聚合酶链反应标记输血传播病毒（TTV）地高辛霉探针的初步应用

用聚合酶链反应法（ＰＣＲ）制备地高辛素标记的输血传播病毒（ＴＴＶ）探针,并与巢式ＰＣＲ法比较。结果 该探针具有ＴＴＶ特异性,其灵敏度为１０ｐｇ ＤＮＡ。应用该法检测１０８份非甲￣庚型肝炎病人的血清标本,应用该法检测１０８份非甲￣庚型肝炎病人的血清标本,ＴＴＶ ＤＮＡ阳性率为１８．５％（２０／１０８）;检测２２份病人的粪便标本,ＴＴＶ ＤＮＡ阳性率为２７．３％（６／２２）。该法与ｎＰＣＲ法的总符合率     

HCMV AD_(169)感染小鼠模型的建立

目的探讨用HCMVAD169病毒株建立小鼠感染动物模型的可行性。方法 BALB/c近交系小鼠30只,随机分为三组,分别为病毒感染组、免疫抑制病毒感染组、正常对照组,病毒接种途径为腹腔注射。观察动物的变化,取各组小鼠全血分离有核细胞,用直接荧光免疫法检测CMVpp65早期抗原,以病理学方法检测动物组织器官的损伤特点。结果接种了病毒的二组小鼠都出现了明显体重不增、皮毛稀松、生长迟缓等病症,肺、肠、涎腺等组织器官发生了广泛病理损害,免疫抑制病毒感染组小鼠血液有核细胞内发现了pp65抗原阳性细胞。结论将HCMVAD169株接种BALB/c近交系小鼠建立感染模型是可行的,在机体免疫抑制状态HCMV可激活感染。     

孕妇感染HCMV时IgG抗体亲和力与HCMV DNA联合检测的临床意义

目的：本文通过研究HCMV-IgG亲和力指数（avidity index,AI）以及HCMV-DNA的检测,对孕产妇原发性感染及继发性感染进行综合评价。旨在为防止和减少围产期感染、流产及新生儿先天畸形、听力障碍和智力障碍提供有效而准确的检测数据及临床诊断依据。方法：采用德国Virion/serion公司酶联免疫吸附试验（ELISA）定量试剂,检测孕妇血清中HCMV的IgM和IgG抗体、IgG抗体亲和力;采用中山医科大学达安公司RV核酸扩增（PCR）荧光定量检测孕妇血清中HCMV-DNA,并对其结果进行分析。结果：341例孕妇中,HCMV-IgG低亲和力样本孕产史不良孕妇组所占比例显著高于初次妊娠孕妇。孕产史不良孕妇HCMV-DNA阳性例数所占比例显著高于初次妊娠孕妇。结论：341例孕妇中存在一定比例的HCMV现症感染,建议妊娠妇女尤其是有不良孕产史者尽可能同时进行HCMV-IgG亲和力指数及HCMV-DNA检查,以便尽早采取措施,避免由于HCMV感染导致的新生儿出生缺陷的发生。     

PCR系统制备地高辛标记的探针检测脊髓灰质炎病毒核酸

笔者应用聚合酶链反应（PCR）合成系统，以逆转录的SabinⅠ、Ⅱ、Ⅲ型病毒cDNA为模板，在反应液中加入标记的Dig-dUTP，经扩增制备了地高辛配基标记的脊髓灰质炎病毒cDNA探针、该法比PCR扩增产物后，电泳，片段回收到标记、提纯，常需3天。结果比较PCR技术直接制备地高辛标记cDNA探针方便，快速，标记率高，用于型别鉴定比中和试验快，敏感，特异性强等优点。     

聚合酶链反应标记输血传播病毒(TTV)地高辛素探针的初步应用

用聚合酶链反应法（ＰＣＲ）制备地高辛素标记的输血传播病毒（ＴＴＶ）探针，并与巢式ＰＣＲ法（ｎＰＣＲ）比较。结果该探针具有ＴＴＶ特异性，其灵敏度为１０ｐｇＤＮＡ。应用该法检测１０８份非甲～庚型肝炎病人的血清标本，ＴＴＶＤＮＡ阳性率为１８５％（２０／１０８）；检测２２份病人的粪便标本，ＴＴＶＤＮＡ阳性率为２７３％（６／２２）。该法与ｎＰＣＲ法的总符合率为９６９％（１２６／１３０）。结论：用ＰＣＲ法直接制备地高辛素标记ＤＮＡ探针简便、快速、灵敏度高，特异性好。应用该法从６名病人的粪便中检出ＴＴＶＤＮＡ，提示ＴＴＶ有可能通过粪口途径传播。     

