霍乱弧菌肠毒素带毒情况分析

霍乱肠毒素 (ＣＴ)是霍乱弧菌毒力因子之一 ,可分为Ａ、Ｂ两个亚单位 ,这两个亚单位的基因ｃｔｘＡ和ｃｔｘＢ位于染色体上 ,并紧密相连。我们采用ＰＣＲ法检测霍乱弧菌ｃｔｘＡ以测定其毒力 ,现将结果报告如下。材料与方法　 (1)材料 :①菌株从流行期间各县 (市 )区卫生防疫站上送及本站分离到的菌株中选取不同地区、来源、型别和不同发病时间的霍乱菌株共 15 9株。②霍乱ＣＴ ＰＣＲ试剂盒ＶＣ(ＣＴ ＧＥＮＥ)ＰＣＲＫＩＴ ,购自军事医学科学院。③ＤＮＡ扩增仪 (ＰＴＣ 5 1ＢＤＮＡＴＨＥＲＭＡＬ ＣＹＣＬＥＲ)、电泳仪和透射式紫外分析…     

3组套式PCR用于检测及区分霍乱弧菌O1群古典型,埃尔托型和O139群

针对霍乱弧菌肠毒素Ａ亚单位（ｃｔｘＡ）基因设计两对引物,建立套式ＰＣＲ,可特异扩增霍乱弧菌Ｏ１群古典型、埃尔托型和Ｏ１３９群;针对霍乱弧菌毒力协调菌毛Ａ亚单位（ＴｃｐＡ）基因设计两对引物,外引物可特异扩增霍乱弧菌Ｏ１群古典型、埃尔托型和Ｏ１３９群,内引物只能特异扩增霍乱弧菌Ｏ１群埃尔托型和Ｏ１３９群;针对Ｏ１３９群特异基因设计两对引物,建立套式ＰＣＲ,可特异扩增Ｏ１３９群。先利用针对ｃｔｘＡ基因设计的套式ＰＣＲ进行初筛,再进一步用另外两组套式ＰＣＲ,可检测及区分霍乱弧菌Ｏ１群古典型、埃尔托型和Ｏ１３９群。对４８株ＥＶＣ,２株ＣＶＣ,６株Ｏ１３９群和３３株非Ｏ１非Ｏ１３９群进行检测,扩增结果与设计均一致。套式ＰＣＲ检测的敏感性可达到１～１０ＣＦＵ。本文建立的方法简单、快速、特异和敏感,有较大的应用价值。     

多聚酶链反应在阿米巴病流行病学研究中的应用

用两对引物扩增（ＰＣＲ）溶组织内阿米巴带囊者粪便中的ＤＮＡ，以鉴别感染虫株的致病性，致病和非致病性ＰＣＲ均为阳性者１人（３．１％），仅一项阳性者分别为６人（１８．８％）和２５人（７８．１％）。７例致病性ＰＣＲ阳性者中，６人有腹泻症状（ＯＲ＝３１．５）。各种对照标本均呈ＰＣＲ阴性反应。以ＰＣＲ法对一小样本人群进行阿米巴病调查，致病和非致病虫株的感染率均为１０％。结果表明，在阿米巴病流行病学调查中，可     

随机引物PCR方法用于霍乱分子流行病学研究

研究建立了随机引物ＰＣＲ方法用于霍乱分子浒病学研究,其中两组引物针对霍乱弧菌重复插入序列设计,一组引物为任意序列。对２株霍乱弧菌Ｏ１群古典型（ＣＶＣ）、８１株魂尔托型（ＥＶＣ）和１０株Ｏ１３９群进行了分析,上述菌株经ＰＣＲ鉴定,均携带霍乱肠毒素（ｃｔｘ）基因和毒力协同调节菌毛（ｔｃｐ）基因。３株ＣＶＣ分为２个类型,８１株ＥＶＣ分为１４个类型,１０株Ｏ１３９群分为３个类型。其中１０株分离于一次霍乱暴     

广西130株非O1群霍乱弧菌血清学分型及噬菌体-生物分型研究

目的 将噬菌体－生物分型方法应用到非Ｏ１群霍乱弧菌的分型,以掌握广西地区非Ｏ１群霍乱弧菌血清型别的分布,并对此分型方法进行探讨。方法 收集广西部分地区１３０株非Ｏ１群霍乱弧菌进行血清学分型和噬菌体－生物分型,并用多聚酯链反应（ＰＣＲ）进行霍乱肠毒素检测。结果 在１３０例菌株中有９０株可以分型,占６９．２３％,分布于３４个血清型,腹泻病人菌株可分为１４个血清型,其中以Ｏ２以优势血清型,外环境菌株分布     

