姜黄素和苏拉明抑制兔RPE细胞增生的对比研究

目的 对比研究姜黄素和苏拉明对兔视网膜色素上皮(RPE)细胞增生的抑制作用.以苏拉明为对照药,探讨姜黄素防治增生性玻璃体视网膜病变(PVR)的潜在价值.方法 MTT法检测不同质量浓度姜黄素和苏拉明在各时间段对体外培养的RPE细胞增生的抑制率.相关回归分析计算两种药物各时间段的半数抑制率(IC50)剂量.流式细胞仪检测姜黄素和苏拉明对RPE细胞周期及细胞凋亡的影响,并且检测姜黄素作用不同时间后RPE细胞的凋亡率.结果 姜黄素和苏拉明对RPE细胞均有明显的抑制作用,呈时间和质量浓度依赖性.姜黄素在24、48、72及96h的IC50均明显低于苏拉明.姜黄素使RPE细胞阻滞在G0/G1期,早于苏拉明的G2/M期.姜黄素可以诱导RPE细胞凋亡,苏拉明则不能.姜黄素15μg/mL作用24、48及72h后,RPE细胞的凋亡率分别为(12.83±0.13)%、(32.27±4.51)%、(56.81±8.67)%.结论 姜黄素通过诱导RPE细胞凋亡而有效抑制其增生,比苏拉明药效强且起效快,有望成为防治PVR的理想天然药物.     

苏拉明对RPE移行和增殖抑制作用的对照研究

目的:进一步研究苏拉明(suramin)对体外培养的人视网膜色素上皮细胞(RPE)移行和增殖的抑制作用。方法:(1)在RPE损伤愈合模型中观察150mg/L suramin对RPE移行的抑制作用。(2)采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)测定体外培养的人RPE在150mg/L suramin作用下的增殖活性的抑制。结果:(1)移行实验发现:150mg/L的suramin在24h对RPE的移行抑制率为48%;(2)增殖实验发现,150mg/L的suramin在3d时对RPE的增殖抑制率为51%。结论:suramin可以显著抑制细胞的移行和增殖,对细胞移行能力的抑制发生在抑制增殖作用之前,提示苏拉明对RPE的抑制可能是先抑制细胞的移行,尔后抑制细胞的增殖,为苏拉明的临床应用提供进一步相关依据。     

可见光对培养的人RPE细胞生长的影响以及SOD和CAT的防护作用

目的：观察外源性超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(caralase，CAT)对培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞光化学损伤的保护作用． 方法:将铺满期原代培养的人RPE细胞分为三组．A组直接作光照处理，B组在培养液中加入SOD(90U/mL)和CAT(900U/ml)后30分钟进行光照，c组为对照组．光照强度2 400 Lx，时间6小时．处理结束后将三组细胞以2.4X10⁵/ml的密度分别接种于24孔板，每孔0.4m1l．于接种后1、3、5和7天观察细胞形志，井进行细胞计数． 结果：光照后3天时，A、B组细胞生长缓慢，C组细胞生长活跃，3天后B组细胞生长接近C组，比A组明显活跃(P＜0.05)相似文献   

苏拉明对体外培养的视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的探讨苏拉明(suram in)对体外培养的猪视网膜色素上皮(retinal p igm ent ep ithelium,RPE)细胞增殖的影响。方法不同浓度苏拉明(0.05、0.1、0.2、0.4g/L)作用于RPE细胞,采用生长曲线法及MTT比色法检测苏拉明对RPE细胞增殖的影响,台盼蓝染色检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期变化;透射电镜观察各浓度苏拉明作用后细胞超微结构变化。结果苏拉明对RPE细胞增殖有抑制作用(P<0.05),且呈时间剂量效应;流式细胞术检测示苏拉明将细胞阻滞于G2/M期(P<0.01);透射电镜结果示苏拉明浓度为0.05~0.2 g/L时,RPE细胞结构无明显变化,而苏拉明0.4g/L时,细胞表面微绒毛减少,染色质边集。结论苏拉明能够抑制体外培养的猪RPE细胞增殖,但随浓度增加,对细胞有潜在毒性作用。     