HCMV宫内感染对婴幼儿智力和听觉发育的影响

目的 探讨人巨细胞病毒宫内感染儿的脑发育状况、认知能力及听觉发育状况.方法 采用酶联免疫吸附试验法检测4 412例孕妇外周血中HCMV IgM,对HCMV IgM阳性孕妇进一步应用逆转录-聚合酶链反应检测胎儿附属物中人巨细胞病毒晚期mRNA,其中1项阳性者为宫内感染组(92例),2项均为阴性者为对照组(88例),联合应用头颅超声、Bayley婴幼儿发育量表、脑干听觉诱发电位检测人巨细胞病毒宫内感染儿出生时及婴幼儿期的听力、智力发育状况.结果 宫内感染儿在出生和出生3个月时头颅超声异常率皆高于对照组(P=0.011;P=0.032);宫内感染儿出生后4个月脑干听觉诱发电位的异常率高于对照组(χ2=12.515,P<0.001).宫内感染儿智力发育指数显著落后于对照组(t=4.637,P<0.01);应用韦氏学龄前及幼儿智力量表(WPPSI)追踪测试患儿,其智能迟缓率仍高达20.00%.结论 人巨细胞病毒宫内感染可引起婴幼儿神经系统病变、智力发育迟缓及听力障碍.     

单克隆抗体防治HCMV感染的研究进展

HCMV属于疱疹病毒科中结构最复杂的一种病毒,在大部分人群中存在隐性感染,当机体免疫力下降时将出现活动性HCMV感染,甚至危及患者生命。随着HCMV单克隆抗体的开发,人们对抗体作用机制有了更进一步的认识,国外已有多株抗HCMV单克隆抗体进入临床试验阶段。本文概述了单克隆抗体在活动性HCMV感染防治方面取得的研究进展,包括作用机制及进入临床试验的几种单克隆抗体。     

孕妇围生期HCMV感染与婴儿先天性疾病关系

目的探讨孕妇人巨细胞病毒（HCMV）活动性感染对婴儿的近期影响。方法采用ELISA和PCR相结合的方法，采集74例HCMV活动性感染孕妇及50例无HCMV活动性感染孕妇的婴儿血进行HCMV—IgM及HCMV—DNA检测．并对感染婴儿定期随访至生后6个月，追踪其近期预后。结果孕期HCMV活动性感染组的婴儿先天性感染率为36．49％，围产期感染率为45．95％，显著高于孕期无HCMV活动性感染组（P〈0．005）；HCMV活动性感染孕妇的婴儿中，先天性感染组症状性感染发病率高于围生期感染组（P〈0．025）；神经系统异常、先天畸形及全身性感染发病例数多于围生期感染组（P〈0．05）；先天性感染组中，症状性感染婴儿治疗后肝功能恢复、HCMVHCMV—IgM和／或HCMV—DNA转阴率及近期预后比围生期感染组差（P〈0．05）。结论孕期HCMV活动性感染与婴儿先天性感染及围生期感染显著相关。孕期HCMV活动性感染引起的先天性感染较围生期感染严重，预后差．故应重视孕期HCMV感染的检测，预防和阻断HCMV先天性感染的发生。     

用地高辛标记的HBV DNA探针检测肝炎和肝细胞癌组织中的HBV存在状态

用地高辛标记的HBV DNA探针分析26例慢性乙型肝炎和41例原发性肝细胞癌组织中的HBV的存在状态。从肝组织中抽提和纯化的细胞DNA,经限制性核酸内切酶EcoRI和HindⅢ酶解、琼脂糖凝胶电泳和Southern印迹杂交分析,HBV DNA的检出率,慢性乙型肝炎组为80.8％,其中游离型占 80.9％,混合型占19.1％;肝细胞癌组为68.3％,其中18例为整合型,10例为混合型。从分子水平探讨了HBV与肝癌的关系及预测肝癌发生危险性的方法。     

地高辛素标记的DNA探针快速鉴定产不耐热肠毒素大肠杆菌的研究

用地高辛素标记的６７０ｂＰ－ＬＴ－ＤＮＡ片段作为探针，用菌落原位杂交法对９株标准参考株进行检测，结果全部相符。对７０株从临床分离的菌株也进行菌落原位杂交．并与３２－Ｐ标记的探针进行比较．结果地高辛素探针的特异性为９７．７％，敏感性为１００％，符合率为９８．６％。从含正常肠道菌的粪便中可以直接检出ＬＴ－ＥＴＥＣ而无须经纯培养。定量试验表明本法最低检出量为６ＣｆｕＬＴ－ＥＴＥＣ／斑点。整个检测过程短．仅须２４～３０ｈ。探针的稳定性好，有效期可长达１年。     