多基因PCR检测产毒性大肠杆菌和志贺氏菌的研究

为了提高普通的单基因ＰＣＲ检测致病性肠道杆菌的时效，采用ＥＴＥＣ４４８１３（ＬＴ）、ＥＴＥＣ１９４４９（ＳＴ）和福氏２ａＴ３２（ｉｐａＨ）３个标准株为模板，建立了检测产毒性大肠杆菌（ＬＴ，ＳＴ）和志贺氏菌的三基因ＰＣＲ方法。并分别用相应单基因ＰＣＲ方法标记的探针斑点杂交标准株ＥＴＥＣ４４８１５（ＬＴ）、工程株ＰＳＬＭ００４（ＳＴ）和标准株４８０２５１１（ｉｐａＨ）。杂交的结果都是阳性，证实了这个多基因ＰＣＲ扩增是特异的。并用此三基因ＰＣＲ反应系统检测１１３株ＥＴＥＣ和志贺氏菌，结果是ＬＴ２５株、ＳＴ１６株、ＬＴ和ＳＴ共３０株及ｉｐａＨ４２株。在几种病原体可能共存的样本中，用一次ＰＣＲ就能解决病原体的检测和鉴别问题，比单基因ＰＣＲ更快速、经济。     

用多基因PCR检测和区分不同群型霍乱病原菌

目的 建立一种快速、敏感的诊断方法,用于检测和区分霍乱弧菌Ｏ１群古典型（ＣＶＣ）,埃尔托型（ＥＶＣ）、Ｏ１３９群和非Ｏ１和Ｐ１３９群,方法 分别针对霍乱弧菌肠毒素Ａ亚单位（ｃｔｘＡ）基因,Ｏ１３９群特异基因、霍乱弧菌溶血素Ａ亚单位（ｈｌｙＡ）基因和毒力协同调节菌毛Ａ亚单位（ｔｃｐＡ）基因设计引物,建立多基因ＰＣＲ方法。ＰＣＲ产物经电泳,根据扩增条带的大小和数目,可检测和区分ＣＶＣ、ＥＶＣ,Ｏ１３９     

霍乱弧菌分型方法及其在流行病学研究中的应用

霍乱弧菌的表型分型包括：Ｏ血清分型、噬菌体分型、多位点酶电泳和耐药谱等。基因分型包括：毒力基因分型、质粒分型、脉冲场凝胶电泳分型、基因探针分型、任意引物ＰＣＲ分型和基因序列分析等方法。上述方法已广泛用于霍乱弧菌的流行病学研究。包括霍乱弧菌流行株的检测、霍乱流行规律、Ｏ１３９群的起源、霍乱的传播途径和耐药机理等研究。     

PCR与快速免疫法用于沙眼衣原体检测的比较

目的 探讨多聚酶链式反应（ＰＣＲ）在检测泌尿生殖道沙眼衣原体（ＣＴ）的应用价值。方法 １０３例病人分为症状组（７３例）和无症状组（３０例）应用ＰＣＲ和快速免疫法对其进行ＣＴ检测。结果 症状组２种检测结果差异无显性（Ｐ〉０．０５），而无症状组ＰＣＲ法阳性率显高于快速免疫法（Ｐ〈０．０５）。结论 ＰＣＲ可用于无症状患的沙眼衣原体检测。     

应用PCR诊断淋菌性与非淋菌性尿道炎的结果分析

应用ＰＣＲ诊断淋菌性与非淋菌性尿道炎的结果分析山东省新泰市人民医院（２７１２００）赵辉朱树敏应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对非淋病性尿道炎（ＮＧＵ）和淋病性尿道炎（ＧＵ）患者中沙眼衣原体（ＣＴ）、解脲脲原体（ＵＵ）的感染进行了检测分析，报告如下。检测对象...     