姜黄素对兔视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用

目的 探讨姜黄素对兔视网膜色素上皮（RPE）细胞增生的抑制作用及其作用机制。方法 选取第4代RPE细胞进行实验,分为姜黄素组和空白对照组,姜黄素组设10、15、20 μg/ml 3个质量浓度。噻唑蓝比色(MTT)法检测姜黄素10、15、20 μg/ml分别在24、48、72 、96 h对体外培养的RPE细胞增生的抑制率。线性回归分析计算各时间段的半数抑制率（IC50）剂量。流式细胞仪（FMC）检测姜黄素15 μg/ml作用72 h后对RPE细胞周期的影响,并且检测姜黄素15 μg/ml作用24、48、72 h后RPE细胞增生细胞核抗原（PCNA）的表达量和凋亡率。透射电子显微镜进行RPE细胞形态学检测。结果 姜黄素24、48、72、96 h的IC50分别是29.31、17.50、13.24、10.99 μg/ml。姜黄素使RPE细胞阻滞在G0/G1期。姜黄素15 μg/ml作用24、48、72 h后,RPE细胞的PCNA表达量分别为（565.04±23.60）,（473.61±36.88）,（396.15±32.45）,凋亡率分别为（12.83±0.13）%,（32.27±4.51）%,（56.81±8.67）%,各浓度组与对照组相比,差异均有统计学意义（P＜0.05）。透射电子显微镜显示RPE细胞出现凋亡特征。结论 姜黄素可以影响RPE细胞的PCNA合成,诱导其凋亡,从而有效抑制RPE细胞增生。姜黄素有望成为一种有效的防治PVR的天然药物。     

环孢霉素A对体外培养人视网膜色素上皮细胞的抑制

为寻找抑制玻璃体内细胞增生的有效药物,用³H-胸腺嗜啶核苷(²H—TdR)掺入及液体闪烁技术,观察了环孢霉素A(CsA)(0.125"μg/ml~4.0μg/ml)对体外培养的加或不加巨噬细胞培养调理液(MCM)的人视网膜色素上皮(RPE)细胞增生的影响。CsA在0.125μg/ml时细胞的抑制率为-3.8%~4.1%(P>0.05);在0.25μg/ml～4.0μg/ml时为8.4%~95.1%(P<0.05),且呈剂量依赖性(r＝0.9413)(P<0.001),ID₅₀为1.49μg/ml。加MCM组细胞增殖较对照组明显（3d,26%;5d,34%;P<0.05),CsA对细胞增殖抑制率较对照组有提高(1.0%～13.9%)．表明CsA对体外培养的人RPE细胞有明显的抑制作用． （中华眼底病杂志,1995,11：22-24）     

曲安奈德对正常人视网膜色素上皮细胞

目的研究曲安奈德（TA）对视网膜色素上皮（RPE）细胞的毒性作用。方法四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法测定不同浓度(0.4、0.2、0.1、0.05、0.025 mg/ml)TA对RPE细胞增生的影响；流式细胞术检测TA［当生长抑制率达到50%时的药物浓度(IC₅₀)］作用72 h后细胞周期的变化；倒置相差显微镜和透射电子显微镜观察细胞形态和超微结构的改变。结果0.4~0.025 mg/ml浓度范围内，与对照组比较，TA作用后RPE细胞生长均有明显抑制 (P＜0.05)，且呈浓度依赖性。TA组S期细胞较对照组减少10.6%（P＜0.05）。光学显微镜下TA组细胞密度稀疏，形态不规则，有较多突起及细胞空泡。电子显微镜下TA组细胞核染色质分布不均，细胞质空化，甚至可见细胞坏死。结论TA可抑制培养人RPE细胞有丝分裂S期，抑制细胞增生；明显破坏细胞结构甚至导致细胞死亡。(中华眼底病杂志,2005,21:233-236)     

