煮沸裂解法快速提取大鲵DNA

目的建立大鲵基因组DNA快速简便高效的提取方法。方法借鉴煮沸裂解法制备质粒DNA方法,改进后用于提取大鲵基因组DNA。结果本方法提取DNA纯度高（A260/A28介于1.7~2.1之间）,耗时短（2h）,毒性小,分子大小约为23kb,适用于PCR扩增及后续分析。结论本方法提取基因组DNA纯度高、耗时短、提取所用试剂毒性小、成本低,值得在大鲵基因组DNA提取中使用,也可为其他动物的相关研究提供参考。     

一种快速微量外周血基因组DNA的提取方法

目的建立一种简便、快速、有效、微量外周血基因组DNA的提取方法.方法采用NaI作细胞裂解剂裂解细胞和细胞核,用氯仿:异戊醇(24:1)直接提取基因组DNA.结果该方法提取外周血基因组DNA的纯度高A260 nm/A280 nm=(1.87±0.11),提取效率每毫升外周血可得DNA(31±3.12)μg.结论该法简便、快速、有效,适应于批量临床标本的处理.     

百合鳞叶总DNA提取方法的改进

目的建立一种适合RAPD分析的百合鳞叶总DNA提取方法。方法在传统CTAB提取方法上,对其进行改良,进一步优化提取方法。结果用改良CTAB法提取的总DNA的OD260/OD280在1.6-2.0之间,电泳条带清晰,其含量和纯度完全满足RAPD分析的要求。结论该方法提取百合鳞叶总DNA简便实用。     

三种方法提取金黄色葡萄球菌DNA的比较

目的对三种金黄色葡萄球菌DNA提取方法的效果进行比较,以期获得一种简便、经济的提取方法。方法采用改良SDS法、NP40法和细菌DNA试剂盒法分别提取同一浓度的金黄色葡萄球菌ATCC25923细菌DNA,利用Nano Drop 2000核酸检测仪测定核酸浓度和纯度,纯度用核酸在波长260 nm处的吸光值与在波长280 nm处的吸光值的比值A260/A280表示,用1%琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量;提取不同浓度梯度的金黄色葡萄球菌ATCC25923细菌DNA,PCR扩增16S r DNA片段检测并比较三种方法的灵敏度。结果三种方法提取金黄色葡萄球菌所得核酸浓度差异有统计学意义(χ~2=6.25,P0.05),NP40法提取浓度较高,改良SDS法较低。试剂盒法提取的DNA纯度较高,A_(260)/A_(280)值在1.8~2.0之间;NP40法提取纯度较差;DNA电泳结果表明SDS法和TIANGEN试剂盒法提取的DNA条带清晰,无拖带现象,NP40法未出现DNA主带,且有拖带现象。所有方法所得DNA经PCR扩增均出现阳性条带。NP40法提取DNA的PCR检测敏感度最高,为1.5×10~6 cfu/ml,改良SDS法敏感度最低,为1.5×10~8 cfu/ml。结论 NP40法提取DNA成本低,耗时少,灵敏度高,适用于金黄色葡萄球菌的快速初筛。     

鼠麴草基因组DNA的提取方法及随机扩增多态性DNA分析

目的以鼠麴草的叶为材料,研究鼠麴草DNA的提取方法及对其进行随机扩增多态性DNA（RAPD）的分析。方法采用略改进的十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法、高盐低pH法、木本法和十二烷基硫酸钠（SDS）法分别提取鼠麴草叶的基因组DNA。通过RAPD分析所提取的DNA,比较所用的提取方法。结果CTAB法得到DNA的A260/A280为1.937,浓度为992.25μg/ml,优于其他3种方法。结论CTAB法是4种方法中最佳的方法。     