Ｏ１群霍乱弧菌毒力基因和菌株流行能力关系研究

摘要：目的　调查福建省１９６２－２００５ 年不同流行时期、不同流行血清型的Ｏ１ 群埃尔托型霍乱弧菌
（ＥＶＣ）毒力基因分布情况;探讨霍乱弧菌（ＶＣ）不同毒力基因特征与霍乱流行能力的关系。方法　运用
ＰＣＲ 扩增技术,检测１９６２－２００５ 年６９ 株（稻叶２１、小川４８） 霍乱患者分离株的犮狋狓犃基因, 同时进行
犮狋狓犅、狋犮狆犃、狉狊狋犚、犺犾狔犃毒力因子的古典型（犆犾）和埃尔托型（犈犾）基因亚型的扩增;结合流行病学资料
分析不同毒力特征菌株的流行能力。结果　６９株Ｏ１群霍乱弧菌犮狋狓犃基因阳性６２株,犮狋狓犃基因阴性的菌
株均不同程度地携带有其他各相关毒力基因;各毒力因子古典型和埃尔托型的阳检率分别为犮狋狓犅６０．９％
（４２株）和７２．５％ （５０株）,狉狊狋犚３７．７％ （２６株）和７２．５％ （５０株）,狋犮狆犃４．３５％ （３株）和６９．５７％ （４８
株）,犺犾狔犃６５．２２％ （４５株）和７９．７１％ （５５株）。犮狋狓犅 犆犾、狉狊狋犚 犆犾基因以及菌株同时携带狉狊狋犚 犆犾和狉狊狋犚
犈犾基因的阳性率在稻叶型（阳性率分别为３８．１％ 、０ 和０） 和小川型（阳性率分别为７０．８％ 、５４．２％ 和
３５．４％ ）菌株中的差异有统计学意义（犘均＜０．０５）。犮狋狓犅 犈犾、狉狊狋犚 犆犾、狉狊狋犚 犈犾基因的阳性率在１９６２－
１９６４年、１９７８ 年、１９９４－２０００ 年的小川型３ 个不同流行时期（阳性率分别为犮狋狓犅 犈犾：１００．０％ 、
１００．０％ 、４４．８％ ;狉狊狋犚 犆犾：０、０、８９．７％ ;狉狊狋犚 犈犾：１００．０％ 、８７．５％ 、５８．６％ ） 的差异有统计学意义
（犘均＜０．０５）。犮狋狓犅 犆犾、犮狋狓犅 犈犾、狉狊狋犚 犈犾基因的阳性率在１９８０－１９８６ 年、２００５ 年稻叶型两个不同流行
时期（阳性率分别为犮狋狓犅 犆犾：１３．３％ 、１００．０％ ;犮狋狓犅 犈犾：１００．０％ 、６６．７％ ;狉狊狋犚 犈犾：９３．３％ 、５０．０％ ）
的差异有统计学意义（犘均＜０．０５）。结论　福建省１９６２－２００５年Ｏ１群霍乱菌株不同程度地携带有相关的
毒力因子;各毒力因子埃尔托型基因片段的检出率均要高于古典型,以狉狊狋犚和狋犮狆犃基因的差异最明显;
相对于稻叶血清型,小川血清型更容易整合古典型的犮狋狓犅和狉狊狋犚基因片段;犮狋狓犅和狉狊狋犚基因的类型和不
同血清型霍乱菌株的流行能力有相关性。
关键词：霍乱弧菌;毒力基因;ＰＣＲ;等位基因
中图分类号：Ｒ１８３．４　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１４）０１ ００４１ ０５     

广东省1985～1993年脊髓灰质炎流行野毒株的基因分析

广东省是脊髓灰质炎（脊灰）高发区，１９８５～１９９３年各年都有流行，历年流行的脊灰野毒株均为Ｉ型病毒。在历年来分离的流行病毒株中，选择不同时期的Ｉ型脊灰病毒２２株做ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析，发现广东省脊灰Ｉ型流行株共有９种电泳图谱类型，显示了在基因水平上的多样性。根据ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析结果又选择了其中９株代表株，对其ＶＰ１编码区３００个核苷酸进行序列分析，结果显示各年的流行株间序列有差异。此结果表明，广东省脊灰流行与多种基因型脊灰病毒的存在有关，但口服脊灰疫苗（ＯＰＶ）形成的免疫屏障可阻断脊灰野病毒的传播。     

1995～1997年辽宁,河南,河北省麻疹病毒流行株基因型分析

以反转录二步多聚酶链反应方法（ＲＴ－ＰＣＲ）直接测定麻疹病人唾液、尿液标本中的麻疹病毒（ＭＶ）血凝基因（Ｈ）、核衣壳基因（Ｎ）。以ＲＴ－ＰＣＲ产物纯化后进行ＭＶ４５０ｎｔＨ、２８２ｎｔＮ基因核苷酸片段测序分析,测序结果一致表明１９９５～１９９７年期间中国部分地区ＭＶ流行株存在２种基因型。其中一种基因型只发现１株,与ＥＤｗ５４株相同,另一种基因型占流行株的绝大多数（称新基因型）,与其它国家以前报道的ＭＶ流行株基因型的Ｎ基因最大差异为１５．４％,与ＥＤｗ５４、疫苗株相差８．８％;Ｈ基因最大差异是１０．８％     