姜黄素、丹参单体和苦参碱抑制IL-1β诱导下兔RPE细细胞增生的体外实验研究

背景 增生性玻璃体视网膜病变(PVR)是临床上常见的致盲眼病.视网膜色素上皮(RPE)细胞是PVR发生和发展中的关键细胞,研究中药对体外培养RPE细胞的作用及原理对于防治PVR并揭示其发病机制具有重要意义. 目的 研究姜黄素、丹参单体、苦参碱对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的兔RPE细胞增生的抑制效果.方法 取第3～4代体外培养的有色兔RPE细胞,采用透射电子显微镜鉴定细胞结构.采用MTT法检测2.5、5.0、10.0、20.0 μg/L IL-1β培养后24、48和72 h RPE细胞的增生率;并检测5、10、20 μg/ml姜黄素和丹参单体IH763-4以及100、200、400 μg/ml苦参碱对IL-1β诱导RPE细胞增生的抑制率.采用线性回归分析计算各药物的半数抑制率(IC50)剂量.结果 初分离的兔RPE细胞呈球形,细胞中可见大量黑色素颗粒;第4代细胞色素颗粒明显减少,形态更加狭长.免疫细胞化学染色结果显示,细胞角蛋白(AE1/AE3)在细胞质表达呈阳性.透射电子显微镜下可见细胞顶端有大量的微绒毛,细胞间可见连接复合体.不同质量浓度IL-1β组培养后24、48、72 h细胞增生率总体比较差异均有统计学意义(F时间=30.33,P=0.00;F浓度=9.37,P=0.00);组内相邻培养时间点间细胞增生率比较差异均有统计学意义(均P＜0.05),同一培养时间点相邻质量浓度IL-1β组间细胞增生率比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).10.0μ,g/LIL-1β培养72 h后细胞增生率达峰值.不同质量浓度姜黄素、丹参单体和苦参碱不同培养时间点细胞抑制率总体比较差异均有统计学意义(姜黄素:F时间=128.75,P=0.00;F质量浓度=334.05,P=0.00.丹参单体:F时间=39.32,P=0.00;F质量浓度=165.57,P=0.00.苦参碱:F时间=267.76,P=0.00;F质量浓度=912.34,P=0.00).3种药物对RPE细胞的抑制作用均呈明显的剂量和时间依赖性,组内相邻培养时间点间细胞抑制率比较差异均有统计学意义(均P＜0.05),相邻质量浓度药物组间细胞抑制率的比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).培养后24、48及72 h,姜黄素的IC50分别为26.77、19.01和9.45 μg/ml,丹参单体的IC50分别为33.72、23.47和12.56μg/ml,苦参碱的IC50分别为570.96、352.25和97.50 μg/ml. 结论 IL-1β可促进RPE细胞增生,10.0 μg/L IL-1β促增生作用最显著;姜黄素、丹参单体、苦参碱均可抑制IL-1β诱导的RPE细胞增生,其抑制作用均呈时间和剂量依赖性,其中姜黄素抗增生作用最强.     

细胞因子及苏拉明对视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的：研究在血小板源性生长因子（PDGF）和白介素-1β（IL-1β）作用下苏拉明（suramin）对培养的人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）细胞增殖的影响。方法：将不同浓度的（15,150,250mg／L）苏拉明分别加入用PDGF 10μg／L或IL-1 10μg／L培养的RPE细胞培养液中,继续培养3d后采用四甲基偶氮唑盐（tetrazolium,MTT）比色法,细胞分裂指数计数和核仁组成区嗜银染色（AgNORs）检测在细胞因子作用下不同浓度苏拉明对RPE增殖活力的影响。结果：含有PDGF 10μg／L或IL-1β10μg／L的培养液显著刺激RPE的增殖,苏拉明明显抑制了这两种细胞因子条件下RPE的增殖,在150mg／L时的抑制率分别为26％$H18％,对细胞的形态无明显影响。结论：苏拉明对PDGF或IL-1β刺激的RPE的增殖有显著抑制作用,该作用为非毒性作用。进一步证明苏拉明对增生性玻璃体视网膜病变（proliferative vitreoretinopathy,PVR）中相关细胞因子的拮抗作用,为临床防治PVR提供了新的用药思路。     