PCR法制备地高辛标记探针原位杂交在人结核杆菌Edman株基因检测中的应用

目的 建立一种用于临床上检测人感染结核杆菌Edman株的快速敏感的PCR探针原位杂交方法.方法 根据NCBI报道的人结核杆菌编码序列,以结核杆菌Edman株Ag85A基因150~841 bp之间的基因序列为靶序列,采用PCR法制备对人结核杆菌特异性高的地高辛标记DNA探针(690 bp),并对探针进行电泳和测序鉴定.分离培养结核杆菌,通过原位杂交检测所制备探针的特异性;对结核杆菌做10倍比稀释,运用探针对其进行敏感性检测.结果 所制备的探针对结核杆菌的杂交反应呈阳性,以dNTP代替地高辛标记探针作为对照组的杂交反应为阴性;通过基因序列测定证实了PCR产物的特异性;PCR法制备地高辛标记探针原位杂交法检测结核杆菌A_g85A基因下限为1.0 x 10.c妯ml. 结论 本研究建立的地高辛标记探针原位杂交法对结核杆菌Edman株Ag85A基因的检测具有快速、特异、敏感白勺特点,适合结核分枝杆菌的临床检测.     

聚合酶链反应结合地高辛标记探针杂交检测宫颈组织癌人乳头瘤病毒

应用聚合酶链反应结合地高辛标记探针杂交方法检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）。应用１对通用型引物检测３６例新鲜活检宫颈癌组织中ＨＰＶ，凝胶电泳分析与聚合酶链反应结合印迹杂交（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ）及聚合酶链反应结合斑点杂交的检测阳性率分别为６６７％、６９４％、６９４％，结果基本一致。应用３对通用型引物检测宫颈癌组织中ＨＰＶ，ＨＰＶ的检测阳性率分别为７２２％（２６／３６）、７５０％（２７／３６）、６３２％（１２／１９），总的检测阳性率为９１７％（３３／３６）；在β球蛋白基因阳性的２７例宫颈癌组织中，总的检测阳性率为９００％（２４／２７）。说明聚合酶链反应结合地高辛探针检测ＨＰＶ方法可应用于宫颈癌的分子流行病学研究。     

反向斑点杂交技术在结核分枝杆菌耐药性检测中的应用研究

目的利用反向斑点杂交技术，建立结核分枝杆菌对利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）耐药相关基因突变的快速检测方法。方法根据结核分枝杆菌标准株H37Rv序列，自行设计针对rpoB、katG、inhA、rpsL和embB基因中常见耐药突变区的系列寡核苷酸探针，制成膜芯片，并对64例结核分枝杆菌临床株的基因突变情况进行检测。结果在36株RFP耐药菌中，有32株被检出在rpoB基因上发生突变，突变检出率为88．89％（32／36）；在39株INH耐药菌中，有30株被检出在katG或inhA基因上发生基因突变或缺失，检出率为76．92％（30／39）；在34株SM耐药菌中，有25株被检出在rpsL基因分析部位发生突变，检出率为73．5％（25／34）；在32株EMB耐’药菌中，有19株在embB基因分析部位发生突变，检出率为59．4％（19／32）。膜芯片检出的突变与基因测序结果一致。结论用膜芯片检测结核分枝杆菌对利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）四种主要一线抗结核药的耐药性，具有较高的特异性和敏感性，可作为常规药敏方法的补充，用于指导开展早期、有效的临床化疗。     

黄疸婴儿人类巨细胞病毒感染的荧光定量PCR检测

目的:调查黄疸婴儿人类巨细胞病毒感染的情况。方法:采用荧光定量PCR方法对203例黄疸婴儿尿液标本进行HCMV-DNA定量检测。结果:在所检测的203例婴儿中,HCMV-DNA阳性的有52例,感染率为25.62%。HCMV-DNA拷贝数与黄疸持续时间无相关性。结论:HCMV是引起婴儿黄疸的主要原因之一,荧光定量PCR检测婴儿尿液中的HCMV-DNA快速、方便,检出率高,可及时诊断出巨细胞病毒的感染,以便及时治疗,降低畸形儿发生率。     