随机引物聚合酶链反应对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因分型的研究

目的建立耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）随机引物聚合酶链反应（ＡＰ－ＰＣＲ）基因分型的方法用于；临床流行病学调查。方法优化ＡＰ－ＰＣＲ方法并与抗生素敏感谱分型法比较，评价ＡＰ－ＦＣＲ基因分型法的可靠性与分辨力；并对４９株ＭＲＳＡ进行ＡＰ－ＲＣＲ基因分型。结果４９株医院感染的ＭＲＳＡ可分为１０个ＡＰ－ＰＣＲ谱型，主要谱型为 Ａ３型，分型率 １００％；其中 ４１株 ＭＲＳＡ为流行病学相关株。结论 ＡＰ－ＰＣＲ基因分型是一种经济、快捷、可靠的分型方法；是在分子水平上对微生物感染进行病原学、发病机理及流行病学研究较理想的工具。     

北京市２００７－２０１４年Ｏ１群霍乱弧菌 病原学特征分析

摘要：目的　分析北京市２００７－２０１４年分离到的Ｏ１群霍乱弧菌的病原学特征。方法　对霍乱感染者、水
产品和外环境来源的Ｏ１ 群霍乱弧菌, 采用血清分型、荧光定量ＰＣＲ 检测霍乱毒素基因犮狋狓犃犅、Ｋ Ｂ 法
８ 种药物（多西环素、环丙沙星、诺氟沙星、复方新诺明、丁胺卡那霉素、庆大霉素、头孢曲松和呋喃妥
因）进行敏感性试验和脉冲场凝胶电泳（ＰＦＧＥ） 分子分型方法,研究不同来源菌株在各方面的异同。结
果　北京市２００７－２０１４年共分离得到不同来源Ｏ１群霍乱弧菌１２５株（感染者７５株,水产品３７株,外环
境涂抹１３株）,小川型９６株,稻叶型２９株。其中１６株菌犮狋狓犃犅基因阳性（感染者５株,水产品９株,外
环境涂抹２株）,其他犮狋狓犃犅基因阴性（感染者７０株,水产品２８株,外环境涂抹１１株）;小川型犮狋狓犃犅基
因阴性霍乱弧菌占７０．４０％ （８８／１２５）;１２５株菌对庆大霉素、头孢曲松和呋喃妥因完全敏感,其中２５株菌
（感染者１０株,水产品１１株,外环境４株）对５种抗菌药物出现７种耐药型别,有６株来自感染者和水产
品的菌株产生双重或三重耐药,而４株外环境的耐药菌株均为单一耐药。ＰＦＧＥ 分子分型结果显示,１２５株
菌株经犖狅狋Ⅰ酶切后可分为９１种型别,７起聚集性疫情中分离到的３７株菌全部为小川型,可分为６ 个聚
类,２９株稻叶型菌株可分为３个聚类。结论　北京市２００７－２０１４年Ｏ１群霍乱弧菌病原学特征复杂多样,
在产毒株引起霍乱弧菌疫情减少的情况下,应关注非产毒霍乱弧菌导致的疫情。
关键词：霍乱弧菌;药物敏感试验;毒力基因;脉冲场凝胶电泳
中图分类号：Ｒ３７８　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１６）１０ ０７２１ ０６     

从活甲鱼体表检测出O1群霍乱弧菌

目的：对甲鱼进行霍乱弧菌检测，为疾病预防控制提供准确可靠的试验数据。方法：按照卫生部《霍乱防治手册》第五版检测方法。同时，用霍乱弧菌快速层析试剂检测和科玛嘉弧菌显色培养基分离培养。结果：从24份甲鱼体表涂抹物中用霍乱弧菌快速层析试剂检测出2株01群霍乱弧菌，用科玛嘉弧菌显色培养基和庆大琼脂分离出3株01群霍乱弧菌。噬菌体-生物分型为31L型，常见非流行株。结论：本次监测结果（3／24）阳性率较高（12．5％），建议加强海产品、水产品霍乱弧菌监测。     

