新生大鼠高氧肺损伤肺组织超微结构及VEGF蛋白表达变化

【目的】探讨高氧对新生大鼠肺组织超微结构的影响及其血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor VEGF)蛋白表达的变化。【方法】新生SD大鼠48只随机分为高氧试验组和空气对照组,高氧试验组吸入95%以上高氧建立高氧肺损伤模型。采用透射电镜和免疫组化观察新生大鼠3、71、4 d肺组织超微结构和VEGF蛋白表达变化。【结果】吸入高氧3 d新生大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AEC-II)出现板层小体结构松散,部分血管内皮细胞肿胀,随着高氧吸入时间的延长,14 d时AEC-II、血管内皮细胞产生了致死性损害作用,出现了类似早产儿支气管肺发育不良的肺组织形态学特征。VEGF蛋白在高氧吸入3 d时出现降低,7 d明显降低,到14 d时进一步降低。【结论】持续高氧吸入可造成新生大鼠肺肺泡Ⅱ型上皮细胞和血管内皮细胞损害。高氧可抑制VEGF蛋白在新生大鼠肺内的表达,VEGF可能在新生鼠肺发育和高氧肺损伤发病机理中起重要作用。     

异丙酚注射液和微量肝素对新生大鼠高氧肺损伤的影响

目的:探讨异丙酚注射液和微量肝素对新生大鼠高氧肺损伤的影响,为高氧肺损伤的临床治疗提供理论依据。方法:选取Wistar乳鼠120只,随机分为空气对照组、高氧模型组、异丙酚治疗组和微量肝素治疗组,每组各30只。实验开始第3、7及14天各处死10只动物,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),采用硫代巴比妥酸比色法测定丙二醛(MDA)水平,取肺组织测定肺湿/干质量比(W/D),观察肺水肿情况,采用HE染色观察肺组织的病理变化,采用免疫组化染色观察肺组织中TNF-α的表达和Clara细胞的数量。结果:异丙酚治疗组BALF中MDA水平、肺W/D、肺组织中TNF-α的表达强度明显低于高氧模型组,Clara细胞数明显高于高氧模型组,差异均有统计学意义(P均<0.01);但各药物之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:异丙酚注射液及微量肝素可以减轻新生大鼠高氧肺损伤程度,对高氧环境下的肺组织具有一定的保护作用。     

伊诺舒注射液对新生大鼠高氧肺损伤的影响

目的:探讨伊诺舒注射液(Ambroxol Hydrochloride Injection,AHI)对高氧诱发新生鼠肺损伤的影响。方法:选用新生Wistar乳鼠120只,随机分为3组(每组n=30),空气对照组、高氧模型组、AHI治疗组。空气对照组新生鼠暴露在室内空气中,其他各组新生鼠暴露在90%O2共14天,实验开始第2天治疗组腹腔内注射AHI(50 mg/kg),空气对照组和高氧模型组腹腔内注射生理盐水,实验开始第3、7及14天每组处死10只动物,取支气管-肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)检测丙二醛(MDA)水平。光镜下观察肺组织的病理变化,采用免疫组化染色观察肺组织中结缔组织生长因子(CTGF)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达和Clara细胞的数量。结果:高氧模型组BALF中MDA水平、肺组织中CTGF及TNF-α的表达强度明显高于空气对照组,Clara细胞数明显低于空气对照组,均有显著性差异(均P<0.01);AHI治疗组BALF中MDA水平、肺组织中CTGF及TNF-α的表达强度明显低于模型组,Clara细胞数明显高于模型组,均有显著性差异(均P<0.01)。结论:AHI对新生大鼠高氧肺损伤有保护作用。     

不同时间使用地塞米松对新生大鼠高氧肺损伤的影响

目的 观察不同时间使用地塞米松对新生大鼠高氧肺损伤及生长发育的影响, 以期为在支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia, BPD)的防治过程中能否使用地塞米松提供理论依据。方法 将新生Wistar大鼠随机分为空气组、高氧组、早期地塞米松组、晚期地塞米松组。观察记录各组大鼠一般状况、体重及死亡情况。观察各组大鼠肺组织发育、肺水肿及肺泡化阻滞程度。结果 新生大鼠生后肺仍处于持续发育阶段, 暴露于95%氧可出现高氧肺损伤及肺发育阻滞;早期地塞米松组大鼠的一般状况最差, 其肺水肿、肺泡发育阻滞程度最严重。晚期地塞米松组大鼠一般状况好转, 体重增长率较高氧组及对照组快, 但与高氧组比较, 肺系数、RAC值及肺间隔厚度差异无统计学意义。结论 早期使用地塞米松没有预防BPD的作用, 且会加重高氧肺损伤。建议不要将地塞米松作为BPD的预防性用药, 在使用地塞米松治疗BPD的过程中, 应在晚期使用, 并尽可能使用小剂量、短疗程。     