联合共培养系统诱导骨髓间充质干细胞分化为视网膜色素上皮样细胞

目的 探讨添加脑源性神经生长因子（BDNF）、表皮生长因子（EGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的培养基联合人类视网膜色素上皮细胞（HRPECs）共培养对骨髓间充质干细胞（BMSCs）定向诱导分化的影响.方法 实验研究.实验分三组：HRPECs＋BDNF、EGF、bFGF＋BMSCs共培养组、BDNF、EGF、bFGF＋BMSCs共培养组和对照组（单独BMSCs）.第一组取第3代HRPECs接种在双层培养板的上层,将第3代人BMSCs接种于下层培养板中,在双层六孔板的每孔中加入混合有20 ng/mlbFGF、20 ng/ml EGF、20 ng/ml BDNF及10%胎牛血清（FBS）的DMEM-LG培养液（需做免疫细胞化学染色应同时在下层放入18 mm×18 mm盖玻片进行细胞爬片）.第二组取第3代人BMSCs接种在六孔培养板中,每孔中加入含20 ng/ml bFGF、20 ng/ml EGF、20 ng/ml BDNF及10%FBS的DMEM-LG培养液.第三组将第3代人BMSCs接种于六孔培养板中,加入10%FBS的DMEM-LG培养液.在倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化.2周后停止培养,采用免疫细胞化学染色法和RT-PCR检测角蛋白18、RPE65蛋白存诱导细胞中的表达.数据采用Holm-Sidak法进行分析.结果 诱导2周后,第一组BMSCs细胞呈圆形、类圆形、不规则形、短棒状外观,细胞内有色素颗粒形成,其他两组没有类似改变.三组间免疫细胞化学染色法检测RPE65蛋白、角蛋白18,光密度值结果显示第一组和第二组间、第一组和第三组间差异有统计学意义（RPE65：t=37.416、36.236,P＜0.05;角蛋白18：t=38.611、37.532,P＜0.05）.而第二组和第三组间差异没有统计学意义（RPE65：t=1.180,P＞0.05;角蛋白18：t=1.079,P＞0.05）.RT-PCR检测相对mRNA表达量,结果显示第一组和第二组间、第一组和第三组间差异有统计学意义（RPE65/β-actin：t=176.110、174.820,P＜0.05;角蛋白18/β-actin：t=243.230、241.560,P＜0.05）.而第二组和第三组间差异无统计学意义（RPE65/β-actin：t=1.283.P＞0.05;角蛋白18/β-actin：t=1.670,P＞0.05）.结论 利用BDNF、EGF、bFGF联合HRPECs共培养可以使BMSCs分化为视网膜色素上皮样细胞.     

活体猪眼行放射状视神经切开术后的 组织病理学观察

目的观察活体猪眼行放射状视神经切开术（RON）后的病理改变过程，为临床RON安全性提供实验依据。方法健康小型猪共12只，其中8只双眼行RON后，分别于1、3、7、48 d处死，每天各处死2只猪；2只猪一只眼行RON，另一只眼作正常对照；2只猪一只眼行RON，另一只眼行单纯玻璃体切除，于120 d后处死。取出眼球后常规制作石蜡组织切片行苏木精-伊红染色、Masson三色染色或Luxol 坚固蓝染色，光学显微镜下对不同水平的视神经断面进行观察。结果所有眼球大血管壁未被破坏，球后视神经的软脑膜保持完整。手术后第1天可见创口形成，局部出血向周围及后方浸润，神经纤维髓鞘脱失所致的空泡样改变局限在创口内。手术后第3天时可见空泡样改变范围扩大。手术后第7天创口成纤维细胞密集，神经胶质细胞增生及分散的色素颗粒存在，浸润的炎性细胞以淋巴细胞和单核细胞为主。手术后第48天视盘创口胶原成分填充，切开深度未及的后方视神经局部神经胶质细胞密集，坚固蓝染色浅淡，边界清晰，其范围部分越过中线。手术后第120天创伤下方部位呈现局部视神经萎缩性改变。正常眼及单纯玻璃体切除眼切片光学显微镜观察未见病理改变。结论正常活体猪眼行RON后最终形成局部视神经萎缩，一定程度上手术本身是安全的。(中华眼底病杂志,2005,21:13-15)     

