天麻基因组DNA提取方法的选择和优化

目的:探讨天麻DNA提取法。方法:选最优法并正交试验。结果:SDS-CTAB法提取DNA完整、纯度高、重复性好。结论:优化SDS-CTAB法提取DNA适用于天麻AFLP体系。     

百合鳞叶总DNA提取方法的改进

目的建立一种适合RAPD分析的百合鳞叶总DNA提取方法。方法在传统CTAB提取方法上,对其进行改良,进一步优化提取方法。结果用改良CTAB法提取的总DNA的OD260/OD280在1.6-2.0之间,电泳条带清晰,其含量和纯度完全满足RAPD分析的要求。结论该方法提取百合鳞叶总DNA简便实用。     

天麻总DNA提取的研究

目的：寻找快速便捷的天麻总DNA的提取方法.方法：采用天麻干品为材料,用CTAB,SDS 2种提取法及液氮、玻璃砂2种研磨方法提取干天麻总DNA,并进行了比较.结果：2种不同的研磨法和2种不同的提取方法,均可从天麻中提取到一定纯度的DNA,其中CTAB法提取的DNA纯度较好,产率较高;SDS法提取的DNA纯度较低且不稳定,产率较低.结论：从天麻干品中采用CTAB法提取DNA用于分子生物学研究是可行的,用玻璃砂研磨能取得与液氮相近的结果.     

提取道地药材基因组DNA方法的探讨

目的为研究道地药材的遗传多样性、种类鉴定和基因指纹图谱的构建等提供技术保证。方法以道地中药材板桥党参（板党）、五鹤续断药源植物的鲜嫩叶片为材料,采用改进的CTAB法从中提取出基因组DNA,检测其提取效果。结果使用改进的CTAB法从鲜叶中提取板党、五鹤续断的基因组DNA浓度较高,能满足PCR反应的要求。结论自行改进的CTAB法提取道地药材板党、五鹤续断基因组DNA效果较好。     

天麻多糖提取工艺的研究

目的优化从天麻中提取多糖的工艺。方法采用正交试验法,以天麻提取液中多糖含量为考察指标,研究提取温度、提取时间、料水比对天麻多糖提取工艺的影响。结果各因素影响天麻多糖提取工艺的重要程度依次为提取温度、提取时间、料水比。最佳提取工艺参数为提取温度100℃,提取时间4h,料水比1：40。结论该提取工艺方法稳定、简便、可行。     

天麻有效成分提取工艺研究

目的:考察不同条件下天麻素的提取情况。方法:采用正交试验法,以提取液中天麻素的含量为指标优选提取工艺条件。结果:提取的最佳条件为选用6倍药材量的600 ml/L乙醇提取3次,每次1.5 h。     

金银花药材脱氧核糖核酸(DNA)提取方法的研究

目的:研究金银花药材总脱氧核糖核酸(DNA)的提取方法。方法:对经典的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法进行了改良,采用改良的CTAB法提取金银花药材的总DNA,通过紫外吸收、琼脂糖凝胶电泳检测其纯度和浓度。结果:用改良的CTAB法提取的总DNA的OD260/OD280比值在1.76-1.85之间,干药材提取率为89.8-325.4μg/g。结论:用改良CTAB法提取的基因组DNA纯度高,符合分子生物学的要求。     

两种提取白桂木基因组DNA方法的比较研究

[目的]寻找适合白桂木基因组DNA的提取方法。[方法]采用改良的CTAB法及试剂盒法提取白桂木基因组DNA。用紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法检测白桂木DNA纯度、浓度,比较两种方法的适用性。[结果]试剂盒法能够较好去除多糖及其他次生代谢产物。[结论]试剂盒法更适合从白桂木中提取高质量的DNA。     

玄参总DNA提取方法的比较研究

目的探讨药材玄参总DNA的最佳提取方法。方法分别采用SDS法和CTAB法提取药材玄参总DNA,并对其进行核酸含量测定和电泳检测。结果采用SDS法提取的总DNA其OD260/OD280=1.83,而采用CTAB法提取的总DNA其OD260/OD280=1.64;DNA电泳检测显示采用SDS法提取的总DNA条带清晰,而采用CTAB法提取的总DNA出现严重的拖尾现象。结论用SDS法提取药材玄参总DNA优于CTAB法。     