人巨细胞病毒感染与自然流产关系的研究

目的 探讨人巨细胞病毒(HCMV)感染与自然流产之间的关系。方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)及聚合酶链试验(PCR)检测39例自然流产患者(流产组)血清中HCMV-IgM及外周血、胎儿组织中HCMV-DNA,并选择23例人工流产孕妇做对照组。结果 流产组患者血清中HCMV-IgM、外周血、胎儿组织HCMV-DNA阳性率分别为38.46%、43.58%、33.33%.对照组分别是8.69%、8.69%、4.31%.两者比较差别有显着性意义(P<0.05).结论 HCMV感染是引起自然流产的重要原因之一。     

孕妇巨细胞病毒激活感染及对胎儿影响研究

目的 探讨孕妇巨细胞病毒激活感染的危险因素及对胎儿的影响.方法 收集孕妇血清标本351份,母婴血清标本245对,检测HCMV-IgM抗体.并对孕妇的年龄、孕次、产次及病理性流产史等因素进行调查,观察对婴儿的影响.结果 上述因素对HCMV激活感染有一定作用,其中孕次是激活感染的危险因素.孕妇激活感染可影响胎儿发育,引起胎儿生长发育迟缓,新生儿呈低体重,多种脏器均有HCMV包涵体及病毒颗粒.在孕早期能使胎儿发育受阻而产生难免流产.结论 减少怀孕次数有利于优生优育,避免早期的HCMV激活感染,可减少流产及畸形儿出生.     

婴幼儿人巨细胞病毒基因分子信标杂交荧光检测的研究

目的选择人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）基因序列设计分子信标,建立扩增体系及分子信标（moIecular beacon）芯片检测方法。方法选取2008年6月1日至2008年7月30日,人巨细胞病毒呈阳性的临床血标本来源于重庆市四所医院（重庆市儿童医院为9例、重庆市计生医院为8例、第三军医大学西南医院为7例、第三军医大学新桥医院为5例）,共计29例纳入感染组。选取同期来源于上述四所医院（第三军医大学西南医院为5例、重庆市计生医院为4例、第三军医大学新桥医院为4例、重庆市儿童医院为3例）的人巨细胞病毒呈阴性临床标本,共计16例纳入对照组。无探针包被位点（n=10）纳入空白对照组（本研究遵循的程序符合第三军医大学西南医院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准,取得受试对象的知情同意,并与试验患儿监护人签署临床研究知情同意书）。运用Beacon designer软件设计人巨细胞病毒分子信标及其单侧延长臂分子信标,建立扩增体系及分子信标芯片人巨细胞病毒检测方法,应用荧光显微镜观测荧光信号强度。结果荧光显微镜观测人巨细胞病毒感染组与对照组PCR产物与分子信标杂交后荧光信号强度区别明显;29例人巨细胞病毒婴幼儿感染（感染组）与16例无人巨细胞病毒感染（对照组）的荧光信号强度比较,差异有显著意义（P〈0．05）。结论分子信标芯片技术检测婴幼儿人巨细胞病毒基因具有灵敏、快速、可批量处理等优特点。采用荧光显微镜观测荧光杂交信号具有更强的荧光信号识别、放大功能及结果判断更准确等优点。     

孕妇人巨细胞病毒激活感染危险因素研究

采用ＥＬＩＳＡ法检测３５１例晚期孕妇血清中ＩｇＭ抗体，发现上海地区孕妇ＨＣＭＶ激活感染率为３．７％（１３／３５１），孕妇的年龄、孕次、产次、病理性流产史及人工流产等因素对ＨＣＭＶ激活感染均有一定作用，其中孕次与人工流产可能是ＨＣＭＶ激活感染的危险因素（Ｐ＜０．０５）。     

292名孕妇人巨细胞病毒感染危险因素研究

２９２份母婴血清用ＥＬＩＳＡ检测ＨＣＭＶＩｇＧ与ＩｇＭ抗体，拟了解孕妇激活感染的危险因素。发现上海市孕妇与婴儿感染与激活感染率各为９８．９７％，３．７７％与９６．９２％，１．７１％。孕妇文化程度在中学以上其分娩婴儿的ＩｇＭ抗体阳性率仅为低于水平的１／２．８。孕妇怀孕胎次≥３次的ＲＲ（相对危险度）是怀１胎的５．６７倍，其分娩婴儿ＩｇＭ阳性率的ＲＲ为１．８９倍。孕妇有病理性生产史者ＩｇＭ阳性率的ＲＲ是