舒拉明对碱性成纤维细胞生长因子促进人视网膜色素上皮细胞增殖作用拮抗效应的研究

目的探讨舒拉明抗增生性玻璃体视网膜病变(PVR)的作用及机制。方法采用体外培养的人眼视网膜色素上皮(RPE)细胞,总共10组。其中5个对照组的培养基中分别加入终浓度为1、10、100、500ng/ml的bFGF和3125μg/ml的舒拉明。实验组4组,培养基中除加入3125μg/ml的舒拉明外,还分别加入终浓度为1、10、100和500ng/ml的bFGF。另设1组空白组。培养48h后,采用MTT法,酶联免疫检测仪测定各孔吸光度(A)值,计算细胞的增殖率。采用析因分析比较bFGF和舒拉明的交互效应和单独效应。结果各组细胞生长无明显的形态学差异。舒拉明与bFGF存在拮抗性交互效应(F=673,P<001)。对照组比较空白组,全部bFGF组A值都增加,最大A值为bFGF的10ng/ml浓度组;舒拉明组则降低;实验组中,各组A值较bFGF对照组都下降,最大A值左移对应bFGF的100ng/ml浓度组。结论舒拉明能够拮抗bFGF促RPE细胞增殖的作用,其抑制RPE细胞增殖并进一步防治PVR的机制至少包括拮抗了生长因子的生物学效应。     

培养人视网膜色素上皮细胞增生的抑制与Ki-67表达

目的 探讨柔红霉素对视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增生的抑制及其与Ki-67表达的关系。 方法 用180μg/L柔红霉素作用培养的人RPE细胞12h，之后24 h用氚-标记脱氧胸苷(tritium-labelled thymidine deoxyribose,³H-TdR)掺入法测定DNA合成抑制率，免疫细胞化学染色和定量分析观察Ki-67表达，流式细胞术检测细胞周期变化。 结果 培养人RPE细胞DNA合成抑制率与柔红霉素剂量成正比，对照组和柔红霉素组Ki-67阳性细胞率分别为89.3%和45.6%(P＜0.01)，两组中阳性细胞胞核积分光密度值分别为68.1±6.2和27.3±5.5 (P＜0.01)。柔红霉素组^G₂期细胞比例由8.9%增至29.5%。 结论 柔红霉素使培养人RPE细胞阻滞于^G₂期，抑制了细胞增生；Ki-67表达可以反映RPE细胞的增生抑制。（中华眼底病杂志，2000，16：1-70）     

结膜瓣覆盖治疗角膜碱烧伤中MMP-9和TIMP-1的表达

目的：研究结膜瓣覆盖术治疗兔角膜碱烧伤中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及组织型基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的表达机制。方法：将50只兔随机分成实验组及对照组,每组分别25只,建立兔角膜烧伤模型。实验组在角膜烧伤后当天行结膜瓣覆盖术。采用免疫组化法测定两组角膜碱烧伤后不同时间点MMP-9和TIMP-1的表达。结果：MMP-9在角膜碱烧伤后的3d开始升高,14d达到最高,之后逐渐下降;而TIMP-1在伤后即有表达,7d有所下降,于14d达到最低,21d达到峰值。实验组MMP-9的表达均明显低于对照组,且角膜碱烧伤后的3,14,21d和28d差异有统计学意义（P〈0.05）;而TIMP-1则明显高于对照组,且角膜碱烧伤后3,14d和21d差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：角膜碱烧伤的病理损伤及修复过程中,MMP-9及TIMP-1的表达密切相关。结膜瓣覆盖治疗重度角膜碱烧伤的疗效确切。     