三磷酸腺苷-氯化镁对新生大鼠高氧肺损伤的影响

目的:探讨三磷酸腺苷-氯化镁(ATP-MgCl2)对高氧诱发新生鼠肺损伤的影响。方法:选用生后2天体重5～10 g的Wistar大鼠120只,随机分为空气对照组、高氧模型组、ATP-MgCl2治疗组,每组40只。新生鼠制备成高氧模型后第2天始治疗组新生鼠腹腔内注射ATP-MgCl2(45 mg/kg),空气对照组和高氧模型组腹腔内注射等量生理盐水,以上3组实验开始第3、7及14天每组处死10只动物,取肺组织,光镜下观察肺组织的病理变化,采用免疫组化染色观察肺组织中肿瘤坏死因子-a(TNF-a),转化生长因子(TGF-β1)和波形蛋白(Vimentin)的表达。结果:高氧模型组TNF-a、TGF-β1及Vim-entin表达强度明显高于空气对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。ATP-MgCl2组TNF-a、TGF-β1及Vimentin表达强度低于高氧模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:三磷酸腺苷-氯化镁对新生大鼠高氧肺损伤有保护作用,对支气管肺发育不良有一定的预防作用。     

己酮可可碱对新生大鼠高氧肺损伤的保护作用

目的:观察己酮可可碱(pentoxifylline,PTX)对高氧肺损伤新生大鼠的保护作用。方法:新生Wistar大鼠160只,随机分成空气对照组、空气+PTX组、高氧对照组、高氧+PTX治疗组。高氧组与治疗组分别建立高氧肺损伤模型,治疗组制备模型后腹腔注射PTX(20mg/kg.d)。各组模型3、7、12、15天随机分批处死,取肺组织检测SOD活力、MDA水平,并对肺组织进行HE染色观察肺发育程度。结果:高氧对照组SOD活力低于高氧+PTX治疗组,MDA水平明显高于PTX治疗组(P<0.01)。结论:PTX对新生大鼠高氧肺损伤有保护作用。     

前列腺素E_1对新生大鼠高氧肺损伤的影响

目的:探讨前列腺素E1(Prostaglandin E1,PGE1)对高氧诱发新生大鼠肺损伤的影响。方法:选用新生Wistar乳鼠90只,随机均分为3组(空气对照组,高氧模型组和PGE1治疗组)。每组大鼠于第3、7及14天分别处死各10只,采用硫代巴比妥酸法及考马斯亮蓝方法检测丙二醛(MDA)及总蛋白(TP)水平;光镜下观察肺组织的病理变化,采用免疫组化染色观察肺组织中结缔组织生长因子(CTGF)、γ-干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果:高氧模型组BALF中MDA水平、TP水平、肺组织中CTGF、IFN-γ及TNF-α的表达强度明显高于空气对照组,PGE1治疗组BALF中MDA水平、TP水平、肺组织中CTGF、IFN-γ及TNF-α的表达强度明显低于高氧模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:前列腺素E1对新生Wistar乳鼠高氧肺损伤有保护作用,其作用机制可能与抑制氧自由基和细胞因子的释放有关。     

川芎嗪对高氧致新生大鼠支气管肺发育不良的影响

【目的】探讨川芎嗪对高氧致新生大鼠慢性支气管肺发育不良的影响。【方法】80只出生12 h内的清洁级Sprague-Dawley(SD)大鼠作为研究对象,随机分成4组(每组20只):A组为空气对照组;B组为空气+川芎嗪组;C组为高氧组;D组为高氧+川芎嗪组。B、D组新生鼠每日腹腔注射溶于生理盐水中的川芎嗪30 mg/kg,A、C组新生鼠每日腹腔注射等量生理盐水,持续14 d。第14 d每组随机选取10只新生鼠,处死取肺组织切片,HE染色法观察肺组织病理变化并计算辐射状肺泡计数(radical alveolar counts,RAC),应用分光光度计比色法检测各组大鼠肺组织丙二醛(ma-londialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平。应用ELISA方法测定肺组织中8-异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)含量。【结果】①C组显示明显的肺泡发育受阻,RAC值较A、B组均减少(P0.05),但D组RAC较C组显著增加(P0.05);②C组MDA水平、8-iso-PGF2α含量显著高于A、B组(P0.05),D组MDA水平、8-iso-PGF2α含量较C组明显下降(P0.05);③A、B、C组SOD比较无明显差异,D组使用丹参后其水平上升,与C组比较有统计学差异(P0.05)。【结论】川芎嗪对高氧所致的支气管肺发育不良有保护作用,其机制可能是通过抗氧自由基、减轻肺部炎性反应而发挥作用。     