非O1群霍乱弧菌噬菌体-生物学分型

目的：了解用霍乱弧菌噬菌体和溶血性等4项生物学试验对非O1群霍乱弧菌进行噬菌体-生物学分型实际应用意义。方法：用VP1-VP55组弧菌噬菌体对非O1群霍乱弧菌进行噬菌体分型；用溶源性噬菌体敏感试验、溶源性测定、山梨醇发酵和溶血试验对非O1群霍乱弧菌进行生物学分型。结果：236株非O1群霍乱弧菌中能被5组O1群霍乱弧菌噬菌体分型的62株，总分型率为26．3％，其中腹泻病人52株，从业人员10株，分型率分别为22．0％和9．3％，分属于11个噬菌体型，腹泻病人以21、26噬菌体型居多，从业人员无优势型别，对5组O1群霍乱弧菌体均不敏感的174株；62株非O1群霍乱弧菌分属于e、f、k、l等4个生物型，23个噬菌体-生物型在8-31型之间，均属非流行株范畴；对第Ⅳ组噬菌体（10^9／ml）及其常规稀释噬菌体和溶原性噬菌体、溶源性表现为不裂解。结论：非O1群霍乱弧菌进行噬菌体分型，对预测非O1群霍乱弧菌流行具有一定的实用和指导性意义。现成的噬菌体分型方法对非O1群霍乱弧菌进行噬菌体分型存在一定的缺陷，应寻找更适宜于非O1群霍乱弧菌分型的噬菌体用于实际应用。     

白山市鸭绿江水体非O1群霍乱弧菌血清分型

目的了解白山市外环境水体中非O1群霍乱弧菌的菌型分布和致病性,掌握其流行规律,为感染性腹泻的控制和防治提供科学依据。方法于2006年4月-2008年8月对鸭绿江水系白山段水体进行了连续定点的监测,并对部分菌株进行了霍乱肠毒素的检测。结果共检测水样200份,检出非O1群霍乱弧菌70株,可以用诊断血清分型的有41株,可分型率为58．57％,未定型29株,占41．43％。分离出携带霍乱肠毒素毒力基因（CT）的非O1群霍乱弧菌5株。结论通过对鸭绿江水系白山段水体的监测,证实该水体中广泛存在着非O1群霍乱弧菌,其血清分型是复杂和分散的。首次分离出携带霍乱肠毒素毒力基因（CT）的非O1群霍乱弧菌。鸭绿江水系中非O1群霍乱弧菌的存在与人们的生活污水排放有密切关系。     

霍乱弧菌04-5a糖发酵激活蛋白编码基因分析

目的 比较霍乱弧菌04-5a株糖发酵激活蛋白编码基因与霍乱流行株与非流行株相关序列的差异,明确其基因型.方法 采用基因克隆测序方法,对霍乱弧菌04-5a株糖发酵激活蛋白编码基因进行序列分析,并与相关序列进行比较.结果 霍乱弧菌04-5a株糖发酵激活蛋白编码基因由771个碱基对组成,编码258个氨基酸的多肽,流行株和非流行株相关序列比较发现,04-5a株与流行株两者基因完全相同,与非流行株在334、622和666位核苷酸碱基的具有差异,第666位碱基的差异导致了氨基酸的不同,在非流行株与流行株分别为丙氨酸与苏氨酸.结论 霍乱弧菌04-5a株糖发酵激活蛋白编码基因序列符合流行株基因特征,在非流行株与流行株第666位碱基差异可能与其致病性及流行有关,值得深入研究.     

日本SSD—256型B超5V电源维修

西门子ＭＥＶ７７加速器是比较老的机型 ,但由于其稳定可靠 ,维修方便 ,在国内有一定的保有量 ,其中二手机器占很大比例。该机控制部分还没有微处理器 ,多由通用集成块完成各功能 ,集成化较低 ,故障要多一些。现介绍两例故障供参考。故障１旋转治疗时 ,ＲＯＴＲＡＣＴＯＲ及ＶＥＲＩＦＩ ＥＲ机架角度显示计数 ,但控制台面板上ＡＲＣ显示不计数。应是ＰＣ７（ＡＲＣＣＴＲ）故障或ＰＣ７ -３Ｂ :ＡＲＣＣＴ信号异常。ＰＣ５、ＰＣ６、ＰＣ７和ＰＣ８均为计数板 ,可以互换。将ＰＣ７与ＰＣ５互换后 ,故障依旧。说明ＰＣ７是好的 ,可能是ＡＲ…