全血基因组DNA快速提取法

目的　建立一种简便、快速、有效、微量外周血基因组DNA的提取方法。方法　采用NaI作细胞裂解剂裂解细胞和细胞核 ,用氯仿∶异戊醇 ( 2 4∶1 )直接提取基因组DNA。结果　该方法提取外周血基因组DNA的纯度高 ,A2 60nm/A2 80nm=1 .83± 0 .1 3,每毫升外周血可得DNA 33± 3.5 2 μg。结论　本法简便、快速、有效 ,适用于批量临床标本的处理。     

PCR及Real-time PCR评价细菌DNA提取方法

目的:比较几种不同的细菌DNA提取方法,建立一种适于PCR和Real-time PCR的细菌DNA提取方法.方法:分别用蛋白酶K法、碱裂解法、Chelex-100 NP40、Chelex-100 TritonX-100法和水煮法提取同种浓度大肠杆菌DNA,测定OD260/280;用不同方法提取不同浓度的大肠杆菌DNA,进行PCR和实时荧光定量PCR扩增,比较灵敏度.结果:5种方法提取细菌DNA,其中Chelex-100 NP40 法纯度(OD260/280=1.79±0.03)最高,此方法所提取的DNA产物进行PCR及Real-time PCR扩增未见假阳性及假阴性,其灵敏度为10个/ml细菌浓度.结论:Chelex-100 NP40的细菌DNA提取方法纯度及灵敏度高,且适应于PCR及Real-time PCR.     

白假丝酵母菌DNA提取方法的研究

目的建立一种提取白假丝酵母菌DNA的有效方法。方法采用蜗牛酶消化破壁形成原生质体,饱和酚/氯仿抽提法提取基因组DNA,用琼脂糖凝胶电泳及PCR反应等进行鉴定。结果提取物经琼脂糖凝胶电泳检测到DNA主带,基本无DNA碎带,提取的DNA浓度为(1.18±0.36)μg/μl,纯度好(OD260/OD280>1.7),不用RNase酶处理,无需任何纯化即可用于PCR扩增。结论本研究中提取DNA的方法简便易行,提取物可适用于各种分子生物学研究。     

全血基因组DNA的提取和纯化方法比较

目的探讨全血基因组DNA的快速纯化方法。方法分别采用表面活性剂裂解法、传统酚抽提法、加热法分别制备DNA，分析各种方法提取DNA的产量、纯度，以及方法本身的优缺点、费用等，同时我们进行RAPD标记实验以比较纯化的DNA在PCR上应用的效果。结果表面活性剂裂解法简单快速，其制备的DNA产率、纯度明显高于传统酚抽提法，但其完整性不如后者。加热法快速制备的全血基因组DNA作为模板虽然纯度差，但仍可用于PCR，并得到满意的检测结果。同一份标本采用不同方法提取的DNA作为模板进行的RAPD标记实验，其多重PCR产物进行分离产生的DNA图谱基本一致。结论3种全血DNA纯化方法均可满足不同的实验要求。     

骨肉瘤基因组DNA的提取及部分酶切分析

目的比较提取骨肉瘤基因组DNA,建立基因组DNA的最佳部分酶切条件并制备其部分酶切产物.方法采用经典的基因组DNA提取法和改良玻璃棒缠绕法提取骨肉瘤基因组DNA,以限制内切酶Sau3A I部分酶切,采用玻璃珠(Silver Beads)DNA胶回收试剂盒与蔗糖梯度离心回收分离目的片段DNA.结果提取基因组DNA片段大于150 kb,37℃,Sau3AI 14(u/μg)部分酶切骨肉瘤基因组DNA 30 min获得18 kb ～23kb基因片段的富集,制备目的片段DNA.结论经改良玻璃棒缠绕法提取骨肉瘤基因组DNA具有纯度、产量高,方法简单,无蛋白和RNA污染,片段足够长,可被Sau3AI部分酶切,玻璃珠(Silver Beads)DNA胶回收试剂盒和蔗糖梯度离心回收分离目的片段DNA纯度高,无小的DNA片段混入,可满足构建入噬菌体载体(EMBL3)基因组文库.为构建骨肉瘤的入EMBL3载体基因组文库做好了前期工作.