高锌饮食对大鼠海马超微结构的影响

给鼠饲以添加不同含量的高锌饲料，分别于每ｋｇ干饲料中加硫酸锌２００（Ｚ１组），４００（Ｚ２组），８００（Ｚ３组），１２００（Ｚ４组）ｍｇ／ｋｇ。历时１２周观察其海马的形态学变化。结果显示：①光镜下海马结构无明显改变。②电镜下Ｚ１组、Ｚ２组海马结构基本正常。Ｚ３、Ｚ４组神经元内线粒体内部嵴断裂，基质淡化，严重者呈空泡变性，溶酶体增多，髓鞘融合，突触数量明显减少。提示服用过高剂量锌可引起海马超微结构的改变，从而影响脑功能。     

痰热清对新生大鼠高氧肺损伤的影响

目的:探讨痰热清注射液对新生大鼠高氧肺损伤的影响。方法:选用生后2天的Wistar大鼠乳鼠90只随机分为高氧组、治疗组、正常组,高氧组与治疗组制备成高氧肺损伤模型,治疗组制备模型后腹腔注射痰热清注射液。各组模型制备后的第3、7、14天时随机分批处死大鼠,取肺组织,行HE染色观察肺的发育程度,并行免疫组织化学染色,对肺组织中转化生长因子β1、转化生长因子βⅠ、Ⅱ型受体行定位、半定量评分,对肺巨核细胞行细胞计数,将各组的测定值进行比较分析。结果:高氧组肺组织中转化生长因子β1、转化生长因子βⅠ、Ⅱ型受体的表达明显强于正常组、痰热清组,有显著性差异(P<0.01)。高氧组的肺巨核细胞计数少于正常组、痰热清组,有显著性差异(P<0.01)。结论:痰热清注射液在新生大鼠高氧肺损伤时对肺组织有保护作用,对支气管—肺发育不良有一定的预防作用。     

Postnatal selenium repletion protects lungs of neonatal rats from hyperoxia.

We reported previously that Se-adequate neonatal rat pups born to Se-adequate dams were resistant to lung damage by hyperoxia. To assess whether early postnatal Se repletion could also protect developing pups reared under hyperoxia, female Sprague-Dawley rats (n = 20) were bred and fed a Se-deficient (0.04 microgram/g) diet during pregnancy. On d 1 postpartum, dams were divided into two groups and fed either a Se-deficient diet or a Se-repleted (0.5 microgram/g) diet. On d 4 postpartum, litters in each group were randomly assigned to either air or high oxygen (greater than 95% O2) environments. Histologic evaluation of lungs from d-8 pups indicated that Se repletion significantly reduced the incidence of lung lesions caused by hyperoxia. Selenium-repleted pups also had significantly greater lung volumes and internal surface areas. The 7-d period of Se repletion resulted in significantly elevated maternal milk Se concentrations compared with a Se-deficient group, which was reflected in the pups by elevated plasma and hepatic Se concentrations and Se-dependent glutathione peroxidase (SeGPx) activities. Pulmonary glutathione concentration and SeGPx activity in pups were affected by oxygen exposure only, not by Se nutrition. Therefore, early postnatal Se repletion can protect the developing lung from oxygen-induced injury, a protection that is not entirely due to the effects of Se on pulmonary SeGPx activity and glutathione concentration.     

新生儿缺氧缺血性脑病中高氧液的应用研究

【目的】探讨高氧液对新生儿缺氧缺血性脑病的疗效,为减轻缺氧缺血对患儿脑损害提供临床依据。【方法】40例缺氧缺血性脑病新生儿,实验组20例使用高氧液,对照组20例未用高氧液。采用比色法和血气分析检测血浆超氧化物歧化敏(superoxidedismutase,SOD)、丙二醛(malondialialdehde,MDA)和血气变化,观察临床症状、体征、颅脑CT及新生儿神经评定(neonatalbehavioralneurologicalassessment,NBNA)评分。【结果】用高氧液组PaO_2、SaO_2明显升高(P<0.01),PaCO_2明显下降(P<0.01);血浆SOD升高、MDA下降(P<0.01);用高氧液组临床症状、体征迅速改善,颅脑CT及NBNA评分情况优于对照组(P<0.05)。【结论】高氧液对治疗新生儿缺氧缺血性脑病有明显疗效。     