不同预处理方法对天麻块茎总DNA提取效果的影响

目的:以天麻块茎为材料,研究不同的预处理方法对DNA提取的纯度和浓度的影响.方法:将新鲜天麻块茎切成薄片,分别置于生理盐水,灭菌双蒸水及不同浓度的乙醇溶液中,于4℃存放5～7d,再分别用CTAB法和SDS法提取其总DNA.结果:样品采用浓度为30%～50%的乙醇溶液浸泡后再提取,获得的DNA浓度和纯度都较为理想,而经生理盐水和灭菌双蒸水预处理后提取的样品DNA虽纯度不理想,但浓度较高.结论:采用30%～50%的的乙醇溶液可作为天麻块茎总DNA提取前的预处理液,生理盐水和灭菌双蒸水适用于样品的长期保存.     

天麻DNA转化马铃薯遗传稳定性研究

目的观察天麻DNA转化马铃薯的遗传稳定性.方法①紫外分光光度法扫描观察转基因马铃薯图谱变化,扫描波长为200～300nm.②SDS-PAGE电泳观察转基因马铃薯蛋白质表达情况.结果转基因马铃薯5～7子代的扫描图谱和电泳图谱与马铃薯的图谱均有明显差异.结论转基因马铃薯子代含有天麻的某些成分,并且遗传性状比较稳定.     

利用浸苗法将野生天麻总DNA导入马铃薯的研究

目的研究野生天麻总DNA对马铃薯的转化,分析马铃薯转化植株中野生天麻的药用成分天麻素。方法采用浸苗法将野生天麻总DNA导入马铃薯试管苗,通过紫外扫描法、PCR扩增筛选转化植株,对转化植株进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)蛋白分析,通过TLC法检测天麻素。结果(1)在200株转化的马铃薯中有21株的紫外扫描图谱与正常对照组有显著差异,且在220 nm有明显吸收峰。(2)5株经PCR扩增出野生天麻抗真菌蛋白(GAFP)基因。(3)转基因马铃薯与正常马铃薯的蛋白表达有明显差异,并且在转基因马铃薯中有一条与GAFP相同的条带。而正常马铃薯中无此条带。(4)通过薄层色谱法检测出3株转基因马铃薯表达野生天麻的有效药用成分天麻素。结论采用浸苗法进行外源总DNA导入是可行的。     

天麻简单重复序列反应体系的初步研究

目的: 探讨兰科药用植物天麻(Gastrodia elata Bl.)简单重复序列(simple sequence repeat,SSR)PCR循环中退火温度及反应体系中各主要成分对反应的影响.方法: 根据Genebank登录的天麻微卫星序列设计引物, 并对反应体系中各影响因素进行优化.结果: 所设计引物可扩增出预期的条带,并构建了清晰稳定的SSR指纹图谱,最终建立的25 μl反应体系为:Taq DNA酶1U、Mg2 1.2～1.6 mmol/L、引物各0.4～0.6 μmol/L、模板DNA 40～60 mg/L和dNTPs 0.20 mmol/L.结论: 首次初步确立了适合天麻SSR的最佳退火温度及反应体系中各主要成分的最佳浓度,为天麻的SSR分子标记及遗传多态性分析奠定了一定基础.     

天麻液相色谱指纹图谱研究

目的建立天麻的液相色谱指纹图谱,为科学评价及有效控制天麻质量提供新方法。方法采用HPLC法分析不同产地的18个天麻样品,确定指纹峰并进行对照药材相似度、共有模式相似度的计算,用纯品随行对照结合LC-MS对主要指纹峰进行定性鉴定。结果建立了由27个指纹峰和17个共有峰组成的天麻液相色谱指纹图谱,指纹峰具有特征性,鉴定了其中12个主要的指纹峰。用对照药材相似度,可将天麻样品分为3类安徽河南产天麻、陕西四川产天麻和云南产天麻。两个相关系数分界点为0.80和0.58,夹角余弦分界点为0.88和0.73。结论所选指纹峰有特征性,建立的指纹谱可用来区别3个产地的天麻药材,并为进一步控制天麻质量提供依据。     

