesCBV）所致神经系统病变目前报道较少，其实并非少见。主要因其感染后多系统损害症状复杂，很难使人们确诊为神经系统病变，如不早期确诊及时治疗，个别病人可导致失明或致残。方法所有可疑本病患者均经CBV抗体IgM、IgGI－Ⅳ型测定，采用酶联免疫吸附试验（ELISA），用（CBVI－Ⅳ）抗原分别检查患者血清中的抗体（包括IgM和IgG）IgMI：100·IgG1；800或1：1600视为阳性。结果9例病人IgM1：100、IgG1：1600阳性，5例IgM（－）、IgG1：1600阳性确诊为柯萨奇B组病毒感染。结论以上病人均给抗病毒和脑细胞活化剂治疗一个月，临床体征消失，头颅CT扫描转正常。临床实践证明病原学血清诊断是唯一先决条件，病毒特异性抗体检测已是公认的一种可靠快速可取的诊断方法。     

柯萨奇B_4病毒感染与克山病及其病区病毒性心肌炎

目的　探讨柯萨奇 B4病毒与克山病及其病区病毒性心肌炎的关系。方法　采用寡核苷酸探针的原位核酸杂交方法 ,结合病理学观察 ,对比研究克山病与病毒性心肌炎的异同。结果　克山病与病毒性心肌炎各自具有特征性的病理学改变 ;发病区 88.89%的病毒性心肌炎出现阳性杂交信号 ,而且几乎每例的所有心肌细胞均见阳性杂交信号 ;95 .2 4%的亚急型克山病出现阳性杂交信号 ,且半数以上的标本几乎所有的心肌细胞内出现阳性杂交信号 ;阳性信号在病毒性心肌炎和亚急型克山病的心肌细胞内的分布及阳性信号颗粒的形态并无明显区别。结论　柯萨奇 B4病毒与克山病及其病区病毒性心肌炎密切相关 ,其不同的病变特征可能是由于组成病因网的诸因素发生变动所致     

利用直接原位PCR法探讨柯萨奇B3病毒与心肌炎的病原学关系

目的探讨柯萨奇B3病毒(CVB3)感染与急性心肌炎的病原学关系。方法应用生物素标记的核苷酸直接掺入法，建立了直接法原位逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术，分别对感染的HeLa细胞、病毒性心肌炎鼠心肌样本及临床心肌炎的心肌活检标本中的CVB3进行检测。结果病毒感染的HeLa细胞可见阳性信号，细胞呈蓝紫色，而未感染的HeLa细胞无阳性信号，细胞不着色。在CVB3感染的病毒性心肌炎小鼠心肌组织中可检测到病毒RNA的存在。16例病理学及临床诊断为心肌炎的患者心肌组织中，7例检测到CVB3 RNA，而16例正常心肌标本中均为阴性。结论CVB3感染与心肌炎发病有密切关系。     

原位RT—PC法检测柯萨奇B病毒RNA的实验研究

目的 建立定位检测细胞或组织中柯萨奇Ｂ病毒ＲＮＡ的原位ＲＴ－ＰＣＲ方法（直接法）。方法 对柯萨奇Ｂ病毒（１－６型）感染ＨｅＬａ细胞,经核酸酶（ＤＮａｓｅ和ＲＮａｓｅ）处理后的病毒感染ＨｅＬａ细胞以及非感染的ＨｅＬａ细胞进行原位ＲＴ－ＰＣＲ检测。结果 经扩增后,病毒感染的ＨｅＬａ细胞呈蓝黑阳性信号;并且这种阳性信号经ＲＮａｓｅＡ作用而消失,却不受ＤＮａｓｅ作用的影响,而非感染的ＨｅＬａ细胞则不着色。     

柯萨奇B组病毒感染在Ⅰ型糖尿病中的艇

环境因素特别是柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＢＶ）感染在Ⅰ型糖尿病发生中起重要作用。Ⅰ型糖尿病发病年龄和季节变化相似于ＣＢＶ感染；Ⅰ型糖尿病患者血清ＣＢＶＩｇＭ及ＲＮＡ阳性率高于对照组，且妊娠期ＣＢＶ感染增加其子女发病危险性。已从Ⅰ型糖尿病病人的胰腺中分离至ＣＢ３Ｖ和ＣＢ４Ｖ，人源的ＣＢ４ＶＥ２株接种易感小鼠可引起糖尿病。ＣＢＶ感染体外培养的人胰腺β细胞可出现其功能改变和胰岛素分泌降低。胰岛β细胞破坏可能是由     

心肌梗死患者与柯萨奇B组病毒感染关系的研究

心肌梗死与柯萨奇Ｂ组病毒 (ＣｏｘＢＶ)感染的关系 ,已引起国内外关注〔1～3〕,为探讨ＣｏｘＢＶ感染在心肌梗死患者发病中的意义 ,我们对急性心肌梗死 (ＡＭＩ)患者和正常人进行了调查 ,现将结果报告如下。1　对象与方法1 .1 　 对象患者组 :本院心血管内科 1 999年 1 0月～ 2 0 0 1年 4月住院 ,临床诊断为ＡＭＩ患者 1 0 5例 ,男 79例 ,女 2 6例 ;年龄 2 5～ 93岁。入院 1～ 2ｄ内采集血清。对照组 :采集本院门诊健康体检的 40例正常人血清 ,年龄 2 5～ 90岁。1 .2 　 方法逆转录聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)方法检测急性期患者血清中肠道…