产前感染对新生大鼠肺结缔组织生长因子表达的影响

目的 动态观察产前炎症暴露生后大鼠肺结缔组织生长因子(CTGF)表达和肺泡结构变化,探讨CTGF对肺发育的影响机制。方法 Wistar孕大鼠随机分为实验组和对照组,分别于孕19 d和20 d腹腔注射脂多糖(LPS2.5 mg/kg)和等量生理盐水,足月自然分娩后,于日龄1、3、7、14 d两组分别取8只仔鼠,麻醉处死后取肺组织,左肺行HE染色,观察肺组织结构,测量肺泡数量、肺泡间隔厚度、肺泡占组织面积比例,右肺采用Real time PCR和Western blot方法测定肺组织中CTGF mRNA及蛋白表达水平。结果 1)随日龄增加,两组大鼠肺泡数量、肺泡占组织面积比逐渐增加,肺泡间隔变薄。生后1 d、3 d、7 d及14 d,实验组肺泡数量明显少于对照组(P<0.05或<0.01);生后1 d、3 d和7 d,实验组肺泡占组织面积比明显大于对照组(P<0.01);生后1 d及3 d,实验组肺泡间隔厚度明显小于对照组(P=0.000)。2)生后1 d、3 d和7 d实验组CTGFmRNA表达明显高于对照组(P<0.05或<0.01)。3)生后1、3、7、 14 d实验组CTGF蛋白表达均明显强于对照组(P均<0.05)。结论 产前感染导致生后大鼠肺CTGF表达增加与肺结构异常有关。     

二氧化硫吸入致大鼠肺组织基因表达谱改变

目的 研究短期吸入二氧化硫（SO2）毒理作用的分子机制。方法 采用Affymetrix基因芯片（RAE230A）技术，研究SO2短期（56mg／m^3，6h／d，共7d）吸入后大鼠肺组织基因表达谱的改变。结果 与其相应的对照组相比，SO2短期吸入后表达上调的基因有31个，其中包括18个已知基因和13个新基因，而表达下调的基因有30个，其中包括19个已知基因和儿个新基因。结论 （1）短期吸入SO2的大鼠肺基因表达谱与其对照组相比，氧化磷酸化相关的一些基因发生了变化，表明高剂量短期吸入SO2可能导致线粒体功能损伤；（2）与甲状腺激素有关的几个基因表达也发生了变化，表明SO2可能会造成甲状腺激素在体内生理过程的改变；（3）SO2可引起多种基因的表达发生改变，这意味着多种基因的表达是易变且不稳定的，在肺组织中可能存在着SO2诱发的表达不稳定型基因组。     

川芎嗪对高体积分数氧肺损伤新生大鼠血管内皮生长因子表达的影响

目的 探讨高氧性肺损伤新生大鼠肺损伤过程中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达情况,并观察川芎嗪对高氧性肺损伤的干预作用。方法 96只出生12 h内的清洁级Sprague-Dawley(SD)大鼠作为研究对象。随机分成4组(每组24只):Ⅰ组:空气对照组;Ⅱ组:空气+川芎嗪组;Ⅲ组:高氧组;Ⅳ组:高氧+川芎嗪组。Ⅲ组、Ⅳ组新生大鼠高氧暴露(氧体积分数850 mL/L),Ⅱ组、Ⅳ组予每日腹腔注射溶于9 g/L盐水的川芎嗪30 mg/kg,Ⅰ组、Ⅲ组予等量9 g/L盐水注射。在实验3、7 d和14 d每组随机选取8只处死,取其肺组织,采用HE染色观察其肺组织病理改变,免疫组织化学方法检测其血小板内皮细胞表面黏附分子-1(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1)及VEGF水平的表达,以PECAM-1阳性染色的内皮细胞面积与肺实质细胞总面积的百分比代表肺微血管密度。结果 第3,7,14天Ⅲ组RAC值及微血管密度较Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅳ组均减少(P<0.05)。Ⅲ组新生大鼠第3,7,14 d时肺组织PECAM-1及VEGF蛋白表达明显低于Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅳ组。Ⅳ组新生大鼠第3,7,14 d时肺组织RAC值、肺微血管密度、PECAM-1及 VEGF蛋白表达和Ⅰ组、Ⅱ组比较差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 高氧暴露抑制新生鼠肺VEGF的表达,川芎嗪可改善肺发育,作用机制可能与上调VEGF的表达有关。