天麻总DNA提取及聚合酶链反应扩增鉴定

目的：改良常用的植物DNA提取的CTAB，SDS法，以有效去除天麻多糖类杂质。方法：用CTAB法提取天麻鲜品不同部位（块茎、花序轴和胚芽）DNA；用生理盐水浸泡天麻干品之后，在应用CTAB，SDS法提取天麻干品的DNA；通过已知序列的天麻抗真菌蛋白基因片段的聚合酶链反应（PCR）扩增和PCR产物测序鉴定天麻DNA及其质量。结果：提取了44份天麻样本DNA，用CTAB法提取天麻鲜品不同部位的DNA，成功地用于PCR扩增，并通过DNA测序进一步鉴定；应用改良的CTAB，SDS法提取天麻干品DNA可用于PCR扩增，但DNA测序未成功。结论：用CTAB法提取的天麻鲜品各个部位DNA均可用于基因分析，而用天麻胚芽提取DNA的效果最理想；改良CTAB法能有效提取天麻干品DNA。提取的DNA可用于基因扩增。     

天麻的研究进展

概述了天麻生活史和栽培生产的研究进展 ,及天麻化学、药理研究和临床应用的现状 ,提出了天麻研究开发利用的发展方向     

天麻微卫星DNA分子标记与天麻素含量的关系

目的：探讨天麻遗传变异与其品质的关系,为优良种质的选育提供科学途径。方法：采用CTAB法提取天麻DNA,进行PCR扩增,用微卫星DNA分子技术（SSR）标记DNA;用高效液相色谱法检测不同种质天麻的天麻素含量,分析两者之间的关系。结果：出现A条带类型的样品天麻素含量较高,7EKYC、9EDF;24GBJ、22GZJ;1FDJ、2FLL;4VDF、6EKYW;18GWAC、8EWD,分别聚到一起,遗传距离较小。结论：特异引物扩增位点与天麻素含量有关,高天麻素含量与SSR高分子量条带有关,其关系有待进一步研究。     

一种适于AFLP分析的天麻花葶DNA提取方法

目的：获得能用于中药天麻扩增片段长度多态性（AFLP）分析及其它分子生物学研究的高质量DNA。方法：以天麻花葶为材料，采用改良SDS法提取天麻DNA，经紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测。结果：改良的SDS法能获得高质量的DNA，OD260／OD280为1．75～1．9，蛋白质、多糖、RNA等去除较彻底，适于AFLP分析。结论：改良的SDS法所提取天麻DNA适于AFLP分析。     

天麻化学成分研究(Ⅰ)

目的 研究天麻中的弱极性成分。方法 硅胶柱色谱结合制备薄层层析分离，光谱分析鉴定结果。结果 分离并鉴定了7个化合物。他们分别为：对差劲苄基乙基醚（I），β-谷甾醇（Ⅱ），棕榈酸（Ⅲ），2，2’-亚甲基-二（6-叔丁基-4-甲基苯酚）（Ⅳ），对羟苄基甲醚（Ⅴ），邻苯二甲酸二甲酯（Ⅵ）和对羟基苯甲醛（Ⅶ）。结论 化合物Ⅳ和Ⅵ为天麻中首次报道成分，其中，化合物Ⅳ为四取代苯的二聚体，为首次从天麻属及兰科植物中分离鉴定。     

高效液相色谱法测定天麻中L-焦谷氨酸的含量

应用ＨＰＬＣ法对没来源和加工方法不同的天麻Ｇａｓｔｒｏｄｉａ ｅｌａｔａ Ｂｌ,中Ｌ－焦谷氨酸成分进行了定量分析。结果显示Ｌ－焦谷氨酸在天麻中的含量因产地、栽培方法和加工方法的不同而有差异。野生比家种、鲜品比干品的Ｌ－焦谷氨酸含量高。