维甲酸诱导的视网膜色素上皮细胞凋亡

目的 研究维甲酸(rentinoic acid,RA)诱导的视网膜色素上皮(retinal pigment epithlium,RPE)细胞凋亡特征。 方法 体外培养的RPE细胞中加入10-^5_、10^-6_、10^-7mol/L RA,应用吖啶橙荧光染色和核苷酸末端转移酶介导的dUIP末端标记法(Tdt-mediated dUIP nick end labelling method,TUNEL法)观察凋亡细胞。 结果 10^-5、10^-6、10^-7mol/L RA诱导RPE细胞凋亡,凋亡细胞表现为细胞固缩,染色质聚.TUNEL法显示凋亡细胞DNA片断化.10^-7、10^-6、10^-5mol/L RA作用5天时,凋亡指数分别为36.9、44.9%、61.4%。作用6天时，凋亡指数分别为48.0%、59.9%、74.2%。经统计学处理,同一RA浓度时,随作用时间延长凋亡指数增加;同一作用时间时,随RA浓度增大凋亡指数增加,差异有显著性(P<0.05). 结论 RA能诱导RPE细胞凋亡，且有很好的时间剂量效应。(中华眼底病杂志,1998,14:153-155)     

金丝桃素对体外培养的人视网膜色素上皮细胞蛋白激酶C活性的影响

目的 研究金丝桃素(hypericin)对体外培养的人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium，RPE）细胞的蛋白激酶C（protein kinase C, PKC）活性的影响。 方法 用含0.5～5.0 μmol/L金丝桃素的10％血清培养液培养人RPE细胞,在有或没有PKC激活剂佛波醇-12-豆蔻酰-13乙酸 （phorbol 12-myristate 13-acetate，PM A）预处理RPE细胞的情况下，用PKC检测试剂盒测定金丝桃素对细胞液PKC（cytosolic PKC，c-PKC）和细胞膜PKC（membranous PKC，m-PKC）活性变化的影响。 结果 未经PMA处理的人RPE细胞的c-PKC和m-PKC的原始活性分别为(35.34±4.1) pmol·min^-1·mg^-1和(62.52±8.8) pmol·min^-1 ·mg^-1。PMA处理细胞后，c-PKC在5 min内就迅速下降，20 min后下降缓慢，60 min降至处理前的18％，以后一直处于很低的水平。m-PKC在5 min后逐渐升高，至40 min达到高峰以后下降，60 min后恢复至对照水平，10 h后降至对照组的30％以下。用PMA处理RPE细胞48 h后，c-PKC和m-PKC都降低至不能测出。但若将金丝桃素与PMA同时加入后，能抵消大部分PMA对PKC的下降调节。 结论 金丝桃素能阻止RPE细胞的PKC转位，使PKC的活性发生变化，有可能促进RPE细胞的凋亡，防止增生性玻璃体视网膜病变的发生。 （中华眼底病杂志，2003，19：55-58）     

苏拉明联合地塞米松对体外培养的视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的:探讨苏拉明(suramin,Sur)联合地塞米松(dexamethasone,Dex)对体外培养的猪视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增殖的影响。方法:选择0.05,0.1,0.2,0.4g/L Sur单独作用及联合0.2g/LDex作用于RPE细胞4d,MTT比色法检测对RPE细胞增殖的影响;0.2g/L Sur和0.2g/L Dex分别作用于RPE细胞,流式细胞术检测细胞周期变化;Sur浓度为0.2g/L,0.4g/L及0.2g/L Sur联合0.2g/L Dex时,透射电镜观察细胞超微结构情况。结果:MTT比色法检测表明各浓度Sur对RPE细胞有抑制作用(P<0.05),呈剂量效应关系;0.2g/L Dex与各浓度Sur联合应用对RPE细胞的抑制率由单独应用Sur的16.0%,27.3%,40.5%,64.1%增至42.3%,52.1%,65.6%,78.8%。流式细胞检测提示Sur将细胞阻滞于G2/M期(P<0.01);Dex将细胞阻滞于S期(P<0.01)。透射电镜结果显示,Sur浓度为0.2g/L时,单独应用及联合0.2g/L Dex应用,RPE细胞结构无明显变化,而Sur0.4g/L时,细胞表面微绒毛减少,细胞核皱缩。结论:Sur联合Dex能有效抑制体外培养的RPE细胞增殖。